生存素siRNA对结肠癌细胞凋亡增殖和侵袭性的影响

目的研究siRNA表达质粒沉默Survivin基因的效率及其对大肠癌细胞株SW480凋亡、增殖和侵袭性的影响.方法构建Survivin基因的siRNA表达质粒(pRNAT/sur-siRNA),用Westeron-blot和半定量RT-PCR研究该表达质粒转染SW480后Survivin蛋白和mRNA表达的变化,流式细胞仪检测Survivin基因沉默后SW480细胞凋亡的变化,MTT法检测SW480细胞体外增值的变化细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化.结果针对Survivin的siRNA的表达质粒下调大肠癌SW480细胞株Survivin蛋白和mRNA的表达水平,分别为85.0%,80.0%;pRNAT/sur-siRNA转染SW480后,SW480细胞凋亡率为16.9%;细胞增殖抑制率为37.4%,与对照组相比有显著差异(P＜0.01);细胞侵袭实验示pRNAT/sur-siRNA/SW480细胞、pRNAT/SW480、SW480细胞的细胞穿透数分别为153±66、505±65、578±98个,(P＜0.01).结论针对Siurvivin的siRNA可以显著降低Survivin的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,促进肿瘤细胞的凋亡.     

沉默ATF5对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响的研究

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。     

p33ING1b基因对人结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

目的:构建pcDNA3.1( )/p33ING1b真核表达载体及观察其对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:构建人p33ING1b真核表达载体,采用脂质体转染方法,将pcDNA3.1( )/p33ING1b转染人结肠癌细胞系SW480,G418筛选,挑选阳性克隆,阳性克隆经RTPCR及Westernblot鉴定后,通过生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测高表达p33ING1b基因的SW480细胞体外增殖情况,并用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。结果:成功构建重组pcDNA3.1( )/p33ING1b基因的真核表达载体,建立高表达p33ING1b基因的SW480细胞系,p33ING1b基因在SW480细胞中高表达后,其生长速度减慢,细胞凋亡率(15.4±1.7)%较空载体组(2.0±0.6)%及未转染组(1.6±0.8)%明显升高。结论:p33ING1b基因高表达对SW480细胞系具有生长抑制和促进凋亡的作用。     

siRNA干扰XIAP基因对卵巢癌SKOV-3细胞生物学功能影响的研究

目的:采用小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV-3细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的表达,观察其对卵巢癌细胞增殖能力和凋亡的影响.方法:将XIAP siRNA转染SKOV-3细胞,MTT检测细胞增殖抑制情况,Annexin-V检测细胞凋亡率的变化,FCM法检测细胞周期变化.结果:XIAP siRNA转染后能明显抑制XIAP蛋白的表达,与其他组相比差异有统计学意义,F=63.782,P<0.05;特异性干涉组细胞的增殖能力明显低于空白对照组及非特异性干涉组,F=53.412,P<0.05;XIAP-siRNA转染组的细胞凋亡率为((31.54±0.62)%],与非特异性干涉组[(5.34±0.38)%]和空白对照组[(6.73±0.46)%]相比,差异有统计学意义,F=102.32,P<0.01.SKOV-3细胞明显阻滞在G0/G1期,与其他组相比,差异有统计学意义,P<0.01.结论:干扰XIAP基因可抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,诱导其凋亡.     

FHIT转染对丝裂霉素诱导结肠癌细胞凋亡的影响

目的:研究FHIT转染对丝裂霉素诱导结肠癌细胞凋亡的影响。方法:将FIHT基因及其空载体转染至SW480细胞,Western blot检测SW480细胞FHIT蛋白的表达,MTT检测丝裂霉素对转染FHIT细胞和转染空载体细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析丝裂霉素处理后细胞凋亡率。结果:FHIT基因转染后,可以检测到FHIT蛋白的表达;MTT法检测同等浓度的丝裂霉素对FHIT+SW480细胞的生长抑制率要明显高于FHIT-SW480细胞;丝裂霉素处理后,FHIT+SW480细胞的凋亡率均明显高于FHIT-SW480细胞。结论:真核质粒介导的FHIT基因转染本身不能促进肿瘤细胞的凋亡,但是FHIT基因转染后可以使得细胞对抗癌药物丝裂霉素的敏感性增加。     

