氨基丁酸联合卡泊芬净抗白色假丝酵母菌生物被膜协同作用研究

目的探讨氨基丁酸联合卡泊芬净抗白色假丝酵母菌生物被膜的协同作用。方法利用白色假丝酵母菌标准菌株SC5314,采用生物被膜形成实验,分为空白对照组、氨基丁酸单用组、卡泊芬净单用组、氨基丁酸联合卡泊芬净组,对比各组生物被膜形成情况。采用XTT还原法测定氨基丁酸、卡泊芬净单用以及氨基丁酸联合卡泊芬净对成熟生物被膜细胞代谢活性的抑制作用。采用YNB培养基菌丝形成实验,考察氨基丁酸与卡泊芬净合用是否具有协同抑制菌丝形成的作用。结果卡泊芬净0.1μg·mL-1联合氨基丁酸0.1μmol·L-1对白色假丝酵母菌SC5314生物被膜的形成具有显著的抑制作用。此外,XTT还原法测定氨基丁酸6.25μmol·L-1联合卡泊芬净0.1μg·mL-1时降低被膜细胞代谢活性的效率能够达到约15%。采用YNB培养基形成菌丝,氨基丁酸6.25μmol·L-1联合卡泊芬净0.1μg·mL-1对白色假丝酵母菌SC5314菌丝形成能力有显著的抑制作用。结论氨基丁酸联合卡泊芬净表现出显著的体外协同抗白色假丝酵母菌标准菌株SC5314生物被膜作用。     

卡泊芬净治疗泌尿系真菌感染一例

卡泊芬净等棘白菌素类药物在尿液中的浓度较低且缺乏临床数据,其治疗泌尿系真菌感染的效果还存在争议。但对于耐唑类真菌感染、肾功能不全的患者,棘白菌素类药物可能是一种治疗选择。本文报道了1例临床药师参与的尿路假丝酵母菌感染的治疗过程,临床药师结合患者泌尿系感染症状、查阅国内外相关文献和指南,建议临床医师给予卡泊芬净,同时实施药学监护,保障了患者的安全合理用药。     

卡泊芬净的应用效果分析

目的:对卡泊芬净的临床疗效进行分析。方法:对38例不同真菌感染的患者应用卡泊芬净进行治疗。结果:经治疗,治愈出院者9例(23.68%),无效者7例(18.42%),未有死亡病例发生,总有效率为81.58%;不良反应方面,头痛与腹泻各有3例(7.89%),发热2例(5.26%),仅1例出现皮疹(2.63%),未有静脉炎、肝肾功能损伤及血液异常等严重并发症出现。结论:卡泊芬净抗真菌疗效肯定,不良反应少,建议临床严格掌握用药适应症,使其发挥更好的社会效益。     

卡泊芬净致粒细胞减少

患者男,89岁,因持续发热2周入院。查体:T38.3℃,R22次/min,BP 100/60mmHg(1mmHg=0.133kPa),神志清楚,急性病容,皮肤、黏膜无黄染,全身浅表淋巴结不肿大。双肺呼吸音粗,双下肺均可闻及湿啰音慕     

卡泊芬净对生物膜态白色念珠菌体外抑菌作用的试验研究

目的:检测卡泊芬净对生物膜态白色念珠菌分离株的抑菌作用,探讨临床治疗其相关感染的最适治疗剂量。方法:分别测定卡泊芬净对10株白色念珠菌临床株游离态及生物膜态的半数抑菌浓度(MIC50),并对比观察不同浓度卡泊芬净作用下白色念珠菌的增殖活性。结果:卡泊芬净对游离态白色念珠菌的MIC50为0.125～0.5mg.L-1,对生物膜态白色念珠菌的MIC50为0.25～256mg.L-1,当卡泊芬净浓度高于白色念珠菌MIC50时,全部游离态白色念珠菌的增殖活性几乎完全受到抑制,但有7株生物膜态白色念珠菌的增殖活性再次增强,且大于阳性对照的50%。结论:卡泊芬净对生物膜态白色念珠菌有抑菌作用,但并不呈浓度依赖性,当其用于治疗生物膜态白色念珠菌相关感染时的最适治疗剂量有待临床研究验证。     

支原体培养基培养白色假丝酵母菌的研究及应用

目的探讨用支原体培养鉴定试剂在作支原体培养鉴定的同时,同步检测白色假丝酵母菌的可行性。方法对400例进行支原体培养和药敏结果检验的阴道炎患者同时取三份标本,分别进行盐水湿片法、沙保弱氏培养基真菌培养法和支原体培养法检测阴道白色假丝酵母菌。结果阴道分泌物支原体培养法检出率29．8％与常规湿片法的检出率15．50％比较,差异有显著性（P〈0．01）;阴道分泌物支原体培养法检出率29．75％与传统白色念珠菌培养法的检出率30．50％比较差是无显著性（P〉0．05）结论支原体培养基可用于培养白色假丝酵母菌,一种培养基可用于两种不同治疗方法的阴道炎病原菌的培养,简化了操作,节约了成本,同时为病人节约了费用,具有临床和社会意义。     

