间充质干细胞条件培养基对肺泡上皮液体清除能力的影响

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对小鼠肺泡液体清除的影响和对人肺泡上皮细胞生存能力的作用,并明确小鼠BMSCs条件培养基在肺脏液体清除中的作用机制。方法细胞贴壁法分离培养小鼠BMSCs,应用流式细胞术对小鼠BMSCs的表面标记物进行鉴定;运用酶标仪测定小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体肺泡液体清除率;利用活细胞计数盒(CCK-8)试剂研究小鼠BMSCs条件培养基对人H441肺泡上皮细胞生存能力的影响;采用蛋白质印迹法研究小鼠BMSCs条件培养基对人肺泡上皮细胞钠通道蛋白水平的影响。结果小鼠BMSCs稳定表达CD44,阴性表达CD34;小鼠BMSCs条件培养基能够提升在体小鼠肺泡液体清除率;小鼠BMSCs的条件培养基能够提高人肺泡上皮细胞的生存能力;蛋白质印迹法结果显示小鼠BMSCs条件培养基能够增加人肺泡上皮细胞钠通道的蛋白水平表达。结论小鼠BMSCs条件培养基能够增强肺泡上皮细胞的液体清除并能改善其生存能力,机制可能与肺泡上皮细胞钠通道蛋白表达的增加有关。     

咪达唑仑对人肺脏液体清除的作用机制研究

目的探讨咪达唑仑对人肺上皮细胞短路电流的影响,并探讨可能的机制。方法应用尤斯灌流室装置测定H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利可抑制的电流算得阿米洛利敏感性电流,以用药前H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100%对照。用100μmol/L咪达唑仑处理H441细胞,在0,15,30,60min 4个时间点提取蛋白用于蛋白印迹法,研究咪达唑仑对细胞外调节蛋白酶(ERK)1/2蛋白磷酸化的影响。结果咪达唑仑能够剂量依赖性抑制H441单层细胞的短路电流,此电流可被阿米洛利抑制;蛋白印迹法结果显示咪达唑仑能够促进ERK1/2蛋白磷酸化。结论咪达唑仑通过抑制人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而降低肺泡上皮离子转运,其机制可能与其促进ERK1/2蛋白磷酸化有关。临床上对伴有肺水肿的患者应用咪达唑仑时应考虑其可能对肺泡上皮液体清除的影响。     

布比卡因对人肺上皮细胞短路电流影响的研究

目的布比卡因是长效酰胺类局麻药,本研究旨在观察布比卡因对人肺上皮细胞短路电流的影响,并探讨可能的机制。方法应用尤斯灌流室装置测定H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利抑制后的电流算得阿米洛利敏感性电流,以用药前H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100%对照。用100μmol·L~(-1)布比卡因处理H441细胞,在0、15、30、60 min 4个时间点提取蛋白用于Western blot,研究布比卡因对ERK1/2蛋白磷酸化的影响。结果布比卡因能够剂量依赖性抑制H441单层细胞的短路电流,此电流可被阿米洛利抑制;Western blot结果显示,布比卡因能够促进ERK1/2蛋白磷酸化。结论布比卡因通过抑制人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而降低肺泡上皮离子转运,其机制可能与其促进ERK1/2蛋白磷酸化有关。临床上对伴有肺部疾患的病人应用布比卡因时应考虑其可能对肺泡上皮液体清除的影响。     

厄贝沙坦抑制大鼠平滑肌细胞AT1R及其下游信号通路

目的本研究目的是利用厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预平滑肌细胞,阐明血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达及其下游信号通路的影响。方法利用Western Blot技术,研究厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ干预平滑肌细胞后对细胞AT1受体蛋白表达及其下游信号通路-细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白磷酸化水平的影响。结果研究发现厄贝沙坦能显著地抑制AngⅡ诱导的AT1受体蛋白表达(0.208±0.022 vs 0.997±0.131,P<0.01)及下游信号通路中的ERK1/2蛋白磷酸化(0.055±0.007 vs 0.103±0.020,P<0.01)、STAT3蛋白磷酸化(0.162±0.010 vs 0.758±0.054,P<0.01)。结论这些研究结果表明厄贝沙坦抑制AT1R和下游的ERK1/2及STAT3信号通路,从而抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖等,发挥控制血压、防治心脑血管疾病作用。     

