转化生长因子β1对缺血再灌注损伤肺组织肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β含量的调节

背景：肺缺血再灌注时，大量聚集在肺内的白细胞被激活，释放多种细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β等，进而介导再灌注损伤。新近研究发现，转化生长因子β1对犬移植肺组织缺血再灌注损伤有保护作用。 目的：观察转化生长因子β1干预后，肺缺血再灌注损伤肺组织肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量变化。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-08/10在解放军第二军医大学附属长海医院胸心外科实验室完成。 材料：清洁级SD大鼠30只，随机分为假手术组、缺血再灌注组、转化生长因子β1组，10只/组。转化生长因子β1为Peprotech INC.公司产品。 方法：缺血再灌注组与转化生长因子β1组大鼠通过结扎肺门阻断肺循环1 h、再灌注2 h建立原位肺缺血再灌注损伤模型，假手术组大鼠仅以10#丝线绕过肺门后不结扎。肺循环阻断前15 min，各组颈静脉注射肝素抗凝，转化生长因子β1组同时注射10 μg/kg转化生长因子β1。 主要观察指标：再灌注2 h后摘取左肺组织，光镜下观察肺组织形态变化，测定湿干重比及肺泡损伤指数，ELISA法检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量。 结果：30只大鼠均进入结果分析。假手术组肺组织无明显病理改变；缺血再灌注组可见明显的组织水肿及中性粒细胞浸润；转化生长因子β1组轻微组织水肿，少量中性粒细胞浸润。与假手术组比较，缺血再灌注组湿干重比及肺泡损伤指数均显著升高（P < 0.01）；与缺血再灌注组比较，转化生长因子β1组上述两项指标均明显降低（P < 0.05）。与假手术组比较，缺血再灌注组肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β含量均显著升高（P < 0.01）；与缺血再灌注组比较，转化生长因子β1组上述两项指标均明显降低（P < 0.05，P < 0.01）。 结论：转化生长因子β1能够明显改善肺缺血再灌注损伤，该作用与其有效抑制肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β的表达密切相关。     

心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌组织及血清肌钙蛋白Ⅰ表达和心肌肿瘤坏死因子α与重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白的干预**

背景：心肌缺血再灌注时生成大量的肿瘤坏死因子α直接造成心肌的收缩功能下降。 目的：观察药物重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对大鼠缺血再灌注心肌损伤的影响。 方法：成年雄性Wistar大鼠建立心肌缺血再灌注模型。药物干预组在再灌注前注射重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白,模型组给予生理盐水,并设立不造模的假手术组。再灌注后立即测量心肌梗死面积,ELISA检测再灌注后的心肌肿瘤坏死因子α及血清肌钙蛋白Ⅰ的含量,实时PCR检测心肌肿瘤坏死因子α mRNA的表达。 结果与结论：与假手术组相比,模型组与药物干预组大鼠心肌肿瘤坏死因子α及其mRNA和肌钙蛋白的水平明显升高 (P < 0.05);与模型组相比,药物干预组心肌肿瘤坏死因子α及血清肌钙蛋白Ⅰ水平明显升高(P < 0. 05),心肌梗死体积与肿瘤坏死因子α mRNA的表达减少(P < 0. 05)。提示重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白能够减轻心肌缺血/再灌注损伤作用,改善大鼠的心功能。     

