新生儿、儿童及成人外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞分泌IFN—γ及IL—4变化研究

本研究应用相应的荧光标记的抗体 ,从单细胞水平检测了正常无家族过敏史的 17例新生儿、 18例儿童及 10例成人外周血CD4+ 、CD8+ 细胞分泌IFN γ、IL 4的变化 ,结果显示产生IFN γ的CD4+ (Th1)和CD8+ (Tc1)细胞、产生IL 4的CD4+ (Th2 )细胞及同时产生IFN γ/IL 4的CD4+ (Th0 )细胞 ,随着年龄的增长而明显增高 (P <0 0 5 ) ,Th1/Th2比值也明显升高 (P <0 0 5 )。表明从新生儿期至成人Th1、Tc1、Th2、Th0有一个正常生理性增加过程 ,其中Th1、Tc1变化更为显著 ,可能与抗原暴露接触有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生IL-18、IL-4和IFN-γ的水平

为了研究细胞因子在慢性乙型肝炎中的表达水平变化及诱生活性 ,检测不同临床类型慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ )ＩＬ 18、ＩＬ 4及ＩＦＮ γ的水平并对其意义作初步探讨。1　资料与方法1 1　资料　选择临床确诊的 10 5例慢性乙型肝炎患者 ,分为三组 ,39例轻度组 ,37例中度组 ,2 9例重度组。正常对照组 32例来自健康志愿者。1 2　方法　取研究对象抗凝血 ,常规分离ＰＢＭＣ。调整ＰＢＭＣ浓度 ,一组加入脂多糖 (ＬＰＳ为Ｓｉｇｍａ公司产品 ) ,终浓度为 1μｇ/ｍｌ;另一组不加ＬＰＳ ,调整细胞悬液浓度为10 6/ｍｌ。置入 37℃…     

SLE患者IFN-γ、IL-4及IL-12水平变化及意义

从Th1/Th2细胞代表性细胞因子IFN γ/IL 4和IL 12水平的变化分析SLE患者Th1/Th2细胞的偏移现象。本实验通过半定量PCR法和ELISA酶联免疫检测法检测上述三种细胞因子含量。实验结果显示 ,SLE患者IL 4/IFN γ基因水平比值为0 32 8,高于对照组 (0 0 7)。ELISA检测显示IL 12在SLE患者血清中为 (38 39± 15 1)pg/ml,低于对照组 (84 97± 13 7)pg/ml(P <0 0 5 )。结论 :SLE患者Th1/Th2细胞因子平衡失调 ,IL 4细胞因子基因水平增高 ,同时血清中IL 12水平降低。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

青霉素过敏病人外周血淋巴细胞IL-4、IFN-γmRNA的表达

目的 :研究青霉素类过敏反应和细胞因子IL 4、IFN γ的关系。方法 :采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 1 4例青霉素G(PG)过敏病人 (速发型、迟发型过敏病人 7例 )和 1 1例对照者外周血淋巴细胞经青霉素G刺激后IL 4、IFN γmRNA的表达。结果 :速发型青霉素过敏反应组有 4例 ,迟发型青霉素过敏反应组、正常对照组各有 1例外周血淋巴细胞中IL 4mRNA有表达 ;速发型过敏反应组有 6例 ,迟发型过敏反应组有 2例 ,正常对照组有 1例淋巴细胞内有IFN γmRNA表达。速发型过敏反应组IFN γ表达明显高于迟发型过敏反应组、正常对…     

SARS患者急性期外周血CD3+、CD4+及CD8+细胞数量的变化

目的 探讨SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法 用全自动血细胞分析仪检测44例SARS患者外周血白细胞计数及分类，用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群；并与正常对照组比较。结果 与对照组比较，SARS组患者白细胞总数显著下降，淋巴细胞百分数和绝对数显著下降，粒细胞绝对数显著下降，粒细胞百分数显著增加；CD3^ 、CD4^ 和CD8^ 细胞绝对数显著下降，CD3^ 、CD4^ 及CD8^ 细胞百分数和CD4^ /CD8^ 比值与对照组比较无显著性差异。结论 SARS冠状病毒感染损伤患者细胞免疫功能。     

补肾益气方对人蜕膜CD4^＋ T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调控作用

目的:观察补肾益气方对人早孕蜕膜CD4+T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调节作用,探讨其调节母胎界面Th1/Th2免疫保胎机制.方法:将40只成年雌性SD大鼠随机分成两组:补肾益气方组和生理盐水组,分别灌服体积相同的中药和生理盐水,早晚各一次,3天后颈动脉取血;收集孕6～10周行人工流产术的正常孕妇的蜕膜组织,用免疫磁珠方法分离出CD4+T细胞进行培养,分4组:10%胎牛血清为正常对照组(A组),10%中药血清组(B组),20%中药血清组(C组),10%生理盐水血清组(D组),分别培养24、48、72小时,以ELISA检测法检测细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的水平.结果:与A组相比,B组和C组的Th2型细胞因子IL-4的水平均显著升高(P＜0.05);Th1型细胞因子IFN-γ的水平显著降低(P＜0.01),但是B组和C组的结果之间无显著差异.结论:补肾益气方通过促进蜕膜CD4+T分泌IL-4,并抑制其产生IFN-γ,从而促进母胎界面形成Th2优势.     

