气道重塑与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在支气管哮喘发病机制中的研究进展

支气管哮喘是一种以可逆性气流受限为特征的气道慢性炎症性疾病。在支气管哮喘众多发病机制中,气道重塑与磷脂酰肌醇 3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路联系紧密。气道重塑与支气管气道平滑肌细胞的增殖和凋亡密切相关。PI3K/PKB信号通路作为细胞内一条重要的信号传导通路,起到抑制细胞凋亡、促进细胞周期的进展,介导细胞增殖等作用,因而可以结合气道重塑与PI3K/PKB通路对支气管哮喘的发病和治疗进行探讨和研究。该研究现对支气管哮喘、气道重塑、PI3K/PKB通路的研究进展进行了综述,以期为支气管哮喘的治疗提供借鉴。     

牡荆素通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制人骨肉瘤细胞生长的研究

目的 研究牡荆素如何影响骨肉瘤细胞的生长以及所涉及的机制。方法 将143B细胞分为空白组(不给予任何处理，正常培养细胞)、对照组(0.1%二甲基亚砜)和低、中、高剂量实验组(20,40和60μmol·L^-1牡荆素)。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况，用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果 干预24 h后，中、高剂量实验组和对照组、空白组的细胞增殖率分别为(51.34±4.69)%、(33.16±3.67)%、(99.32±2.66)%和(100.00±3.26)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.34±0.03、0.27±0.03、0.87±0.05和0.87±0.03,p-Akt(ser473)蛋白相对表达水平分别为0.35±0.03、0.22±0.04、1.02±0.07和0.97±0.06,p-Akt(thr308)蛋白相对表达水平分别为0.33±0.02、0.31±0.03、0.93±0.04和0.93±0.02。中、高剂量实验组的上述指标与对照组和空白组比较，差异均有统计学意义(均...     

菊苣酸通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制口腔癌KB细胞增殖、侵袭与黏附的研究

目的 探讨菊苣酸对口腔癌KB细胞增殖、侵袭与黏附的影响及机制。方法 将KB细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组,分别用0,5,10和20μmol·L^-1菊苣酸干预24 h。比较4组细胞的穿膜细胞数、细胞黏附率,以及磷脂酰肌醇3激酶p85亚单位（PI3Kp85）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达情况。结果 低、高剂量实验组和对照组的穿膜细胞数百分比分别为（79.37±8.04）%,（64.66±7.61）%和（100.00±0）%,细胞黏附率分别为（84.06±3.27）%,（64.64±7.22）%和（100.00±0）%,PI3Kp85相对表达量分别为0.70±0.10,0.08±0.02和0.78±0.05,p-Akt相对表达量分别为0.50±0.06,0.27±0.05和0.81±0.07,低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 菊苣酸能够抑制口腔癌KB细胞的增殖、侵袭与黏附,该作用与抑制PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路参与哮喘气道炎症反应的研究现状

哮喘是一种常见且易反复发作的气道免疫炎症疾病,多种细胞及其组分可共同参与并促进其病理过程.气道炎症是哮喘的基本特征,可引起气道高反应,常表现为炎症细胞的增加及炎性细胞的浸润.磷脂酰肌醇3激酶(phosphati-dylinositol 3-kinase,PI3K)的活化可导致丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/thr...     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在黄芪甲苷防治疾病中的作用

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在细胞增殖、凋亡抑制、细胞迁移、囊泡转运和细胞癌转化中起重要作用。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASI)是黄芪的主要成分之一,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、促进血管内皮增生等多方面药理作用。黄芪甲苷通过多层次、多靶点作用于PI3K/Akt信号通路调节细胞的表型和功能,在治疗和预防多种疾病中至关重要。本文总结了黄芪甲苷在多种疾病中的具体作用机制,以期揭示黄芪甲苷在疾病预防和治疗中的可能性,为其后续研究提供一定的理论依据。     

血管外膜脂肪组织源性脂联素通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路促进血管内膜损伤后内皮细胞增生的研究

