人参皂甙对肝癌介入前后VEGF、AFPh的影响

将66例肝癌患者随机分为两组,介入组采用经导管肝动脉栓塞术治疗,栓塞剂选择碘油;联合组在介入治疗的基础上,给予参一胶囊口服,2粒／次,2次／d。酶联免疫吸附法检测患者术前1周、术后1周及1个月甲胎蛋白（AFPh）和血管内皮生长因子（VEGF）水平。结果介入治疗1周、1个月后,联合组VEGF、AFPh水平均明显低于介入组（P〈0．05）。提示人参皂甙-Rg3可降低单纯肝动脉栓塞引起的癌组织VEGF高表达,减少肿瘤新生血管形成,加强其抑瘤作用。     

食管鳞癌患者血清中VEGF的表达变化及意义

目的观察食管鳞癌患者血清血管内皮生长因子（VEGF）的表达变化,并探讨其意义。方法采用ELISA法检测46例食管鳞癌患者和10名健康体检者外周静脉血血清中的VEGF。结果食管癌患者血清VEGF水平为（502.176±65.218）pg/ml,对照组为（311.648±40.984）pg/ml,两组相比,P〈0.01;根据肿瘤国际TNM分期标准：食管癌组Ⅰ期＋Ⅱ期者血清VEGF水平为（446.890±50.602）pg/ml,Ⅲ期者为（580.012±56.996）pg/ml,两组相比,P〈0.01;浸润深度T1＋T2者血清VEGF水平为（434.725±49.703）pg/ml,T3者为（503.504±68.500）pg/ml、T4者为（595.441±48.192）pg/ml,三者相比,P均〈0.01;有淋巴结转移者血清VEGF水平为（576.011±61.798）pg/ml,高于无淋巴结转移者的（464.340±68.639）pg/ml,P〈0.01。结论食管鳞癌患者血清VEGF表达升高,与肿瘤的发生、浸润深度、淋巴结转移情况及TNM分期相关。VEGF是食管鳞癌发生发展预后判断的一个有价值的依据。     

人参皂甙Rg3对人食管癌EC-9706细胞及内源性VEGF的影响

培养人食管癌细胞株EC0706,不同浓度中药20（R）-人参皂甙Rg3和不同时间点进行干预,采用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学等技术了解不同浓度Rg3对此细胞增殖、凋亡、细胞周期及内源性VEGF的影响。MTT法示不同浓度Rg3对人食管癌细胞株EC0706的增殖均有明显抑制作用;流式细胞术示Rg3能诱导细胞凋亡及调节细胞周期;免疫细胞化学示Rg3能抑制细胞内源性VEGF的表达。认为适当浓度的RS3作用一定时间后,可促进人食管癌细胞株EC0706的凋亡,并可抑制肿瘤细胞内源性分泌的VEGF的表达,Rg3抑制肿瘤血管生成的机制之一是通过影响细胞分泌上述因子而起作用的。     

食管鳞癌组织中survivin、VEGF表达相关性及其临床意义

目的观察survivin和血管内皮生长因子（VEGF）在食管癌组织中的表达,探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测58例食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的survivin、VEGF。结果survivin、VEGF在食管癌组织中阳性率明显高于癌旁组织（P〈0．05）;其表达与TNM分期、有无淋巴结转移有关（P〈0．05）,与患者性别、年龄、组织学分型、是否累及浆膜无关（P〉0．05）;二者表达呈正相关（r=0．340,P〈0．05）。结论survivin、VEGF在食管癌中高表达,二者在食管癌的侵袭和转移中发挥重要作用,并具有协同作用。     

伊班膦酸钠对食管鳞癌EC9706细胞增殖及VEGF表达的作用

目的了解双膦酸盐(BPs)对人食管癌EC9706细胞株增殖的影响,探讨伊班膦酸钠对VEGF表达的作用。方法倒置显微镜观察细胞形态变化,进行细胞形态学观察;采用MTT法检测伊班膦酸钠对EC9706细胞增殖的抑制作用;采用免疫细胞化学检测伊班膦酸钠对EC9706细胞VEGF表达的影响。结果随着伊班膦酸钠药物浓度的增加和作用时间的延长,实验组细胞密度下降,细胞碎片增多,核染色质和胞浆皱缩,胞膜和核膜增厚,折光性差,细胞贴壁能力下降。实验组不同浓度的伊班膦酸钠对食管癌EC9706细胞均有抑制作用,且与药物浓度和作用时间呈正相关,与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。对照组及10、20、40μg/ml浓度VEGF蛋白的表达率分别为43.81±3.61、30.92±3.30、21.57±3.17、9.05±1.38,各实验组与对照组比较、各实验组组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论伊班膦酸钠对食管癌EC9706细胞有增殖抑制作用,并且具有时间及剂量依赖性。伊班膦酸钠可以从蛋白水平抑制食管癌EC9706细胞VEGF的表达。     