卡泊芬净相关肝损伤的真实世界研究

目的:研究真实世界卡泊芬净相关肝损伤的发生情况和危险因素,为临床安全使用卡泊芬净提供参考.方法:通过信息系统提取2019年1月至2020年7月武汉市第一医院使用醋酸卡泊芬净的出院患者病历,根据《药物性肝损伤诊治指南(2015年版)》对卡泊芬净相关肝损伤病例进行回顾性分析,使用RousselUclaf因果关系评估法(RU...     

卡泊芬净及其杂质的LC-QTOF-MS定性分析

目的 采用LC-QTOF-MS分析醋酸卡泊芬净原料药及其强降解产物的杂质,研究卡泊芬净及其相关杂质(杂质A、B、C、D和E)的质谱特征。方法 采用Waters CORTECS^® C₁₈⁺(4.6 mm×150 mm,2.7 μm)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸-水溶液,流动相B为0.1%甲酸-乙腈,流速为0.6 mL·min^-1,梯度洗脱;ESI-QTOF-MS正离子扫描检测。结果 在一级质谱中,除杂质D主要显示单电荷准分子离子峰外,卡泊芬净及其余4个杂质均以多电荷准分子离子峰的响应较高;在二级质谱中,卡泊芬净及其他含乙二胺结构的杂质均会丢失乙二胺及其所连基团产生碎片离子m/z 103 3;卡泊芬净及其相关杂质主要通过肽键的断裂生成一系列碎片离子,也可以通过丢失氨基酸残基中的羟基、酰基或氨基生成碎片离子;杂质A和杂质C分别显示高丰度的特征碎片离子m/z 137.070 8和m/z 77.071 1,可以与卡泊芬净及其他杂质区分。结论 卡泊芬净及其5个杂质均具有明显的质谱特征,研究结果可为卡泊芬净生产过程中可能出现的未知杂质的结构鉴定提供参考,以便及早发现生产工艺中的潜在问题,降低产品质量风险。     

卡泊芬净治疗IFI的临床研究进展

卡泊芬净为棘球白素类抗真菌药，也是第一个在全世界范围使用的棘球白素，目前已在75个国家被广泛使用。卡泊芬净可以抑制真菌细胞壁上β1，3葡聚酶的合成。在体内外均有抗假丝酵母属和曲霉属真菌的能力。其药代动力学特点允许每日1次用药，药物交叉反应很少。患耐受性好。上市5年中安全性极好。     

新型抗真菌药卡泊芬净的临床应用

目前适于全身抗真菌感染的药物主要有：多烯类（两性霉素B）、吡咯类（酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑）、氟嘧啶类（5-氟尿嘧啶）等3类。丙烯胺类如特比萘芬因疗效低不宜单独给药，仅与吡咯类联用于耐吡咯类的霉菌感染。这些药物都有治疗价值，但存在疗效欠佳或难以耐受的不良反应等问题，加上耐药菌株的出现，因此临床上迫切需要开发出高效、低毒、广谱的抗真菌药。卡泊芬净即是新一类抗真菌药。     

Evaluation of synergistic anticandidal and apoptotic effects of ferulic acid and caspofungin against Candida albicans

This study aimed to investigate the synergy between anticandidal and apoptotic effects of ferulic acid and caspofungin against Candida albicans and Candida glabrata, with the help of a quantitative checkerboard microdilution assay using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) as a viability dye. Apoptotic effects of caspofungin and ferulic acid concentrations (alone and combined) were analyzed for C. albicans and C. glabrata based on annexin V–propidium iodide binding capacities using flow cytometric analysis. C. albicans showed a synergistic effect, represented by a fractional inhibitory concentration index of < 0.5, but C. glabrata showed no synergistic effect (fractional inhibitory concentration index > 0.5). Early and late apoptotic effects of caspofungin and ferulic acid concentrations (1 μg/mL and 1000 μg/mL) were calculated as 55.7% and 18.3%, respectively, while their necrotic effects were determined as 5.8% and 51.6%, respectively, using flow cytometric analyses. The apoptotic effects of the combination of caspofungin and ferulic acid at concentrations of 1 μg/mL and 1000 μg/mL on C. albicans and C. glabrata were 73.0% and 48.7%, respectively. Ferulic acid also demonstrated a synergistic effect in combination with caspofungin against C. albicans. Another possibility is to combine the existing anticandidal drug with phytochemicals to enhance the efficacy of anticandidal drug.     