高表达GRIM-19诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的：研究干扰素/维甲酸诱导死亡基因（retinoidinterferoninduced mortality,GRIM19）对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法：构建GRIM19真核表达载体（pCMVFlagGRIM19）,转染入SW480细胞中,Western blotting检测GRIM19及凋亡相关蛋白Balxl的表达,采用AnnexinV/PI和线粒体膜电位JC-1染色检测SW480细胞的凋亡。结果：成功构建pCMVFlagGRIM19真核表达载体。pCMV-Flag-GRIM-19质粒转染SW480细胞后,GRIM19的表达上调,凋亡抑制蛋白Bclxl的表达则下调。转染空质粒pCMVFlag组SW480细胞凋亡率为（7.7±1.39）%,转染pCMV-Flag-GRIM-19质粒后SW480细胞凋亡率为（15.0±2.52）%（P<0.05）。线粒体膜电位检测显示转染空质粒pCMVFlag组SW480细胞膜电位降低细胞为（7.5±2.09）%,而转染pCMVFlagGRIM19后细胞线粒体膜电位降低细胞为（17.5±3.07）%（P<0.05）。结论：GRIM-19体外转染可有效诱导结肠癌SW480细胞凋亡。     

沉默信号转导和转录活化因子（STAT3）对卵巢癌细胞SKOV-3中肌糖蛋白（TN-C）表达的影响

目的:探讨肌糖蛋白C（TN-C）对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响,并研究SKOV-3中沉默信号转导和转录活化因子（STAT3）对TN-C表达的调控。方法:用不同浓度的重组TN-C蛋白（0、50、100和200ng/ml）处理人卵巢癌SKOV-3细胞48h后,采用MTT法检测细胞增殖速率;以血清饥饿诱导细胞凋亡,同时给予TN-C刺激,Annexin V/PI双染法检测SKOV-3细胞凋亡。构建STAT3过表达载体或特异性siRNA 序列并转染SKOV-3,建立SKOV-3STAT3（+）或SKOV-3STAT3（-）细胞,Western blotting检测不同SKOV-3细胞核中STAT3、p-STAT3的水平变化以及细胞TN-C水平的变化。结果:MTT及Annexin V/PI双染法结果显示TN-C呈剂量依赖性促进SKOV-3细胞增殖,同时抑制血清饥饿诱导的SKOV-3细胞大量凋亡。SKOV-3细胞核中p-STAT3与细胞TN-C水平正相关,抑制p-STAT3或减少STAT3的表达都导致TN-C水平的下降。结论:TN-C在卵巢癌的转移和侵袭中有重要的作用,STAT3可调节卵巢癌细胞中TN-C的表达水平,提示二者可联合作为临床上卵巢癌治疗的潜在靶点。     

RNA干扰下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响.方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV-3,RT-PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后SKOV-3中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化;Boyden小室体外侵袭和划痕实验观察细胞侵袭和迁移能力,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:转染RhoA shRNA的实验组细胞与转染空载体的对照组细胞比较,RhoA mRNA的表达分别为(5.46±2.02)%和(56.37±17.42)%,蛋白质的表达分别为(6.03±2.04)%和(59.03±19.94)%,细胞平均侵袭百分比为(15.84±4.17)%和(33.64±4.64)%,愈合百分比为(44.79±6.21)%和(68.36±4.46)%,增殖能力(A值)分别为0.726±0.166和1.703±0.340,P<0.05(n=3);而粘附能力(A值)分别为0.833±0.137和0.894±0.189,P>0.05(n=3).结论:通过RNAi降低RhoA的表达能降低卵巢癌细胞SKOV-3体外侵袭、迁移和增殖能力.     