SLE患者外周血IFN-γ及IL-4细胞因子mRNA的表达研究

为利用实时监测定量PCR技术检测细胞因子mRNA的表达 ,从mRNA水平探讨IFN γ、IL 4mRNA的变化。对初诊SLE患者外周血IFN γ、IL 4的mRNA表达进行检测 ,并同时使用LPS及PHA作刺激剂研究其对SLE患者细胞因子mRNA表达的影响。结果是PHA刺激后 ,正常组IFN γmRNA的表达明显高于SLE组 (P =0 0 2 4 ) ;LPS对正常对照的IFN γ和IL 4的mRNA表达均能明显上调 ,但SLE患者仅表现为IFN γ升高 ,IL 4升高不明显 ;未刺激组SLE患者与正常对照的比较结果显示IFN γ的表达及IFN γ/IL 4有明显降低 (P =0 0 14 ,P =0 0 33)。故SLE患者与正常对照相比 ,IFN γmRNA的表达下降 ,同时SLE患者的IFN γ、IL 4mRNA表达对LPS及PHA的反应下降。由于不同的患者受累系统不同 ,临床表现不一 ,可能T细胞的异常并不相同 ,其免疫系统紊乱的机制也不一致     

重肌灵片对ⅡA型重症肌无力外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子IFN-γ、IL-4、TGF-β水平的影响

目的：探讨重肌灵片对重症肌无力（MG）患者的细胞免疫调节机制。方法：将60例MG患者随机分为治疗组30例、对照组30例，治疗组服用重肌灵片及泼尼松模拟片；对照组服用泼尼松片及重肌灵模拟片，疗程12周。应用流式细胞仪检测重症肌无力患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况；ELISA法测定患者外周血单个核细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-4和TGF-B的水平。结果：两组患者治疗后CD4^＋T细胞百分率、CD4^＋／CD8^＋比值均有明显下降，治疗组CD4^＋／CD8^＋比值与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。治疗组治疗后CD8^＋T细胞百分率明显增加，与治疗前比较有显著性差异（P〈0．05），而对照组治疗后CD8^＋T细胞百分率无明显变化（P〉0．05）。与治疗前比较，治疗组治疗后IFN—γ、IL-4水平降低（P〈0．01），TGF-β水平升高（P〈0．01），而对照组三者水平皆降低。结论：通过调节T淋巴细胞亚群比例分布以及IFN-γ、IL-4、TGF-β等细胞因子的分泌，可能是重肌灵片发挥免疫调节作用机制之一。     

早孕期弓形虫感染对大鼠胎盘IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平的影响

研究早孕期弓形虫感染对Wistar大鼠胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ表达水平的变化,从而探讨弓形虫感染致不良妊娠的分子免疫学机制。将Wistar孕鼠随机分为2组:①对照组12只;②早孕感染组12只。早孕感染组每只孕鼠于妊娠第5天腹腔注射1×105个弓形虫强毒株(RH株)速殖子,对照组不做任何处理。所有孕鼠均于孕19 d颈椎分离处死,无菌获取胎盘,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-ti me PCR)及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:①实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γmRNA相对表达水平分别为(0.006±0.010)、(0.119±0.080)、(0.82±0.354)和(0.596±0.444)、(0.478±0.224)、(0.297±0.180),三者之间均具有显著性差异(P<0.01);②实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γ蛋白表达水平分别为(4.63±1.26)、(239.24±83.16)、(105.47±67.88)和(2.40±1.33)、(103.03±79.72)、(208.02±74.95),三者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)、(P<0.05);③实验组与对照组mRNA水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(390.67±264.12)(37.65±21.10)和(1.31±0.96)、(0.79±0.60)两者之间均具有显著性差异(P<0.01);④实验组与对照组蛋白水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(176.51±212.95)、(7.26±8.81)和(23.09±12.95)、(0.44±0.21)。两者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)。大鼠早孕期弓形虫感染后,胎盘局部Th1型细胞因子表达增高,Th2型细胞因子表达降低,打破了正常妊娠所需的Th1/Th2平衡状态,使平衡倾向于Th1,可能是弓形虫孕期感染致不良妊娠的重要分子机制之一。     

