一种新型日本血吸虫疫苗(童虫活细胞)诱导小鼠产生有效保护性免疫力的研究

目的观察日本血吸虫童虫活细胞诱导小鼠产生的保护性免疫效果.方法采用日本血吸虫肝期童虫的活细胞和虫体组织碎片,在未加佐剂条件下分别接种昆明小鼠,每组10只,每2周接种1次,共4次,末次接种后第7天攻击感染血吸虫尾蚴30条/鼠,感染后第42天解剖小鼠,与对照组比较检测和分析虫体发育数、虫体大小、鼠肝病变及其组织内虫卵肉芽肿大小、血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1亚类比值.结果细胞接种组和虫体碎片接种组分别与PBS注射组比,虫体发育数分别下降67.6%%和46.3%;肝组织中虫卵数(LEPG)在细胞接种组和虫体碎片接种组中分别减少95.4%和64.8%;在细胞接种鼠组肝表面卵结节和虫卵肉芽肿及雄虫长度均显著小于其他两组者;特异性IgG2a/IgG1比值≥2,但总抗体水平低于虫体接种组.结论该研究首次建立了一种血吸虫细胞型疫苗研究模型,初步结果表明,在不加佐剂条件用血吸虫童虫活细胞可诱导小鼠产生显著的抗攻击感染免疫力,其机制可能主要为Th1介导的细胞免疫应答.     

日本血吸虫感染小鼠肝肉芽肿与Th1／Th2细胞因子水平的动态变化

目的 观察小鼠感染日本血吸虫后急、慢性期肝肉芽肿病变与Th1/Th2细胞因子的动态变化,探讨Th1/Th2在肉芽肿形成及调节中的作用。方法 采用石蜡切片,HE染色后观察感染小鼠肉芽肿病变,用ELISA双抗夹心法测定小鼠感染后0、4、6、8和12周血清及脾淋巴细胞IL-2、IFNr和IL-4水平的动态变化。结果 小鼠感染后6周出现明显肉芽肿病变,8周肉芽肿反应达高峰;12周则明显缩小;感染小鼠血清及脾淋巴细胞的Th1细胞因子IL-2和IFNr在感染后4～6周开始上升,8周达高峰,随后下降;而Th2细胞因子IL-4在感染后8周时迅速上升且随感染时间延长而明显升高。结论 Th1细胞因子IL-2和IFNr与血吸虫卵肉芽肿的诱导和形成密切相关。而Th2细胞因子ILL-4可抑制Th1细胞因子在血吸虫病慢性期虫卵肉芽肿自发性免疫调节中起重要作用。     

单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响

目的：探索日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响。方法：BALB／c小鼠随机两组，实验组腹腔注射 NP30主动免疫3次，对照组腹腔注射生理盐水，分别在尾蚴攻击感染后第39，49，64，108，112天处死，应用透射电镜观察肝虫卵肉芽肿细胞凋亡的形态改变，流式细胞术（FCM）和末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测虫卵肉芽肿凋亡细胞。结果：透射电镜观察虫卵肉芽肿细胞有凋亡小体形成；经FCM和TUNEL检测实验组虫卵肉芽肿细胞凋亡明显多于对照组。结论：细胞凋亡在日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成、细胞转化过程中起着重要作用。NP30抗病免疫作用的机制之一是促进虫卵肉芽肿细胞的凋亡。     

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。     

日本血吸虫主要虫卵抗原Sjp40在感染新西兰白兔肝脏中的表达与免疫定位

目的观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况,并进行免疫定位。方法日本血吸
虫尾蚴感染新西兰白兔,收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏,Trizol法提取各组肝脏总RNA,以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸
脱氢酶（GAPDH）为内参,Taqman探针qRT-PCR检测Sjp40 mRNA的表达;提取各组肝脏总蛋白,以硫酸铵盐析法和Protein G
免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-McAb 9G7和抗弓形虫tSAG1-McAb Y3A8（对照抗体）,western blot检测Sjp40蛋白的表达;
制备肝脏石蜡切片,HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展,进一步以免疫荧光技术进行Sjp40在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿
组织中的定位。结果日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi肝脏沉积虫卵中Sjp40 mRNA水平显著高于29 dpi 尚
未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵（P<0.05）,westernb blot 证实了Sjp40 蛋白在29 dpi 和45 dpi 兔肝脏中的表
达。免疫荧光显示：Sjp40在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内,而45 dpi可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫
卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。结论Sjp40在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增
加,在感染兔急性肉芽肿病变期（45dpi）呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象,提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过
程中具有重要作用。
     

