增龄变化对血管移植材料脐带静脉顺应性的影响

背景血管重建术中内径小于6 mm的人工合成血管替代人体小动脉或静脉一直未获得满意的效果,因而目前小动脉及静脉代用品成为亟待解决的问题.目的观察不同胎龄脐带静脉压力-容积关系,为血管移植材料脐带静脉的生物力学性质上提供实验数据.设计非随机对照实验.材料实验于2004-06在郧阳医学院医用生物力学实验室完成,湖北省十堰市太和医院妇产科收集胎龄在24～42周自然流产或分娩的正常胎儿脐带静脉50条(经产妇许可),产妇年龄20～30岁.其中胎龄24～27周8例,28～32周7例,33～36周8例,37周4例,38周5例,39周5例,40周5例,41周4例,42周4例.干预取胎儿脐带50条,测量一段脐带长度(2 cm)并标记两端点后,切下脐带置于生理盐水中.仔细地对脐带静脉进行机械剥离后,将试件两端标记点固定在软组织生物力学试验台上,测定其压力-容积关系,计算出顺应性.主要观察指标不同脐带静脉的压力、容积及顺应性.结果50条脐带全部进入结果分析.①37～40周脐带静脉压力-容积曲线比较接近,而28周,42周脐带静脉压力-容积曲线幅度明显下降,经二次回归分析可见38周胎龄压力-容积曲线回归系数绝对值最大.②脐带静脉顺应性随胎龄增加而增大[24～27周(2.22-±0.34)×10-4mL/(kP·cm),28～32周(3.65±0.46)×10-4 mL/(kPa·cm),33～36周(4.22±0.55)×10-4mL/(kPa·cm),37周(7.63±0.48)×10-4 mL/(kPa·cm),38周(8.32±0.76)×10-4mL/(kPa·cm)],但39周以后又降低[39周(7.61±0.46)×10-4 mL/(kPa·cm),40周(7.53±0.72)×10-4 mL/(kPa·cm),41周(4.13±0.35)×10-4 mL/(kPa·cm),42周(2.25±0.62)×10-4 mL/(kPa·cm)].37～40周脐带静脉的顺应性较相近,而42周及28周以下脐带静脉的顺应性与37～40周比较(F=65.84-86.52,P＜0.01).结论人脐带静脉是动脉移植物的良好替代材料,在移植时除了考虑脐带静脉与宿主动脉相匹配外,还应注意其顺应性与胎龄的关系,实验结果提示,胎龄在37～40周的脐带静脉作为临床应用的移植材料较为理想.     