ε-聚赖氨酸对白念珠菌抑菌活性及机制研究

目的 研究ε-多聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine, ε-PL)对白念珠菌(Candida albicans)的抑菌活性及抑菌机制。方法 以白念珠菌的标准菌株ATCC64548(氟康唑敏感株)、ATCC64550(氟康唑耐药株)以及临床收集的50株菌为实验菌株,按照CLISI- M27文件中的微量稀释法测定ε-多聚赖氨酸的MIC、MFC和SMIC50值;绘制48h内的浮游菌株时间-生长曲线和生物膜抑制-时间曲线;连续观测并记录4h内的芽管形成率和芽管长度;测定药物处理前后白念珠菌的丙二醛和活性氧(ROS)含量。结果 ε-PL对白念珠的最低抑菌浓度(MIC)为512μg/mL,最低杀菌浓度(MFC)为1024μg/mL,SMIC50为512μg/mL,ε-PL对白念珠菌浮游菌及生物膜的抑菌作用随着浓度的升高作用愈明显。抑菌-时间曲线结果表明ε-PL对白念珠菌的浮游菌和生物膜在12h左右即产生明显抑制作用。芽管实验的结果表明高浓度的ε-PL对白念珠菌的芽管形成率及芽管长度具有明显抑制作用。ε-PL作用于白念珠菌后MDA和ROS含量呈现上升趋势,并且与药物浓度大小成正相关。结论 ε-PL对白念珠菌浮游菌株及生物膜均有良好的抑制作用,高浓度ε-PL对白念珠菌主要毒力菌丝有明显抑制作用,ε-PL作用导致白念珠菌内产生大量的活性氧(ROS)以及产生一定程度的脂质氧化,提示ε-PL可能通过氧化作用发挥抑菌效果。     

不同标本类型中分离出白念珠菌对抗真菌药物敏感性分析

目的 探讨从不同类型标本中分离的白念珠菌菌株对常用抗真菌药物的耐药谱，为临床白念珠菌感染性疾病诊断和治疗提供理论和实验依据。方法 用真菌鉴定卡及Rosco真菌药敏纸片对分离出的所有白念珠菌作菌种鉴定和药敏实验，采用μ检验分析从男性生殖道分泌物、女性生殖道分泌物和痰液中分离出白念珠菌的药物敏感特点。结果 从痰液中分离出的白念珠菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、咪康唑、酮康唑和制霉菌素敏感率分别为97．8％、98．9％、83．1％、87．6％和99．9％；男性尿道分泌物中自念珠菌的敏感率分别是76．1％、81．1％、65．3％、71．6％和86．0％；女性生殖道分泌物中菌株分别是58．4％、71．3％、61．4％、62.4％和86.1％，三组之间具有统计学意义（P〈0．01）。结论 不同标本中分离出的白念珠菌对抗真菌的敏感性有显著性差异。     

大蒜素抗白色念珠菌感染的免疫学机制

目的：探讨大蒜素抗白色念珠菌感染的免疫学机制,以期为系统性白色念珠菌感染的临床治疗提供实验依据。方法：分别建立正常小鼠和免疫抑制小鼠系统性白色念珠菌感染模型,并随机分为对照组和用药组。各用药组小鼠给予大蒜素7d,对照组同期给予等量生理盐水。用MTT法、双抗体夹心ELISA法、平板菌落计数法分别检测大蒜素对各感染小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、IFN-γ水平及内脏活菌数目的影响。结果：经组织病理鉴定,小鼠系统性白色念珠菌感染模型建立成功。各用药组使用大蒜素7d后,脾脏T淋巴细胞增殖活性、IFN-γ水平与各自对照组比较均显著提高,差异有统计学意义（P〈0.01）,而内脏活菌数目较之对照组有明显下降,差异亦有统计学意义（P〈0.01）。结论：大蒜素能够有效提高正常感染小鼠和免疫功能低下小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、IFN-γ水平,并能降低组织中白色念珠菌活菌数目。     

Synergistic effect between silver nanoparticles and antifungal agents on Candida albicans revealed by dynamic surface-enhanced Raman spectroscopy

Abstract

Identifying the mechanisms of action of new potential antibiotics is a necessary but time-consuming and costly process. We have developed an ultra-rapid, highly sensitive, and reproducible dynamic surface-enhanced Raman spectroscopy (D-SERS) method to discriminate and evaluate the sensitivity of Candida albicans to antifungal agents with different mechanisms by using silver nanoparticles (Ag NPs). Although Ag NPs have been used conventionally for the enhancement of Raman signals, the accompanying influence of Ag NPs on the microbes has not been investigated. Herein, surface charge and concentration of Ag NPs are likely to be the main influencing factors. Then different concentrations of Ag NPs with the same surface charge as C. albicans were prepared to find the optimal conditions for enhancement of Raman signals while minimally affecting tested fungi. Spectral variations were observed with increasing concentrations of Ag NPs, as well as those of antifungal agents, including echinocandin and azole drugs. The results indicated that the combination of sub-lethal Ag NPs and echinocandin drugs revealed potent synergistic effects against fungi. This could be explained by the metabolism of fungi, the result of which has also been verified by transmission electron microscopy (TEM). Lastly, the combination of sub-lethal Ag NPs and echinocandin drugs was used for a mammalian cell toxicity assay to demonstrate whether the optimal combination could cause lower cytotoxicity to mammalian cells. This work opens a window not only for the evaluation of antifungal agents with different mechanisms, but also for the clinical treatment of fungal infections or even new drug development.     

