塞来昔布对胶质瘤细胞线粒体膜电位的影响

目的观察塞来昔布（Celecoxib）降低U251脑胶质瘤细胞线粒体膜电位（MMP）并诱导其凋亡的相关规律。方法采用100μmol／L塞米昔布处理培养的U251细胞，并用流式细胞仪检测其MMP和细胞凋亡的变化。结果经塞来昔布处理后胶质瘤细胞MMP明显降低，并随时间延长而变化。单染实验中12h和24h处理组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；12h组与24h组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。双染实验中Rhl23-PI-细胞为细胞膜完整，MMP降低，即将发生凋亡的细胞，12h处理组MMP明显降低，Rhl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01）；24h处理组与对照组比较，MMP降低，Pthl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01），但与12h组比较，MMP降低，Pthl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01）。结论塞米昔布能有效降低胶质瘤细胞线MMP并能诱导U251细胞发生凋亡，从而降低细胞氧化供能，使胶质瘤细胞处于缺氧状态。塞米昔布对胶质瘤细胞MMP的影响可能参与胶质瘤细胞凋亡。     

动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)在动脉粥样硬化组织中的表达以及选择性COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的人血管平滑肌细胞(VSMCs)在细胞增殖和凋亡中的作用.方法 对22例动脉粥样硬化组织切片进行COX-2免疫组织化学染色;对体外培养的原代人VSMCs以不同浓度的塞来昔布处理24 h,以噻唑蓝(MTT)细胞增殖及细胞毒性检测法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞早期凋亡.结果 免疫组织化学染色阳性表达率为95％,且在血管内膜、中膜和外膜均有阳性细胞存在;体外培养的人VSMCs中加入塞来昔布可明显抑制COX-2的表达;浓度为0、10、20、40、80 μmol/L的塞来昔布作用于VSMCs 24 h后,以MTF法检测细胞存活率分别为100.00％、90.06％、81.38％、75.41％、68.90％;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率分别为0.02％、0.62％、0.92％、1.17％、1.63％.结论 COX-2大量表达于动脉粥样硬化组织中,特别表达于炎性巨细胞以及中层VSMCs中,塞来昔布可抑制体外培养的人VSMCs中COX-2的表达,从而抑制其增殖并诱导其凋亡,两者均呈剂量依赖性.     

塞来昔布对SKBR3细胞增殖、凋亡及核干细胞因子表达的影响

目的 观察塞来昔布对SKBR3细胞增殖与凋亡及核干细胞因子(NS)基因表达的影响.方法 体外培养人乳腺癌SKBR3细胞株高表达[人表皮生长因子受体(Her)-2/neu],应用噻唑蓝(MTT)、细胞形态学观察、免疫印迹、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)酶活性测定、流式细胞术等,观察塞来昔布对 SKBR3细胞增殖与凋亡的影响,并检测NS基因在肿瘤细胞中的定位与表达变化.结果 MTT代谢率测定结果显示塞来昔布能显著抑制SKBR3细胞的增殖,并且呈浓度依赖性,与对照组比较,细胞形态学观察到塞来昔布加药组SKBR3细胞出现典型的凋亡细胞特征.免疫荧光与免疫印迹结果显示NS蛋白和p53蛋白的表达水平随着塞来昔布浓度的增加而逐渐增加(在塞来昔布为1 5、30、60、120 μmol/L时,NS蛋白分别为0.460±0.094、0.695±0.124、0.820±0.161、1.058 ±0.196,p53蛋白分别为0.898±0.166、1.231±0.254、1.518±0.309、1.828±0.362),而环氧合酶-2(COX-2)蛋白(分别为0.252±0.053、0.184±0.032、0.131 ±0.028、0.099±0.019)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白(分别为0.829±0.178、0.661±10.112、0.524 ±0.108、0.378±0.075)则相反.流式细胞仪检测结果显示塞来昔布使SKBR3细胞周期阻滞在G0/G1期结论 塞来昔布以浓度依赖的方式抑制SKBR3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与NS表达上调有关.     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对膀胱癌T24细胞杀伤作用的研究

目的：体外观察塞来昔布对人膀胱癌T24细胞株的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法i采用MTT法检测塞来昔布对T24细胞的生长抑制作用;采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Western印迹法检测塞来昔布作用前后T24细胞COX-2蛋白的表达变化;采用RT—PCR法检测塞来昔布作用前后T24细胞Bcl-2及Bax基因的表达变化。结果：塞来昔布（≥100μmol／L）作用24h及48h后能明显抑制T24细胞的生长并诱导凋亡;塞来昔布100μmol／L作用,24h及48h后,T24细胞COX-2蛋白表达量下降,Bcl-2基因表达亦下调,而Bax基因在塞来昔布作用24h后变化不明显,48h后表达上调。结论：塞来昔布能抑制T24细胞增殖并诱导其凋亡,可能与下调Bcl-2、上调Bax基因表达有关。     

