三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901多药耐药的逆转作用及其机制

研究三氧化二砷(arsenic trioxide，As₂O₃)对胃癌细胞多药耐药的逆转作用及其机制。逐渐递增长春新碱(VCR)的浓度诱导胃癌细胞株SGC7901产生多药耐药性(SGC7901/VCR)。MTT法测定药物对肿瘤细胞的杀伤作用；Western blotting检测肿瘤细胞内P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-s)表达。结果表明，胃癌SGC7901/VCR细胞对长春新碱(VCR)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)及表阿霉素的耐药倍数分别为16.56倍、2.69倍及13.05倍。经As₂O₃预处理24 h后，长春新碱、5-氟尿嘧啶及表阿霉素对SGC7901/VCR的耐药倍数显著下降(P<0.05)。SGC7901/VCR在静息时细胞内P-gp、GST-s蛋白表达显著高于SGC7901。而As₂O₃可使SGC7901/VCR细胞内P-gp、GST-s蛋白表达显著下降，但是对SGC7901无明显作用。从而证实As₂O₃部分逆转SGC7901/VCR的耐药性，其机制可能与P-gp、GST-s蛋白表达降低有关。     

P-gp、TopoⅡ和GST-π在大肠癌中的表达及其意义

目的 探讨P－gp、TopoⅡ和GST－π在大肠癌的表达情况及其临床意义。方法 运用免疫组织化学技术（SP法）检测P－gp、TopoⅡ和GST－π在69例大肠癌中的表达情况。结果 （1）69例大肠癌中，P-gp表达者60.87%，TopoⅡ表达者59.42%，GST－π表达者79.71%，P－gp和GST－π共同表达者52.17%。（2）P－gp在高分化腺癌中高表达，在低分化腺癌低表达（P＝0.026）。（3）单因素分析表明，P－gp与大肠癌患者的生存期和不良预后有关。Cox回归分析表明，P-gp表达、P-gp和GST－π共同表达与患者的生存率有关，TopoⅡ表达对患者有保护趋势。结论 实验表明，P－gp、TopoⅡ和GST－π等多因素联合作用是大肠癌多药耐药性的主要作用机制。对大鼠癌患者进行此三项指标的测定，对于患者预后的估计和制定合理的化疗方案具有积极的指导意义。     

三氧化二砷诱导人胃腺癌细胞SGC7901凋亡机制的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2O3)诱导人胃腺癌细胞SGC7901的凋亡效应以及细胞线粒体跨膜电位 (ΔΨm )的改变。方法 :通过形态学观察以及测定细胞活力、亚G1 期细胞含量 ,细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻量 ,罗丹明123(Rh123)/碘化丙啶 (PI)双染色 ,流式细胞仪检测ΔΨm变化等方法鉴定细胞凋亡。结果 :As2O3 诱导细胞凋亡效应与其诱导ΔΨm下降密切相关。结论 :细胞ΔΨm下降是As2O3 诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

圣和散对胃癌SGC7901/VCR耐药细胞P-糖蛋白表达的影响

胃癌多药耐药(multidrug resistance,MDR)是胃癌化疗失败的主要原因之一[1],P-糖蛋白(P-glucoprotein,P-gp)是与胃癌MDR相关的主要分子,其表达水平与细胞膜通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度密切相关[2,3]。本实验主要观察中药圣和散逆转胃癌SGC7901/VCR耐药细胞MDR的作用。1材料与方法1·1材料耐长春新碱(VCR)人胃癌细胞株(SGC7901/VCR)(引自第四军医大学西京医院);RPMI1640细胞培养基(美国Gibco公司);噻唑蓝(MTT)、曲拉通(Triton X-100)(美国Sigma公司);抗P-gp单抗(美国Immunotech公司);流式细胞仪(美国BD公司);5-…     

P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ、LRP在大肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ、LRP在大肠癌中的表达情况及临床意义.方法 应用免疫组化方法(PV-6000法)检测P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ、LRP在58例大肠癌根治术标本中的表达.结果 58例大肠癌中P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ和LRP的阳性率分别为75.9%,70.7%,56.9%和65.5%.P-gp表达与淋巴结转移有关,与分化类型、Dukes分期、浸润深度无关.GST-π、TOPO-Ⅱ、LRP及四者联合表达与各项病理特征无关.结论 P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ、 LRP等联合作用是大肠癌多药耐药性的主要作用机制,检测患者P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ、LRP的表达对大肠癌的化疗药物和方案选择具有参考意义.     

