共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
2.
3.
4.
5.
6.
聚合酶链反应技术结合酶切杂交研究单项抗乙型肝炎… 总被引:1,自引:0,他引:1
以聚合酶链反应(PCR)扩增单项抗乙型肝炎病毒核心抗原阳性血清的乙型肝炎病毒DNA。内外两对引物均选自adr、adw和ayw3种亚型HBV基因组C基因区的共有序列,扩增产物分别长428bp和664b0p,共含一个Bg1Ⅱ酶切点,酶切后前者产生299bp和125bp、后者产生406bp和254bp各一个限制性片段。以另一条基因位置处于内引物对之间的寡核苷酸制备32p-5’末端标记的探针对之进行Sou 相似文献
7.
8.
9.
10.
荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA 总被引:13,自引:0,他引:13
目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法(FQ-PCR),并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP(凝胶成像仪)检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明:用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明:用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便,灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用。 相似文献
11.
聚合酶链反应检测HBVDNA与乙肝病毒血清标志物的对比研究袁晓璞,丁雁本文用套式PCR检测318例患者血清乙肝病毒DNA,同时用酶联免疫分析检测乙肝血清标志物二对半,以探讨乙肝病毒的感染与机体免疫反应的关系。材料和方法1.血清标本来源门诊及住院病人,... 相似文献
12.
定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒 … 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 了解肝病患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA的含量,以便观察临床抗病毒治疗效果及血清HBV DNA水平与病情及预后的关系。方法 应用荧光素标记的半巢式引物在扩增中能量转移的定量聚合酶 链反应(QPCR),对63例肝功能异常的肝病患者血清进行HBV DNA含量测定,并与普通PCR及酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果 QPCR阳性率为82。54%,普通PCR法为71.43%,ELISA 相似文献
13.
HBsAg阳性、抗HBs阴性和抗HBc阳性者乙肝病毒DNA的检测蒋挺英,陈兆军,张腊红,楼德利,及晓英病毒性肝炎血清标志的检测方法,随着免疫学技术的进展而取得迅速发展[1],其测定原理主要依赖于抗原与抗体间的特异性反应,如RIA和ELISA。随着分子... 相似文献
14.
聚合酶链反应技术结合酶切杂交研究单项抗乙型肝炎病毒核心抗原阳性者的乙型肝炎病毒感染 总被引:1,自引:0,他引:1
以聚合酶链反应(PCR)扩增单项抗乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)阳性血清的乙型肝炎病毒(HBV)DNA。内外两对引物均选自adr、adw和ayw3种亚型HBV基因组C基因区的共有序列,扩增产物分别长428bP和664bP,共含一个BglⅡ酶切点,酶切后前者产生299bP和125bP、后者产生406bp和254bp各一个限制性片段。以另一条基因位置处于内引物对之间的寡核苷酸制备32P-5'末端标记的探针对之进行Southern转移杂交,鉴定了扩增产物的特异性。结果从单项抗HBc阳性的8/42例慢性肝炎和2/12倒无症状受测者血清中检出HBVDNA,提示现症低水平病毒复制和潜在的传染性。 相似文献
15.
建立了热启动聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)的技术。PCR所有反应成分被2次加样。先加A液(含dNTPs、一对引物和MgCl_2)与一粒石蜡珠。70℃加热后冷却至室温,使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住A液,然后在向其上加入B液(含耐热性DNA聚合酶、HBVDNA模板和KCl)并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至60℃以上时,中隔蜡层融化,蜡上浮形成防蒸发屏障,A、B两液则由于热分子运动而混匀,从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了PCR的特异性和灵敏性,应用这种技术对76例肝炎血清进行了检测,结果HBVDNA检出率为68%,其中HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)血清检出率为100%;HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)血清检出率为70%;HBsAg(+)、抗-HBC(+)血清检出率为89%;抗HBC(+)血清检出率为对%;标记全阴性血清检出率为33%。 相似文献
16.
17.
18.
竞争性聚合酶链反应法定量检测慢性乙型肝炎患者血… 总被引:4,自引:0,他引:4
设计了以内参照为基础的竞争性聚合酶链反应方法,同时定量检测HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒基因前C区野毒株及变异株,并观察了在应用α干扰素治疗以后的变化。结果发现干扰素治疗有效者中,病毒核酸量迅速下降至转阴;而干扰素治疗无效者中,病毒核酸量也可有所下降,但仍高于检测水平甚至反跳。 相似文献
19.
20.
根据乙型肝炎病毒(HBV)的S区序列设计了3条引物:HBS1、HBS2和HBS3,与HBS1和HBS2配对,经2次聚合酶链反应(PCR)扩增。即可在检测有无HBV-DNA存在的同时对其基因型分类,可检出10ag的HBV-DNA,比免疫学方法更灵敏和特异。25份不同亚型的标准血清中的绝大多数用S-PCR和AGID/RPHA的分型结果一致,S-PCR的另一突出优越性的于能够对HBsAg低滴度和阴性标本 相似文献