含中药莪术瓜蒌汤兔血清诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨莪术瓜蒌汤含药血清对人肺癌细胞凋亡的诱导作用。方法 :用莪术瓜蒌汤不同剂量的水煎剂、全反式维甲酸乳剂和生理盐水给家兔灌胃 ,制备高、中、低剂量莪术瓜蒌汤含药血清 ,全反式维甲酸血清和对照血清 ,分别作用于PGLH7细胞 ,流式细胞仪观察含药血清与PGLH7凋亡的量效关系。结果 :莪术瓜蒌汤含药血清中剂量、高剂量组随着作用时间的延长 ,凋亡细胞所占的比例明显增加 ,有统计学差异 (P <0 .0 5)。结论 :莪术瓜蒌汤具有一定的抗肺癌作用 ,其机制可能与诱导肺癌细胞凋亡有关。     

壮筋续骨汤含药血清体外培养大鼠成骨细胞的增殖

背景：壮筋续骨汤具有促进胫骨骨折愈合的作用。 目的：观察壮筋续骨汤含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。 方法：大鼠灌胃给予壮筋续骨汤后制备含药血清。取第2代生长状况良好出生48 h内的SD大鼠成骨细胞,对照组和壮筋续骨汤组分别加入5%,10%,20%的正常SD大鼠血清和含药血清培养72 h。 结果与结论：MTT法检测发现壮筋续骨汤含药血清对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,以10%壮筋续骨汤组作用最明显(P < 0.05)。流式细胞仪检测各组细胞DNA合成期(S期)的比例,发现壮筋续骨汤组处于S期的细胞比例明显大于对照组 (P < 0.05)。说明壮筋续骨汤含药血清能促进成骨细胞DNA的合成,使更多的细胞进入S期,促进体外培养的成骨细胞增殖。     

化痰散结方含药血清对人肺癌细胞Fas和FasL表达的影响

目的 :化痰散结方是根据中医祛邪理论而研制的复方药物 ,经临床多年应用对肿瘤有良效 ,能够有效地控制肺癌所致的胸腔积液 ,缓解疼痛 ,抑制癌细胞的生长和扩散。在以往的研究中发现 ,化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞的凋亡。为了进一步明确化痰散结方诱导人肺癌细胞凋亡的机理 ,对细胞凋亡相关信号通路 :Fas-FasL通路 ,进行了研究 ,以观察化痰散结方含药血清 ,对人肺癌SPC -A1细胞Fas和FasL的表达的影响。方法 :纯种新西兰家兔 10只 ,雌雄各半 ,随机分为含药组和对照组两组 ,每组 5只。含药组每日给予化痰散结方药液浸膏 7g/kg灌胃 …     

低血清培养对骨髓间充质干细胞细胞周期同步化的影响

目的探索骨髓间充质干细胞细胞周期同步在G0/G1期的培养条件。方法培养骨髓间充质干细胞并用CD44、CD90、CD71、CD11b进行流式细胞术鉴定,观察50、5和100mL/L胎牛血清培养条件下细胞周期的变化情况及对细胞凋亡的影响。结果骨髓间充质干细胞CD44、CD90、CD71阳性,CD11b阴性。50mL/L胎牛血清培养1d和5mL/L胎牛血清培养1~3d可使G0/G1期细胞比例减少,S期和G2期细胞比例增加,但随着时间延长,G0/G1期细胞比例明显增加,S期和G2期细胞比例减少,细胞周期阻滞在G0/G1期,50mL/L胎牛血清不增加细胞凋亡比例,5mL/L胎牛血清在3d内使细胞凋亡比例明显增加,随时间延长又逐渐下降。5mL/L胎牛血清培养5d组G0/G1期细胞比例增加最为明显,由75.9%上升到89.4%,凋亡细胞比例仅为0.162%。结论5mL/L胎牛血清培养5d是使间充质干细胞细胞周期同步在G0/G1期的理想的培养条件。     