c-myc反义寡核苷酸对表达FHIT基因的结肠癌细胞增殖及凋亡作用的影响

目的：观察脂质体介导的c—myc反义寡核苷酸对表达FHIT基因的结肠癌细胞增殖及凋亡作用的影响。方法：用脂质体法将重组FHIT基因的PRC／CMV质粒和空载体质转染到人结肠细胞株SW480，随后分别转染c—myc反义寡核苷酸。Western blot法检测细胞FHIT和c—myc的表达；MTF法检测细胞的增殖；AO／EB染色法和流式细胞分析技术检测细胞的凋亡。结果：转染FHIT基因后，SW480细胞有明显的FHIT蛋白表达而转染空载体的细胞未检测到FHIT蛋白表达。C—myc反义寡核苷酸转染后，对SW480细胞c—myc的表达有明显的抑制作用（P〈0．01）；对FHIT＋／-SW480细胞的增殖均有明显的抑制作用（P〈0．01），且对FHIT＋SW480细胞的抑制作用明显强于FHIT—SW480细胞（P〈0．05）。同时，c-myc反义寡核苷酸对FHIT＋／-SW480细胞的凋亡均有明显的促进作用，对FHIT＋SW480细胞凋亡的促进作用明显强于FHIT—SW480细胞（P〈0．05）。结论：FHIT基因的表达和癌基因c—myc的表达抑制共同作用可以发挥较强的抗肿瘤细胞的效果，为多基因联合干预治疗肿瘤奠定了理论基础。     

干扰素诱导跨膜蛋白１对结肠癌ＳＷ４８０细胞株侵袭和转移能力的影响

目的　研究干扰素诱导跨膜蛋白１（ＩＦＩＴＭ１）对结肠癌ＳＷ４８０细胞株侵袭和转移的影响。方法　构建ＩＦＩＴＭ１／ｐＥＧＦＰ-Ｃ３重组质粒并且转染大肠癌细胞株ＳＷ４８０,免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜（ＬＣＳＭ）、ＲＴ ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定ＩＦＩＴＭ１／ｐＥＧＦＰ-Ｃ３重组质粒。Ｇ４１８筛选稳定过表达ＩＦＩＴＭ１的ＳＷ４８０细胞株（ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０）,细胞侵袭性实验、明胶酶法测定ＭＭＰ-２和ＭＭＰ-９活性,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＭＭＰ-９蛋白表达及ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０侵袭和转移能力。结果　成功构建ＩＦＩＴＭ１／ｐＥＧＦＰ-Ｃ３重组表达质粒,获得ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞株;细胞侵袭实验显示ＳＷ４８０细胞、ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞的细胞穿透数分别为（４４８.６４±３８.０９）个和（５４０.４５±４４.６１）个,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０１）;明胶酶法测定显示ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９活性较ＳＷ４８０和ｐＥＧＰＦ／ＳＷ４８０细胞明显增强。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ显示ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞ＭＭＰ-９表达水平明显高于ＳＷ４８０和ｐＥＧＦＰ／ＳＷ４８０细胞株。结论　ＩＦＩＴＭ１可增加大肠癌ＳＷ４８０细胞株侵袭和转移的能力。     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL内源mdr1基因对细胞增生的影响

目的构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的mdr1基因的短发夹状RNA重组质粒,研究其沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL内源mdr1基因对细胞增生的抑制作用。方法运用基因克隆技术构建靶向于mdr1基因的重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL,CCK-8检测对SKOV3／TAXOL细胞增生的抑制作用。结果构建的重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1能明显抑制mdr1基因的表达。CCK-8检测结果表明,转染重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1的SKOV3／TAXOL靶细胞的抑制率比对照组显著提高（P〈0．05）。pGPU6／GFP／Neo—mdr1明显抑制SKOV3／TAXOL细胞的增生。细胞凋亡检测显示,pGPU6／GFP／Neo—mdr1转染SKOV3／T后细胞凋亡增加,通过pGPU6／GFP／Neo—mdr1转染SKOV3／T促进凋亡的发生。结论mdr1基因在耐药的卵巢癌细胞增生与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1可有效地抑制SKOV3／TAXOL细胞内源mdr1基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增生和促进凋亡的发生,     

纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达

目的　研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法　以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶 酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果　 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论　纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。     

CAR抑制卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的研究

背景与目的:柯萨奇-腺病毒受体(coxsackieandadenovirusreceptor,CAR)最早作为2,5型腺病毒的受体而被人们发现和认识,近年的研究发现它还是粘附分子家族的一员,并参与肿瘤恶性表型改变。本研究通过转染真核表达载体,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的影响。方法:利用Westernblot和RT-PCR检测4株卵巢癌细胞CAR的表达;脂质体介导转染含有全长CAR基因的真核表达质粒至SKOV3细胞,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;体外粘附实验及软琼脂克隆形成实验验证CAR对SKOV3侵袭转移表型的影响。结果:4株卵巢癌细胞中,CAR表达水平不同程度下调,其中SKOV3细胞CAR表达缺失。转染后,SKOV3细胞CARmRNA和蛋白质水平表达均明显增高;细胞间粘附力明显增强;软琼脂克隆实验显示转染细胞每孔克隆形成数(25.3±8.9)明显低于未转染组(88.8±14.0)和转染空质粒组(82.5±19.4)。结论:外源性CAR基因的导入可以增强卵巢癌细胞SKOV3间的粘附性,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移表型。     

沉默轴突导向蛋白4D基因对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨沉默轴突导向蛋白4D(Sema4D)基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响,并验证Sema4D干扰RNA对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 针对Sema4D基因构建短发夹RNA(shRNA)重组载体pshRNA Sema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法筛选RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染卵巢癌SKOV3细胞(重组载体组),并以空载体组(转染空载体pcDNA3.1质粒)和未转染组(未作任何处理)为对照.采用RT-PCR法和Westem blot法分别检测转染前后SKOV3细胞中Sema4D mRNA和蛋白表达,并榆测转染前后SKO3细胞的增殖、侵袭和转移能力.建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,将满足成瘤标准的15只裸鼠随机分为pshRNASema4D组(重组载体组)、空载体组和未转染组,每组5只,分别向瘤块内注射pshRNASema4D-B(50μg/次)、空载体(50μg/次)和磷酸盐缓冲液(PBS,100μl/次),每3 d注射1次,共3周,观察移植瘤生长情况.结果 酶切鉴定和测序分析证实,靶向Sema4D的3个ShRNA重组载体pshRNASema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒构建成功.RT-PCR法筛选显示,重组载体pshRNASema4D-B质粒干扰效果最佳.重组载体组转染24、48和72 h时,SKOV3细胞中Sema4DmRNA的相对表达水平分别为0.401.4±0.051、0.120±0.035和0.014±0.015,重组载体组转染72 h时的Sema4D mRNA相对表达水平明显低于空载体组(0.521±0.019)和未转染组(0.536±0.040,P<0.05).Western blot法检测显示,重组载体组转染24、48和72 h时,细胞中Sema4D蛋白的相对表达水平分别为0.196±0.023、0.074±0.015和0.040±0.014,重组载体组转染72 h时的Sema4D蛋门相对表达水平明显低于空载体组(0.275±0.009)和未转染组(0.282±0.015,P<0.05).与空载体组和未转染组比较,重组载体组细胞增殖、侵袭和迁移能力受到抑制(P<0.05).注射pehRNASema4D-B后,裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤块重量较空载体组和未转染组明显降低(P<0.05).结论 RNA干扰技术能成功沉默SKOV3细胞中Sema4D基因的表达,通过下调Sema4D基因的表达呵抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭及转移,Sema4D干扰RNA能抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,Sema4D基因可能成为人卵巢癌基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一.

