2015年重庆市3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例的实验室诊断

目的   分析重庆市2015年3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例病原、抗原及核酸检测过程,减少卵形疟原虫的漏诊和误诊。 方法  收集流行性病学资料及血样,按照WS259-2015疟疾的诊断标准对3例血样进行血涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条检测（RDT）及巢式PCR检测。 结果  3例患者均为非洲务工归国人员,并都有疟疾发病史。血涂片镜检结果,3例血样均为疟原虫阳性。RDT检测结果3例均为除恶性疟以外其他疟原虫阳性。国家参比实验室推荐的巢式PCR检测DNA,3例均为阴性。用卵形疟原虫wallikeri亚种的种特异性引物的PCR检测,3例均为阳性。 结论  根据镜检、RDT和卵形疟原虫wallikeri亚种种特异性PCR检测确定,重庆市2015年首次发现了3例卵形疟原虫wallikeri亚种感染输入病例,为重庆地区首次发现。     

四川省输入性卵形疟原虫wallikeri亚种实验室检测分析

目的 鉴定四川省疑似输入性卵形疟原虫感染病例wallikeri亚种感染情况,并对2014-2017年全省1 079份复核血样卵形疟原虫wallikeri亚种感染情况进行分析。方法 对2018年1-4月四川省10例疑似输入性卵形疟原虫感染病例进行血涂片镜检、快速诊断试纸条（RDT）检测和巢式PCR检测并进行测序分析,同时回顾性检测2014-2017年全省 1 079份复核血样卵形疟原虫wallikeri亚种感染情况。结果 2018年1-4月四川省10例疑似输入性卵形疟原虫感染病例镜检结果均为卵形疟原虫阳性,其中2例存在恶性疟原虫混合感染;RDT检测结果均为疟原虫阳性;常规巢式PCR检测除2例结果为恶性疟原虫阳性外,其余均为阴性;采用卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物进行PCR检测,10例均为阳性,序列分析结果显示为卵形疟原虫wallikeri亚种。对2014-2017年全省1 079份复核血样进行回顾性检测,发现2例卵形疟原虫wallikeri亚种与恶性疟原虫混合感染病例,均为2017年报告,此前检测结果为单纯恶性疟原虫感染。结论 四川省首次鉴定发现输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例。     

河南省输入性卵形疟的实验室检测分析

目的对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果。方法采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率。结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1%;wallikeri亚种感染67例,占60.9%。5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100%,镜检法为94.5%,RDT-Wondfo法为51.8%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9%,RDT-CareStart法为25.5%,差异有统计学意义(χ2=205.940,P0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7%,镜检法为90.7%,RDT-Wondfo法为46.5%,RDT-CareStart法为18.6%,差异有统计学意义(χ2=109.700,P0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100%,镜检法为97.0%,RDT-Wondfo法为55.2%,RDT-CareStart法为29.9%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5%,差异有统计学意义(χ2=190.292,P0.05)。结论巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同。     

河南省输入性卵形疟的实验室检测分析北大核心CSCD

目的对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果。方法采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率。结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1%;wallikeri亚种感染67例,占60.9%。5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100%,镜检法为94.5%,RDT-Wondfo法为51.8%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9%,RDT-CareStart法为25.5%,差异有统计学意义(χ2=205.940,P<0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7%,镜检法为90.7%,RDT-Wondfo法为46.5%,RDT-CareStart法为18.6%,差异有统计学意义(χ2=109.700,P<0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100%,镜检法为97.0%,RDT-Wondfo法为55.2%,RDT-CareStart法为29.9%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5%,差异有统计学意义(χ2=190.292,P<0.05)。结论巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同。     

一宗输入性卵形疟个案调查分析与实验室诊断

目的 调查深圳市首例境外输入性卵形疟患者的发病和诊疗过程,为科学防治卵形疟提供借鉴. 方法 收集患者的临床和流行病学资料,采集外周血作涂片镜检疟原虫,疟疾快速诊断试验(rapid diagnostic test,RDT)检测疟原虫特异性抗原,巢式PCR扩增富色氨酸抗原基因鉴定基因型.结果 患者由非洲几内亚疟疾流行区回国,具有寒战、发热、出汗等临床症状.血涂片查见疟原虫,受感染红细胞呈伞矢状,薛氏点明显,可见滋养体、裂殖体和配子体,形态特点与卵形疟原虫相符;但疟疾RDT抗原检测结果为阴性;基因分型鉴定为卵形疟原虫wallikeri新亚种,采用青蒿琥酯片与磷酸伯氨喹联合用药治愈. 结论 根据患者流行病学史、临床表现以及实验室检测结果判断为一宗输入性卵形疟个案.     