食管鳞状细胞癌组织中VEGF、MMP-9的表达及意义

目的观察食管鳞状细胞癌（鳞癌）组织中血管内皮细胞生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测60例手术切除的食管鳞癌组织、癌旁组织、切缘正常食管黏膜组织中的VEGF和MMP-9。结果食管鳞癌组织中的VEGF和MMP-9在明显高于癌旁组织和正常食管黏膜（P均〈0.05）。食管鳞癌组织中的VEGF和MMP-9与淋巴转移、浸润深度、TNM分期有关（P均〈0.05）。食管鳞癌组织中的VEGF和MMP-9呈正相关（r=0.421,P〈0.05）。结论食管鳞癌组织中VEGF和MMP-9表达增高。二者与食管鳞癌的发生发展有关。     

食管鳞状细胞癌VEGF的表达及意义

肿瘤内新生血管可提供肿瘤生长必需的养料和转运其代谢产物,同时为肿瘤发生血性转移提供通道.新近研究表明,肿瘤血管形成是由多种生物活性因子调节控制的,其中血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肿瘤新生血管形成中的作用尤为重要.     

人参皂苷Rg3对缺氧诱导的人肾癌786-0细胞VEGF表达的影响及机制探讨

目的观察人参皂苷Rg3对缺氧诱导的人肾癌786-0细胞VEGF表达的影响,并探讨其可能的机制。方法将缺氧诱导的786-0细胞分为缺氧组和Rg3组,Rg3组分别加入25、50、100、200μmol/L的Rg3作用24 h,对照组不处理。分别采用RT-PCR法、ELISA法检测786-0细胞中的VEGF mRNA及其蛋白,采用Western blot法检测786-0细胞中的STAT3和MAPKs总蛋白(p38、ERK1/2、JNK)及其蛋白磷酸化水平。结果 Rg3组786-0细胞中VEGF mRNA及其蛋白表达均较对照组显著降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性(P均<0.01)。Rg3组786-0细胞中STAT3和MAPKs中ERK1/2、JNK蛋白磷酸化水平较对照组显著降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性(P均<0.01),STAT3和p38、ERK1/2、JNK、pp38水平无明显差异。结论缺氧状态下Rg3可抑制786-0细胞的VEGF表达,其机制与抑制STAT3和MAPKs蛋白磷酸化有关。     

Ki-67和VEGF在食管腺癌中的表达及意义

目的:通过对人食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EA)标本进行Ki-67和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的检测,揭示上述两者在EA发生发展中的作用及对预后的影响.方法:经病理确诊的EA患者50例,取其术后切除标本作为EA组,另取正常食管鳞状上皮50例作为正常对照组.采用免疫组化染色法检测EA标本中Ki-67蛋白和VEGF蛋白的表达情况,并进行组间比较和相关性分析.结果:Ki-67蛋白在正常鳞状上皮中几乎不表达,而在EA中呈中强阳性表达,广泛表达于腺癌细胞胞核,与正常食管鳞状上皮比较,差异均有显著性(X2=85.463,P＜0.01),且癌细胞分化程度和肿瘤病理学分期与Ki-67蛋白表达相关(X2=13.11,X2=17.78,均P＜0.01);VEGF蛋白在正常鳞状上皮中不表达,在EA细胞胞质中呈强表达,与正常食管比较,差异均有显著性(X2=80.60,P＜0.01).且癌细胞分化程度、肿瘤的浸润程度及肿瘤病理学分期与VEGF蛋白表达相关(X2=16.378,X2=15.50,X2=15.882,均P＜0.05).Ki-67和VEGF在EA中表达升高,呈正协同关系(X2=74.678,P=0.00).结论:Ki-67和VEGF在EA中表达均升高,说明两者的表达上调在EA的增殖及转移中起了重要作用,对肿瘤的预后起较好的高效能预测作用.     