目的 研究血管外膜脂肪组织分泌的脂联素对血管内膜损伤后内皮细胞增生的影响及可能的分子机制.方法 将C57BL/6J野生型小鼠72只完全随机分为A组（仅剪开颈部皮肤后再缝合）、B组（给予颈动脉套管结扎）、C组（剪开颈部皮肤后于颈动脉周围移植脂联素基因敲除小鼠脂肪组织）及D组（颈动脉套管结扎同时于颈动脉周围移植脂联素基因敲除小鼠脂肪组织）,每组18只.手术8周后处死小鼠,取各组小鼠左颈总动脉切片,采用苏木精-伊红染色,观察各组小鼠颈动脉内膜增生情况并测定内膜增厚程度,以内膜面积与中膜面积的比值表示.应用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠颈动脉组织内脂联素水平.采用蛋白质印迹法检测各组小鼠颈动脉组织内磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）及其磷酸化产物的水平.体外实验将小鼠内皮细胞以5＆#215;104个/ml接种于内皮细胞生长培养基中,将细胞分为对照组、脂联素组（在对照组基础上加入重组脂联素100 mg/L）及PI3K抑制组（在对照组基础上加入重组脂联素100 mg/L和PI3K抑制剂LY29400 250 μg/L）,利用标记5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）的微小RNA（miR-21）模拟物转染小鼠内皮细胞,使其在细胞中呈过表达状态,通过荧光显微镜观察各组内皮细胞的增生情况,比较BrdU阳性细胞百分率.结果 B组小鼠颈动脉内膜增厚程度明显大于A组、C组和D组,差异均有统计学意义[（1.37±0.09）比（0.82±0.18）、（0.71±0.05）、（1.03±0.06）,P值分别为0.023、0.001、0.010].B组小鼠脂联素的表达水平明显高于A组、C组和D组,差异有统计学意义[（95±6） ng/L比（77±5）ng/L、（55±5）ng/L、（70±7）ng/L,P=0.049、0.021、0.027].C组与D组小鼠颈动脉组织内AKT及PI3K磷酸化产物水平较A组与B组降低.体外实验脂联素组内皮细胞的BrdU阳性细胞率较对照组明显增加,差异有统计学意?     

microRNA—155通过磷脂酰肌醇3激酶/丝—苏氨酸蛋白激酶信号通路调节低氧诱导的缺血性脑卒中的血管生成研究

目的 研究微小RNA155（miRNA-155）通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝-苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路调节低氧诱导的缺血性脑卒中的血管生成作用机制。方法 用线栓法建立永久性局灶脑缺血大鼠模型,并在实施造模手术前48 h给予CoCl₂构成持续低氧环境。将造模后的大鼠随机分为模型组、对照组、实验A组和实验B组,每组15只;另取15只健康大鼠给予只穿线不结扎处置作为假手术组。模型组和假手术组术后均不给予任何处理;对照组造模手术后5 min给予单侧脑室注射10 mg·kg^-1慢病毒载体miRNA-155-siRNA-NC1 10μL;实验A组造模手术后5 min给予单侧脑室注射10 mg·kg^-1慢病毒载体miRNA-155-siRNA 10μL;实验B组造模手术后5 min给予单侧脑室注射10 mg·kg^-1 LY294002 10μL。5组大鼠均每周给药1次,每组均干预28 d。用免疫组化法检测大鼠的脑组织微血管密度（MVD）,用蛋白质印迹法检测大鼠脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）...     

汉黄芩素调节磷脂酰肌醇 3激酶 /丝氨酸苏氨酸蛋白激酶 /核因子 κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠辅助性 T细胞 17/调节性 T细胞平衡的影响