上海市2例输入性卵形疟误诊病例的实验室诊断分析

上海市疾病预防控制中心(简称上海市疾控)采用显微镜检查、疟疾快速诊断检测(RDT)和疟疾核酸检测[NP-2002法、多重PCR法和荧光定量PCR (qPCR)法]对2例虫种分型存在争议的输入性疟疾患者的血样进行实验室诊断与分析。结果显示,上海市A区疾病预防控制中心(简称A区疾控)对患者1的初检结果为镜检查见恶性疟原虫,RDT检测结果为恶性疟阳性,未作核酸检测;上海市疾控对患者1的复核结果是镜检查见卵形疟原虫,RDT检测结果为恶性疟阳性,核酸检测结果为卵形疟原虫阳性。B区疾控分别采用镜检、 RDT和qPCR法对患者2进行初检,结果均为间日疟阳性;上海市疾控对患者2的复核结果为镜检查见卵形疟原虫,RDT结果为阴性,核酸检测结果为卵形疟阳性。     

罕见输入性卵形疟原虫wallikeri亚种的PCR鉴定和测序分析

目的应用PCR技术对与间日疟原虫形态相识的卵形疟原虫亚种wallikeri进行鉴定。方法采集1例镜检可疑间日疟输入性疟疾患者滤纸血,采用PCR扩增18核糖体小亚单位RNA（18Small Subunit ribosomal RNA,18S SurRNA）片段,并进行测序分析。结果采用5对引物（rFAL1、rFAL2,rVIV1、rVIV2,rMAL1、rMAL2,rOVA1、rOVA2,rOVA1v、rOVA2v）进行PCR扩增,其中rOVA1v、rOVA2v引物扩增阳性,PCR产物大小为760bp;测序分析该基因片段（GenBank accession number KJ786425）与GenBank数据库中Plasomdium ovale wallikeri克隆RSH10 18S rRNA基因部分序列（KF219561.1）及卵形疟ssrRNA基因（AJ001527.1）的序列一致性都为100%。结论卵形疟与间日疟原虫形态相似,可采用PCR技术确认。本例患者感染的疟原虫经PCR鉴定和测序分析确定为卵形疟原虫变形P.ovale wallikeri变形亚种。     

河南省输入性卵形疟原虫2个亚种富色氨酸抗原基因的多态性分析

目的分析河南省2015年输入性卵形疟原虫富色氨酸抗原(Plasmodium ovale tryptophan-rich antigen,Po TRA)基因序列。方法采集河南省2015年22例输入性卵形疟患者的血样,收集患者相关信息。提取血样DNA,用巢式PCR方法扩增Po TRA基因,连接至p MD18-T载体,提取质粒进行测序,在Gen Bank中进行同源性比对,判断卵形疟原虫的亚种,并对其基因长度及种类进行分析。对Po TRA基因的氨基酸序列进行比对,分析氨基酸的差异。用邻接法构建系统进化树,分析样本间的亲缘关系。结果 22例卵形疟中,8例为卵形疟原虫wallikeri亚种(P.ovale wallikeri),占36.4%,Po TRA基因长度有245和299 bp 2种类型,以245 bp为主;14例为卵形疟原虫curtisi亚种(P.ovale curtisi),占63.6%,Po TRA基因长度有299、317和335 bp等3种类型,以299 bp为主。氨基酸序列比对显示,wallikeri亚种的2种基因类型相差2个氨基酸单元(MANPINMANPIN和AITPIN),curtisi亚种的3种基因类型间相差2个氨基酸单元(TITPIS和TINPIN)。系统进化树显示,22例样本分为curtisi和wallikeri 2个亚群,其中curtisi亚群又分为2个亚支,299 bp的样本在同一亚支内,317和335 bp的样本在另一亚支内,亲缘关系更近。结论 2015年河南省输入性卵形疟有curtisi和wallikeri 2个亚种,其Po TRA基因存在多态性,curtisi亚种有3种基因类型,wallikeri亚种有2种基因类型。     