白藜芦醇对人肝癌HepG2细胞周期影响的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对体外培养的人肝癌细胞(HepG2)细胞周期分布的影响,为Res抗癌作用提供实验依据.方法:人肝癌细胞系HevG2细胞经不同浓度Res(0、25、50、100μmol/L)培养24、48、72 h.在相差显微镜下观察细胞的形态变化.将作用于Res的细胞经PBS洗涤,70%冷乙醇同定,PI染色,流式细胞仪检测(FCM)细胞周期时相分布以及细胞周期素蛋白依赖性激酶CDK2,周期素Cyclin E水平的变化.结果:白藜芦醇可抑制肝癌HepG2细胞增殖,其作用具有一定的时间和浓度依赖性,伴随细胞周期分布变化,G0/G1期比例下降,s期、G2/M期比例上调,且与对照组相比,实验组CDK2及Cyclin E表达增加.结论:白藜芦醇可能通过影响CDK2及Cyclin E的活性使HepG2细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌HepG2细胞的增殖.     

小檗碱对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的 :分析小檗碱 (Ber)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 ,探讨其免疫抑制作用的机制。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,以CFSE染色 ,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白 (ConA)或者佛波醇酯 (PDB)和离子霉素 (Ion)进行刺激 ,以流式细胞仪分析小檗碱对淋巴细胞增殖率的影响 ;以WST 1检测淋巴细胞的增殖情况 ;用碘化丙锭 (PI)染色分析细胞周期分布 ;细胞凋亡以Annexin V染色进行分析。结果 :CFSE染色分析显示 ,当浓度为 10 0、30和 10 μmol L时 ,Ber无论对ConA或PDB Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖 ,都具有明显的抑制作用 (P <0 0 5 )。以WST 1分析细胞增殖情况 ,也获得相似的结果。对细胞周期分析表明 ,随着小檗碱浓度的增加 ,处于亚二倍体峰的细胞数增加 ,处于S和G2 M期的细胞数则减少 ,而G0 G1 期的细胞数基本不变。Annexin V染色法结果表明 ,30 μmol LBer组Annexin V单阳性区域的百分率为 ( 7 13± 1 0 8) % ,与PDB Ion阴性组的百分率 ( 2 4 9± 0 2 5 ) %比较有显著的差异 (P <0 0 1)。结论 :小檗碱对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用 ,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期 ,这种抑制作用表现出明显的周期特异性。同时 ,Ber可以诱导体外培养的小鼠淋巴细胞发生凋亡。     

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期素依赖性蛋白激酶2的影响

目的 观察HCMV感染细胞周期素依赖性蛋白激酶2（Cdk2）的亚细胞定位，研究HCMV感染对Cdk2蛋白水平及对细胞周期蛋白E（CyclinE）／Cdk2激酶活性的影响。方法通过密度抑制使细胞同步化于G0／G1期，用HCMV AD169毒株感染人胚肺成纤维细胞（HEL），用免疫细胞化学技术分别测定HCMV感染前及感染后24 h Cdk2亚细胞定位；Western Blot法测定HCMV Cdk2蛋白丰度；用免疫沉淀，激酶活性分析法检测HCMV感染细胞内Cdk2的活性。结果 接触抑制阻止在Go期细胞Cdk2游离在细胞质，HCMV感染24h内导致Cdk2从细胞质移位到细胞核。同时HCMV感染可引起cvclinE／Cdk2激酶的强烈激活，但HCMV感染并不诱导Cdk2蛋白丰度增加。结论HCMV感染G0／G1细胞，在24h内导致Cdk2从细胞质移位到细胞核，使之与细胞核内的调节亚单位CyclinE结合，激活CyclinE／Cdk2激酶，使细胞周期越过G1，S限制点，进展至晚G1期。     

生理范围内静水压力对体外培养的人膀胱平滑肌细胞的影响

为探索生理范围内的静水压对体外培养的人膀胱平滑肌细胞(HBSMCs)的影响,实验采用自行设计的静水压加压装置并按压力梯度分组,用HE染色观察细胞形态,用免疫荧光、流式细胞仪、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测细胞骨架F-actin、细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)与基质金属蛋白酶7(MMP-7)。发现各组的细胞形态、骨架、细胞周期和增殖无明显差异,而各组间MMP-7mRNA的表达呈现出随静水压力的升高而增加随后逐渐下降的趋势。因此,我们得出生理范围内持续静水压可能对体外培养的HBSMCs的形态、骨架、周期、增殖无明显影响,而对MMP-7mRNA的表达具有一定的影响。     

黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4 h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯类多克隆刺激剂PDB和离子霉素Ion进行刺激,以流式细胞术(FCM)结合荧光抗体染色技术检测黄芩苷对CD3+ T细胞增殖率的影响;以碘化丙锭(PI)染色结合FCM分析其细胞周期分布.结果:BA(10、15、20、25 ms/L)对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖均有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈浓度依赖性.对细胞周期分析表明,BA能使ConA或PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞停滞于G0/G1 期、S期,阻止其进入G2/M期,阻止作用随浓度的增加而增强.结论:BA对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖有明显抑制作用,能够将淋巴细胞阻滞在G1/G1 期和S期,表现出明显的周期特异性.本研究提示黄芩苷有发展成免疫抑制剂的潜力.     

野生型PTEN基因对卵巢癌细胞株的影响

目的： 观察转入野生型PTEN基因的卵巢癌细胞生物学行为变化，探索该基因对卵巢癌细胞周期的影响和抑制肿瘤侵袭的机制。 方法： 将野生型PTEN基因的pcDNA3.1Hygro(-)真核质粒载体转染SKOV3细胞系，潮霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养；采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化；用MTT法检测细胞抑制率。分别用RT-PCR检测转染前后PTEN mRNA表达水平变化；采用重组基底膜侵袭模型，观察转染前后细胞侵袭力的变化。 结果： 成功转染SKOV3并稳定表达PTEN，转染PTEN可以明显改变SKOV3细胞周期，使其阻滞于S期；明显抑制肿瘤细胞的侵袭力。 结论： 提示转染外源野生型PTEN基因可使SKOV3细胞周期阻滞于S期，并且通过抑制肿瘤细胞侵袭与生长，而具有明显的抑癌作用。     

重组腺病毒介导的p^16与p^53基因联合转移对人肺癌细胞系 …

目的 探讨ｐ＾１６和ｐ＾５３基因对肺癌细胞的协同抑制效应及凋亡诱导作用。方法 首先用同源重组技术构建重组ｐ＾１６和ｐ＾５３腺病毒载体,然后单独或联合感染人肺癌细胞系Ｈ３５８,用免疫组织法及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测腺病毒介导的基因转移效率与表达水平,用克隆形成实验、原位末端标记及流式术观察它们对Ｈ３５８生长特性及凋亡的影响,结果 免疫组织化学染色结果表明重组腺病毒载体可高效地将外源基因ｐ＾５３转     

HMGB2对肺腺癌细胞周期和增殖的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B2(HMGB2)对肺腺癌细胞周期和增殖的影响。方法:从Cancer RNA-Seq Nexus (CRN)数据库分析肺腺癌组织HMGB2表达情况;从OncoLnc数据库分析HMGB2与肺腺癌患者预后的相关性;从肿瘤单细胞数据库(CancerSEA)分析HMGB2与肺腺癌细胞14种功能状态的相关性;利用siRNA技术下调人肺腺癌A549细胞中HMGB2表达,通过real-time PCR和Western blot验证沉默效果,CCK8和EdU实验检测细胞的增殖。结果:HMGB2在肺腺癌中高表达;HMGB2高表达组肺腺癌患者的总生存期明显低于HMGB2低表达患者(log-rank检验P=0.017 3);HMGB2表达与肺腺癌细胞周期和增殖呈正相关;敲减HMGB2表达后A549细胞的活力和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论:HMGB2的表达与肺腺癌细胞周期和增殖显著正相关,可以作为潜在的评估肺腺癌患者预后的标志物和治疗靶标。     