三氧化二砷对肝癌细胞表达PTTG1和VEGF的影响及其意义

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721的作用及其可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测As2O3对两种细胞的生长活性;用流式细胞仪测定经不同浓度As2O3溶液处理后的两种细胞的周期变化,并用Annexin V-FITC与PI双染法检测细胞凋亡;用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测As2O3对两种细胞垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响;用蛋白免疫印迹法(western-blotting)检测As2O3对两种细胞PTTG1和VEGF蛋白表达的影响.结果 As2O3可显著抑制BEL-7402和SMMC-7721细胞的生长,并呈量效关系(r=0.973,P<0.01;r=0.985,P<0.01),半数抑制浓度(IC50)分别为4.38 μmol/L和5.16 μmol/L.BEL-7402和SMMC-7721经As2O3处理后均发生显著凋亡(P<0.01).As2O3能显著下调两种细胞PTTG1和VEGF mRNA及蛋白的表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在G2/M期.结论 As2O3可有效抑制人肝癌细胞的生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期及下调PTTG1和VEGF的表达有关.     

HPA反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中HPA蛋白表达的影响

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPA)反义寡核苷酸 (ASODN)对人食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响。方法　将食管癌 EC970 6细胞体外分组贴壁培养 ,实验组分别用设计合成的 10、2 0、30 μm ol/ L 三种浓度的 4条封闭肝素酶不同基因位点的 ASODN(ASODN- t1 、ASODN- t2 、ASODN- t3、ASODN- t4 )。对照 组为 1条无关寡核苷酸 (N - ODN)转染 EC970 6细胞 ,对照 组为无转染。采用免疫组化 (SP)法检测各组 EC970 6细胞中HPA蛋白表达情况。结果　实验组中 3种浓度的 4条 HPA- t2 效应最强。不同浓度的 4条 HPA ASODN对EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,但均低于对照 组及对照 组 (无转染 )(P<0 .0 5 )。结论　HPA ASODN可抑制食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达。     

人参皂苷Rg3对小鼠肝癌血管形成的影响

目的：探讨人参皂苷Rg3抑制人肝癌组织血管生成的机制。方法：①选用昆明种小鼠6只（雌雄各半,供传代用）,昆明种小鼠140只（雌雄各半）按体重随机分为正常对照组（20只）,肝癌模型组（30只）,人参皂苷R船组（30只）,5-FU（5-氟尿嘧啶）组（30只）,人参皂苷Rg3联合5-FU组（30只）。采用小鼠肝癌细胞株H22肝内注射建立小鼠移植性肝癌模型的方法,将小鼠肝癌细胞株H22肝内注射24h后,人参皂苷Rg3组小鼠灌胃给药,5-FU组腹腔内注射给药,人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠灌胃和腹腔内注射给药,连续10d后处死各组全部小鼠并留取标本进行检测。②免疫组织化学染色观察各组小鼠肝组织血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：5-FU组、人参皂苷Rg2组、人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠肝癌组织VEGF表达水平均低于肝癌模型组（均P〈0．05）;人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合5-FU纽小鼠肝癌组织VEGF表达水平均低于5-FU组（均P〈0．05）;人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠肝癌组织VEGF表达水平与人参皂苷Rg3组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：人参皂苷Rg3可抑制肝癌细胞血管生成,其可能机制是抑制VEGF表达。     

TIMP3、E-Cadherin基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中的甲基化及蛋白表达

目的:观察食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-Cadherin基因甲基化的水平及蛋白表达,以及去甲基化药物5-Aza-CAR对其的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫细胞化学的方法,分别检测体外培养的食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-Cadherin基因甲基化水平及蛋白表达.用5μmol/L 5-Aza-CdR处理两种细胞系后,用同样的方法检测其甲基化水平及蛋白表达,观察药物的影响.结果:TIMP3基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中均表现为非甲基化,蛋白呈现弱表达;而E-Cadherin基因在EC1中发生甲基化,EC9706中发生半甲基化,蛋白表达均缺失.5-Aza-CdR作用后的两种细胞系中,TIMP3基因仍为非甲基化,而蛋白表达似有所曾强;但E-cadherin基因甲基化得到了逆转,蛋白表达由原来的不表达,转变为强表达.结论:5-Aza-CdR能够有效逆转E-cadherin基因甲基化,并使其蛋白恢复表达;TIMP3基因的失活似与甲基化机制无关,5-Aza-CdR对其蛋白表达的恢复作用微弱.     