落新妇甙对肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景：肝脏是对缺血再灌注损伤最敏感的器官之一。黄酮类化合物落新妇甙可作为递氢体清除氧自由基,从而可能在减轻肝脏缺血再灌注损伤等方面发挥作用。 目的：观察落新妇甙对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用,对其机制进行初步探讨。 方法：C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组、模型组、小剂量干预组和大剂量干预组。干预组小鼠于缺血前24 h和1 h分别给予10或40 mg/kg的落新妇甙腹腔注射,然后建立70%部分肝缺血再灌注模型。采集血液和肝脏组织样本。检测血清丙氨酸氨基转移酶活性,ELISA测血清肿瘤坏死因子α水平,化学比色法测定肝组织中超氧化物歧化酶、丙二醛含量。肝脏组织病理学检测。Westernblot检测肝组织中肿瘤坏死因子α蛋白含量,RT-PCR检测肿瘤坏死因子α mRNA。 结果与结论：落新妇甙干预能有效降低血清丙氨酸氨基转移酶水平,干预组肝组织丙二醛含量较模型对照组明显下降(P < 0.01);而超氧化物歧化酶含量明显上升(P < 0.01);干预组血清肿瘤坏死因子α含量较模型组对照组明显下降(P < 0.01);小、大剂量干预组肝组织中肿瘤坏死因子α蛋白表达与模型组模型对照组比较渐次降低,与半定量RT-PCR结果相符(小剂量干预组P < 0.05,大剂量干预组P < 0.01)。落新妇甙保护肝脏热缺血再灌注损伤显示出剂量-效应关系趋势。结果提示,落新妇甙干预能减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤后的炎症反应和脂质过氧化损伤,有效改善肝功能和肝脏病理损害;机制可能在于其能抑制缺血再灌注损伤肝组织中肿瘤坏死因子α的高表达。     

白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织中TNF-α和IL-6水平的影响

目的探讨白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的影响。方法健康Wistar大鼠48只,随机均分为假手术组、缺血再灌注损伤组、白藜芦醇50mg·kg-1组和白藜芦醇25mg·kg-1组,每组12只,采用腹主动脉缺血法制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,然后采用ELISA法检测各组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平。结果白藜芦醇50mg·kg-1组和白藜芦醇25mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注损伤组,差异有统计学意义(P0.05)。白藜芦醇50mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平低于白藜芦醇25mg·kg-1组,差异有统计学意义(P0.05)。结论白藜芦醇能够降低脊髓缺血再灌注损伤组织中TNF-α和IL-6水平,改善机体的免疫功能,进而减轻脊髓组织的缺血再灌注损伤。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡与Survivin和IGF-1表达的关系

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和IGF-1因子表达与细胞凋亡的关系.方法 将80只成年健康雄性Wistar大鼠,分为Survivin组和IGF-1组,每组各40只,并随机分为对照组、假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组,每组4只(n=4).应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO),采用免疫组织化学方法检测Survivin蛋白与IGF-1蛋白在神经元凋亡中的表达情况.结果 Survivin组:假手术组Survivin阳性神经元在海马、皮质区及纹状体区呈基础表达,缺血再灌注2h表达明显增加,48h达高峰,14d表达最低,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05).IGF-1组:正常对照组及假手术组IGF-1阳性神经元在海马、皮质区及纹状体区呈基础表达,缺血再灌2h时IGF-1表达明显增高,48h达高峰,3～14d仍维持高表达,与正常对照组及假手术组比较有显著性差异(p＜0.05).结论 内源性Survivin与IGF-1因子可能具有在抑制神经元凋亡的作用.     

巴戟天醇提物对大鼠脑缺血再灌注损伤组织TNF-αIL-6表达水平的影响

目的探讨巴戟天醇提物(RMOEE)对大鼠脑缺血再灌注损伤组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法 40只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术组、脑缺血再灌注损伤模型组、RMOEE 3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组4组,每组10只。RMOEE 3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组大鼠连续1周按相应剂量进行RMOEE灌胃,而假手术组和脑缺血再灌注损伤模型组大鼠仅进行同体积生理盐水灌胃。末次给药1h后采用改良的Zea-Longa线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,测定各组大鼠脑组织含TNF-α、IL-6表达水平。结果 RMOEE3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组脑组织TNF-α、IL-6表达水平较脑缺血再灌注损伤模型组低(P0.05)。RMOEE 3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组TNF-α、IL-6表达水平比较差异有统计学意义(P0.05)。结论RMOEE可通过减少TNF-α、IL-6表达而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