日照市首例输入性卵形疟的实验室检测分析

目的 目的 对日照市首例输入性卵形疟病例进行实验室检测, 以明确诊断。方法 方法 收集患者流行病学资料和血样, 分别进行疟疾快速诊断检测 （RDT）、 疟原虫镜检及巢式PCR检测。结果 结果 患者从非洲刚果金务工返乡, 回居住地莒县陵 阳镇1个月后出现不规则发热、 乏力。RDT检测提示为非恶性疟原虫感染。血涂片镜下可见感染红细胞明显变形, 呈多 种不规则形状; 环状体粗大, 可见大滋养体期和裂殖体期疟原虫。巢式PCR扩增基因产物长度约800 bp, 与卵形疟原虫 相符。综合上述结果, 该病例诊断为单一卵形疟原虫感染。结论 结论 虽然镜检是疟疾诊断的金标准, 但卵形疟原虫在镜下 很难鉴别, 结合 PCR检测结果可明确诊断。     

两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析

目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012～2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6%、25.4%、0%和63.4%、29.6%、7%,符合率为81.7%;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100%,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8%、43.8%和10.4%,镜检与巢式PCR符合率为72.9%;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种wallikeri和混合感染分别占80.8%、11.5%和7.7%,检出变种wallikeri总数占卵形疟19.2%。结论巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平。     

8例输入性卵形疟不同亚型的鉴定

目的鉴定并分析境外输入性卵形疟的2种亚型及其感染的临床特点。方法对在北京友谊医院2015年1月—2017年3月确诊的8例输入性卵形疟患者进行虫种亚型的鉴定,并分析比较不同亚型感染引起的实验室指标的差异。结果通过对8例患者进行巢氏PCR鉴定及序列分析,结果显示卵形疟curtisi及卵形疟wallikeri亚型各4例;与curtisi亚型感染相比,wallikeri亚型感染后引起血小板下降程度更低,乳酸脱氢酶及TBIL的上升程度更高。结论输入性卵形疟的亚型鉴定须通过巢氏PCR鉴定完成,wallikeri亚型感染导致的器官损害更为严重。     

1例国内罕见的输入性卵形疟的实验室检测

目的对1例输入性疑似疟疾患者的血样进行实验室检测。方法制备疑似疟疾患者血样的血涂片,吉姆萨染色后进行疟原虫的镜检观察。利用实验室自行研制的疟原虫属特异性（通用型）和4种疟原虫种特异性的巢式PCR和实时荧光PCR检测方法,对该血样进行疟疾检测及分型。将PCR扩增片段进行序列测定,并与已知的卵形疟序列进行blast比对分析。结合血样的分子生物学检测结果,重新对镜检结果进行复核。结果血样初次镜检为疟疾阴性。使用疟原虫巢式PCR通用引物对血样的DNA进行PCR检测,扩增出了预期大小约240bp的条带;巢式PCR分型检测表明,血样仅扩增出预期大小约450bp的卵形疟条带,无对应大小的恶性疟、间日疟和三日疟扩增条带产生。疟原虫通用型和卵形疟特异性的荧光PCR检测结果均为典型的S形阳性曲线,卵形疟扩增片段的熔解温度为72.5℃。序列分析表明,扩增片段长度为434bp,blast比对发现去除引物后的393个碱基与GenBank DQ845247等卵形疟的SSU rRNA对应部分的基因序列同源性为100%。重新对血涂片进行镜检复核,结果在薄血膜中发现了卵形疟的环状滋养体,被寄生的红细胞为椭圆形,边缘呈伞矢状。结论使用巢式PCR、实时荧光PCR、序列分析和镜检等方法,证实该例输入性的疑似疟疾患者为卵形疟原虫感染。     