儿童抽动障碍ASO、IL-6和IL-8水平的研究

目的:观察儿童抽动障碍患者抗链球菌溶血素O、T淋巴细胞亚群、血清IL-6、IL-8水平的变化,以探讨其发病可能机理.方法:对52例儿童抽动障碍患者和30例正常儿童分别采用间接免疫SAP花环法检测T淋巴细胞亚群和ELISA法检测血清IL-6和IL-8水平.结果:儿童抽动障碍患儿,T淋巴细胞亚群与对照组比较无统计学差异,抗链球菌溶血素O明显高于对照组,血清IL-6水平、IL-8水平两组无统计学差异.结论:儿童抽动障碍患者可能存在免疫学方面的改变,其和免疫学的关系还有待进一步深入探讨.     

肺结核患者外周血CD4~+和CD8~+记忆性T细胞亚群、IL-17、IL-27表达的初步探讨

目的:探讨肺结核患者外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚群及白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17),IL-27的表达。方法:采用流式细胞术检测肺结核患者组外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞,患者组按治疗史分为初治组,复治组;按痰涂片抗酸染色分为痰涂阳性组,痰涂阴性组。初治组8例为凡既往未用过抗结核药物治疗或用药时间少于一个月的新发病例;复治组22例为凡既往应用抗结核药物一个月以上的新发病例、复发病例、初治治疗失败病例等;痰涂阳组9例为痰涂片抗酸染色阳性;痰涂阴组21例为痰涂片抗酸染色阴性。ELISA法检测IL-17,IL-27。结果:①与健康对照组比较:患者组CD4+效应型记忆性T细胞均显著增高(P<0.05),初治组与涂阴组CD8+效应型记忆性T细胞均显著降低(P<0.05),复治组IL-17显著降低(P<0.05),而IL-27显著增高(P<0.05)。②与初治组比较:复治组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),而CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),IL-17显著降低(P<0.05),IL-27显著增高(P<0.05)。③与涂阴组比较:涂阳组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),CD8+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05)。④Spearman相关性分析显示:IL-17与IL-27呈正相关(P<0.05),记忆性T细胞亚群与IL-17,IL-27水平无显著相关性(P>0.05)。结论:肺结核患者外周血CD4+效应型记忆性T细胞的表达可望作为TB初步诊断的观察指标,CD4+中央型记忆性T细胞和CD8+效应型记忆性T细胞的表达均可望作为TB患者的临床分组依据,TB外周血IL-17、IL-27水平可望用于判断TB的炎症程度。     

子宫内膜异位症患者血清IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17的变化及意义

目的观察子宫内膜异位症(EM)患者血清IL-4、IFN-γ、TGF-β和IL-17的表达水平,分析Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡状态并探讨其与子宫内膜异位症发生发展的关系。方法选取确诊为子宫内膜异位症的病例42例为研究对象,并以无子宫内膜异位症的健康女性为对照组,采集其血清用ELISA法检测并比较IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的水平,计算IL-4/IFN-γ、TGF-β/IL-17的比值。结果子宫内膜异位症患者外周血IFN-γ、IL-17的水平均显著低于对照组(P<0.01),而IL-4和TGF-β均显著高于对照组(P<0.05)。IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17的比值都显著高于对照组(P<0.01),EM组Ⅲ～Ⅳ期患者的IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期的患者。结论 EM组患者外周血中Th1细胞相关的细胞因子IFN-γ和TH17细胞相关的IL-17水平均下降,而Th2和Treg细胞因子水平上升,且IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17随病程的进展而显著升高,提示在子宫内膜异位症患者可能存在着Th1/Th2和TH17/Treg细胞的平衡失衡,且与病程发展紧密相关。     