脐带静脉组织结构的定量分析：评估其替代小动脉移植材料的可行性

碟子背景：长期以来，因缺乏理想的血管移植材料而制约了血管疾病的治疗效果。组织工程技术已解决了大口径人工血管替代品，但小动脉人工血管替代品一直未获得理想的材料。目的：观察不同胎龄、不同段脐带静脉的几何形态和显微结构成分，以探讨脐带静脉作为小动脉移植材料的可行性。设计：分组对照观察。单位：郧阳医学院医用生物力学实验室。对象：实验于2001—09／2004—07在郧阳医学院医用生物力学实验室完成。选择十堰市太和医院妇产科收集胎龄在24～42周自然流产或分娩的胎儿脐带50例（经产妇许可），产妇年龄在20-30岁。方法：①对脐带静脉进行机械剥离，制备成脐带静脉标本。根据胎龄分为5组：24～27周组7例；28～32周组7例；33-36周组8例；37～40周组20例；41～42周组8例。其中取胎龄在37—40周的脐带20例，依胎盘端为近端，胎儿端为远端分为近、中．远3段。常规石蜡包埋、切片。用苏木精-伊红染色法．Weigert法．苯胺蓝法及桔黄G法分别染组织结构、弹性纤维、胶原纤维和平滑肌。②脐带静脉图像定量分析：测量管径，壁厚．内膜．中膜和外膜厚度，采用德国产Leica—Q500IW彩色图像处理系统。提取中膜平滑肌细胞核，计算机自动计数测量框内细胞核的数目和面积，然后换算出单位面积内的细胞核的数目和面积，以此作为中膜平滑肌细胞核的数密度和面密度；分别测量血管壁中膜平滑肌．胶原纤维和弹性纤维各成分的绝对面积，计算不同着色面积与测试区域整体面积之比，从而求出平滑肌．胶原纤维和弹性纤维在各血管壁中的相对含量。主要观察指标：①不同胎龄脐带静脉的几何形态变化。②不同胎龄脐带静脉的显微结构成分。③不同段脐带静脉的显微结构成分。结果：①不同胎龄脐带静脉的几何形态变化：随胎龄增加，脐带静脉中膜厚度和外径在各胎龄组间均有显著的增加（24～27周，28～32周，33～36周，37～40周，41～42周中膜厚分别为0.186，0．203，0．237，0，264，0．268mm，F=133.35，P〈0.01；外径分别为1．861，1．962，2．303，2．464，2．465mm，F=37．35，P〈0．01）。②不同胎龄脐带静脉的显微结构成分：从24-40周，随胎龄增加，脐带静脉中膜弹性纤维含量逐渐增多，胶原纤维的含量及胶原纤维／弹性纤维比值逐渐减少。③不同段脐带静脉的显微结构成分：弹性纤维的含量近段比远段多（10，16，6．36Aa％，F=5.77～12．3，P〈0．05），由近段到远段胶原纤维／弹性纤维比值逐渐增大（F=7．63～13．4,P〈0.05）。结论：①脐带静脉具有与普通中等动脉相似的结构，37～40周脐带静脉管壁的胶原纤维、弹性纤维含量适中，既能承载一定的应力，又有较大的扩张能力，还富含平滑肌，具备收缩能力。②在血管移植时，以选用37-40周脐带静脉为佳，且近段顺应性优于远段，可适时选用，以利于脐带静脉移植于动脉后，能很快适应动脉的力学环境，提高移植后的远期通畅率。     

脐带静脉组织结构的定量分析评估其替代小动脉移植材料的可行性

背景长期以来,因缺乏理想的血管移植材料而制约了血管疾病的治疗效果.组织工程技术已解决了大口径人工血管替代品,但小动脉人工血管替代品一直未获得理想的材料.目的观察不同胎龄、不同段脐带静脉的几何形态和显微结构成分,以探讨脐带静脉作为小动脉移植材料的可行性.设计分组对照观察.单位郧阳医学院医用生物力学实验室.对象实验于2001-09/2004-07在郧阳医学院医用生物力学实验室完成.选择十堰市太和医院妇产科收集胎龄在24～42周自然流产或分娩的胎儿脐带50例(经产妇许可),产妇年龄在20～30岁.方法①对脐带静脉进行机械剥离,制备成脐带静脉标本.根据胎龄分为5组24～27周组7例;28～32周组7例;33～36周组8例;37～40周组20例;41～42周组8例.其中取胎龄在37～40周的脐带20例,依胎盘端为近端,胎儿端为远端分为近、中、远3段.常规石蜡包埋、切片.用苏木精-伊红染色法、Weigert法、苯胺蓝法及桔黄G法分别染组织结构、弹性纤维、胶原纤维和平滑肌.②脐带静脉图像定量分析测量管径、壁厚、内膜、中膜和外膜厚度,采用德国产Leica-Q500IW彩色图像处理系统.提取中膜平滑肌细胞核,计算机自动计数测量框内细胞核的数目和面积,然后换算出单位面积内的细胞核的数目和面积,以此作为中膜平滑肌细胞核的数密度和面密度;分别测量血管壁中膜平滑肌、胶原纤维和弹性纤维各成分的绝对面积,计算不同着色面积与测试区域整体面积之比,从而求出平滑肌、胶原纤维和弹性纤维在各血管壁中的相对含量.主要观察指标①不同胎龄脐带静脉的几何形态变化.②不同胎龄脐带静脉的显微结构成分.③不同段脐带静脉的显微结构成分.结果①不同胎龄脐带静脉的几何形态变化随胎龄增加,脐带静脉中膜厚度和外径在各胎龄组间均有显著的增加(24～27周,28～32周,33～36周,37～40周,41～42周中膜厚分别为0.186,0.203,0.237,0.264,0.268 mm,F=133.35,P＜0.01;外径分别为1.861,1.962,2.303,2.464,2.465 mm,F=37.35,P＜0.01).②不同胎龄脐带静脉的显微结构成分从24～40周,随胎龄增加,脐带静脉中膜弹性纤维含量逐渐增多,胶原纤维的含量及胶原纤维/弹性纤维比值逐渐减少.③不同段脐带静脉的显微结构成分弹性纤维的含量近段比远段多(10.16,6.36Aa%,F=5.77～12.3,P＜0.05),由近段到远段胶原纤维/弹性纤维比值逐渐增大(F=7.63～13.4,P＜0.05).结论①脐带静脉具有与普通中等动脉相似的结构,37～40周脐带静脉管壁的胶原纤维、弹性纤维含量适中,既能承载一定的应力,又有较大的扩张能力,还富含平滑肌,具备收缩能力.②在血管移植时,以选用37～40周脐带静脉为佳,且近段顺应性优于远段,可适时选用,以利于脐带静脉移植于动脉后,能很快适应动脉的力学环境,提高移植后的远期通畅率.     