三氧化二砷对人肺腺癌A549/R细胞多药耐药相关蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549/R细胞耐药性的逆转作用及对多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。方法以荧光分光光度计测定细胞内药物浓度的改变，采用半定量逆转录聚合酶联反应(RT PCR) 技术检测As2O3处理后A549/R MRP基因表达的变化。结果As2O3的非细胞毒性剂量可增加A549/R细胞内多柔比星(ADM)浓度，降低其IC50。A549/R细胞中MRP呈过表达状态，不同浓度的As2O3处理A549/R后MRP表达水平明显降低。结论As2O3可部分逆转A549/R细胞对ADM的耐药性，其逆转机制与改变MRP基因表达有关。     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率(IC50)分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

胆管癌中MRP-1和GST-π的表达及临床意义

目的多药耐药性（MDR）是导致胆管癌化疗疗效不佳的主要原因,本研究通过检测胆管癌组织中MRP—1和GST-π的表达情况,探讨其耐药的临床意义。方法收集2001年1至2007年12月收治并行手术切除的21例胆管癌标本,RT-PCR方法检测标本中MRP-1及GST-π mRNA的表达。结果MRP—1和GST-πmRNA在胆管癌组织中的表达阳性率分别76．2％和66．7％,显著高于对照组（P〈0．05）,上述指标与性别、年龄、病理分期、分化程度、淋巴结转移均无关（P〉0．05）。结论MRP-1、GST-π基因在未经过化疗的胆管癌组织中均有不同程度的高表达;胆管癌的原发性多药耐药可能与MRP-1、GST-π有关。     

苦参碱和氧化苦参碱对胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性的作用

目的研究苦参碱和氧化苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性的作用。方法以SGC7901/VCR为研究对象,用SRB法测定苦参碱和氧化苦参碱对SGC7901/VCR耐药细胞的增殖抑制率,计算IC50和IC10,并进一步计算其耐药倍数和逆转倍数。流式细胞术检测罗丹明123的荧光强度变化。结果苦参碱和氧化苦参碱对SGC7901/VCR均存在抑制作用,且呈剂量依赖。VCR耐药倍数为33.4倍;0.78 mg/ml苦参碱逆转倍数为1.92倍;0.71 mg/ml氧化苦参碱逆转倍数为3.39倍;细胞内罗丹明123浓度较明显增加(P<0.01)。结论低毒浓度的苦参碱和氧化苦参碱对人胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR具有一定的耐药逆转作用,且氧化苦参碱优于苦参碱。     

番茄红素对胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用

目的研究番茄红素体外对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用。方法将番茄红素作用于胃癌细胞SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制率,3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR)参入试验测定对细胞DNA合成的影响,TRAPPCRELISA法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果番茄红素作用后胃癌细胞生长明显受抑制,24、48、72和96h的IC50分别为22×10-4、15×10-4、67×10-6和40×10-6mmolL-1。10-5mmolL-1的番茄红素作用胃癌细胞24、48、72、96h后,3HTdR掺入量分别为(442512±13409)cpm、(365647±15391)cpm、(275365±12833)cpm、(161482±9456)cpm,低于对照组的(624831±26563)cpm、(750582±25898)cpm、(832124±22352)cpm、(859130±36821)cpm(P<001);TRAPPCRELISA法显示A值分别为1102±0026、0846±0018、0735±0017、0586±0014,低于对照组(1801±0048、1887±0072、2047±0085、2131±0076,P<001)。10-5mmol·L-1的番茄红素作用胃癌细胞96h后,G0/G1期细胞比例为(697±52)%,高于对照组的(456±37)%(P<001),凋亡率达(256±28)%。结论番茄红素能明显抑制胃癌细胞增殖及端粒酶活性,能使细胞产生G0/G1期阻滞,并诱导凋亡。     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对K5 6 2 ADM细胞的诱导凋亡效应 ,探讨其作用机制。方法 :应用噻唑蓝 (MTT)比色法、Wright Giemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术 (FCM)观察K5 6 2 ADM细胞凋亡 ;FCM测定K5 6 2 ADM细胞Fas、Bcl 2、P5 3蛋白水平的变化 ;比色法检测Caspase3活性变化。结果 :As2 O3 可抑制K5 6 2 ADM细胞增殖 ;K5 6 2 ADM呈典型凋亡形态改变 ;DNA电泳可见梯状条带出现 ;FCM分析示亚G1期细胞比例增高 ,G2 M期阻滞 ;Fas、P5 3蛋白表达明显上调 ;Caspase3活性明显增强。结论 :As2 O3 可通过Fas依赖性Caspase3激活而诱导K5 6 2 ADM细胞凋亡。     

