抗cAMP血清的制备

<正> cAMP抗血清是cAMP放射免疫分析的特异试剂,本文介绍其制备方法如下。 一、免疫原制备:cAMP是小分子,需与大分子载体蛋白结合后才具有免疫原性。参考Oliver等和Steiner等的方法,取牛血清白蛋白(BS-A)和血蓝蛋白(LHC)各30mg分别溶于1.5ml水中,调pH至5.5。另取ScAMP(2’-0-琥珀酰-cA-MP)15mg二份。各溶于1.5ml水中,调pH至5.5,分别滴入BSA和LHC溶液中。各加入水溶性碳二亚胺(EDC)15mg,使反应液的载体蛋白:ScAMP:EDC=2:1:1(W/W)。搅拌混匀后,暗处反应24小时,对生理盐水磷酸缓冲液(0.01M,pH7.4)在4℃透析3～7天,冰冻干燥,贮于-20℃冰箱备用。经纸电泳和紫外吸收光谱分析,证明ScAMP分别与B     

以全血快速分离染色体DNA新方法

本文介绍一种从冷冻的含柠檬酸盐的全血中快速分离染色体DNA的新方法,该法在90min内即可获得高质量的DNA,可用于限制酶切和PCR扩增等.并且该法不再使用有害的有机试剂,省略了相应烦锁的抽提步骤。具体方法为:将保存在0～20℃中的含柠檬酸盐的血样本(5ml)于37℃迅速溶化,加50ml裂解缓冲液(0.32M蔗糖,5mM MgCl_21％TritonX-100,0.01M Tris-HCI pH7.6)混匀后冰浴15min,4℃离心10min(6 800 g),弃上清液,沉淀溶解于50ml洗涤缓冲液内(10mM NaCl/10mM EDTA,pH8.0),再次4℃离心(6 300 g)10min,小心去除上清液,沉淀(白色)依次加入     

松果体胆硷酯酶阳性神经的分布

<正> 用大白鼠22只,体重200克左右,10％福尔马林生理盐水灌注,取松果体浸泡于30％蔗糖缓冲液中过夜,然后分三组实验。第一组动物12只,将松果体冰冻切片,厚40微米,然后入下述孵化液2小时(37℃),显示胆硷酯酶。即乙酰硫代胆硷7mg,蒸馏水1ml,0.1M磷酸氢二钠4.5ml,0.1M磷     

荧光抗体标记技术的改进

<正> 用荧光标记抗体,事先需将抗体纯化。而我们在实践中发现,直接标记全血清也会产生满意的效果,现报告如下。 取驴抗兔血清2ml,用pH7.4的0.01mol/LPBS稀释一倍后装入透析袋,放入FITC溶液(2.5mg FITC溶于200ml pH9.5的0.1mol/L碳酸盐缓冲液)中,4℃,24小时,继而通过Sephadex G-25(柱体积为70ml,洗脱液为pH7.4的0.01mol/L PBS)层析,除去游离荧光素和其他未标记成份,如此即得所需的标记抗体。     

cAMP红细胞膜竞争结合分析

用新鲜人血液经肝素抗凝,于4℃下制备红细胞膜,悬浮于5mmol磷酸缓冲液(pH7.5)和50%甘油混合液中,蛋白浓度约4—5mg/ml,贮存于-20℃备用。3H-cAMP(中国原子能研究院产品,14Ci/mmol,     

有机锗（Ge—132）对损伤大鼠肝枯否细胞免疫活性及酶活性的影响

材料与方法一、取日龄1～5天的Wistar 系大鼠乳鼠肝枯否细胞原代单层培养4～8天,选生长良好的细胞瓶分为正常组、损伤组(加入5mol/L 含CC(?)4的20%FCS RPMl1640培养液3ml)、实验组(同上加CC(?)4再加Ge-132 0.1mg/ml)和阳性对照组(CC(?)4加     

他克莫司血药浓度对肾脏移植病人血肌酐水平的影响

<正>目的:探讨他克莫司的血药浓度对肾脏移植病人血肌酐的影响。方法:选择本院行肾脏移植手术成功的68例患者,按照患者他克莫司的血药浓度将68例肾移植患者分为<5ng/ml组(n=23)、>20ng/ml组(n=18)和5～20ng/ml组(n=27),监测各组血肌酐(Scr)水平。另选40例同期健康体检者为对照组。结果:>20ng/ml组患者血肌酐水平(188.21±15.39μM)高于5～20ng/ml组(98.61±20.57μM)和<5ng/ml组(150.72±19.55μM),<5ng/ml组高于5～20ng/ml组,且高于对照组(74.04±15.92μM),差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:监测他克莫司的血药浓度并调整药物剂量对肾移植患者具有重要的临床意义。     

