p27表达和DNA倍体在软骨肉瘤中的研究

目的：软骨肉瘤是常见的骨恶性肿瘤之一。其形态多变、生物学行为复杂，对软骨瘤和高分化软骨肉瘤，只凭病理组织学特征鉴别它们通常是很困难的，并且软骨肉瘤组织学分级与其生物学行为时常不一致。因此，需要更为客观可靠的指标来协助诊断，指导软骨肉瘤的分级和估计软骨肉瘤的预后。肿瘤细胞周期的研究是当前肿瘤研究热点之一，肿瘤细胞周期受一系列细胞周期调节因子控制，包括Ｇ１期细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎｓ）和相应的细胞周期素依赖激酶（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｓ，ＣＤＫｓ），ＣＤＫｓ活性又受一系列细胞周期素依赖激酶抑制物（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＣＤＫＩｓ）控制。ｐ２７是新近发现的ＣＤＫＩｓ家族之一，在细胞周期增殖和分化调控中起非常重要作用。ｐ２７蛋白主要抑制Ｇ１期ｃｙｃｌｉｎＥ－ＣＤＫ２复合物及ｃｙ－ｃｌｉｎＤ－ＣＤＫ４／６复合物活性，它过度表达可使细胞周期停滞在Ｇ１中期。软骨肉瘤ｐ２７表达国内外尚未见报道。检测软骨肉瘤中ｐ２７表达，从而探讨ｐ２７表达与软骨肉瘤组织分级和ＤＮＡ倍体的关系及其对软骨肉瘤的诊断和预后判断是否具有应用价值十分必要。方法：３６例经典软骨肉瘤未脱钙     

V79和V798细胞周期及其调控因子的差异比较

为了解Ｖ７９和Ｖ７９－８两种细胞及调控因子的差异，用「＾３Ｈ『胸腺嘧核苷参入法检测两种细胞，发现Ｖ７９细胞无可检测到的Ｇ２期；Ｖ７９－８细胞则同时缺管可测到的Ｇ１和Ｇ２期。流式细胞光度术显示，Ｖ７９Ｇ１ＡＤＷＥ调控上存在差异。比较两者Ｇ１期周期调控因子的ｍＲＮＡ表达水平发现，Ｖ７９－８ｃｙｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＤ３和ＩＤ表达水平明显高于Ｖ７９，这可能直接导致了两者Ｇ１的差异。     

转化生长因子β1对G1期的负性调节

ＴＧＦ是具有生物活性的多肽，它通过下调Ｇ１期细胞周期蛋白Ａ，Ｄ，Ｅ的表达、改变细胞周期蛋白依赖性激酶ＣＤＫ２，ＣＤＫ４和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｐ２７的活性，使细胞停滞在Ｇ１期，ＴＧＦ－β１还可通过抑癌基因产物Ｒｂ非磷酸化状态的聚积和下调Ｇ１早期“演进因子”ｃ－ｍｙｃ的表达阻止Ｇ１期细胞向Ｓ期进展     

钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响

目的　探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）对ＨｅＬａ细胞Ｓ期进程的影响及其分子机理。　方法　通过ＴｄＲ双阻断法获得同步化的Ｓ期ＨｅＬａ细胞,以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和Ｗｅｓｔｅｒｎ 技术分别观察了ＴＦＰ对ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程和胸苷激酶（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性及细胞周期引擎分子ＣｙｃｌｉｎＡ、Ｃｄｋ２ 和细胞周期调节蛋白ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ＰＣＮＡ、ｐ２１ 蛋白表达水平的影响。　结果　ＴＦＰ（２０μｍ ｏｌ／Ｌ）能使３ Ｈ－ＴｄＲ的掺入峰值后移,并抑制了Ｃｙ－ｃｌｉｎＡ、ＰＣＮＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ的表达和提高了ｐ２１ 蛋白的水平,但对Ｃｄｋ２的表达几乎无影响。　结论　ＣａＭ 除了能通过影响ＰＣＮＡ的水平直接作用于ＤＮＡ 合成,同时又可通过作用于ＣｙｃｌｉｎＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ｐ２１ 等周期引擎分子和调控因子水平正调ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程。     