多普勒超声信号分析定量评价自体静脉移植血管的管壁弹性和血流动力学变化

本研究以狗股静脉移植于股动脉为实验模型，采用Ｈｐ—１０００型彩色多普勒诊断仪（探头频率７．５ＭＨｚ），连续观察术后１２周内移植血管管壁弹性和流经移植血管段血流动力学变化。通过多普勒超声信号分析，定量评价了自体静脉移植血管的顺应性特点并计算了血流搏动指数。结果显示，移植血管的顺应性低于宿主动脉的顺应性，但术后１２周内无明显变化；血流搏动指数作为反映流经移植血管段的血流动力学的一项指标，术后１２周内无明显变化，且与术前无明显变化。     

兔骨髓干细胞移植对自体移植静脉桥血管再内皮化的影响

背景:传统观念认为内皮修复再生是临近部位成熟内皮细胞迁移、增生的结果。近期研究提示,体内循环血池中的内皮祖细胞参与了损伤部位的内皮修复,而骨髓干细胞中含右大量的内皮祖细胞。目的:观察兔骨髓干细胞植入后,行自体静脉移植的静脉桥血管再内皮化及内膜增生的情况。设计、时间及地点:开放性实验,于2007-05/2008-05在北华大学附属医院内科实验室完成。材料:清洁级新西兰大白兔23只,随机分为细胞移植组13只,空白对照组10只。方法:两组兔均建立自体静脉移植模型,麻醉后颈前正中切口,游离出左侧颈外静脉及颈总动脉,在颈总动脉的上下两端阻断血流后,横断血管,取左侧的颈外静脉4.0～5.0cm,上下倒向后置于同侧颈总动脉之间,采用间断外翻法行端端吻合。细胞移植组于造模后3d抽取自体骨髓,淋巴细胞分离液法提取单个核细胞,行荧光染料DAPI标记后,经耳缘静脉注入100μL细胞悬液(6×108个细胞),培养4周。空白对照组经耳缘静脉注入100μL磷酸盐缓冲液。主要观察指标:静脉移植段血管内皮的完整性、内膜厚度及内膜一氧化氮合酶活性。结果:与空白对照组比较,细胞移植组的移植段血管内皮细胞覆盖率明显升高(t=2.654,P<0.05);内膜厚度明显降低(t=3.474,P<0.05);内膜一氧化氮合酶活性明显升高(t=2.604,P<0.05)。结论:兔骨髓干细胞植入后,可以促进自体移植静脉桥血管的再内皮化,并抑制内膜的过度增生。     

