CA19-9时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

ＣＡ19- 9是一种胃肠道的肿瘤相关抗原 ,由糖链乳酸 -Ｎ -岩藻戊糖唾液酸联结构成 ,分子量为 30 0万至 5 0 0万道尔顿[1] 。临床研究显示ＣＡ19- 9与胰腺癌的关系最为密切 ,与胆囊癌、胆管癌、胃癌、结直肠癌也有一定的相关性[2 ] 。进一步研究发现 ,ＣＡ19- 9含量的高低对上述肿瘤的诊断及预防均有一定价值[3] 。目前 ,其检测方法有ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＣＬＩＡＣＬＩＡ等 ,近来我们应用时间分辨荧光免疫分析技术 ,建立了ＣＡ19- 9时间分辨荧光免疫分析法 (ＴＲＦＩＡ) ,并与ＥＬＩＳＡ及化学发光免疫分析 (ＣＬＩＡ)进行了临床检测结果评…     

抗B-CLL Id x抗CD3双特异性抗体的制备及其特性研究

应用无筛选标记细胞株杂交瘤·杂交瘤细胞直接融合法制备了２株分泌抗慢性Ｂ淋巴细胞白血病（Ｂ－ＣＬＬ）Ｉｄｘ抗ＣＤ３双特异性抗体（ＢｓＡｂ）的四价体瘤细胞株。采用间接ＥＬＩＳＡ试验与间接免疫荧光试验证明了该ＢｓＡｂ能分别与Ｂ－ＣＬＬ患者血清及带ＣＤ３标记的细胞特异性结合,经细胞结合试验证明该ＢｓＡｂ同时具备与Ｉｄ及ＣＤ３两种抗原结合能力,经酶桥联法证明该ＢｓＡｂ亚类为ＩｇＧ１×ＩｇＧ２ａ,用ＭＴＴ法证实ＢｓＡｂ能诱导Ｔ细胞活化增殖     

人外周血树突状细胞在LAK抗HPBALL细胞中作用的研究

为探讨树突状细胞（ＤＣ）在ＬＡＫ抗ＨＰＢＡＬＬ细胞中的作用，采用多因素、多水平的杀伤试验，同时以光镜、电镜观察ＤＣ、ＬＡＫ、ＨＰＢＡＬＬ相互作用的形态特征及ＤＮＡ断端标记法检测瘤细胞是否凋亡。结果表明：（１）ＤＣ无直接杀伤ＨＰＢＡＬＬ作用。（２）５×１０５～１×１０７／ＬＤＣ有增强不同Ｅ／ＴＬＡＫ杀伤活性的趋势，而１×１０７～５×１０７／ＬＤＣ对ＬＡＫ活性有抑制趋势。（３）ＤＣ、ＬＡＫ杀伤ＨＰＢＡＬＬ的最佳组合条件为：ＤＣ培养４ｄ、浓度５×１０６／Ｌ，ＬＡＫＥ／Ｔ＝１０／１，ｒＩＬ－２＝０。（４）光镜、电镜下均可见ＤＣ的突起与ＬＡＫ、ＨＰＢＡＬＬ细胞紧密接触形成细胞簇。（５）ＤＮＡ断端标记法显示瘤细胞呈末端脱氧核糖核酸转移酶阳性反应。结论：ＤＣ对ＬＡＫ杀伤ＨＰＢＡＬＬ活性具有双向调节作用     

CA19-9免疫放射分析方法的评估

ＣＡ１９ ９是一种胃肠道的肿瘤相关抗原 ,由糖链乳酸 Ｎ 岩澡戊糖唾液酸联结构成 ,分子量为３００～５００万［１］。临床研究显示ＣＡ１９ ９与胰腺癌的关系最为密切 ,与胆囊癌、胆管癌、胃癌、结直肠癌也有一定的相关性［２］。进一步研究发现 ,ＣＡ１９ ９含量的高低对上述肿瘤的诊断及预防均有指导价值［３］。我们应用近年发展的ＣＡ１９ ９免疫放射分析技术 ,建立了ＣＡ１９ ９时间分辨荧光免疫分析（ＴＲＦＩＡ） ,并与现存的化学发光免疫分析（ＣＬＩＡ）进行了临床检测结果评价。材料和方法一、材料与试剂 :抗ＣＡ１９ ９单克隆…     