大鼠中央杏仁核内亮氨酸脑啡肽的分布

雄性Wistar大鼠6只,复合麻醉剂(Chloroper t)腹腔注射麻醉(3ml/kg),经左心室-升主动脉插管快速灌入生理盐水50m1,随后灌注1%多聚甲醛、0.2%苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4,4℃)300ml,30min灌完。立即取脑,入同样固定液后固定2h(4℃),置入含30%蔗糖的0.1mol/L磷酸缓冲液内(4℃)24h。恒冷箱连续冠状切片(厚48μm)。0.01mol/L PBS接片。第1抗体为兔抗L-ENK血清(INC产品),用ABC(Vector产品)程序孵育切片,DAB法呈色。对照实验采用替换实验和吸收实验,结果为阴性。     

用C1q-Sepharose一步法纯化IgM(文摘)

本法纯化IgM是基于C_1q可特异地结合IgG和IgM的片段,而且对IgM亲和力明显高于单体IgG。从人血清中纯化C_1q(3mg/ml),溶解于50mmol琥珀酸钠,0.5molNaCl、pH6.0,或在0.1mol NaHCO_3、0.5mol NaCl、pH8.3中,与CNBr活化的Seph-arose4B结合,所加入蛋白浓度为5～6mg/ml凝胶,制成C_1q-Sepharose。结合率约35％(1.7mgC_1q/ml凝胶)。腹水中IgM用     

抗AKP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用SP2/0骨髓瘤细胞与碱性磷酸酶(AKP)(美国Sigma公司,批号21F—0270)免疫的小鼠的脾细胞进行细胞融合,建立了分泌抗AKP的单克隆细胞系。 一、小鼠免疫:AKP0.1mg加福氏佐刺0.1ml,腹腔注射0.2ml/只;四周后同剂量腹腔追加一次;再过2周后单纯抗原0.1mg,0.1ml/只,尾静脉注射,三天后取脾细胞融合。     

小鼠腹腔巨噬细胞体外产生的细胞毒性因子

本文初步探讨了巨噬细胞(Mφ)激活剂(主要是LPS)体外对小鼠腹腔Mφ产生细胞毒性因子(Mφ—CF)的作用。研究结果表明,Mφ—CF活性的产生以LPS1000ng/ml、培养8小时的情况下为最好;高活性Mφ—CF的产生有赖于环境中激活剂的持续存在;LPS和MAF对Mφ—CF的产生有各自独立而又协同的作用;本实验中的CF经56℃30分钟及4℃透析作用后,其活性不受影响,但经100℃、10分钟其性丧失。     

ACM—M抗肿瘤活性的初步研究

本文用~3H—胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)体外参入法和对荷瘤小鼠的生命延长了新蒽环类抗肿瘤抗生素ACM—M抗肿瘤活性的初步研究。实验结果表明,ACM—M10ug/ml和100ug/ml对~3H—TdR参入P_(380)肿瘤细胞的DNA合成制率分别为97％和98.4％。ACM—M4mg/kg和2mg/kg两剂量对DBA/2小鼠P_(380)的白血病的生命延长率分别为276.36％和310.91％。     

卡芬尼对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的免疫机制

本文研究了卡芬尼(CCA)治疗大鼠佐剂性关节炎(AA)的免疫调节机制。CCA 能使 AA大鼠低下的脾细胞刀豆素 A(ConA)反应、IL—2产生能力恢复正常,使外周血中减少的 Ts 细胞数目回升到正常水平,使 AA 大鼠腹腔 M(?)升高的 IL—1和 H_2O_2产生水平降至正常范围,还能明显减少 AA 大鼠炎性关节组织中 PGE_(?)的含量.研究 CCA 对体外正常大鼠淋巴细胞与 M(?)以及 AA 大鼠 M(?)功能的影响时发现,CCA 对 ConA 诱导的脾细胞增殖反应呈低浓度(0.1～1μg/ml)增强和高浓度(10μg/ml)抑制的双向作用;CCA(100μg/ml)对常大鼠腹腔 M(?)释放 H_2O_2无明显影响,但能显著减少 AA 大鼠腹腔 M(?)释放 H_2O_2.结果表明,CCA 对 AA 大鼠有明显的免疫调节作用,这种作用有明显的机能和剂量依赖性.CCA 对 AA 大鼠的治疗作用与其调整患鼠异常的免疫功能有关。     

增强免疫金银法敏感性的探讨

试剂:兔抗5-HT抗体,为INC产品。胶体金标记的羊抗兔抗体,为陕西中医研究院病理室产品。材料:豚鼠小肠段经Bouin氏液浸泡固定后,制成6μm厚的小肠卷石醋切片。免疫金银法的程序:石醋切片按常规脱蜡到蒸馏水。入0.05 M TBS pH 7.45分钟×2。滴加3%正常牛血清(用0.05 M TBS pH 7.4配制)10分钟。滴加5-HT抗体(1:1000～1:90000)在不同温度(4℃～37℃)孵育不同时间(3小时～24小时)。于0.05 M TBS pH 7.4洗5分钟×3。于0.02 M TBS pH 8.2配制)10分钟。滴加胶体金标记的羊抗兔抗(1:30稀释)于室温孵育60分钟。入0.02 M TBS pH 8.2洗5分钟×2。入0.05M TBS pH 7.4小船坞钟×2。入蒸馏水洗4分钟×3。入银显色     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶(ATPase)和AchE是在科学研究中常用的两种酶,在科学研究中为了同时观察肌肉和神经中两种酶的分布和酶的活性,经实验研究,将两种酶是时显示在一张切片上,收到良好效果,特介绍如下。1　材料和方法1.1　组织的制备,取新鲜的动物肌组织,平铺于滤纸上,用冰冻切片机上,行纵行切片,厚度可切10～30μm,用4%中性甲醛固定保存在0～4℃的冰箱内,时间不宜过长,如固定24～48小时内,仍可收到良好效果。1.2　结合染色程序(1)ATPase显色,将切片放在下列的孵育液内。孵育液为:0.1巴比妥纳20ml,0.1gM氯化钙10ml,双蒸溜水30ml,ATP钠盐152mg。…     