血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞生长增殖的影响

背景:在体外构建组织工程材料的过程中,快速获得足够数量且纯度高的种子细胞极为重要,但目前人脐静脉间充质干细胞原代培养的增殖率仍较低.目的:观察血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞原代生长、增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008 03/07在辽宁医学院解剖学实验室完成.材料:正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条,由锦州市凌河区妇幼保健院及辽宁医学院附属第一医院提供.方法:采用胶原酶消化法分离人脐静脉间充质干细胞,以1×105L-1的密度接种于24孔培养板,设立2组,实验组加入150 g/L 血管内皮细胞生长因子,对照组不加入任何细胞因子.主要观察指标:观察细胞形态变化,MTT法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞CD166的表达.结果:接种后6 h细胞开始贴壁,48 h后细胞完全贴壁生长,出现呈椭圆形、多角形的内皮细胞,以及呈梭形的成纤维样细胞,有的形成漩涡状生长集落;原代培养1周后细胞以梭形为主;传代后24 h细胞基本完成贴壁,48 h细胞开始分裂增殖,5～7 d可见多核的成纤维样细胞贴壁,呈长杆状、三角形、梭形等.与对照组比较,实验组细胞生长状态较好,增殖较快,单位时间内获得的细胞数量明显增加(t=2.235,P＜0.05),CD166阳性细胞率显著升高(t=-1.638,P＜0.01).结论:血管内皮细胞生长因子可促进入脐静脉间充质干细胞贴壁,且更有利于间充质干细胞的增殖和纯化.     

自体骨髓来源内皮祖细胞移植对移植静脉桥血管再内皮化及内膜增生的影响

目的:已有实验研究证明,移植骨髓来源内皮祖细胞可以促进球囊损伤后血管内皮的修复及抑制内膜的增生.那么移植骨髓来源内皮祖细胞对自体静脉移植术后静脉血管内皮修复和内膜增生是否起同样的作用?观察自体骨髓来源内皮祖细胞移植对自体静脉移植术后静脉桥血管再内皮化及内膜增生的作用。方法:实验于2007-01/08在北华大学附属医院内科实验室完成。实验室级别:P2级。①实验材料:6～8月龄雄性新西兰大白兔由解放军第二军医大学实验动物中心提供.体质量(2.5±0.5)kg,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:抽取成年兔骨髓分离制备骨髓单个核细胞,体外扩增法培养出骨髓来源内皮祖细胞.在培养第7天通过Ac-Dil-LDL、FITC-BS-1双染色及流式细胞仪检测CD34、CD133、FIK-1表达进行细胞鉴定,应用DAPI荧光染料体外标记培养7 d的骨髓来源内皮祖细胞、将成年新西兰大白兔23只随机分为细胞移植组(n=13)和对照组(n=10)进行自体左颈外静脉、颈总动脉移植术,在建模后第3天将DAPI标记的骨髓来源内皮祖细胞悬液经耳缘静脉植入细胞移植组动物体内,埘照组植入等量的PBS液③实验评估:细胞移植后4周.观察兔静脉移植段血管性及内膜厚度。结果:23只免均进入结果分析,无脱落:①通过体外扩增法培养的骨髓来源内皮组细胞,培养至7 d可见AC-Dil-LDI及FITC-BS-1双染色阳性细胞并表达CD34、CD133及FIK-1。②在呈绿荧光染色的血管内皮中可见有部分不均匀的散发蓝色荧光(DAPI标记细胞的细胞核)。③细胞移植组兔静脉血管内皮有DAPI标记的细胞.且内膜厚度明显低于对照组(P<0.05)结论:自体骨髓来源的内皮祖细胞移植可以促进损伤部位血管内皮的修复.并抑制内膜的过度增生。     

Ang(1-7)对AngⅡ诱导人脐静脉血管内皮细胞株细胞组织因子表达的影响

血管紧张素-（1-7）[Ang（1-7）]是近来新发现的RAS中一重要活性产物。它是在不同酶作用下南AngⅠ和（或）AngⅡ生成的一个由7个氨基酸组成的多肽。Ang（1-7）在许多方面与AngⅡ有着相拈抗的作用，如舒张血管、降低血压和抑制细胞增殖等，二者共同维持着生理的平衡。有资料显示AngⅡ可影响与血栓形成有关的凝血系统、纤溶系统以及血小板的功能，     