VEGF-C siRNA载体构建及其对转染食管癌细胞中VEGF-C表达的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人食管癌细胞EC9706中血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的抑制作用.方法 根据siRNA设计原则,针对人VEGF-C cDNA序列设计并合成编码siRNA的寡核苷酸序列,并将其克隆入siRNA表达载体,构建重组质粒.将重组质粒转染入EC9706细胞株,通过免疫组织化学、RT-PCR和原位杂交法检测转染细胞中VEGF-C蛋白和mRNA的表达.结果 正常未转染(对照组)和无关序列转染(无关序列组)EC9706中,均有大量VEGF-c蛋白阳性棕色颗粒、mRNA阳性条带和紫蓝色阳性颗粒,而在siRNA转染EC9706(siRNA1-3组)中,仅有少量弱表达颗粒和较弱的阳性条带,与对照组和无关序列组相比,P均<0.01.结论 成功构建了VEGF-C siRNA载体.此载体能有效抑制人食管癌细胞EC9706中VEGF-C的表达,其可能成为抗食管癌淋巴管生成的一种新方法 .     

Expression of heparanase mRNA in anti-sense oligonucleotide-transfected human esophageal cancer EC9706 cells

AIM: To investigate the effects of anti-sense oligonudeotides (ASODNs) on mRNA expression of heparanase in human esophageal cancer EC9706 cells. METHODS: One non-sense oligonucleotide (N-ODN) and five ASODNs against different heparanase mRNA sites were transfected into EC9706 cells, then the expression of heparanase mRNA in EC9706 cells was studied by in situ hybridization. RESULTS: The expression of heparanase mRNA could be inhibited by ASODNs.There was no significant difference among five ASODNs (P>0.05), but there was a significant difference between ASODNs and N-ODN or non-transfected group (ASODN1: 2.25±0.25, ASODN2: 2.21±0.23, ASODN3: 2.23±0.23, ASODN4: 2.25±0.24 vs N-ODN: 3.47±2.80 or non- transfected group: 3.51±2.93 respectively,P<0.05). CONCLUSION: The expression of heparanase mRNA in EC9706 cells can be inhibited by ASODNs in vivo, and heparanase ASODNs can inhibit metastasis of esophageal squamous cell carcinoma or other tumors by inhibiting the expression of heparanase.     

DNA聚合酶β过表达对食管癌EC9706细胞的影响

目的:观察过表达的DNA聚合酶β对食管癌EC9706细胞系的影响.方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出野生型和突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,定向克隆至pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体,获得野生型和突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-polβ.分别将野生型和突变型的pEGFP-C3-polβ转染EC9706细胞,荧光显微镜观察其定位,绘制生长曲线,测定细胞周期.结果:DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列正确,荧光显微镜结果显示野生型的DNA聚合酶β表达以细胞核为主,突变型的DNA聚合酶β则表达在整个细胞中,明显与野生型的DNA聚合酶β的核定位不同.而且,野生型的细胞生长较对照组缓慢(P＜0.05),野生型的还能抑制EC9706细胞的生长和使S期细胞减少(22.11±0.12 vs 44.86±0.03,P＜0.05),而突变型的则不能促进EC9706细胞的生长,S期细胞增殖不明显(P＞0.05).结论:过表达的野生型食管癌DNA聚合酶β可以降低EC9706细胞的增殖.     

瘦素对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激原代培养的HUVECs,检测HUVECs表达VEGF的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达也随之升高,经统计学检验有相关性;在相同瘦素浓度下, 随着作用时间的延长,VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达也随之升高,且有相关性。结论:瘦素可以刺激HU- VECs表达VEGF而且呈时间和剂量相关性。     

顺铂对食管癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 研究顺铂对食管癌细胞周期和端粒酶活性的影响，为其临床应用提供理论依据。方法 用2μg/ml顺铂处理食管癌EC9706细胞，流式细胞仪分析细胞周期的改变，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变。结果 顺铂可使食管癌细胞阻滞于S期，诱导细胞凋亡；同时降低食管癌端粒酶活性。结论 顺铂对食管癌有治疗作用，端粒酶活性可作为观察食管癌化疗疗效的一个指标。