特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用

目的探讨特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用。方法采用微量液体稀释法测定特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑对生殖器部位分离的36株白念珠菌药敏试验，应用棋盘微量稀释法测定特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑对36株白念珠菌的联合药敏试验。结果白念珠菌菌株对氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬耐药株分别为3株（8．33％）、4株（11．11％）、6株（16．67％）。特比萘芬和氟康唑联用MIC几何平均数较其单独应用均显著降低（t=3．590，P〈0．05；t=3．252，P〈0．05），15株有协同作用（42％），18株有相加作用（50％），3株无关作用（8％）；特比萘芬和伊曲康唑联用后的MIC几何平均数较其单独应用均显著降低（t=3．849，P〈0．001；t=2．409，P〈0．05），表现为协同作用有14株（39％），相加作用的有17株（47％），无关作用的有5株（14％）；均未发现拮抗作用。结论特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用对大部分白念珠菌能产生协同作用和相加作用，提示特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用能增强抗白念珠菌的作用。     

大蒜素联合氟康唑对假丝酵母体外抗菌活性的影响

目的 研究大蒜素与氟康唑体外联合应用对临床分离假丝酵母联合抗菌效应的影响。方法 采用棋盘法设计，微量稀释法测定不同浓度组合的大蒜素及大蒜素和氟康唑联合应用分别对65 株假丝酵母的最低抑菌浓度，并计算FIC 指数，判定联合抗菌效应；用10% 的小牛血清-RPMI1640 培养基诱导菌丝形成，检测大蒜素与氟康唑联合应用对假丝酵母芽管率和菌丝形成的影响。结果 大蒜素与氟康唑联合对假丝酵母的敏感菌株和耐药菌株的MIC50 均降低，较单用氟康唑和大蒜素分别降低8 倍和5 倍( 分别为由64μg/mL 降至0.25μg/mL、由32μg/mL 降至2μg/mL)；FIC 指数分布：FIC ≤ 0.5 占100%，表现为协同作用；大蒜素能加强氟康唑抑制菌丝的形成。结论 大蒜素与氟康唑联用后，对假丝酵母表现为协同抗菌作用，能显著提高氟康唑对假丝酵母的杀菌活性。     

白色念珠菌酮康唑抗药株的筛选

目的获得白色念珠菌的酮康唑抗药株。方法采用美国国家临床实验标准化委员会 (NC CLS)推荐的最小抑菌浓度 (MIC)测定法 ,从 8株不同来源的白色念珠菌中筛选出YS2 0 1 (MIC为0 0 62 μg/mL)作为出发菌株 ,分别利用紫外线 (UV)和亚硝基胍 (NTG)对其原生质体进行诱变。结果经大量筛选 ,得到抗药突变株UP1 1及NP2 9,其MIC分别达到 3 5 μg/mL和 75 μg/mL。结论获得酮康唑抗药株 ,突变株的抗药特性稳定。     

聚乙烯亚胺单独及与三种抗菌药物联用对白念珠菌的体外抗菌活性

目的评估多支链的阳离子高分子聚合物——聚乙烯亚胺(PEI)单独及与三种不同类别的常规抗菌药物(两性霉素B、氟康唑和多黏菌素B)联合使用对白念珠菌(MY7245和MY7238)的两种临床分离物的抗真菌活性。方法通过体外实验测定不同分子质量聚乙烯亚胺单独及与三种不同类别的常规抗菌药物联合使用对两株白念珠菌的最小抑菌浓度和杀灭时间,确定PEI单独及联合使用的体外抗真菌活性。结果分子量在2～745ku范围内的PEI均对这两种白念珠菌产生很好的抗真菌活性,且分子量小的PEI比分子量大的PEI的抗菌作用更显著。与单独作用的PEI相比,分子量较大的PEI与常规药物联合使用时可产生较强的协同作用。在体外致死研究实验中可以看到,PEI-两性霉素B和PEI-氟康唑结合物可以提高抑菌作用,但PEI-多黏菌素B结合物却拮抗抑菌作用。结论PEI单独与联合使用均对白念珠菌产生很好的抗菌效果。