不同剪切力作用与不同时间点血管内皮细胞内皮素-1和一氧化氮含量变化的差异

目的：应用不同剪切力作用体外培养的脐静脉内皮细胞，观察其在不同时间点内皮素-1和一氧化氮含量表达的差异。方法：实验于2002—07／2004—05在解放军总医院基础医学研究所生化研究室完成。利用流室装置通过精密蠕动泵提供剪切力，以50Pa和100Pa两种剪切力作用体外培养的脐静脉内皮细胞，并分别从30，60，120，300，420min5个时间点取灌流液，对照组为没有施加剪切力的脐静脉内皮细胞。用放射免疫法和硝酸还原酶法检测50Pa和100Pa剪切力作用下及空白对照组脐静脉内皮细胞内皮素-1和一氧化氮的含量。结果：①两组剪切力作用内皮细胞，其内皮素-1的表达量在开始前120min均有升高趋势，在30，60，120min时，50Pa组和100Pa组内皮素-1含量明显高于对照组【(28．7&;#177;2．1)，(37．8&;#177;3．5)，(26．0&;#177;2．8)ng／L；(33．6&;#177;5．8)，(43．3&;#177;7．2)，(26．5&;#177;3．6)ng／L；(45．3&;#177;9．4)，(53．6&;#177;8．6)．(32．2&;#177;4．7)ng／L，(f=1．835—6．079，P&;lt;0．05)】。②一氧化氮含量：在30，60，120min时，50Pa组和100Pa组一氧化氮含量明显高于对照组【(37．5&;#177;5．4)，(40．2&;#177;6．7)，(20．7&;#177;3．0)μmol／L；(52．7&;#177;6．3)，(63．7&;#177;7．2)，(21．4&;#177;3．3)μmol／L；(67．8&;#177;6．9)，(84．5&;#177;8．6)，(23．5&;#177;4．1)μmol／L(f=1．835—6．079，P&;lt;0．05)】。100Pa组在60，120min时明显高于50Pa组(t=2．556，3．376，P&;lt;0．05)。结论：在一定层流剪切力和时间范围内内皮细胞表达内皮素-1和一氧化氮呈递增趋势，保持相对稳定，当时间进一步延长时，其表达失去平衡，具有强烈收缩血管活性的内皮素-1相对增多,提示损伤内皮细胞的因素增加。     

人脐静脉内皮细胞血管紧张素转化酶及血管紧张素转化酶2表达与氧化型低密度脂蛋白的关系

目的:新近研究发现血管紧张素转化酶2与血管紧张素转化酶在功能上相拮抗.采用反转录-聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹方法,观察氧化型低密度脂蛋白对人血管内皮细胞血管紧张素转化酶及血管紧张素转化酶2表达的影响.方法:实验于2007-05/08在南方医科大学附属珠江医院中心实验室完成.①用正常人新鲜血浆制备氧化低密度脂蛋白,人脐静脉内皮细胞株复苏、传代后取生长良好的3～6代用于实验.②实验分为7组:空白对照组加无血清培养基;20,40,80mg/L氧化型低密度脂蛋白组分别与人脐静脉内皮细胞孵育24h;40mg/L氧化型低密度脂蛋白分别与人脐静脉内皮细胞孵育6,12,24h.各组实验重复6次.③提取细胞总RNA及蛋白,应用反转录-聚合酶链反应检测血管紧张素转化酶、血管紧张素转化酶2mRNA表达水平;以蛋白质免疫印迹法检测血管紧张素转化酶、血管紧张素转化酶2蛋白表达水平.结果:①与空白对照组比较,氧化低密度脂蛋白20,40,80mg/L组血管紧张素转化酶mRNA表达增加,血管紧张素转化酶2mRNA表达降低(P＜0.01),不同剂量组间差异亦有显著性意义(P均＜0.01).40mg/L氧化型低密度脂蛋白6,12,24h组血管紧张素转化酶mRNA表达增加,血管紧张素转化酶2mRNA表达减少(P＜0.05),不同时间点间差异亦有显著性意义(P均＜0.05).②与空白对照组比较,氧化低密度脂蛋白20,40,80mg/L组血管紧张素转化酶蛋白表达增加,血管紧张素转化酶2蛋白表达减少(P＜0.01),不同剂量组间差异亦有显著性意义(P均＜0.01).40mg/L氧化型低密度脂蛋白6,12,24h组血管紧张素转化酶蛋白表达增加,血管紧张素转化酶2蛋白表达降低(P＜0.05),不同时间点间差异亦有显著性意义(P均＜0.05).结论:氧化型低密度脂蛋白可上调血管紧张素转化酶蛋白及基因表达,下调血管紧张素转化酶2蛋白及基因表达,且呈剂量和时间依赖性.     

