DNA探针检测间日疟原虫的初步研究

由于间日疟原虫目前尚不能体外培养,抗原制备困难,使间日疟的流行病学调查及诊断受到限制。本文报道以间日疟原虫红内期基因组DNA库0.24kb DNA片段为探针,用~(32)P标记后进行点杂交试验检测间日疟原虫的初步结果。 材料与方法 含间日疟原虫红内期基因组DNA库亚克隆VPL101/5 0.24kb DNA片段的重组质粒pUC19由澳大利亚昆士兰医学研究所Kidson赠送。按文献方法进行感受态细胞JM 109的制备、重组质     

恶性疟原虫DNA探针检测血内恶性疟原虫的初步研究

从培养恶性疟原虫(Fcc-1)中分离纯化基因组DNA,用~(32)P标记,作为探针,按DNA斑点杂交法,检测血样。结果表明:该探针可检出9个恶性疟原虫感染红细胞/10_6红细胞;在现场应用时,与13例恶性疟阳性标本镜检符合率为92％:与1例间日疟原虫病例和正常人血、白细胞之间,未发现非特异性杂交。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

恶性疟原虫特异的质粒型DNA探针的制备

恶性疟原虫 DNA 与 pBR_(322)质粒 DNA 体外重组后,导入 E.coli HB_(101)建成基因文库,用疟原虫全基因组 DNA 从文库中筛出了5个杂交信号特强的克隆 pBF_1,pBF_2,pBF_3,pBF_4和 pBF_5。克隆 pBF_4 DNA与 P.c DNA,P.b DNA,及人白细胞 DNA 均无交叉反应,与 P.f DNA 杂交时,可检出的最低 DNA 量为10pg。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。     

基因组、克隆重组DNA探针平行检测恶性疟原虫的初步研究

本文报告实验室制备恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ分离株）基因组ＤＮＡ．酶切冻融回收克隆重组ｐＰＦ１４ＤＮＡ，经３２Ｐ缺口移位法标记作为探针，按ＤＮＡ—ＤＮＡ斑点杂交试验平行检测Ｐ．ｆ．ＤＮＡ及血样中恶性疟原虫的初步结果．两探针检测人工培养的恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ）敏感度，基因组探针为０．０００７８％原虫血症和７．８３ｐｇ原虫ＤＮＡ，ｐＰＦ１４探针为０．００７８％和１５．６３ｐｇ。镜检确诊并复核后的５６例云南恶性疟病人血样，基因组探针检出５３例（９４．６４％），ｐＰＦ１４探针检出５１例（９１．０７％）．９例间日疟病人血样，基因组探针阳性７例，ｐＰＦ１４探针均未显示杂交．２例伯氏鼠疟、１例刚地弓形虫阳性鼠及１０例正常人血样皆为阴性．结果揭示：这两种探针似可用于我国疟疾主要流行区恶性疟原虫检测。与基因组探针相比，ｐＰＦ１４探针似是发展适合于我因恶性疟原虫大规模核酸诊断技术中，比较经济、方便的探针来源。     

光敏生物素DNA探针用于血内和蚊体内疟原虫的检测

从恶性疟原虫基因文库中筛选的具有Ｐ．ｆ种特异的质粒型ｐＢＦ２克隆ＤＮＡ经光敏生物素标记后作探针，用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫，敏感性和持异性均达应用水平，显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。     

光敏生物素DNA探针用于血内和蚊体内疟原虫的检测

从恶性疟原虫（Ｐ．ｆ） 基因文库中筛选的具有Ｐ．ｆ 种特异的质粒型ｐＢＦ２ 克隆ＤＮＡ 经光敏生物素标记后作探针，用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫，敏感性和特异性均达应用水平，显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。     

PCR／DNA探针检测系统用于间日疟原虫检出及基因型检测？…

根据间日疟原虫环子孢子表面蛋白（ＣＳＰ）基因序列研制了ＰＣＲ／ＤＮＡ探针检测系统,试验证明该检测方法对间日疟原虫特异,检出原虫密度为０．２个／μｌ病人阳性检出率为９６．２％,试验中对不同ＰＣＲ操作过程及试验样本不同处理方法的检测结果进行了比较。     

恶性疟原虫基因文库构建及特异DNA探针的应用研究

将恶性疟原虫Ｆｃｃ－１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ用ＨｉｎｄⅢＤＮＡ用ＨｉｎｄⅢ消化与ｐＢＲ３２２重组后导入大肠杆菌ＨＢ１０１,转化效率为１．５×１０＾６转化子／μｇ ＤＮＡ,建成基因库。用Ｐ．ｆ基因组ＤＮＡ原位杂交,证明了该库的有效性,又筛出特异克隆。克隆之一ｐＢＦ２ ＤＮＡ用＾３２Ｐ和光敏生物素标记作探针,可分别从间日疟原虫,恶疟原虫,伯氏疟原虫,食蟹猴疟原虫和人白细胞ＤＮＡ样本中特异地检出Ｐ,ｆ     

PCR/DNA探针检测系统用于间日疟原虫检出及基因型检测的研究

根据间日疟原虫环子孢子表面蛋白（ＣＳＰ）基因序列研制了ＰＣＲ／ＤＮＡ探针检测系统。试验证明该检测方法对间日疟原虫特异,检出原虫密度为０．２个／μｌ,病人阳性检出率为９６．２％。试验中对不同ＰＣＲ操作过程及试验样本不同处理方法的检测结果进行了比较。在样本的原虫基因型检测分析中,基因优势型ＰＶ２１０阳性率为８８．５％,基因变异型ＰＶ２４７阳性率为１１．５％,混合型阳性率为３．８％,基因变异型均出现在云南省采集的血样中     

应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA

由于ＤＮＡ探针杂交反应特异性高 ,国内外研究者已采用ＤＮＡ探针杂交技术检测结核分枝杆菌。但该检测方法敏感性较低 ,通常采用与聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增相结合的方法。但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会。我们在对ＤＮＡ探针与ＰＣＲ结合检测临床标本进行系统研究的基础上 ,发现临床标本简化法处理 ,即ＤＮＡ探针化学发光检测 ,ＤＮＡ损失较少 ,还可提高检测的敏感性 ,现将结果报道如下。材料与方法一、菌种来源受试分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所。二、标本收集结核患者痰标本 2 31份 ,血液标本 85份 ,脑脊液、胸、…     

PCR-ELISA检测疟原虫DNA的研究

目的：介绍一种诊断疟疾的新方法ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ。方法：根据业已报道的疟原虫ＳＳＵｒ－ＲＮＡ基因保守序列，设计并合成一对通用于恶性疟原虫和间日疟原虫的引物，其中一引物的５’端加以生物素标记。经ＰＣＲ扩增后，携带有生物素的扩增产物与先期包被于ＥＬＩＳＡ板上的亲和素结合，再经与恶性疟原虫、间日疟原虫特异、荧光素标记的寡核苷酸探针分别杂交，底物显色等步骤，使ＰＣＲ产物得以半定量地检出。结果：对于恶性疟原虫和间日疟原虫，本法检出最低原虫密度阈值分别为４和１０个原虫／μｌ血（取血２０μｌ），本法检测两种疟原虫未发现交叉反应。结论：本试验具有较高的敏感度和特异性，可望用于疟疾流行病学调查