抗癌多肽A38对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响

目的:探讨经计算机辅助药物设计的抗癌多肽A38,或与顺铂联合应用对人胃癌细胞株SGC-7901的体外生长抑制作用及对肿瘤细胞早期凋亡的影响。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901与不同浓度的A38、顺铂及A38+顺铂(DDP)分别进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的A38、顺铂及联合用药组在作用24,48,72 h后对SGC-7901细胞的生长抑制率;流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果:不同浓度A38、顺铂及联合用药后,SGC-7901细胞生长抑制率在不同浓度不同时段较对照组均显著增加(P均<0.01),联合用药组细胞生长抑制率较两单药组也明显增强(P均<0.01),呈现明显时效和量效关系。流式细胞仪检测凋亡结果显示:A38、顺铂及联合用药后,SGC-7901细胞的凋亡率在不同浓度不同时段较对照组均显著增加(P均<0.01),联合用药组细胞的凋亡率较两单药组也明显增加(P均<0.01)。结论:A38能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞生长,诱导肿瘤细胞早期凋亡,小剂量顺铂与A38联用具有协同抑制作用,且效果比高浓度下的单用A38或单用顺铂的抑制作用明显。     

淫羊藿苷对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

目的观察中药提取成分淫羊藿苷(ICA)对人胃癌细胞株(SGC-7901)增殖的影响。方法用低、中、高3个浓度淫羊藿苷(ICA)干预处于对数分裂期的胃癌细胞,在12、24、36、48h,用MTT法检测各组细胞的OD值,计算抑制率;流式细胞仪(PI法)检测各组的细胞周期。结果与对照组比较,低、中、高浓度组均对SGC-7901细胞有抑制作用,且呈一定的量效、时效关系,在同一浓度组中,随时间延长ICA的抑制作用逐渐增强,于24h达到高峰。其中中浓度24h的抑制作用最为显著。ICA使胃癌细胞G0/G1期的比例明显升高,中浓度时细胞增殖周期变化最明显。结论ICA对胃癌细胞SGC-7901有一定的抑制作用,并为胃癌的治疗提供新的策略。     

木犀草素抑制白血病耐药株K562/A02的GST-π表达

目的 探讨木犀草素(luteolin)对白血病耐药株K562/A02细胞谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响.方法 木犀草素30 mmol/L预处理K562/A02细胞第1、3、5d后,MTT法测定阿霉素IC50,采用722分光光度计测定细胞内GSH含量及Western Blot法测定木犀草素处理后GST-π蛋白表达.结果 木犀草素对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用,用木犀草素处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1、3、5d分别为10.7％、42.7％和15.8％;木犀草素显著降低K562/A02细胞内GSH含量,GST-π蛋白的表达于用药后第1、3、5d分别下降22％、56％和34％.结论 木犀草素具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能与降低细胞内GSH含量,下调K562/A02细胞GST-π蛋白的表达相关.     