血管移植中不同段脐带静脉的生物力学特性研究

背景临床施行血管重建术,内径小于6mm的人工合成血管替代人体小动脉或静脉一直未获得满意的效果,因而目前小动脉及静脉代用品的研制成为亟待解决的问题.目的为脐带静脉作为小口径移植材料的临床应用提供理论依据.设计非随机分组对照研究.地点和对象实验在郧阳医学院解剖学教研室完成,对象为湖北省十堰市太和医院妇产科收集胎龄在37 40周自然分娩正常胎儿脐带静脉20例,产妇年龄在20～30岁.干预取胎儿脐带静脉20例,依胎盘端为近端,胎儿端为远端分为近、中、远3段.在生物软组织力学试验机上测定近、中、远段脐带静脉的压力-直径关系,计算出弹性模量.横断取材,冷冻切片,苏木精-伊红法染色,用计算机图像分析系统测量其几何形态学指标.主要观察指标脐带静脉的血管各相同性增量弹性模量(Einc)、血管压力-应变弹性模量(Ep)、血管容积弹性模量(Ev)、直径和壁厚.结果近、中、远段脐带静脉的Einc,Ep和Ev均随压力的上升而增大,近段3种弹性模量(Einc26.98±3.21,Ep16.58±2.12,Ev8.31±2.35)均低于远段(Einc33.20±4.21,Ep119.45±2.87,Ev9.71±1.32)(F=95.74～126.52,P＜0.05),由近段到远段呈增大趋势.中膜厚度[(0.30±0.05)mm,(0.24±0.03)mm]及直径[(3.07±0.12)mm,(2.30±0.13)mm]值从近段到远段逐渐减小(F=12.76,P＜0.01).结论脐带静脉作为小口径动脉移植的替代材料是可行的,在血管移植时,应注意选择不同段脐带静脉,使作为移植材料的脐带静脉与宿主血管材料间的生物力学特性尽量相近,以提高移植血管的远期通畅率.     

氧自由基对培养人脐静脉内皮细胞代谢产物的影响

目的：观察氧自由基对培养的人脐静脉内皮细胞产生的裂解不对称二甲精氨酸的酶--二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性及表达的影响，以探讨不对称二甲精氨酸代谢机斜及卡托普利的作用。方法：实验于2003—05／2004—06在南昌大学医学分子中心进行。采用改良的Jaffe法培养人脐静脉内皮细胞，取生长良好的3～6代人脐静脉内皮细胞分为4组：①空白对照组：加DMEM培养液。②氧自由基0．01，0.1mmol／L组：分别加入氧自由基0.01，0.1mmol／L。③卡托普利组：同时加入氧自由基0.1mmol／L及卡托普利（100mg／L）共孵。孵育24h后，检测上清液中一氧化氮、一氧化氮合酶活性、内皮细胞的代谢产物不对称二甲精氨酸浓度以及反应二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶酶活性的L-瓜氨酸浓度，采用Western blotting测定细胞裂解液中二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达。结果：①二甲精氨酸浓度：氧自由基0，01，0.1mmol／L组均高于空白对照组[（2．71&;#177;0．35），（4．78&;#177;0．67），（0．81&;#177;0．12）μmol／L，P〈0．05，0．01]，卡托普利组低于氧自由基0．1mmol／L组[（2．03&;#177;0．35）μmol／L．P〈0．01]。②L-瓜氨酸浓度：氧自由基0．01，0．1mmol／L组均低于空白对照组（P〈0．05，0．01）．卡托普利组高于氧自由基0．1mmol／L组（P〈0．01）。③一氧化氮浓度及一氧化氮合酶活性：氧自由基0．01，0．1mmol／L组均低于空白对照组（P〈0．05，0．01），卡托普利组高于氧自由基0．1mmol／L组（P〈0．01）。④二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达：各组间无差异（P〉0．05）。结论：氧自由基培养下，内皮损伤，不对称二甲精氨酸的增加与二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的活性减弱有关，与其蛋白的表达无关。而卡托普利则通过增加二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性促进不对称二甲精氨酸代谢，使一氧化氮合酶活性增加，抑制氧自由基对内皮功能的损伤。     