2015年重庆市输入性疟疾病例特征分析

目的 分析重庆市2015年输入性疟疾病例实验室诊断结果及流行病学特征。方法 按照《重庆市疟疾诊断参比实验室工作手册》操作规程,采用涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条（RDT）及巢式PCR对该市输入性病例进行实验室诊断分型,并从寄生虫病防治信息管理系统收集疟疾个案调查资料进行分析。结果 2015年重庆市共报告境外输入性疟疾病例31例,其中间日疟2例（6.45%）、恶性疟23例（74.19%）、卵形疟5例（16.13%）、三日疟1例（3.22%）,5例卵形疟中3例经实验室诊断为卵形疟wallikeri亚型。30例（96.77%）输入自非洲,1例（3.33%）输入自东南亚;30例为男性,1例为女性,年龄23～61岁,病例分布无明显季节性。病例从发病到初次就诊时间、从初次就诊到确诊时间的中位数均为2 d,初次就诊单位多为县级单位,确诊单位多为省级单位。结论 重庆市2015年疟疾病例均为输入性,未发现本地病例,仍保持消除疟疾状态,但仍要加强输入性疟疾病例的管理及病原学监测工作,并加强相关疟疾防治机构医务人员的防治能力培训。     

疟疾巢式PCR检测方法的优化应用

目的结合疟疾检测工作实际,对疟疾基因检测的巢式PCR方法进行优化应用,以提高疟疾检测效率。方法通过采用PCR预混液、内引物一步扩增、重新设计针对卵形疟多个亚种的新引物,在疟疾巢式PCR的基础对反应体系、反应条件和卵形疟原虫特异性引物进行优化。对优化后的方法进行特异性和敏感性分析,并用巢式PCR和优化后的方法同时对疟疾阳性血样和疟疾送检血样进行检测,对检测结果进行比较分析。结果优化后的方法特异性较好,敏感性可达pg至fg级。两种方法同时检测疟疾阳性血样的结果表明,优化后的方法PCR扩增产物的产量无明显变化,非特异性扩增明显减少,卵形疟不同亚种的检出率提高,总体特异性提高。对111份疟疾送检血样的实测结果表明,巢式PCR的敏感性和虫种特异性分别为94.57%和86.96%,优化后方法的敏感性和虫种特异性均为93.48%,两种方法敏感性差异无统计学意义(P0.05),但优化后的方法特异性明显提高(P0.05)。结论优化后的PCR检测在保持常规巢式PCR方法敏感性的基础上提高了特异性,同时因其实验环节减少而节省了检测成本、提高了检测效率。     

2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果分析

目的 分析2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果,为巩固江苏省疟疾诊断水平提供科学依据。方法 由江苏省疟疾诊断参比实验室收集2017年疟疾网报病例诊断结果和样本;对每份病例样本分别采用镜检、核酸检测复核和疟疾快速诊断试纸条（RDT）检测;比较分析不同地区和不同疟原虫虫种样本检测结果符合情况。结果 2017年江苏省共有疟疾网报病例242例,经复核确定疟疾病例共239例,其中恶性疟163例、间日疟21例、三日疟11例、卵形疟43例、恶性疟和卵形疟原虫混合感染1例。13个设区市疟疾网报病例的诊断符合率均＞80%,总符合率为88.8%;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫检测符合率分别为98.8%、57.1%、63.6%、81.4%,RDT对4种疟原虫感染检出率分别为95.7%、85.0%、63.6%、79.1%。结论 2017年江苏省疟疾网报病例诊断质量总体较高,对非恶性疟人体疟原虫的虫种鉴别能力有待提高,RDT对非恶性疟人体疟原虫感染检测效果不理想。在当前消除疟疾阶段,应加强和保持各部门的疟疾诊断能力。     

合肥市1例输入性卵形疟病例分析

目的　对合肥市1例输入性卵形疟病例进行流行病学调查和实验室诊断分析,为今后预防控制输入性疟疾提供参考依据。方法　对该例输入性卵形疟患者的流行病学史、诊疗经过等资料进行收集、整理和分析。结果　患者从非洲莫桑比克务工返乡,回国数月后因反复发热就医。快速诊断试纸条法（RDT）提示为非恶性疟原虫感染;镜检见被感染红细胞正常大小或略胀大、锯齿状不明显,大滋养体胞浆增多、形态不规则、基本无空泡。荧光定量PCR确诊该病例为卵形疟原虫感染。结论　临床医务人员应加强对有境外流行区生活及工作史人员的疟疾诊断意识,及时早期合理用药,防止疟疾疫情扩散。