木犀草素抑制白血病耐药株K562/A02的GST-π表达

目的探讨木犀草素（luteolin）对白血病耐药株K562/A02细胞谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）的影响。方法木犀草素30 mmol/L预处理K562/A02细胞第1、35、d后,MTT法测定阿霉素IC50,采用722分光光度计测定细胞内GSH含量及Western Blot法测定木犀草素处理后GST-π蛋白表达。结果木犀草素对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用,用木犀草素处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1、3、5 d分别为10.7%4、2.7%和15.8%;木犀草素显著降低K562/A02细胞内GSH含量,GST-π蛋白的表达于用药后第1、35、d分别下降22%5、6%和34%。结论木犀草素具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能与降低细胞内GSH含量,下调K562/A02细胞GST-π蛋白的表达相关。     

紫杉醇对胃癌细胞survivin 蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对胃癌细胞系SGC-7901survivin蛋白表达以及细胞凋亡的影响。方法不同浓度紫杉醇处理SGC-7901细胞后,在不同时间点采用Western Blot方法检测细胞中survivin蛋白的表达,同时采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并分析其与survivin蛋白表达的关系。结果 Western Blot结果显示,紫杉醇处理SGC-7901细胞后survivin蛋白表达增加,并呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测结果显示,紫杉醇处理SGC-7901细胞后,细胞凋亡率随时间延长而增加。结论紫杉醇可以诱导胃癌细胞系SGC-7901survivin蛋白表达增加,这可能是导致肿瘤耐药的重要机制。     

三氧化二砷诱导K562/ADM耐药细胞凋亡中活性氧的作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）诱导K562／ADM细胞凋亡中活性氧（ROS）的作用和其与耐药基因radr1及其编码的P-糖蛋白（P—gP）表达的关系。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法检测K562／ADM细胞增殖活性；Annexin V／PI染色法检测细胞凋亡；RT-P（鼠检测mdr1基因mRNA的表达；流式细胞术测定P-gP表达、ROS活性和细胞内阿霉素（ADM）含量。结果：As2O3显著抑制K562／ADM细胞的增殖，Annexin V／PI双染检测显示凋亡细胞明显增加：ROS活性明显下降；mdr1 mRNA和P-gP表达明显降低，P-gP功能受抑，细胞内ADM含量显著增高。结论：As2O3抑制K562／ADM耐药细胞的增殖活性和促进其凋亡，其机制可能为通过降低细胞ROS水平、抑制radr1/P-gp的表达和功能，进而逆转mdr1/P-gP介导的多药耐药和凋亡抑制。     

甘草次酸对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡及PI3K-Akt-mTOR通路的影响

目的 探究甘草次酸对胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及PI3K-Akt-mTOR通路的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞,分为对照组和甘草次酸低、中、高浓度（12.5、25.0、50.0 μmol/L）组,药物处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖情况;药物处理48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3以及PI3K-Akt-mTOR信号通路中磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果 甘草次酸低、中、高浓度组胃癌SGC7901细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量相关性（P<0.05）。与对照组比较,甘草次酸低、中、高浓度组胃癌SGC7901细胞G₀/G₁期细胞比例显著降低（P<0.05）,G₂/M期细胞比例及凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 甘草次酸可抑制胃癌SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路激活有关。     

奥曲肽对胃癌细胞株SGC7901生长调控作用的研究

目的 研究奥曲肽(OCT)对人胃中分化腺癌细胞株SGC7901体外生长抑制作用的机制。方法MTT法测定OCT对SGC7901细胞生长的调控；流式细胞术分析OCT对SGC7901细胞周期的影响；免疫细胞化学染色法检测表皮生长因子受体(EGFR)的表达；放射免疫法测定细胞培养上清液中表皮生长因子(EGF)和胃泌素的含量。结果 OCT对SGC7901细胞生长有抑制作用；OCT可诱导SGC7901细胞G0／G1期阻滞，加药后24小时最显著，同时伴s期细胞比例减少；OCT作用后24、36小时．SGC7901细胞EGFR表达较对照组明显减少。加入OCT24小时，细胞培养上清液中EGF和胃泌素含量明显下降。结论 OCT可通过多种途径抑制体外培养的SGC 7901细胞的增殖。