细胞周期蛋白A对舌鳞癌细胞周期和抗原含量的影响

细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ是调节细胞周期活动的重要蛋白质，在细胞的增殖及肿瘤的发生中具有重要作用。近年来，对细胞周期调控分子机制的研究有了突破性进展，已知细胞生长周期由一系列细胞分泌的蛋白控制，并证实哺乳动物的ｃｙｃｌｉｎ有８种，其中ｃｙｃｌｉｎＡ／Ｃｄｋ２为Ｓ期和Ｇ２期所必需的〔１〕。细胞在由Ｇ１→Ｓ→Ｇ２→Ｍ期的转换过程中，存在着几个限制点，其中Ｇ２／Ｓ限制点是调控细胞周期进程的关键〔２〕。ｃｙｃｌｉｎＡ的合成在细胞周期由Ｇ１→Ｓ期明显增加，证明ｃｙｃｌｉｎＡ为Ｓ期的特征性细胞周期蛋白，存在于…     

反义周期蛋白B1基因转染HT29细胞后若干细胞增殖调控相关基因表达的变化

用基因重组技术将插入有反义周期蛋白Ｂ１（ｃｙｃｌｉｎＢ１）基因ｐＸＪ４１－ｎｅｏ质粒，转染人结肠腺癌ＨＴ２９，获得了ＨＴＢ１细胞株。ＨＴＢ１细胞显示出ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ明显的表达抑制。为了探讨ＨＴＢ１细胞生长变慢和它的增殖相关基因表达之间的关系，我们用异硫氰酸胍－酚一步法提取ＨＴＢ１和ＨＴ２９细胞的总ＲＮＡ，并用一些有关的基因探针进行杂交实验。其结果表明：ｃ－ｍｙｃ和ＣＤＫ４在ＨＴＢ１中的表达低于在ＨＴ２９中的表达；而另一方面，ｐ５３、Ｒｂ、ＴＧＦβ和ｃｙｃｌｉｎＤ３在ＨＴＢ１细胞中的表达高于对照组。而ｃｄｃ２基因表达二者维持相似水平。根据研究结果我们发现，转染有反义ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的ＨＴＢ１细胞在一组正、负调节基因的协同作用下，导致细胞周期运转的变化。     

p53基因突变、int-2基因扩增与食管癌的关系

ｐ５３基因突变、ｉｎｔ－２基因扩增与食管癌的关系邵根泽任运生张少英温博贵食管癌的发生是一个涉及多基因改变的多步骤过程，ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＲＦ、ｉｎｔ－２、ｈｓｔ－１、ＣｙｃｌｉｎＤ等癌基因以及ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ、ＭＣＣ、ｐ１６等抑癌基因的异常是食管癌...     

反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖

用ＤＮＡ重组技术将人类ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的全长ｃＤＮＡ，反向插入到真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ的ＢａｍＨ１位点，得到ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的反义ＲＮＡ表达载体ｐＡＳ－Ｂ１。利用ＤＮＡ磷酸钙共沉淀方法，将ｐＡＳ－Ｂ１转染进ＨＴ２９细胞。在含有Ｇ４１８的培养基中，挑选出独立的细胞克隆。利用ｃｙｃｌｉｎＢ１ｃＤＮＡ作探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定出一株内源性ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ受到抑制的细胞株ＨＴＢ１。比较ＨＴＢ１与对照细胞ＨＴ２９发现，ｃｙｃｌｉｎＢ１的反义ＲＮＡ明显抑制ＨＴ２９细胞的增殖，细胞内３Ｈ－ＴｄＲ参入量减少。流式细胞光度术分析，处于Ｇ１期细胞比率的升高与Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞数量的下降都十分显著。     