目的探讨汉黄芩素( Wog)调节磷脂酰肌醇 3激酶( PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶( Akt)/核因子 κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病( COPD)大鼠辅助性 T细胞 17(Th17)/调节性 T细胞( Treg)平衡的影响。方法 2022年 8-12月,大鼠采用随机数字表法分为 Model组、低剂量 Wog组( Wog-L组, 50 mg/kg)、高剂量 Wog组( Wog-H组, 100 mg/kg)、阳性药物氨茶碱组(Ami组, 2.3 mg/kg)、 IGF-1(PI3K激活剂)组( 1.33 mg/kg)、 Wog-H+IGF-1组(100 mg/kg+1.33 mg/kg)、对照组(CK组),每组 12只。除 CK组外,其他组大鼠均需利用烟熏法联合气管滴注脂多糖( LPS)的方法构建 COPD模型,建模成功 24 h后,进行给药处理,每天 1次给药,持续 4周。检测呼气峰流量( PEF)、每分钟通气量( MV)、吸气峰流量( PIF);流式细胞术检测外周血中 Th17/ Treg;HE染色检测肺组织病理;酶联免疫吸附法检测大鼠肺组织中白细胞介素( IL)-17、IL-10水平;蛋白质印迹法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体 γt(RORγt)、叉头框蛋白 P3(Foxp3)、磷酸化 PI3K(p-PI3K)、磷酸化 Akt(p-Akt)、磷酸化 NF-κB p65(pNF-κB p65)蛋白。结果与 CK组比较, Model组大鼠 PEF(12.56±0.47比 8.72±0.39)、 PIF(9.35±0.32比 7.24±0.17)、 MV(132.26±5.78比 96.63±3.28)、 Treg(31.18±2.62比 15.52±1.01)比例、 IL-10(23.35±1.16比 8.85±0.27)明显降低(均 P<0.05); Th17(3.14±0.13比 18.86±1.67)比例、 Th17/Treg(0.10±0.01比 1.22±0.11)、肺泡间隔( 33.36±1.48比 49.78±1.73)、气道炎症评分( 0比 4.56±0.23)及 IL-17(75.83±3.60比 185.56±8.62)水平明显升高(均 P<0.05)。与 Model组比较, Wog-L组、 Wog-H组 PEF(9.66±0.40,11.49±0.51)、 PIF(8.28±0.19,9.03±0.22)、 MV(105.54±4.11,126.67±5.72)、 Treg(19.93±1.18,27.73±2.05)比例、 IL-10(11.56±0.33,20.72±0.59)水平明显升高(均 P<0.05); Th17(3.14±0.13比 18.86±1.67)比例、 Th17/Treg(0.10±0.01比 1.22±0.11)、肺泡间隔( 43.45±1.26,35.78±1.12)、气道炎症评分( 3.75±0.17,0.86±0.07)、 IL-17(162.27±7.14,103.35±4.33)水平明显降低(均 P<0.05)。与 CK组比较, Model组大鼠 RORγt(0.15±0.01比 1.34±0.11)、 p-PI3K(0.22±0.01比 0.86±0.07)、 p-Akt(0.18±0.01比 0.75±0.06)、 p-NF-κB p65(0.11±0.01比 0.69±0.06)蛋白表达升高, Foxp3(1.45±0.27比 0.35±0.02)蛋白表达降低(均 P<0.05)。与 Model组相比, Wog-L组、 Wog-H组 RORγt(1.08±0.10,0.36±0.02)、 p-PI3K(0.71±0.06,0.35±0.03)、 p-Akt(0.62±0.06,0.28±0.02)、 p-NF-κB p65(0.52±0.05,0.26±0.02)蛋白表达明显降低, Foxp3(0.57±0.04,1.13±0.09)蛋白表达明显升高(均 P<0.05)。 Wog-H组与 Ami组大鼠上述各指标水平近似,均差异无统计学意义( P>0.05)。 IGF-1逆转了高剂量 Wog对 COPD大鼠 Th17/Treg的影响。结论 Wog促进 COPD大鼠 Th17/Treg平衡的机制可能与下调 PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨姜黄素诱导A549细胞凋亡的机制

目的 观察并探讨姜黄素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及其机制。方法 将A549细胞分为空白组(正常培养)和低、高剂量实验组(分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)及激动药+低、高剂量实验组(先用50μmol·L^-1 Recilisib Sodium干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)、抑制药+低、高剂量实验组(先用25μmol·L^-1 PI3K-IN-1干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)。用MTT法测定细胞增值率；用流式细胞术测定细胞凋亡情况；用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)mRNA的相对表达水平；用蛋白质印迹法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果 空白组、低剂量实验组、高剂量实验组、激动药+低剂量实验组、抑制药+低剂量实验组、激动药+高剂量实验组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100...     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白自噬通路在支气管肺发育不良中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。方法 将A549细胞(腺癌人类肺泡基底上皮细胞)一定条件培养后分成对照组、支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组。支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组高氧环境培养,置于37℃、85%氧气孵化箱中培养48 h,前者不加药剂、后者加10μmol/L的雷帕霉素干预;对照组常规环境培养,置于37℃、5%二氧化碳孵化箱中培养48 h,不加药剂。利用高氧构建支气管肺发育不良的细胞模型,利用蛋白质印迹实验和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证自噬对高氧处理后A549细胞肺泡表面标志物合成蛋白复合物(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)的影响,利用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测自噬对高氧处理后A549细胞增殖的影响,利用蛋白质印迹实验验证PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。结果 蛋白质印迹实验和RT-qPCR实验表明自噬激活剂雷帕霉素挽救了高氧处理后A549细胞SPC、AQP5表达的下调。EdU实验表明雷帕霉素显著促进了高氧处...     