化学发光免疫测定抗dsDNA抗体的实验条件分析和初步应用

采用正交设计确定了化学发光免疫测定抗ｄｓＤＮＡ抗体的最适实验条件，并与免疫荧光法（ｌＦ）、酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫测定法（Ｆａｒｒ）比较。结果表明，最适条件：ｄｓＤＮＡ包被浓度为１０μｇ／ｍｌ、ＡＢＥＩ－ＳａＨＩｇＧ结合物使用发光强度为１．０×１０￣４ｍｖ坎德拉，氯化高铁血红素（Ｈｅｍｉｎ）浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，Ｈ＿２Ｏ＿２浓度为０．３％，５６份ＳＬＥ患者血清中，化学发光免疫测定法（ＣＬＩＡ）检测抗ｄｓＤＮＡ抗体阳性率为８３．９％，高于ＩＦ和ＥＬＩＳＡ法，接近Ｆａｒｒ法水平。阻断试验证明，本方法检测抗ｄｓＤＮＡ抗体具较高特异性。     

化学发光和发光标记技术

化学发光免疫分析是继放射免疫分析和酶联免疫分析后建立起来的一种高灵敏、高特异性的免疫分析技术。化学发光标记是化学发光免疫分析的关键技术,不仅在小分子、大分子物质的标记分析中用于标记物的制备,而且在基因探针标记、肿瘤标记和诊断以及导向药物研究中广为采用。本文简要介绍了化学发光和发光标记技术。     

乙型肝炎患者红细胞CR1密度相关基因多态性与CR1活性的相关性

为研究乙型肝炎患者红细胞ＣＲ１活性与ＣＲ１密度相关基因多态型别的关系,采用ＰＣＲ加ＨｉｎｄⅢ酶切技术测定红细胞ＣＲ１密度相关基因多态型别（ＨＨ、ＨＬ、ＬＬ型）,采用红细胞ＣＲ１（ＥＣＲ１）免疫粘附活性（ＲＣＩＡ）和粘附ＩＣ量免疫酶联（ＥＬＩＳＡ）法测定红细胞ＣＲ１活性。乙型肝炎患者ＨＨ型比率是７３９％（３４／４６）,正常人ＨＨ型比率是８０％（６４／８０）,ＨＨ型乙型肝炎患者ＥＣＲ１ＲＣＩＡ（３７８±０２９ｎｇＡＨＧ／１０７ＲＢＣ）明显高于ＨＬ型乙型肝炎患者（１８８±０２６ｎｇＡＨＧ／１０７ＲＢＣ）和ＨＨ型正常人（２６０±０３０ｎｇＡＨＧ／１０７ＲＢＣ）。提示乙型肝炎患者红细胞免疫功能低下是获得性的。     

CELL-ELISA法检测HLA-Ⅰ类抗原在内皮细胞的表达

ＣＥＬＬ－ＥＬＩＳＡ法检测ＨＬＡ－Ⅰ类抗原在内皮细胞的表达张庆殷侯桂华孔庆莲曹容华＊（山东医科大学附属医院检验科，济南２５００１２）用胰蛋白酶灌注消化法培养原代人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），待形成致密单层后，用于ＨＬＡ－ＡＢＣ表达试验。在单层ＨＵ...     