尾叶香茶菜二萜类化合物B对小鼠前列腺癌细胞细胞周期的影响及其机制

目的：观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对小鼠前列腺癌细胞株RM-1细胞周期的影响并分析其机制。方法：MTT法观察不同时间、不同剂量的DB对RM-1 细胞增殖率的影响；相差显微镜观察对RM-1细胞形态影响；流式细胞术分析细胞周期变化；RT-PCR和Western blotting分别观察DB作用后RM-1细胞p53、GRIM-19、STAT3 和细胞周期相关因子CHK1、CDK2 mRNA和蛋白水平的表达。结果：（1）MTT结果：DB可抑制RM-1 细胞的增殖，呈时间、剂量依赖性；（2）形态学观察和流式细胞术检测：经DB处理后的RM-1细胞出现生长抑制，细胞主要阻滞在G1期；（3）RT-PCR结果： DB (2 mg/L,4 mg/L,8 mg/L) 分别作用RM-1细胞12 h、24 h、48 h后，p53、CHK1、GRIM-19 mRNA的含量明显高于对照组，CDK2、STAT3 mRNA的含量明显低于对照组（P<0.05）；（4）Western blotting 结果：DB (2 mg/L,4 mg/L,8 mg/L) 分别作用RM-1细胞12 h、24 h、48 h后，P53、GRIM-19 蛋白表达水平高于对照组，而CDK2蛋白表达水平则低于对照组。结论：DB可抑制RM-1细胞增殖，其机制可能是与细胞周期相关基因p53的上调，CDK2表达下降有关，影响了G1期进入S期，同时GRIM-19-STAT3-CDK2途径可能也参与G1期阻滞的过程。     

过表达HSPC238对Bel7402细胞周期的影响

目的:构建pcDNA3.1(-)/HSPC238真核表达载体,研究过表达HSPC238基因对人肝癌细胞株Bel7402细胞周期的影响。方法:采用PCR法从pET28b/HSPC238重组质粒中克隆得到HSPC238 cDNA全长序列,并将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA3.1(-)/HSPC238真核表达质粒。经酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染Bel7402细胞,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株。用RT-PCR和Western blot技术分别检测HSPC238基因在Bel7402中的mRNA和蛋白水平的表达。随后用饥饿法使各组细胞周期同步化,再用流式细胞仪分析HSPC238过表达对细胞周期的影响。结果:pcDNA3.1(-)/HSPC238经酶切鉴定及DNA测序证实,目的基因HSPC238的序列完全正确;RT-PCR和Western blot检测显示,与转染pcDNA3.1(-)组和未转染组相比较,转染pcDNA3.1(-)/HSPC238组的mRNA和蛋白表达水平均明显增高,但前两者间没有差异。用饥饿法同步化后,流式细胞仪检测显示过表达HSPC238可延缓Bel7402细胞株从G1期进入S期。结论:成功构建了pcDNA3.1(-)/HSPC238真核表达载体,并在Bel7402中表达。初步发现过表达HSPC238可延缓肝癌细胞的细胞周期,为更进一步研究HSPC238蛋白的功能奠定了基础。     

慢病毒介导的RASSF1A表达抑制小细胞肺癌H446细胞的生长

 目的：探讨Ras相关结构域家族1A (Ras-association domain family 1A, RASSF1A)抑制小细胞肺癌细胞生长的机制。方法：构建含有RASSF1A基因的慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒,感染H446小细胞肺癌细胞。MTT测细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期;real-time PCR和Western blotting分别检测细胞周期相关蛋白mRNA和蛋白水平的表达。结果：成功获取稳定表达RASSF1A的H446细胞（RASSF1A-H446）。RASSF1A-H446细胞生长缓慢,细胞周期阻滞在G1期。 Real-time PCR和Western blotting结果显示在RASSF1A-H446细胞中,p21和p27的表达明显升高,E2F1的表达明显降低。结论：RASSF1A通过升高p21、p27和降低E2F1的表达,抑制H446细胞的生长。     