右美托咪定激活PI3K/Akt通路改善LPS诱导的大鼠急性肺损伤实验研究

目的 考察右美托咪定（Dex）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（ALI）的影响,并探讨可能与PI3K/Akt信号通路改变的相关机制。方法 将80只SD大鼠根据建模方法随机分为5组：对照组、模型组、Dex低剂量组、Dex高剂量组、Dex+LY294002组,建模24 h时处死并分离肺组织,观察组织病理切片,检查肺水肿程度及微血管通透性,采用Western blotting法检测Akt及其磷酸化蛋白以及线粒体凋亡信号相关蛋白的表达水平,检查线粒体细胞色素C、膜电位及ATP含量,并用电镜观察线粒体形态,采用流式细胞术检测肺组织细胞凋亡情况,采用DCFH-DA探针荧光显微镜法检测细胞内的活性氧（ROS）水平。结果 LPS滴注24 h后,病理切片表现有明显的ALI特征,Dex在50 μg/kg剂量时可明显改善LPS诱导的ALI病理特征;以对照组为参照,p-Akt（Thr308）与p-Akt（Ser473）的相对表达量模型组未发生明显变化,Dex组则均显著增高（P<0.001）,在Dex+LY294002组的表达水平较Dex组显著降低（P<0.001）;模型组的Bax与Bcl-2蛋白较对照组的相对表达量分别显著升高与降低（P<0.001）,Dex组分别降低与升高至接近对照组水平,Dex+LY294002组又分别回升与回降;对照组、模型组、Dex组、Dex+LY294002组的肺组织细胞凋亡率分别为2.4%、19.5%、6.7%、13.1%;各组的ROS水平变化与肺组织细胞凋亡情况一致性良好。结论 Dex可通过激活PI3K/Akt信号通路减轻LPS诱导的肺组织细胞凋亡及线粒体凋亡信号激活,继而改善ALI,发挥肺保护作用。     

Nerve growth factor induces cord formation of mesenchymal stem cell by promoting proliferation and activating the PI3K/Akt signaling pathway

Aim:

To investigate whether nerve growth factor (NGF) induced angiogenesis of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) and the underlying mechanisms.

Methods:

Bone marrow MSCs were isolated from femors or tibias of Sprague-Dawley rat, and cultured. The cells were purified after 3 to 5 passages, seeded on Matrigel-coated 24-well plates and treated with NGF. Tube formation was observed 24 h later. Tropomyosin-related kinase A (TrkA) and p75NTR gene expression was examined using PCR analysis and flow cytometry. Growth curves were determined via cell counting. Expression of VEGF and pAkt/Akt were analyzed with Western blot.

Results:

NGF (25, 50, 100 and 200 μg/L) promoted tube formation of MSCs. The tubular length reached the maximum of a 2.24-fold increase, when the cells were treated with NGF (50 μg/L). NGF (50 μg/L) significantly enhanced Akt phosphorylation. Pretreatment with the specific PI3K inhibitor {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"LY294002","term_id":"1257998346","term_text":"LY294002"}}LY294002 (10 μmol/L) blocked NGF-stimulated Akt phosphorylation, tube formation and angiogenesis. NGF (25–200 μg/L) did not affect the expression of TrkA and vascular endothelial growth factor (VEGF), but significantly suppressed the expression of p75NTR. NGF (50 μg/L) markedly increased the proliferation of MSCs.

Conclusion:

NGF promoted proliferation of MSCs and activated the PI3K/Akt signaling pathway, which may be responsible for NGF induction of MSC angiogenesis.     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。