化学发光免疫分析法测定血清甲状腺素

建立了以鲁米诺、过氧化氢作为发光底物，辣根过氧化物酶作为标记酶的化学发光免疫分析法，用于血清中甲状腺素水平测定，此法灵敏度为４．６ｎｇ／ｍｌ，不同水平Ｔ＿４批内变异系数为４．５％～７．８％，批间变异系数为７．０％～７．４％。加入Ｔ＿４５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ，回收率分别为１０５％、１０１％、１０４％，与放免法有较好的相关性，ｒ＝０．８３１，Ｐ＜０．００１，关系式为Ｔ４－ＣＬＩＡ＝０．９１５Ｔ４－ＲＩＡ＋２７．１（ｎｇ／ｍｌ），ｎ＝２６。　此法操作简便，检测速度快，适合于临床应用。     

新城鸡瘟病毒修饰的同种肿瘤细胞对肿瘤转移免疫防治效应

新城鸡瘟病毒修饰的同种肿瘤细胞对肿瘤转移免疫防治效应张宏宇，白莲花，刘学仁作者试用新城鸡瘟病毒（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ，ＮＤＶ）感染同种Ｌｉｗｅｓ肺癌（Ｌｉｗｅｓｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ＬＬＣ）肿瘤细胞，用ＥＬＩＳＡ法检测ＮＤＶ修饰...     

ABC－ELISA检测胸水中抗结核菌抗体的临床意义

ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ检测胸水中抗结核菌抗体的临床意义周玉皆，蔡后荣，高育瑶ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ为生物素－亲和素系统（ＡＢＣ）与免疫酶联吸附方法相结合的新技术，本文以ＢＣＧ作抗原包被，用该技术检测胸水中抗ＢＣＧ－ＩｇＧ抗体，观察它对结核性胸膜炎的诊断价值。...     

血清糖类抗原CA-125三种免疫分析方法的比较

198 1年Ｂａｓｔ等采用细胞免疫法制备了人浆液性囊腺癌腹水癌细胞株ＯＶＣＡ433的单克隆抗体ＯＣ12 5 ,该抗体可识别一种分子量为 110ＫＤ的糖蛋白 ,即ＣＡ - 12 5。免疫组化结果显示ＣＡ - 12 5在卵巢癌中的阳性率可达 97% ,进一步研究发现其与卵巢上皮癌关系最为密切 ,且为一种分泌型糖蛋白[1] 。从此 ,ＣＡ - 12 5的血清学研究一直颇受关注 ,检测方法不断出现 ,并随技术进步而发展。我们应用近年发展的时间分辨荧光技术 ,建立了ＣＡ - 12 5时间分辨荧光免疫技术(ＩＦＭＡ) ,并与现存的酶联吸附 (ＥＬＩＳＡ)和化学发光免疫分析(ＣＬＩＡ…     

用PCR分析30例急性淋巴细胞白血病的克隆演化

为了解急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排情况，应用ＰＣＲ技术对３０例急性淋巴细胞白血病初诊时及其中１０例复发后进行研究分析。结果表明：１５例Ｂ－ＡＬＬ中１３例具有ＩｇＨ基因重排，其中３例存在２条重排带，８例合并ＴＣＲγ基因重排；８例Ｔ－ＡＬＬ中６例具有ＴＣＲγ基因重排；３例Ｔ．Ｂ－ＡＬＬ具有ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因双重排；４例Ｎｕｌ－ＡＬＬ中２例具有ＴＣＲγ基因重排。１０例复发后，７例具有相应的ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，２例丢失ＩｇＨ基因重排，１例获得ＴＣＲγ基因重排。以上事实表明在ＡＬＬ病程中存在白血病细胞克隆演化     

淋巴细胞白血病细胞分化与基因重排研究

采用ＭｃＡｂｓ免疫酶和ＰＣＲ技术研究３５例淋巴细胞白血病细胞分化起源及ＩｇＨ和ＴＣＲγ、ζ基因重排。结果表明：２０例表达Ｂ细胞表面标记的病例中，１５例Ｂ－ＡＬＬ分别起源于Ｂ祖、前前Ｂ、前Ｂ和成熟Ｂ细胞，５例Ｂ－ＣＬＬ均起源于成熟Ｂ细胞；１７例检测到ＩｇＨ基因重排，８例伴ＴＣＲｒ基因重排，２例伴ＴＣＲξ基因失。８例Ｔ－ＡＬＬ分别起源于幼稚、普通和成熟胸腺细胞，均检测到ＴＣＲｒ基因重排和／或ＴＣＲξ基     