2-甲氧雌二醇对人肺癌细胞的放射增敏作用

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对肺癌细胞A549和GLC-82的放射增敏作用及其对细胞周期的影响,并从分子角度初步探讨2-ME可能的增敏机制。方法:将体外培养的人肺癌细胞A549和GLC-82分为实验组和对照组,其中实验组加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME。通过MTT法定量检测2-ME对2株细胞增殖的抑制作用,集落形成实验测定2-ME对这2株细胞的放射增敏作用,流式细胞术检测细胞周期分布的变化,通过免疫沉淀法检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)活性的改变。结果:分别以2-ME对人肺癌细胞GLC-82和A549的最小有效浓度(0.15625×10-6mol/L和1.25×10-6mol/L)作为放射增敏浓度,均可增加细胞对X线的敏感性,2株细胞存活曲线均见2-ME增敏组比单纯照射组整体下移,D0、Dq值均降低,增敏比:GLC-82细胞为1.98;A549细胞为2.06。细胞周期的检测表明2-ME使细胞周期阻滞于G2/M期,并呈剂量依赖性。2-ME作用后2株细胞CDK2活性均无明显改变。结论:2-ME可通过对细胞周期的调节增加非小细胞肺癌(NSCLC)细胞GLC-82和A549对射线的敏感性。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞增殖和生物大分子物质合成的影响

在体外观察全反式维甲酸对人肺腺癌细胞株ＳＰＣ－Ａ１的增殖和ＤＮＡ，ＲＮＡ以及蛋白质合成的影响，当细胞在含有５μｍｏｌ／Ｌ１０μｍｏｌ／Ｌ和２０μｍｏｌ／Ｌ维甲酸的培养液中培养时，发现细胞生长均受到明显抑制，细胞在含有１０μｍｏｌ／Ｌ维甲酸的培养液中培养２天后，其＾３Ｈ－ＴｄＲ和＾３Ｈ－亮氨酸掺入率明显下降，而培养延长至４天后，＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ－ＵｄＲ和＾３Ｈ－亮氨酸掺入率都明显下降，通过流式     

低氧诱导因子1α诱导卵巢癌细胞周期阻滞的研究

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF-1α）对卵巢癌细胞周期的阻滞作用。方法: 采用化学性低氧诱导剂氯化钴（CoCl2）和物理性低氧培养箱两种方法对体外培养的卵巢癌SW626细胞诱导低氧，用诱骗法（decoy）阻断HIF-1α功能，Western blotting、RT-PCR和流式细胞术分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平和细胞周期比率。结果： B1组(3.75±1.31)和C1组(3.48±1.01) HIF-1α蛋白表达水平明显高于A1组(0.97±0.31)（P<0.05), decoy法对HIF-1α蛋白表达没有明显影响(P>0.05)；A1组（0.65±0.32）和B1组（0.64±0.34）HIF-1α mRNA表达水平明显低于C1组（1.28±0.62）（P<0.05），decoy法对HIF-1α mRNA 表达没有明显影响（P>0.05）；流式细胞术检测发现B1组（81.78±24.33）和C1组（77.62±22.76）G0/G1期细胞比率显著高于A1组（49.49±18.54）（P<0.05）；B2组（61.54±20.84）明显低于B1组（P<0.05），C2组明显低于C1组（56.03±21.42），而A1组和A2组之间无明显差异（P>0.05）。结论：CoCl2或物理性低氧均能明显诱导卵巢癌细胞SW626 G0/G1期细胞周期阻滞和HIF-1α的表达，HIF-1α在低氧引起的卵巢癌细胞SW626的细胞周期阻滞中起重要作用。     

CDCA7 promotes lung adenocarcinoma proliferation via regulating the cell cycle

CDCA7 is overexpressed in several malignant cancers and is predicted by bioinformatics to be a candidate oncogene in lung adenocarcinoma (LUAD). However, the clinical and biological function of CDCA7 in LUAD has never been investigated. In this study, we used quantitative real-time RT-PCR and immunohistochemistry to determine the expression level and clinical significance of CDCA7. As a result, CDCA7 was significantly overexpressed in LUAD compared to adjacent normal tissues. Furthermore, overexpression of CDCA7 was positively associated with more advanced clinical features. Silencing CDCA7 inhibited cell proliferation in LUAD through G1 phase arrest and induction of apoptosis. In conclusion, CDCA7 can be used as a potential therapeutic target for new biomarkers and LUAD.