Abstract：

Objective To observe the effect of DNA Sema4D gene silencing by RNA interfering on the proliferation, migration and invasion of human ovarian cancer SKOV3 cells, and to study the effect of pshRNASema4D on the growth of SKOV3 cells in transplanted tumor in nude nice. Methods Recombinant plasmid pshRNASema4D-A, B and C were respectively transfected into SKOV3 cells by lipofetamine 2000, while cells transfected by plasmid vector pcDNA3.1 and cells untreated as control groups. RT-PCR was adopted to select the recombinant plasmid which showed the most optimal inhibition effect. RT-PCR and Western blotwere used to detected the mRNA and protein expression of Sema4D in SKOV3 cells tranfected for 24, 48 and 72 hours. MTT assay was used to investigate the proliferation of the SKOV3 cells after trasnsfection. Transwell cell migration and invasion assays were used to investigate the migration and invasion abilities of the SK0V3 cells after trasnsfection. Human ovarian cancer model was established in nude mice, and the nude mice were treated with pshRNASema4D-B once every 3 days for 3 weeks. The bulk of the transplanted tumor was measured. Results Three Sema4D-targeted short hairpin RNA (shRNA) A, B and C were successfully inserted into the plasmid vector pshRNA, and the coding sequences of the obtained shRNA were consistent with the designed fragment. The results indicated that both recombinant plasmid pshRNASema4D-A and B could effectively knock down the expression of Sema4D gene in human ovarian cancer cells, of which pshRNASema4D-B was the better choice, while no effect of pshRNASema4D-C was seen. RT-PCR results showed that the relative mRNA expression of Sema4D gene in SKOV3 cells transfected with pshRNA-Sema4D for 24, 48 and 72 hours were 0. 401 ±0.051, 0. 120 ±0.035 and 0.014 ±0. 015, respectively, which were significantly lower than that in SKOV3 cells transfected by empty vector and non-transfected cells at 72 hours after transfection. (0.521 ±0.019, 0.536 ±0.040,respectively, P<0.05). The Westen blot analysis manifested that the relative expression of Sema4D protein of SKOV3 cells transfected by pshRNASema4D for 24, 48 and 72 hours were 0. 196 ± 0. 023, 0. 074 ± 0. 015 and 0. 040 ± 0.014, respectively, which were significantly lower than that in SKOV3 cells transfected by empty vector and non-transfected cells at 72 hours after transfection. (0. 275 ± 0. 009, 0. 282 ± 0. 015, respectively, P < 0. 05 ). Comparing with the empty vector-transfected and non-transfected cells, the proliferation, invasion and migration ability of SKOV3 cells transfected with pshRNA-Sema4D were obviously weakened. The pshRNASema4D-B significantly suppressed the growth of the SKOV3 cells-transplanted tumors in nude mice, and the IR( inhibitory rate ) of pshRNASema4D-B group was ( 61.0 ± 3.3 ) % ( P < 0.05). Conclusions Sema4D can be successfully silenced by RNA interfering in human ovarian cancer SKOV3 cells. Downregulation of Sema4D can inhibit the proliferation, migration and invasion of ovarian cancer cells. The pshRNASema4D can significantly suppress the growth in transplanted tumor of human ovary cancer in nude mice. Sema4D may become a candidate gene of gene therapy of human ovarian cancer.     