脂蛋白（a）杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用脂蛋白（ａ）［Ｌｎ（ａ）］免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交技术，将免疫小鼠的脾细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞进行融合，得到６Ｇ８、９Ｆ１１２株分泌抗Ｌｐ（ａ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对２株细胞进行免疫学鉴定，应用间接ＥＬＩＳＡ法证明，培养上清效价１×１０－３～２×１０－３，培养上清与Ｌｐ（ａ）呈阳性反应，而与ａｐｏＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅢ、Ｅ及血浆纤溶酶原（ＰＬＣ）均无交叉反应，ＥＬＩＳＡ相加实验证明：２株杂交瘤细胞株分别识别Ｌｐ（ａ）分子上２个不同的抗原决定簇。     

鼠抗真菌性黑色素的抗体反应

黑色素与许多人类重要的致病菌的毒性有关，但对其免疫反应所知不多。作者用从Ｃ．Ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ系２４０６７细胞分离的黑色素进行ＥＬＩＳＡ、免疫荧光（ＩＦ）及血清学凝集反应来证明其致免疫性。首先将由Ｃ．Ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ细胞纯化提取的黑色素按不同剂量分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６和Ｔ细胞缺陷ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，并分别于免疫后不同时间取血。ＥＬＩＳＡ试验系将系列稀释的Ｌ多巴黑色素悬液包被９６孔板，过夜，之后８０℃处理３０分钟，并用封闭液封闭，洗涤后加入稀释的血清孵育，二抗用碱性磷酸酶标记的…     

相对离心力加速ELISA技术的改进及临床应用

相对离心力加速ＥＬＩＳＡ技术的改进及临床应用祝卫平，肖爱民，郭虹，赵华严（沙市市传染病医院沙市４３４０００）在我国，ＥＬＩＳＡ技术已被广泛推广应用。我们将相对离心力（ＲＣＦ）用于加速ＥＬＩＳＡ技术，快捷地把常规ＥＬＩＳＡ技术检测血清ＨＢＶＭ从包被到报...     

银强化金标记免疫吸附剂试验的方法学研究

银强化金标记免疫吸附剂试验（ＳＥＧＬＩＳＡ）是一种新的非酶、非放射性免疫测定法，本文以兔抗ＢＳＡ抗体测定为模式，就它的原理、试剂制备和方法学最佳化等进行了研究，并与ＥＬＩＳＡ作了对比试验。     

试论HOOK效应的分子基础

以ＩＲＭＡ、ＩＥＭＡ、ＥＬＩＳＡ和ＴＲ－ＦＩＡ等为代表的，在液相ＲＩＡ（Ｂｅｒｓｏｎ等，１９５９）基础上发展起来的新一代固相标记免疫测定法（ＳＬＩＡ），既敏感又便捷，加之普遍采用单抗（ｍＡｂ）替代多抗（ｐＡｂ），检测抗原的特异性更高。然而，由于ＲＦ、...     

MCAb、PcAb不同标记ELISA技术对HBeAg／抗－HBe检测的评估

用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和多克隆抗体（ＰｃＡｂ）进行辣根过氧化物酶标记或生物素标记作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测乙型肝炎病毒ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ标志物。结果显示，ＭｃＡｂ的灵敏性高于ＰｃＡｂ，且标记用的抗体量较少，一孔一期法同时测ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ只能使用ＭｃＡｂ。利用生物素与亲和素系统与ＭｃＡｂ建立的Ｍｃ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ技术，其灵敏性与放射免疫法（ＲＩＡ）相同，特异性好，稳定性优于ＲＩＡ。生物素标记抗体至少１年保持效价不变，是一种新的较理想的检测ｅ系统的方法之一。