选择性环氧合酶-2抑制剂用于食管腺癌化学预防的实验研究

目的探讨选择性环氧合酶．2（COX．2）抑制剂塞来昔布用于食管腺癌化学预防的可行性。方法采用胃空肠吻合加食管空肠吻合术建立混合反流sD大鼠动物模型。分为模型组（60只）和塞来昔布处理组（处理组,60只）;对照组（20只）仅行单纯剖腹术。术后28周取食管进行病理组织学检查．观察炎性反应程度和致癌情况．免疫组织化学染色检测COX-2的表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测前列腺素E2（PGE2）含量。结果模型组与处理组Barrett食管发生率的差异无统计学意义[84％（41／49）比75％（39／52）,P〉0．05],但模型组食管腺癌发生率显著高于处理组[57％（28／49）比17％（9／52）,P〈0．01]。对照组未见Barrett食管或食管腺癌改变。在大鼠正常食管和空肠组织中均未检测到COX-2表达．而在反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌组织中COX-2表达率为100％。模型组食管组织中PGE2含量显著高于无反流组（P〈0．01）,而处理组大鼠食管组织中PGE2含量显著低于模型组（P〈0．01）。结论塞来昔布显著降低了酸和十二指肠液混合反流模型大鼠Barrett食管癌变的危险。COX-2有可能成为食管腺癌化学预防药物的有效作用靶点。     

高浓度谷氨酸对原代培养人脑胶质瘤细胞生长抑制和凋亡的影响

目的探讨高浓度谷氨酸对人脑胶质瘤原代培养细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法在体外对新鲜的人脑胶质瘤标本进行原代培养；不同浓度的谷氨酸作用不同时间后，进行形态学观察噻唑蓝（MTT）法检测生长抑制率；流式细胞仪Armexin V-FITC／PI双染法检测凋亡率。结果原代人脑胶质瘤细胞短期培养成功。高浓度谷氨酸对培养细胞有明显的抑制作用，并且存在一定的剂量依赖关系。当谷氨酸的浓度为25～50mmol／L时，可明显诱导培养细胞凋亡，并且凋亡率随药物浓度增加和时间延长而增高；当谷氨酸浓度达100mmol／L以上时，细胞则主要以坏死为主。结论以酶消化法可成功对人脑胶质瘤细胞进行体外原代培养；在一定的浓度范围内，高浓度谷氨酸能明显的抑制原代培养人脑胶质瘤细胞生长，并诱导其凋亡。     

特异性环氧合酶-2抑制剂与不同抗癌药联用对胶质瘤细胞生长的影响

目的 观察特异性环氧合酶-2抑制剂依托昔布和塞来昔布(celebrex)与长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)、鬼臼噻吩甙(VM-26)等抗癌药联用对胶质瘤细胞增殖的影响.方法 30 μmol/L依托昔布、100 μmol/L塞来昔布与不同浓度的VCR、DDP、VM-26单用、联用48 h.噻唑蓝(MTT)比色法检测各组抑制率,中效原理和金正均法评价特异性环氧合酶-2抑制剂与各抗癌药联用的效果.结果 30μmol/L依托昔布和100 μmol/L塞来昔布单用对胶质瘤细胞增殖抑制率分别为(40.87±1.88)%和(46.81±2.37)%;不同浓度(1、10、100 mg/L)的VCR、DDP、VM-26单用对胶质瘤细胞增殖均有不同程度的抑制作用;依托昔布和塞来昔布与不同浓度VCR、DDP、VM-26联用组的抑制率均高于各药物单用组,具有协同作用.结论 依托昔布和塞来昔布与抗癌药联用后起协同作用,特异性环氧合酶-2抑制剂可作为抗癌药的化疗增敏剂.     

塞来昔布抑制脑胶质瘤细胞运动侵袭的影响

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对13251胶质瘤细胞运动侵袭能力的影响.方法 采用脑胶质瘤细胞的体外趋化运动模型和体外侵袭模型,分12、24 h的不同时间进行了Celecoxib抑制胶质瘤细胞运动侵袭的生物特性研究.结果 趋化运动实验中Celecoxib处理后12 h组、24 h组细胞较对照组细胞的趋化运动能力明显下降,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞趋化运动抑制率为52.57%、73.91%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭实验中Celecoxib处理12、24 h后侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组的细胞数,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞组织侵袭抑制率为55.90%、85.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Celecoxib能在模拟体内运动侵袭试验中有效抑制U251胶质瘤细胞的运动侵袭能力.     