氧自由基对培养人脐静脉内皮细胞代谢产物的影响

目的:观察氧自由基对培养的人脐静脉内皮细胞产生的裂解不对称二甲精氨酸的酶--二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性及表达的影响,以探讨不对称二甲精氨酸代谢机制及卡托普利的作用。方法:实验于2003-05/2004-06在南昌大学医学分子中心进行。采用改良的Jaffe法培养人脐静脉内皮细胞,取生长良好的3～6代人脐静脉内皮细胞分为4组:①空白对照组:加DMEM培养液。②氧自由基0.01,0.1mmol/L组:分别加入氧自由基0.01,0.1mmol/L。③卡托普利组:同时加入氧自由基0.1mmol/L及卡托普利(100mg/L)共孵。孵育24h后,检测上清液中一氧化氮、一氧化氮合酶活性、内皮细胞的代谢产物不对称二甲精氨酸浓度以及反应二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶酶活性的L-瓜氨酸浓度,采用Westernblotting测定细胞裂解液中二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达。结果:①二甲精氨酸浓度:氧自由基0.01,0.1mmol/L组均高于空白对照组[(2.71±0.35),(4.78±0.67),(0.81±0.12)μmol/L,P<0.05,0.01],卡托普利组低于氧自由基0.1mmol/L组[(2.03±0.35)μmol/L,P<0.01]。②L-瓜氨酸浓度:氧自由基0.01,0.1mmol/L组均低于空白对照组(P<0.05,0.01),卡托普利组高于氧自由基0.1mmol/L组(P<0.01)。③一氧化氮浓度及一氧化氮合酶活性:氧自由基0.01,0.1mmol/L组均低于空白对照组(P<0.05,0.01),卡托普利组高于氧自由基0.1mmol/L组(P<0.01)。④二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达:各组间无差异(P>0.05)。结论:氧自由基培养下,内皮损伤,不对称二甲精氨酸的增加与二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的活性减弱有关,与其蛋白的表达无关。而卡托普利则通过增加二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性促进不对称二甲精氨酸代谢,使一氧化氮合酶活性增加,抑制氧自由基对内皮功能的损伤。     

多份人脐血单个核细胞静脉移植治疗老年期血管性痴呆18例

选取2005-05/2007-12郑州市第二人民医院收治的血管性痴呆老年患者18例,平均年龄72.6岁,平均病程24.5个月,均经CT、MRJ确诊,符合第四届全国脑血管病学术会议修订的脑卒中诊断标准.采集足月新生儿脐带血,无菌塑料袋分离出单个核细胞,通过手背浅静脉将脐血单个核细胞输注入脑卒中患者体内,每例患者平均输注6份,细胞数≥1×108/份,每份间隔1～7 d.与移植前比较,细胞移植后6个月患者神经功能缺损程度评分明显降低(t=8.85,P<0.01);简易智能量表评分和评价日常生活能力的Barthel指数均明显升高(t=13.78,t=12.81,P<0.01).整个治疗过程中未使用免疫抑制剂,细胞移植前后无并发症及不良反应发生.     