咪达唑仑对小鼠肺泡上皮液体清除作用的研究

目的探讨咪达唑仑与在体小鼠肺泡液体清除率(AFC)之间的关系,以及β2肾上腺素受体激动剂特布他林对其作用的影响。方法应用酶标仪测定小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体AFC。结果气管内注入0.1mmol/L咪达唑仑后,能显著降低小鼠AFC。与1mmol/L阿米洛利(特异性钠通道阻断剂)合用后抑制效应未见进一步增强,表明咪达唑仑能够抑制与上皮钠通道有关的阿米洛利敏感性AFC。β2肾上腺素受体激动剂特布他林能明显增加小鼠AFC,与咪达唑仑合用后,特布他林几乎完全逆转咪达唑仑对AFC的抑制作用。结论临床上对合并肺脏损害的患者应用咪达唑仑时应考虑其可能对肺脏液体清除作用的影响,必要时可以考虑应用β2肾上腺素受体激动剂特布他林进行治疗。     

巴豆醛对小鼠气管短路电流的影响及相关机制研究

目的探讨巴豆醛对小鼠气管上皮及原代培养单层气管上皮细胞短路电流的影响及其与PKG2之间的关系,明确巴豆醛在呼吸系统液体转运中可能的作用机制。方法应用尤斯灌流装置记录小鼠气管上皮及原代培养单层气管上皮细胞短路电流,采用Elisa实验明确巴豆醛对ENa C活性的影响。结果巴豆醛能够抑制小鼠气管上皮和原代培养的单层气管上皮细胞的阿米洛利敏感性短路电流,而此阿米洛利敏感性肺液清除主要是由ENa C介导的液体转运。Elisa实验进一步明确了巴豆醛通过抑制PKG2而参与ENa C活性的调控作用。结论巴豆醛可能通过抑制呼吸系统ENa C的功能,阻碍Na+的重吸收,通过抑制PKG2而参与ENa C活性的调控作用,进而诱导产生肺水肿或急性呼吸窘迫综合征。     

右旋美托咪啶对小鼠肺泡上皮液体清除作用的研究

目的探讨右旋美托咪啶与在体小鼠肺泡液体清除率(AFC)之间的关系,以明确其在肺脏液体清除中的作用。方法应用酶标仪测定伊文思蓝标记的小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体AFC。结果与1mmol/L阿米洛利抑制效应相反,气管内注入1.5μg/kg右旋美托咪啶后,能显著增加小鼠在体AFC。与阿米洛利合用后此增强效应受到抑制,表明右旋美托咪啶能够增加与上皮钠通道有关的阿米洛利敏感性AFC。结论临床上对合并肺脏损害的患者进行镇静时,可以考虑右旋美托咪啶对肺脏液体清除作用的影响,应用其进行相应的治疗。     

羧甲基壳聚糖对肺泡液体清除率的作用研究

目的探讨羧甲基壳聚糖与肺泡液体清除率(Alveolar fluid clearance,AFC)之间的关系,阐明羧甲基壳聚糖是否参与了肺上皮液体转运。方法应用酶标仪测定小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体AFC。结果羧甲基壳聚糖气管内给药对AFC无明显抑制作用。结论羧甲基壳聚糖可能不影响肺泡上皮钠主动转运机能,抑制肺水肿液的吸收。     

黄芩苷元对炎症反应的影响

目的研究以黄芩苷元为主要成分的黄芩提取物SBM抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法观察SBM体外对PGE2合成、COX-2酶活性,COX-2蛋白表达、p38蛋白磷酸化的影响;观察给药后对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀、醋酸诱导的小鼠扭体反应的影响。结果SBM可抑制LPS诱导腹腔巨噬细胞PGE2合成、COX-2酶活性及COX-2蛋白表达;抑制ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞p38蛋白磷酸化;并可抑制角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀及醋酸诱导的小鼠扭体反应。结论黄芩提取物SBM可通过抑制淋巴细胞功能、炎症介质产生发挥抗炎作用。     

ERK1/2通路在4-AP诱导大鼠肺动脉收缩中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶-1/2(ERK1/2)通路在4-氨基吡啶(4-aminopyridione,4-AP)阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜上电压依赖性钾通道(KV)所引起的肺动脉收缩中的作用。方法取正常鼠肺动脉制作肺动脉环,分别加入4-AP(KV通道阻断剂),PD98059/U0126+4-AP,比较肺动脉收缩的变化。同时培养肺动脉平滑肌细胞进行Western blot分析4-AP对ERK1/2的影响。结果①在血管环试验中,4-AP引起的肺动脉收缩有浓度依赖性;加入20mmol.L-1PD98059或2μmol.L-1U0126可以抑制4-AP引起的肺动脉收缩。②4-AP可刺激PASMCs ERK1/2蛋白磷酸化;③U0126可抑制4-AP引起的ERK1/2蛋白磷酸化。结论ERK1/2通路参与4-AP阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞膜上电压依赖性钾通道(KV)引起肺动脉收缩。