Smac蛋白对C6胶质瘤细胞的影响

目的 观察Smac蛋白对c6胶质瘤细胞的影响.方法 以不同浓度(1.5×10-6～1.5×10-2)g/L作用于C6胶质瘤细胞24～72 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期的影响.结果 (1)Smac能以剂量和时间依赖方式抑制C6胶质瘤细胞的增殖,在终质量浓度为1.5×10-2g/L,72 h时抑制率达(57.13±1.41)%,24 h半数抑制浓度(IC50)为:1.34×10-2g/L,其差异具有统计学意义(P<0.01);(2)经流式细胞仪分析,Same蛋白能诱导C6胶质瘤细胞发生凋亡,此作用呈剂量和时间依赖性;(3)Smac蛋白可将c6胶质瘤细胞阻滞在G0/G1期.结论 Smac蛋白能够显著抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导其凋亡,其机制可能与C6胶质瘤细胞周期阻滞在G0/G1期有关.     

白花蛇舌草对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其机制

目的 观察白花蛇舌草在体外对胶质瘤U87细胞株增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 用不同浓度的白花蛇舌草含药培养基(0、5、10、15、20ml/L)处理U87细胞不同时间(24、72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对U87细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测对照组与实验组细胞的凋亡差异,免疫印迹法检测U87细胞中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达水平的改变.结果 经白花蛇舌草5、10、15、20ml/L处理后,U87细胞增殖受到明显抑制,呈显著的剂量依赖性;经白花蛇舌草(5、10 ml/L)处理后U87细胞的凋亡率分别增加到(5.22±0.29)%、(8.38±0.65)%,明显高于对照组的(3.09±0.05)%(P＜0.01);白花蛇舌草可明显上调U87细胞中Caspase-3的蛋白表达,且呈浓度依赖性.讨论白花蛇舌草对胶质瘤U87细胞生长的抑制作用可能通过上调Caspase-3基因的表达从而诱导细胞凋亡实现.     

Effects of a selective cyclooxygenase-2 inhibitor (celecoxib) on fracture healing in rats

Background:

Several studies suggested that celecoxib interferes with bone healing while others contradict these findings. This study was conducted to investigate the effects of celecoxib on bone healing in rats femur mold with a dose based on body surface area conversion.

Materials and Methods:

72 adult female Sprague Dawley rats were randomly divided into three groups after the internal fixation operation of nondisplaced transverse mid diaphyseal fractures of the right femurs. Each group was treated with 1% methylcellulose, celecoxib (21 mg/kg/d) for 1 week, or celecoxib (21 mg/kg/d) for 4 weeks after surgeries respectively. Bone healing scores and callus formation were evaluated by radiographs at 3, 4, 6 weeks after surgeries. Half of these rats were sacrificed for histological analysis at 4 weeks after surgery. The remaining fractured femurs were evaluated by biomechanical tests at 6 weeks after surgery.

Results:

The mean radiographic scores for fracture healing of both short and long term groups were lower than that of the control group and the differences among the three groups were statistically significant (P < 0.05) at 3, 4, 6 weeks after surgery. The mean bone trabecula density of both groups was smaller than that of the control group and the differences were also statistically significant (P < 0.05) at 4 week. The maximum load, total energy and stiffness in both the short term and long term groups were significantly decreased compared with those in the control group (P < 0.05) at 6 week.

Conclusion:

Both short term and long term sustained use of celecoxib in rat models has significantly inhibitory effects on rat fracture healing.     

增殖细胞核抗原在脑胶质瘤中的表达

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)在不同类型胶质瘤细胞中的表达 ,以及与复发、预后的关系。方法　应用抗 PCNA单克隆抗体 (小鼠IgGza型 ) ,对 61例脑胶质瘤患者病理切片行免疫组织化学染色 ,不同类型胶质瘤PCNA标记指数进行差异分析。结果　不同类型胶质瘤的PCNA标记指数 (LI)不同 ,随着胶质瘤恶性程度增高而增大 ,两者呈显著正相关 (r =0 .895 ,P <0 .0 1) ,各级别间LI的差异非常有显著性 (P <0 .0 1) ;死亡组与存活组间LI差异有显著性 ;肿瘤首发与否、性别、年龄组间差异无显著性 ;恶性程度、PCNA标记指数和放疗与否与预后相关 (P <0 .0 5 )。结论　PCNA可以作为提示胶质瘤预后的指标 ,对确定胶质瘤的生物学特性和肿瘤的分级有指导作用。不同恶性程度胶质瘤间LI差异有显著性 ,与恶性程度正相关 ,与胶质瘤的预后关系密切 ,PCNA的过度表达提示肿瘤恶性程度高 ,预后差。     

噻莱昔布(celecoxib)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的:研究环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX2)抑制剂celecoxib对人骨肉瘤细胞MG63抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:MTT比色观察celecoxib的细胞毒性作用及其浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色、透射电子显微镜和TUNEL观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及其时间依赖性。结果:celecoxib分别以10、20、40、80μmol/L作用后,细胞生长受到不同程度抑制;荧光显微镜、电镜和TUNEL观察到细胞胞浆浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。流式细胞仪显示celecoxib40μmol/L作用24、48、72h后,细胞凋亡率分别与对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:celecoxib能抑制人MG63细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