日本血吸虫(云南品系)未成熟卵可溶性抗原免疫保护性观察(摘要)

目的对日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原(solubleimmatureeggsantigen,SIEA)免疫鼠体内日本血吸虫成虫的睾丸及卵黄腺组织进行超微结构观察,探讨SIEA抗日本血吸虫生殖作用机制;观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原(SIEA)的抗病免疫作用;观察小鼠经云南品系SIEA免疫后用皖鄂品系血吸虫尾蚴攻击感染,是否也能诱导产生抗病免疫效果.方法制备日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原(SIEA).取适量SIEA加等量福氏佐剂,背部皮下多点注射免疫ICR小鼠后分2组,分别用大理钉螺和华东钉螺逸出的血吸虫尾蚴(30±2)条,攻击感染.于感…     

Non-invasive immunodiagnosis of Schistosomiasis japonica: the detection of specific antibodies in saliva

研究唾液作为日本血吸虫病诊断与筛查标本的可行性。方法　建立日本血吸虫兔感染模型 ,收集兔和慢性血吸虫病人成对的唾液与血清标本 ,以间接ELISA检测唾液、血清标本中的抗血吸虫特异性抗体。结果　①兔唾液与血清样本抗体检测的特异性分别为 93 3 3 % ( 2 8/ 3 0 )和 96 67% ( 2 9/ 3 0 ) ,感染兔血清与唾液样本的抗体检测敏感性分别为 1 0 0 % ( 2 4/ 2 4)和 87 5% ( 2 1 / 2 4)。血清与唾液中的抗SEA (可溶性虫卵抗原 )IgG水平具显著相关性 (r=0 53 0 7,P =0 0 0 3 8<0 0 5) ,与血清标本相同 ,唾液中抗SEAIgG水平可反映兔感染和治疗状况。②病人唾液抗体检测的敏感性为 90 62 % ( 2 9/ 3 2 ) ,血清抗体检测的敏感性为 1 0 0 % ( 3 2 / 3 2 )。正常人唾液1 4 0份 ,阳性 8份 (即假阳性率 5 75% ) ,正常人血清 1 56份 ,阳性 6份 (假阳性率 3 84% )。病人唾液与血清中的特异性抗体含量具显著相关性 (r=0 42 2 7,P =0 0 0 8<0 0 5)。结论　唾液中的抗日本血吸虫特异性抗体的检测可作为非损伤性的血吸虫病免疫诊断和筛查方法     

干扰素对日本血吸虫虫卵肉芽肿小鼠肺模型的免疫调节作用

研究目的探讨干扰素在虫卵肉芽肿病理过程中的作用及血吸虫病的发病机制。方法用纯系NH小鼠感染日本血吸虫虫卵建立小鼠肺部虫卵肉芽肿模型。观察干扰素α对肉芽肿及小鼠免疫反应的影响感染小鼠后分别于第4、8、16、24、32天解剖动物，检测其血清抗体滴度、胸腺T细胞百分比和肉芽肿最大横切面面积。结果干扰素组小鼠抗体滴度、胸腺T细胞百分比在不同时程呈动态变化趋势，其肉芽肿面积在第8天明显增大，以后逐渐缩小。结论干扰素对血吸虫虫卵肉芽肿病变过程具有免疫调节作用。     