人脐带间充质干细胞联合番茄红素对衰老小鼠免疫功能的影响

背景：人脐带间充质干细胞、番茄红素均有延缓衰老的作用,而二者联合应用对衰老机体免疫功能影响的研究却未见报道。目的：分析人脐带间充质干细胞联合番茄红素对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响。方法：ICR小鼠雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组、番茄红素组、干细胞组及干细胞联合番茄红素组。模型组与各治疗组连续8周颈背部皮下注射D-半乳糖溶液,同时进行相应的治疗干预。造模结束后检测各组小鼠血液衰老相关T淋巴细胞百分比、血清白细胞介素2、白细胞介素4水平并观察脾脏、胸腺组织结构。结果与结论：3个治疗组均能提高衰老小鼠血液CD3＋、CD8＋ CD28＋T细胞百分比及血清白细胞介素2、白细胞介素4水平（P〈0．01）;与模型组相比,联合组初始性CD8＋T细胞百分比升高,记忆性CD8＋T细胞百分比降低（P〈0．05）,干细胞及番茄红素组初始性及记忆性CD8vT细胞百分比变化不显著（P〉0．05）：各组初始性及记忆性CD4＋T细胞百分比变化均不显著（P〉0．05）;胸腺、脾脏镜下观察发现：模型组胸腺小体缩小,脾脏淋巴小结明显增多,髓质淤血;正常对照组与3个治疗组胸腺、脾脏皮质髓质均未见明显病变。结果表明人脐带间充质干细胞、番茄红素均可以不同程度改善衰老小鼠免疫功能,且联合治疗效果更优。     

人脐血间充质干细胞尾静脉移植治疗扩张型心肌病

背景：体外研究表明人脐血间充质干细胞可分化为自律性跳动的心肌细胞,而经静脉移植人脐血间充质干细胞治疗扩张型心肌病心力衰竭的报道较少。目的：探讨经尾静脉移植人脐血间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠心肌结构、心功能的影响。方法：Wistar大鼠通过腹腔注射阿霉素诱导扩张型心肌病模型,扩张型心肌病实验组于造模后8周经尾静脉移植人脐血间充质干细胞,扩张型心肌病对照组注射等量DMEM培养基。健康对照组不造模,于相同时间点注射等体积的生理盐水。结果与结论：与健康对照组相比,扩张型心肌病组心功能明显受损,且扩张型心肌病实验组受损较扩张型心肌病对照组轻;移植的细胞有肌钙蛋白T的表达。结果提示人脐血间充质干细胞移植能促进扩张型心肌病大鼠心功能恢复,使心肌组织病变减轻。     

二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

背景:大量实验表明,中药何首乌有效活性成分二苯乙烯苷具有降血脂、抗动脉粥样硬化和保护心血管等作用.在许多病理过程中,活件氧可引起细胞脂质过氧化,引起细胞转运功能和酶的性质发生改变,丧失了对细胞离子的调节功能.目的:观察二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧,复氧损伤是否具有保护作用.设计、时间及地点:以血管内皮细胞为观察对象的随机对照实验,于2006-04/10在九江学院医学院分子生物实验中心完成.材料:人脐静脉血管内皮细胞株.方法:采用人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型,干预实验分为8组,每组重复6次.对照组为人脐静脉血管内皮细胞常氧条件下培养;缺氧复氧组为人脐静脉血管内皮细胞缺氧3 h后分别复氧2 h;10,5,2.5 ng/L二苯乙烯苷治疗组分别在缺氧复氧损伤前及缺氧复氧损伤后给予相应剂量的二苯乙烯苷;10,5,2.5 ng/L二苯乙烯苷预处理组分别在缺氧复氧损伤前给予相应剂量的二苯乙烯苷.主要观察指标:应用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞活力;用UV-1206紫外光分析光度计检测乳酸脱氢酶、总抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮.结果:二苯乙烯苷能剂量依赖性的提高缺氧复氧血管内皮细胞的存活率,降低乳酸脱氢酶活性及丙二醛浓度,提高总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性及一氧化氮浓度(P<0.01),且治疗组比预处理组作用更明显(P<0.01).结论:二苯乙烯苷对血管内皮细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用,而且其治疗作用优于预防作用.