长春西汀对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应机制的影响

目的探讨长春西汀对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应机制的影响。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤组和长春西汀干预组,应用线栓法制备大脑中动脉闭塞2h后再灌注模型,分别于再灌注6h、24h、3d、7d采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死灶大小,采用干、湿重法检测脑组织含水量以评价脑水肿的程度,采用免疫组织化学和原位杂交的方法检测大鼠核转录因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果与假手术组比较,模型组NF-κB的表达于再灌注6h即增高(P<0.05),TNF-α的表达于24h增高(P<0.05),3d时均达高峰(均P<0.05),7d时仍高于假手术组(均P<0.05);与模型组比较,长春西汀干预组于再灌注后24h、3d、7d时NF-κB和TNF-α表达降低。长春西汀干预组NF-κB各时点组内比较未见统计学差异(F=2.324,P>0.05)。与假手术组比较,模型组和长春西汀干预组脑组织水含量于脑缺血再灌注损伤6h即增高,3d时达到高峰(均P<0.05),7d时仍高于假手术组(均P<0.05)。结论长春西汀对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应有明显的抑制作用。     

α-硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性机制的影响

目的探讨α-硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应机制的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组(A)、脑缺血再灌注组(B)和硫辛酸预干预组(C),应用线栓法制备大脑中动脉闭塞2 h后再灌注模型,分别于再灌注6 h、24 h、3 d、7 d采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死灶大小,采用免疫组织化学和原位杂交的方法检测大鼠核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达。结果与假手术组比较,模型组NF-κB的表达于再灌注6 h即增高(P<0.05),TNF-α的表达于24 h增高(P<0.05),3 d时均达高峰(均P<0.05),7 d时仍高于假手术组(均P<0.05);与模型组比较,硫辛酸预干预组于脑缺血再灌注24 h、3 d、7 d时NF-κB和TNF-α表达降低;α-硫辛酸预干预组NF-κB各时点组内比较未见统计学差异(F=2.245,P>0.05)。与模型组比较,α-硫辛酸预干预组梗死体积明显减小,神经功能缺损评分降低(P<0.05)。结论α-硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能是α-硫辛酸抑制NF-κB、TNF-α的表达,从而抑制大鼠脑缺血再灌注损伤后的炎症反应有关。     

雌激素对去卵巢大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用

目的探讨雌激素对去卵巢大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法将大鼠切除双侧卵巢后30d给予肌肉注射苯甲酸雌二醇100μg/(kg·d)连续14d,然后制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;制模12h后取脑组织行免疫组化染色,检测细胞间黏附分子(CD54)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;TUNEL法检测脑组织凋亡细胞数;电镜观察脑细胞膜超微结构的变化。结果与缺血再灌注组及去卵巢组比较,雌激素组脑组织CD54、TNF-α表达明显降低,凋亡细胞数明显减少(均P<0.05);脑细胞膜结构非特异性损伤减轻。结论雌激素通过减少缺血再灌注大鼠脑组织炎性细胞因子表达、减轻炎症反应、降低脑组织细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

目的 观察腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及脑保护机制.方法 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血2 h后再灌注损伤模型;SD大鼠60只,随机分为假手术组(F组),缺血再灌注组(IR组),腺苷预处理组(AP组),每组20只;通过HE 染色在光镜下观察神经细胞损伤变化,免疫组化法检测Bax蛋白的阳性表达.结果 光镜下,假手术组(F组)神经细胞结构正常,腺苷预处理组(AP组)和缺血再灌注组(IR组)均有不同程度的缺血再灌注损伤,腺苷预处理组较缺血再灌注组损伤轻;假手术组Bax蛋白表达极弱,缺血再灌注组和腺苷预处理组在脑缺血再灌注后2 h接近缺血核心区出现Bax蛋白阳性表达,6 h后表达增多,24 h达到高峰,72 h开始减少.与假手术组相比,腺苷预处理组和缺血再灌注组Bax蛋白阳性细胞数显著增多(P＜0.05);与缺血再灌注组相比,腺苷预处理组Bax蛋白阳性细胞数显著减少(P＜0.05).结论 腺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,腺苷可通过下调Bax蛋白的表达发挥脑保护作用.