活化剂HYP协同rSjc26GST的抗血吸虫性肉芽肿的效果及其机制的研究

目的探讨活化剂HYP协同rSjc26GST的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果及机制。方法采用活化剂HYP联用rSjc26GST、福氏佐剂(FCA)联用rSjc26GST、单用HYP和单用福氏佐剂分别免疫BALB／c小鼠，末次免疫后1周，免疫和对照组小鼠均用日本血吸虫尾蚴攻击感染，7周后测定其免疫效应，观察其抗血吸虫卵肉芽肿病变的效果。结果活化剂HYP联用rSjc26GST组的总虫卵数和成熟虫卵数减少率分别为55．37％和54．31％，均显著高于FCA联用rSjc26GST组的30．30％和38．07％；该两组肝内虫卵肉芽肿的直径及面积分别下降36．86％和35．25％及62．59％和60．44％；两组IgG和IgG1水平均明显升高。结论活化剂HYP协同rSjc26GST比FCA具有更好的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果，其机制与体液免疫(IgG和IgG1)的增强密切相关。     

日本血吸虫卵的体外培养与抗卵胚发育研究

探讨在离体培养情况下，抗未成熟虫卵超免疫血清对血吸虫成虫生殖产卵力的影响，以及干扰初产卵胚胎发育的效果。方法收集感染日本血吸虫尾蚴３８～４５天后实验动物门静脉处的血吸虫成虫，分别接种于正常兔血清培养基（对照组）和抗未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）超免疫血清培养基（实验组）。分别观察两组初产卵胚胎发育状况，计算各阶段虫卵的发育率。结果日本血吸虫成虫离体产卵高峰在培养的第１周内，其初产卵在抗卵胚超免疫血清作用下，胚胎发育过程受到明显抑制；抗血清作用１～２周，雌虫产卵数明显减少，并渐趋停止。免疫荧光标记染色可见，抗血清除与卵胚反应明显外，尚与雌虫卵黄腺和紧邻卵黄腺的肠腔内膜组织有高度亲和性。结论采用免疫抗血清可达到在体外抑制雌虫生殖生理机能，降低雌虫产卵力，阻止虫卵胚胎发育成熟的目的。     

日本血吸虫未成熟卵对小鼠肝肉芽肿形成的免疫学影响

目的探讨日本血吸虫未成熟卵诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚免疫的效果及其对小鼠肝肉芽肿形成的影响。方法采用未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及其不同组分抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠产生的抗病免疫能力。结果经ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫后，均可明显地降低攻击感染后免疫鼠的肝肉芽肿数目和大小。与对照组比较，上述两者免疫后的小鼠，其肝肉芽肿平均直径分别下降了２９．２６％和４９．６４％，尤以ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原的免疫效果为佳，且感染鼠脾重明显下降（Ｐ＜０．０１）。但是成熟虫卵可溶性抗原以及ＳＩＥＡ－１分部抗原免疫对降低肝卵肉芽肿数量和大小以及脾肿大程度均无明显作用，甚至刺激肉芽肿反应增强。结论ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫可诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的作用，并明显抑制虫卵肉芽肿的形成。     

日本血吸虫组织蛋白酶B2在小鼠抗血吸虫再感染中的作用

目的 构建日本血吸虫组织蛋白酶B（Sjcb2）真核表达载体,检测日本血吸虫组织蛋白酶B2单独和联合吡喹酮（PZQ）在小鼠抗血吸虫再感染中的作用.方法 将60只BALB/c雌性小鼠随机均分为六组,建立日本血吸虫感染动物模型：感染组、感染攻击组、空质粒处理组、Sjcb2免疫组、吡喹酮处理组、Sjcb2联合吡喹酮处理组.Sjcb2免疫组和Sjcb2联合吡喹酮组分别在初次尾蚴感染前第21天、14天及7天接种pcDNA3.1（＋）/Sjcb2重组质粒,空质粒处理组接种pcDNA3.1（＋）空质粒.初次尾蚴感染后第六周,对吡喹酮处理组和Sjcb2联合吡喹酮处理组小鼠给予PZQ治疗.除感染组外其它各组在第八周再次进行尾蚴攻击感染.分别于第8周和第14周取各组小鼠肝脏组织做病理切片,观察虫卵肉芽肿大小;采用间接ELISA法检测血清中特异性IgE和IgG亚型（IgG1,IgG2和IgG3）;检测各组小鼠荷成虫数,计算抗血吸虫再感染率.结果 Sjcb2免疫组、联合组与其它组分别比较,小鼠荷虫数显著性减少,抗血吸虫再感染率显著升高,虫卵肉芽肿直径显著减小,IgG1水平显著下降和IgE水平显著升高（P〈0.01）.结论 Sjcb2在小鼠模型中具有抗日本血吸虫再感染作用,抗血吸虫再感染率为70.3%,抗再感染作用机制可能与特异性IgE水平升高和IgG1水平下降有关.     