山茛菪硷及川芎嗪预防大鼠实验性肺水肿的研究(一)——生存率、肺指数及病理检查

为了探讨急性肺水肿药物预防的可能性,将大鼠(雄性160～240g)分为三组实验:戊巴比妥钠麻醉后1.静注0.1％肾上腺素(NA0.1ml/100g)造成急性肺水肿。2.先静注654-Ⅱ(3mg/100g)作为预防,再按上述剂量注入NA。3.先注入川芎嗪(12mg/100g)再注入NA。实验结果1.肺     

显示大脑皮质神经元的银浸改良法

本文以Lindere银浸技术为基础,在方法上进行了改进.改良后的方法,能够同时显示出大脑皮质多种神经元,并可使其胞体、突起、神经纤维以及神经元上的棘状突起显示得清晰可辨.此法特异性强,结果可靠,操作简便.便于观察大脑皮质各层神经元的形态结构、分布以及相互联系,为教学及研究提供一种简便可行的方法.1 材料和方法1.1 取材与固定 采用健康成年Wistar大鼠4只,体重200～250g断头处死,立即取出大脑皮质,固定于10%甲醛钙液或Bouin液中12～16h或者采用4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.2灌注内固定处理12h,然后取出大脑皮质,再固定于上述固定液中4h,制作厚10μm的石蜡切片或厚20μm的冰冻切片.1.2 试剂配制(1)三甲基吡啶缓冲贮存液 取三甲基吡啶6.5ml加大约450ml双蒸水制备0.lmol/L溶液,过滤后,加入足量的10%硝酸溶液,调pH至7.2然后再加入双蒸水至500ml.此液在4℃冰箱中可长期保存.(2)稀释工作缓冲液取8ml三甲基吡啶缓冲贮存液加入92ml双蒸水制备成工     

低浓度PEG沉淀法检测循环中免疫复合物的临床价值

测定循环中免疫复合物(IC)的含量有利于诊断免疫复合物病。迄今检测IC的方法有聚乙二醇(PEG)沉淀法、Clq凝胶扩散法,Raji细胞放射免疫法、~(125)I—Fab、mRF凝胶扩散法等,本文采用3.75％PEG沉淀法检测了慢性活动性肝炎等疾病,现把结果报道如下。 一、材料与方法 (一)检测方法:取受检血清0.2ml,加0.1M pH8.4硼酸缓冲液0.4ml使成1:3稀释。对照管加2ml同一硼酸缓冲液和0.22ml稀释血清。测定管中加2ml 4.166％PEG(上海合成洗涤二厂产品、批号79—10—20)溶液和0.22ml稀释血清,此时PEG浓度为3.75％。混和,置室温60分钟后用     

碱性磷酸酶活性是活化B淋巴细胞的一种膜标志

组织化学和细胞组分研究表明,碱性磷酸酶(APase)存在于B细胞性白血病和淋巴瘤以及淋巴母细胞样B细胞株的细胞中,但T淋巴瘤细胞株或骨髓样细胞中则缺如。本文报道建立一种简单、快速检测小鼠脾脏细胞膜APase活性的微量滴定试验。将正常或培养的细胞(4×10~5,悬浮于50μ1PBS)加入聚苯乙烯微量滴定板小孔内,经离心后用0.25M戊二醛使贴壁细胞固定,继用含0.1%吐温的PBS洗涤后,加100μl含1mg/ml对硝基苯磷酸盐(底物)和10~(-3)M MgCl_2的0.05M碳酸钠缓冲液(pH9.8),在室温下放置30分钟,随即加入50μ10.3M NaOH终止反应。用平板多道扫描读数仪测量各孔在405 um的消光度。用本法检测了在体外经LPS和PWM激活的小鼠脾细胞质膜的     

固相化AchE亲和层析纯化抗AchE单克隆抗体

本文将AchE与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联合成了抗AchE单克隆抗体的亲和凝胶,AchE偶联率50～72％。小鼠腹水经50％饱和废硫酸铵沉淀,对PBS pH7.0以透析去除剩余的硫酸铵上亲和层析柱4℃反应16～20h用PBS洗下不吸附的蛋白质,再用IN乙酸或3M KCNS洗下特异性吸附的IgG,产率约2～3mg/ml胶水。聚丙烯酰胺凝胶电泳检定为一条主带,用