NOD小鼠人源化后CD4~+T和CD8~+T细胞及其分泌IFN-γ与IL-17的频率变化及意义

目的 观察分析NOD小鼠和NOD.β2mnullHHD小鼠Ⅰ型糖尿病(Type1 diabetes,T1D)发病情况以及脾T细胞亚群的频率及功能差异,揭示CD4+T和CD8+T细胞亚群在HLA-A*0201转基因NOD小鼠和NOD小鼠的T1D发病中作用的异同。方法采用测量血糖的方法观察2种小鼠的发病情况,采用流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞亚群频率以及这2群细胞分泌IL-17和IFN-γ频率的差异。结果 NOD.β2mnullHHD小鼠较NOD小鼠发病早且严重;NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD4+T细胞亚群显著高于NOD小鼠,NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD8+T细胞亚群显著低于NOD小鼠;2种小鼠的脾淋巴细胞中CD3+CD4+IL-17+T细胞亚群与CD3+CD8+IL17+T细胞频率无差异;NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD4+IFN-γ+T和CD3+CD8+IFN-γ+T细胞亚群频率显著高于NOD小鼠。结论 HLA-2.1分子转入NOD小鼠后HLA-2.1分子加速了HLA-A*0201转基因NOD小鼠T1D的发病进程;NOD.β2mnullHHD小鼠相对NOD小鼠的T1D发病更早、病情更重,这与CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞分泌的IFN-γ显著相关,而与IL-17无关,为T1D防治的临床转化基础研究提供实验数据。     

外周血IL-4、IL-5、IFN-γ含量与支气管哮喘症状评分的关联性

文献报道,IL4、IL-5、IFN-γ等细胞因子参与了哮喘的病情进展过程,但检索文献迄今为止甚少有关于IL4、IL-5、IFN-γ含量与支气管哮喘症状评分相关性的探讨。本文通过观察急性发作期的哮喘患者治疗前后日夜间症状评分和外周血IL-4、IL-5、IFN-γ含量变化,探讨外周血IL-4、IL-5、IFN-γ含量与支气管哮喘症状评分的关联性。现报道如下。     

黄芪复方对重症肌无力患者T淋巴细胞亚群及IFN-γ、TNF-α、IL4和AChRAb的影响

目的探讨黄芪复方对重症肌无力（MG）患者的细胞免疫调节机制及疗效。方法30例患者服用黄芪复方,疗程12周,观察症状改善情况及不良反应。应用流式细胞仪检测MG患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况;应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定患者治疗前后外周血血清细胞因子IFN-γ、TNF—α、IL4及乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）的变化情况：结果经治疗12周后,临床显效率60％（18／30）,总有效率为80％（24／30）。CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值均有明显下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗后CD8^＋T细胞明显增加,与治疗前比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;治疗前血清IFN-γ、IL-4、TNF-α和AChRAb水平显著高于健康组,治疗后IFN-γ、IL-4、TNF-α和AChRAb水平显著降低,与治疗前比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论通过调节淋巴细胞亚群比例分布以及细胞因子水平的变化,可能是黄芪复方发挥免疫调节作用机制之一。     

细胞因子直接诱导正常人CD4+T细胞产生IL-17和IFN-γ

目的:探讨细胞因子(IL-23、IL-2和IL-15)对正常人外周血单个核细胞(PBMC)和CD4 T细胞IL-17产生的诱导作用和调节因素。方法:将正常人PBMC和纯化的CD4 T细胞在不同条件下与IL-23、IL-2和IL-15进行培养,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-17和IFN-γ的水平;采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)在单个细胞水平上检测IL-17和IFN-γ产生细胞的频率。结果:IL-23可诱导PBMC产生IL-17和IFN-γ;Th2细胞因子和抗IL-12受体β1(IL-12Rβ1)mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生。IL-2和IL-15均可诱导IL-17和IFN-γ产生,并与IL-23具有共同诱导作用。IL-12可诱导PBMC产生大量的IFN-γ,但不产生IL-17。进一步研究表明,IL-23、IL-2和IL-15可直接诱导纯化的CD4 T细胞产生IL-17和IFN-γ。结论:IL-23、IL-2和IL-15可直接作用于正常人CD4 T细胞诱导其产生IL-17和IFN-γ;Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生。为探讨自身免疫性疾病等的发生机制和治疗提供了新的靶点。     

牛膝多糖体外诱导人T细胞表达IFN-γ和IL-4蛋白的机制探讨

目的 :探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法 :使用牛膝多糖在不同浓度或在不同时间内对人T细胞进行体外诱导培养 ,用ELISA方法测定培养上清液的IFN γ及IL 4的蛋白表达情况。结果 :①人T细胞受不同浓度ABPS刺激时 ,IFN γ分泌水平随ABPS浓度递增 ,在 4 0 0 μg ml时 ,IFN γ表达量最高 (P <0 0 5 ) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。②人T细胞在ABPS刺激不同时间后 ,IFN γ分泌水平逐步增高 ,在 4 8小时时与其他各时间点比较 ,有非常显著的差异 (P <0 0 0 1) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。结论 :①ABPS能诱导人T细胞分泌IFN γ ,该作用呈时间、剂量依赖性变化 ,而抑制IL 4的分泌。②在蛋白表达水平上证实ABPS能够促进Th1类细胞因子的分泌 ,而抑制Th2类细胞因子的分泌。