HMGB1在日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿组织中的表达

目的：：确定日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成过程中 HMGB1的表达。方法：建立日本血吸虫病小鼠模型,免疫组织化学方法检测肝脏虫卵肉芽肿形成过程中 HMGB1的表达,半定量方法测定 HMGB1表达的累积光密度值(IOD),ANOVA 统计分析各组之间差异。结果：未感染日本血吸虫尾蚴的对照组小鼠肝脏与感染尾蚴后2、4、6周模型组小鼠肝脏虫卵肉芽肿组织中 HMGB1表达差异有显著性(F =526.30,P <0.05),除感染尾蚴后4、6周的模型组差异不具有显著性(t =1.574,P =0.1162)外,其余各组差异均具有显著性(P <0.05)。结论：HMGB1可能参与日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的形成过程。     

经脾脏注射血吸虫虫卵实验方法的探讨

报告应用经脾脏注射虫卵法建立Ｃ５７ＢＬ／６小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型，并与自然感染模型作比较。结果表明，脾脏注射组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为１００％，其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程均与自然感区染模型相似。本实验提示经脾脏注射虫卵是一种较好的、建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的方法。     

两种方法建立小鼠抗GBM肾炎模型的比较

目的探讨建立小鼠抗肾小球基底膜（GBM）肾炎模型的方法。方法72只昆明小鼠随机分为3组,肾炎模型A组、B组和正常对照组。肾炎模型A、B组小鼠一次性尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清（16ml／kg）,正常对照组小鼠注射等量正常兔血清。肾炎模型A组小鼠尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清前1周,背部皮内注射正常兔血清进行预免疫;肾炎模型B组小鼠尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清后24h,尾静脉注射脂多糖（1mg／kg）。于实验第7、14、21、28天取尿液和血清标本,分别检测尿蛋白、血肌酐、血尿素氮含量。并于上述时间点分别取。肾组织观察病理变化。结果。肾炎模型组小鼠注射兔抗小鼠GBM血清后,第7天尿蛋白、血肌酐和血尿素氮含量均明显升高,均高于正常对照组,且A组升高更明显（P〈0．05）。肾组织病理表现为：。肾炎模型A组肾小球基底膜明显增厚,系膜区大量电子致密物沉积,足突融合;壁层上皮细胞增生,大量新月体形成,肾小球囊腔变窄,并可见肾小球纤维化形成,其病变程度均高于肾炎模型B组。正常对照组小鼠肾组织无明显病理变化。结论免疫球蛋白预免疫法可以更好地建立小鼠抗GBM肾炎模型。     

中药免疫增强剂用于提高吡喹酮杀血吸虫效果的实验研究

目的观察两种中药免疫增强剂对吡喹酮杀血吸虫效果的影响.方法将昆明小鼠感染日本血吸虫后,第28天开始用两不同中药制剂(即中药1号和中药2号)分别灌胃C组和D组小鼠,0.5 ml/只/d,连续1周.感染后第35天给予吡喹酮半剂量进行治疗.同时设单用吡喹酮半剂量治疗对照组,吡喹酮全剂量治疗对照组和不用药感染对照组.感染后第49天剖杀小鼠灌注收集虫体.计算杀虫率、观察小鼠肝切片中虫卵肉芽肿大小并测定小鼠血清中特异性抗体动态水平.结果两种中药制剂分别将吡喹酮的杀虫率提高了33.97%和41.18%:虫卵肉芽肿大小与对照组比差异无显著性;在给中药前各组小鼠血清中特异性抗体水平无显著差别,给中药后,中药组小鼠血清中特异性抗体水平逐渐升高,直到给吡喹酮治疗前的抗体水平均显著高于对照组.结论本研究选用的两种中药刺剂均能在不加重虫卵内芽肿病变的同时提高吡喹酮杀日本血吸虫效果,其作用机制可能与中药增强剂促进宿主免疫应答,增强血吸虫特异性抗体生成有关.     

