聚合酶链反应技术结合酶切杂交研究单项抗乙型肝炎…

以聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增单项抗乙型肝炎病毒核心抗原阳性血清的乙型肝炎病毒ＤＮＡ。内外两对引物均选自ａｄｒ、ａｄｗ和ａｙｗ３种亚型ＨＢＶ基因组Ｃ基因区的共有序列，扩增产物分别长４２８ｂｐ和６６４ｂ０ｐ，共含一个Ｂｇ１Ⅱ酶切点，酶切后前者产生２９９ｂｐ和１２５ｂｐ、后者产生４０６ｂｐ和２５４ｂｐ各一个限制性片段。以另一条基因位置处于内引物对之间的寡核苷酸制备３２ｐ－５’末端标记的探针对之进行Ｓｏｕ     

聚合酶链反应检测血清HBV—DNA方法的建立及实验条件分析

本文报道了我室建立的一种利用聚合酶链反应检测血清乙肝病毒(HBV)DNA 的新方法。该方法用血清单纯热处理法代替酚氯仿抽提,简化了操作步骤,节省了时间。该法经溴乙啶染色可检出100fg水平的HBV-DNA,经狄高辛-HBV 探针杂交可检出10fg 水平HBV-DNA.灵敏度高。对228名急、慢性乙肝患者和20名健康志愿者血清HBV-DNA 的检测结果表明:该方法简便、快速、灵敏、可靠,适合于临床应用.     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法（FQ-PCR）,并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP（凝胶成像仪）检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便,灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用。     

聚合酶链反应检测HBV DNA与乙肝病毒血清标志物的对比研究

聚合酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ与乙肝病毒血清标志物的对比研究袁晓璞，丁雁本文用套式ＰＣＲ检测３１８例患者血清乙肝病毒ＤＮＡ，同时用酶联免疫分析检测乙肝血清标志物二对半，以探讨乙肝病毒的感染与机体免疫反应的关系。材料和方法１．血清标本来源门诊及住院病人，...     

定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒 …

目的 了解肝病患者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的含量，以便观察临床抗病毒治疗效果及血清ＨＢＶ ＤＮＡ水平与病情及预后的关系。方法 应用荧光素标记的半巢式引物在扩增中能量转移的定量聚合酶 链反应（ＱＰＣＲ），对６３例肝功能异常的肝病患者血清进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定，并与普通ＰＣＲ及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行比较。结果 ＱＰＣＲ阳性率为８２。５４％，普通ＰＣＲ法为７１．４３％，ＥＬＩＳＡ     

HBsAg阳性,抗HBs阴性和抗HBc阳性者乙肝病毒DNA的检测

ＨＢｓＡｇ阳性、抗ＨＢｓ阴性和抗ＨＢｃ阳性者乙肝病毒ＤＮＡ的检测蒋挺英，陈兆军，张腊红，楼德利，及晓英病毒性肝炎血清标志的检测方法，随着免疫学技术的进展而取得迅速发展［１］，其测定原理主要依赖于抗原与抗体间的特异性反应，如ＲＩＡ和ＥＬＩＳＡ。随着分子...     

聚合酶链反应技术结合酶切杂交研究单项抗乙型肝炎病毒核心抗原阳性者的乙型肝炎病毒感染

以聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增单项抗乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃ）阳性血清的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ。内外两对引物均选自ａｄｒ、ａｄｗ和ａｙｗ３种亚型ＨＢＶ基因组Ｃ基因区的共有序列，扩增产物分别长４２８ｂＰ和６６４ｂＰ，共含一个ＢｇｌⅡ酶切点，酶切后前者产生２９９ｂＰ和１２５ｂＰ、后者产生４０６ｂｐ和２５４ｂｐ各一个限制性片段。以另一条基因位置处于内引物对之间的寡核苷酸制备３２Ｐ－５＇末端标记的探针对之进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移杂交，鉴定了扩增产物的特异性。结果从单项抗ＨＢｃ阳性的８／４２例慢性肝炎和２／１２倒无症状受测者血清中检出ＨＢＶＤＮＡ，提示现症低水平病毒复制和潜在的传染性。     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

竞争性聚合酶链反应法定量检测慢性乙型肝炎患者血…

设计了以内参照为基础的竞争性聚合酶链反应方法，同时定量检测ＨＢｅＡｇ阴性的慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒基因前Ｃ区野毒株及变异株，并观察了在应用α干扰素治疗以后的变化。结果发现干扰素治疗有效者中，病毒核酸量迅速下降至转阴；而干扰素治疗无效者中，病毒核酸量也可有所下降，但仍高于检测水平甚至反跳。     

乙型肝炎病毒基因聚合酶链反应分型方法的建立

根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的Ｓ区序列设计了３条引物：ＨＢＳ１、ＨＢＳ２和ＨＢＳ３，与ＨＢＳ１和ＨＢＳ２配对，经２次聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。即可在检测有无ＨＢＶ－ＤＮＡ存在的同时对其基因型分类，可检出１０ａｇ的ＨＢＶ－ＤＮＡ，比免疫学方法更灵敏和特异。２５份不同亚型的标准血清中的绝大多数用Ｓ－ＰＣＲ和ＡＧＩＤ／ＲＰＨＡ的分型结果一致，Ｓ－ＰＣＲ的另一突出优越性的于能够对ＨＢｓＡｇ低滴度和阴性标本