花生四烯酸乙醇胺对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察神经酰胺通路在大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺（AEA）抑制人胶质瘤U251细胞增殖及诱导细胞凋亡中的作用。方法 噻唑蓝（MTT）法分别测定合用不同浓度c2-神经酰胺（5～20μmol／L）或用烟曲霉毒素（FBl）（1，10μmol／L）预处理24h对AEA（1～10μmol／L）抑制U251细胞增殖作用的影响；流式细胞仪annexin-V／PI双染色法定量分析10μmaol／LFB1预处理24h后对10μmol／LAEA促细胞早期凋亡作用的影响。结果 AEA浓度依赖性抑制U251细胞的增殖且与C2-神经酰胺具协同作用；10μmol／LFB1预处理24h可显著对抗AEA对U251细胞增殖的抑制作用。AEA（10μmol／L）可诱导U251细胞发生早期凋亡（21．3％），而FB1（10μmol／L）预处理后凋亡发生率降为8．3％。结论 AEA可通过增加神经酰胺从头合成抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导早期凋亡。     

选择性COX-2抑制剂Nimesulide对肝肿瘤细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的观察环氧合酶(COX)-2抑制剂尼美舒利(Nimesulide)对肝肿瘤细胞HepG2增殖和凋亡的影响.方法用不同浓度(100、200、300μmol/L)的Nimesulide处理HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法检测Nimesulide对HepG2细胞增殖的影响;Western印迹法检测HepG2细胞半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达,流式细胞术检测细胞凋亡.用放射免疫测定法检测Nimesulide对HepG2细胞PGE2释放水平,反映Nimesulide对COX-2活性的影响.结果 100、200、300μmol/L的Nimesulide作用于HepG2细胞,其A值分别为1.69±0.16,1.06±0.09,0.62±0.06,与对照组(3.09±0.28)相比,差异有非常显著性(P＜0.01).Nimesulide诱导HepG2细胞的凋亡率分别为(4.53±2.15)、(6.02±3.50)、(16.24±7.92),与对照组比较(2.84±1.88,P＜0.01).Nimesulide干预的HepG2细胞的Caspase-3的蛋白表达均明显升高,A值分别为(46.96±2.86)、(60.28±3.05)、(76.59±4.26),与对照组相比(32.57±1.83)差异有非常显著性(P＜0.01).Nimesulide可明显诱导HepG2细胞Caspase-3蛋白活性的升高,A值分别为(0.46±0.03)、(0.73±0.06)、(0.91±0.12),与对照组相比(0.28±0.02),差异有显著性(P＜0.01).Nimesulide可明显抑制HepG2细胞PGE2释放水平,其值分别为(72.34±6.64)、(51.67±4.37)和(30.28±2.67),与对照组比较差异有非常显著性(P＜0.001).结论 Nimesulide抑制肝肿瘤细胞HepG2增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

脑胶质瘤增殖活性与转化生长因子-β1的关系

目的 探讨胶质瘤中转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白与增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白在胶质瘤中的表达及相互关系。方法 根据WHO标准进行分类，采用免疫组织化学方法对35例胶质瘤和7例正常脑组织石蜡标本中TGF-β1与PCNA蛋白的表达水平进行检测，并比较两者的相关性。结果 TGF-β1和PCNA蛋白在胶质瘤细胞中有不同程度的表达，两者呈正相关（r=0．78，P＜0．01），且它们在正常脑组织，低、高级别胶质瘤之间两两比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 人脑胶质瘤TGF-β1蛋白的阳性表达与细胞增殖活性和组织学分级密切相关，它可能参与了人脑胶质瘤细胞的恶性转化。     

bFGF及其抗体对移植前列腺癌生长影响的研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及其抗体对裸鼠人前列腺癌移植瘤生长的影响和作用机制。方法建立人前列腺癌细胞系（DU-145）细胞裸鼠皮下移植瘤动物模型,观察移植肿瘤生长及荷瘤裸鼠状况,观察bFGF与bFGF抗体对裸鼠皮下瘤生长状况的影响;应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）和CD34的表达。结果 1bFGF治疗组移植瘤重量和体积分别比对照组显著增多,移植瘤组织中PCNA指数和微血管密度（MVD）也显著提高;2bFGF抗体治疗组移植瘤体积重量和体积比对照组均显著减少,移植瘤组织中PCNA指数和MVD也显著降低。结论 bFGF能促进前列腺癌细胞的增殖生长,bFGF抗体则能抑制肿瘤的细胞生长,其作用机制与调控肿瘤细胞的增殖和血管形成密切相关。