Congenital infection of rabbits with Schistosoma japonicum and protective immunity of offspring

Background Recently congenital infection with Schistosoma japonicum (S. japonicum) has been domonstrated in pigs, rabbits, mice and dogs. We explored the rabbit as an animal model for the congenital infection of schistosomiasis japonica and assessed the effect of a congenital S. japonicum infection on the resistance of rabbit kittens to a postnatal challenge infection.Methods Sixteen pregnant New Zealand white rabbits were infected with a single dose of S. japonicum cercariae. The exposed animals were divided into three groups according to the gestation age at the time of infection. Diagnosis of prenatally acquired S. japonicum infection in the rabbit kittens was primarily based on serological tests in combination with parasitological and histopathological findings. Congenitally infected kittens were challenged percutaneously with 100 S. japonicum cercariae to assess the effect of a congenital S. japonicum infection on kitten resistance to a postnatal challenge infection.Results The overall prevalence of congenital infection in offspring of infected mothers was 20% (12/60). The congenital infection rate in group L (late gestation) was much higher than in group E (early gestation) and group M (mid-gestation) (P&lt;0.05). After a postnatal challenge infection, prenatally infected kittens had a 54.66% worm reduction rate, 41.45% egg reduction rate, and 51.76% granuloma size reduction rate compared to nave kittens.Conclusions This study demonstrates the possibility of congenital infection of S. japonicum in rabbits and the resistance of congenitally infected kittens to a postnatal challenge infection. These results have important implications not only for epidemiological investigations, but also in designing government control programs for schistosomiasis.     

N-乙酰半胱氨酸对日本血吸虫病小鼠肝纤维化的影响

目的观察N－乙酰半胱氨酸（NAC）对日本血吸虫病小鼠肝纤维化的影响。方法将小鼠随机分为正常组、模型组、预防a、b组和治疗a-b组。除正常组外,其他各组每只小鼠经腹部皮肤人工感染日本血吸虫尾蚴30条。在感染同时给预防a、b组、感染后第六周给治疗a、b组分别以200mg/kg和400mg／kgNAC两种剂量灌胃,2次,d。正常组、模型组和预防组分别在第42d、56d时,治疗组在第56d时处死小鼠,取肝脏,石蜡包埋切片,VG染色观察各组肝组织内纤维增生程度,测量肝内胶原纤维的面积,检测肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量。结果预防a组第42d时肝组织中胶原面积显著比第56d时小（P〈0．05）,第42d时肝组织中胶原面积比模型组小46．67％（P〈0．05）,第56d时肝组织中胶原面积比模型组小53．12％（P〈0．05）;第42d时和第56d时肝组织中Hyp含量净减少率分别为67．58％和31．34％（P〈0．05）。治疗a组肝组织中胶原面积比模型组小28．12％（P〈0．05）;肝组织中Hyp含量净减少率为21．23％（P〈0．05）。预防b组和治疗b组的疗效不佳。结论预防用小剂量NAC减缓日本血吸虫病小鼠肝纤维化的效果最好。     

感染日本血吸虫的BALB/C小鼠血清内抗14OKD抗原分子抗体的动态观察

本研究采用针对日本血吸虫(中国大陆株)虫卵140KD分子的单克隆抗体NP28-5B,建立的竞争ELISA,定期检测感染日本血吸虫(中国大陆株)的BALB/C小鼠体内存在针对140KD SEA抗原的特异性抗体应答及其动态。     

Immunological characteristics of natural resistance in Microtus fortis to infection with Schistosoma japonicum

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｎａｔｕｒａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＭｉｃｒｏｔｕｓｆｏｒｔｉｓ（ＭＦ）ｌｉｖｉｎｇ...