星形细胞瘤p16、Rb、cyclin D1、EGFR表达和DNA含量测定

目的：探讨ｐ１６、Ｒｂ、ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１和ＥＧＦＲ在星形细胞肿瘤发生、发展中的作用及其与预后的关系。方法：免疫组化染色采用即用型Ｓ－Ｐ法，用图像分析系统对８０例星形细胞肿瘤瘤细胞进行ＤＮＡ含量测定。结果：８０例星形细胞肿瘤：ｐ１６、Ｒｂ、ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１和ＥＧＦＲ的阳性率分别为４３．８％、７１．３％、５５．０％和８５．０％，４种蛋白阳性率及ＤＮＡ含量与组织学分级均有统计学意义；ｐ１６、Ｒｂ、ｃ     

G1期细胞周期调节因子与细胞癌变

目前研究结果表明，细胞周期中的多种调整因子参与细胞癌变，特别是Ｇ１期的Ｄ型细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎＤ）的过表达，细胞周期蛋白依赖性抑制因子（ＣＤＩ）的ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｎ２７及参与Ｇ１期负向调节的抑癌基因产物ｐ５３，Ｒｂ的低表达或基因突变皆可导致恶性肿瘤的发生。     

利用原位杂交分析几种cyclin和CDK基因在人乳腺癌中的异常表达

目的 探讨细胞周期调控基因ｃｙｃｌｉｎ和ＣＤＫ的异常与乳腺癌发生的相关性。方法 采集２０例乳腺癌外科手术样品,用原位杂交技术分析了ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１,Ｄ３,Ｅ,ＣＤＫ２和ＣＤＫ４ｍＲＮＡ的表达。结果 在大多数乳腺癌样品中,这些基因有一种或几种出现高表达。     

细胞周期调节因子与肿瘤的发生和调控

细胞的转化和肿瘤发生受到多种细胞周期调节因子的影响。Ｃｙｃｌｉｎｓ和ＣＤＫｓ／Ｃｄｃ２作为细胞周期的正调节因子，促进细胞的生长和分裂，ＣＫIｓ作为负调节因子则抑制细胞生长和促进细胞分化。Ｃｙｃｌｉｎｓ、ＣＤＫｓ／Ｃｄｃ２与ＣＫＩｓ相互调节，相互控制，组成一个复杂的分子调节网。Ｃｙｃｌｉｎｓ过度表达或ＣＫＩｓ的功能性缺失或突变，有利于细胞的转化和肿瘤的发生发展。     

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑,４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期,Ｇ１→Ｓ期转换受阻,同时ＮＢＴ还原反应增强,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加,而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低,其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。     

胆固醇缺乏抑制Jurkat T淋巴细胞增殖及分子机制研究

人蛋白酪氨酸激酶信号传递系统及细胞周期调控这一角度来探讨胆固醇缺乏抑制Ｊｕｒｋａｔ细胞增殖的分子机制。方法采用接免疫荧光染色，流式细胞久仰分析技术及免疫细胞化学染色等方法做相关分析。结果经去脂血清培养基培养的Ｊｕｒｋａｔ细胞加ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ处理３ｄ后，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显下降，细胞增殖受抑细胞受阻于Ｇ０／Ｇ１期，ＰＴＫ活性及细胞ｃｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４蛋白的表达明显降低，加入ＬＤＬ可以     

人THANK基因真核表达载体的构建及其在人胚肾细胞中的表达

１材料和方法１．１材料　大肠杆菌Ｋ８０２、人胚肾细胞２９３由本室验室保存。细胞转染试剂脂质体Ｃｌｏｎｆｅｃｔｉｎ购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。ＤＭＥＭ购自ＧＩＢ－ＣＯ公司。Ｇ４１８购自Ｓｉｇｍａ公司。胎牛血清购自杭州四季青公司。鼠抗人ＴＨＡＮＫ单克隆抗体由倪健博士赠送。含有ＴＨＡＮＫ全长ｃＤＮＡ的质粒ｐＭＤ１８－ＴＨＡＮＫ为本实验室构建［］。真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１购自Ｉｎｖｉｏｔｒｏｇｅｎｅ公司。质粒ｐＭＤ１８－Ｔ购自ＴａＫａＲａ公司。ＤＮＡ胶回收试剂盒、细胞ＲＮＡ抽提试剂盒，购自华舜生物工程…     