芬太尼调控LINC00184抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭

目的:研究芬太尼对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭等生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用CCK-8实验、克隆形成实验检测芬太尼对SKOV3细胞体外增殖的影响;分别采用流式细胞术和Transwell实验检测芬太尼对SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响;Western blot检测细胞增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达。qRT-PCR检测LINC00184在卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞株的表达;构建LINC00184过表达质粒并转染SKOV3细胞,观察上调LINC00184表达对芬太尼处理的SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:芬太尼在体外呈时间和浓度依赖性抑制SKOV3细胞存活,而不明显影响正常卵巢上皮细胞HOSE的存活率。相比对照组,使用5 ng/mL和10 ng/mL芬太尼处理SKOV3细胞,显著下调LINC00184表达水平,降低体外克隆形成率,抑制Ki67、PCNA蛋白表达（均P＜0.01）;显著增加SKOV3细胞凋亡率,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达（均P＜0.01）;显著降低侵袭细胞数,上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin、MMP9蛋白表达（均P＜0.01）。而使用LINC00184过表达质粒上调LINC00184表达则明显削弱芬太尼对SKOV3细胞的上述作用（P＜0.01）。结论:LINC00184在卵巢癌细胞表达上调,并与卵巢癌细胞的增殖、凋亡和侵袭等生物学特性相关;芬太尼通过下调LINC00184表达抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭,并诱导其凋亡。     

siRNA沉默结肠癌转移相关基因1表达对人类卵巢癌细胞株侵袭转移的影响

目的 检测结肠癌转移相关基因1（MACC1）在卵巢癌细胞株中的表达,并探讨用siRNA技术抑制其表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响.方法 应用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）及Western blot法检测OVCAR3、ES-2、SKOV3、HO-8910卵巢癌细胞株中MACC1的表达,合成MACC1特异性siRNA并转染OVCAR3细胞,利用RT-qPCR筛选并鉴定MACC 1基因有效沉默后,应用体外黏附实验、Transwell迁移及侵袭实验、体外血管拟态实验检测MACC1基因沉默后OVCAR3细胞的体外黏附、迁移、侵袭及血管生成能力的变化.结果 OVCAR3细胞较其他卵巢癌细胞株高表达MACC1.MACC1基因沉默后,OVCAR3细胞的体外黏附能力受到不同程度的抑制;Transwell迁移实验中,MACC1 siRNA干扰的OVCAR3细胞（干扰组）转入底层膜的细胞数为（245.5±12.8）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（500.3±16.5）、（496.3±13.1）个,均P＜0.05]; Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜的细胞数为（185.3±14.1）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（405.7±9.1）、（416.3±11.5）个,均P＜0.05];体外血管拟态显示干扰组细胞多呈散在分布,连接减少,形成的完整结构少.结论 利用siRNA技术抑制MACC1基因表达可有效抑制卵巢癌OVCAR3细胞的体外转移和侵袭能力,MACC1有望成为卵巢癌治疗的靶基因.     

法舒地尔对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨法舒地尔对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 采用不同浓度的法舒地尔处理胃癌MGC-803细胞,检测细胞数目;选择无显著细胞毒性的3组浓度（10、25、50 μmol／L）法舒地尔进行后续实验,将经药物处理的胃癌MGC-803细胞作为处理组,而未经药物处理的胃癌MGC-803 细胞作为对照组;细胞培养0、24、48、72、96 h后,CCK-8法检测细胞增殖倍数;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Western blotting检测细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶14（MMP-14）和上皮间质转化（EMT）的标志蛋白波形蛋白（Vimentin）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示,法舒地尔以剂量依赖性的方式抑制胃癌MGC-803细胞的生长,法舒地尔浓度越高,处理组的细胞数量越少,增殖倍数明显降低（P＜0.01）;划痕实验结果表明,处理组伤痕愈合率明显较对照组降低,且法舒地尔浓度越高,处理组伤痕愈合率越低（P＜0.01）;Transwell结果显示,与对照组比较,处理组侵袭的细胞数目明显减少（P＜0.01）;与对照组比较,法舒地尔明显下调VEGF、MMP-9、MMP-14和Vimentin蛋白的表达水平,而上调E-cadherin蛋白的表达水平。结论 法舒地尔可抑制胃癌MGC-803细胞的的增殖、迁移和侵袭能力,降低MMP-9、MMP-14、VEGF表达水平,为胃癌的治疗研究提供新思路和理论基础。