Cyclin D_1与肿瘤

细胞周期蛋白Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ）在细胞周期的Ｇ１期调控中起重要作用,它与肿瘤的生长、恶化和转移有密切关系。本文对ＣｙｃｌｉｎＤ１在肿瘤的发生、发展中所起的作用进行综述。     

表达反义细胞周期蛋白cyclinD1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响

目的观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞生长的影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞系中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况，发现ＰＣ７细胞中基因有扩增及过度表达。我们构建了反义（ＡＳ）ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达载体，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染方法转染ＰＣ７细胞，获得转化细胞系ＰＣ７／ＡＳｃｙｃｌｉｎＤ１。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化细胞系，表明有外源反义ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，而内源性ｃｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达及蛋白合成下调，并进行了细胞凋亡分析。结果转化细胞系细胞恶性生物学行为及表型部分逆转，细胞生长速度、ＤＮＡ合成及细胞增殖和代谢能力均明显下降，软琼脂集落形成能力减低。流式细胞术分析发现细胞被阻滞于Ｇ１期，ＤＮＡ凝胶电泳、原位凋亡检测发现凋亡细胞增多。结论通过反义ＲＮＡ技术，下调在细胞周期调控中起重要作用的ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，可使胰腺癌细胞恶性表型部分逆转。     

细胞周期蛋白E对乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响

观察细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ的表达对乳腺癌细胞ＭＣＦ－７生长及其他周期相关基因的影响。方法构建正义和反义ｃｙｃｌｉｎ Ｅ ｃＤＮＡ真核表达载体,并采用ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩＮＥ转染,将其导入ＭＣＦ－７细胞,获得稳定表达正义及反义ｃｙｃｌｉｎＥ的细胞系,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测有外源性片片段的插入及表达,并作细胞生长曲线、四甲偶氮唑盐（ＭＴＴ）法和流式细胞计数分析;用     

抗VEGF165的嵌合抗体在小鼠骨髓瘤细胞中的表达

目的减少鼠源性单抗的免疫原性,获得抗人血管内皮生长因子１６５（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ１６５,ＶＥＧＦ１６５）的人／鼠嵌合抗体。方法 将抗ＶＥＧＦ１６５鼠单抗ＶｍＤ１１鼠单抗ＶｍＤ１１的轻链可变区基因ＶＬ和重链可变区基因ＶＨ分别克隆到带有人ＩｇＧ１轻链恒定区基因ＣＫ,重链恒定区基因Ｃγ１的真核表达载体ｐＡｃｙｃ－ｎｅｏ－Ｃｋ和ｐｓｖ２－Ｃγ１上,构建了真     

p16与细胞周期调节蛋白在食管癌中的表达

细胞周期的调控异常与肿瘤的发生密切相关。其中，ｃｙｃｌｉｎＤ１细胞周期依赖性蛋白激酶４（ＣＤＫ４）ｐ１６，这一以ＣＤＫ４为中心的细胞周期调控途径较为明确，且其各组分的异常与肿瘤的关系十分密切，我们用免疫组化方法对４３例原发食管癌中的ｐ１６、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４蛋白的存在状态进行了研究，旨在探索其相互的作用及与食管癌发生的关系。一、材料和方法１．标本：４３例食管癌组织取自河南医科大学第二附属医院和河南省肿瘤医院１９９６～１９９７年的手术切除标本。患者术前未接受过放、化疗。每例标本分别取癌…