缝隙连接阻滞剂16-DSA对大鼠缺血性室性心律失常影响的研究

缝隙连接位于心肌细胞之间，是离子和小分子物质相互传递的直接通路，对心脏的电传导有重要作用。有研究证明，缝隙连接的数量及分布的改变与心律失常的发生有关。本实验着眼于研究缝隙连接阻滞剂16-DSA对于局部心肌缺血性室性心律失常的影响，以及对于缺血心肌的电生理作用。以期探索缝隙连接的影响，对室性心律失常的发生机制及防治办法提供部分实验依据。     

缝隙连接阻滞剂对离体SD大鼠局部缺血心脏血流动力学的影响

目的 观察缝隙连接阻滞剂16-DSA对离体SD大鼠正常心脏及局部缺血心脏机械功能的影响,探索缝隙连接在维持心脏机械功能的作用.方法 建立离体SD火鼠心脏Langendorff灌流模型（含16-DSA的K-H灌流液）;结扎左前降支,建立局部心肌缺血模型;取缺血部分心肌进行免疫荧光染色检测,应用图像分析系统半定量分析细胞间机械连接和缝隙连接的代表蛋白,包括Desmoplakin和缝隙连接蛋白43（ Cx43）蛋白的水平.透射电镜观察缺血及16-DSA对心肌结构的影响.结果（1）16-DSA有使正常心脏左心室压最大上升速率（dp/dtmax）和左心室收缩峰压（LVSP）下降的趋势,对左心室舒张末压（LVEDP）无明显影响.局部缺血心脏的LVSP,dp/dtmax明显下降,LVEDP明显上升,16-DSA对缺血心脏的LVSP、dp/dtmax均无明显影响,对LVEDP有改善的趋势.（2）缺血心肌Cx43和Desmoplakin的表达面积比正常心肌明显减少.16-DSA可使缺血所致Cx43的减少发生部分逆转,但对Desmoplakin无明显影响.（3）通过透射电镜可见缺血对心肌细胞有破坏性影响,16-DSA可以减轻该影响.结论 （1）16-DSA可以使正常心脏的收缩功能下降,而对舒张功能无明显影响.（2）16-DSA可以部分逆转缺血对心脏舒张功能的破坏,可能与其部分逆转缺血对Cx43下调有关.但其对心肌机械连接——桥粒无明显影响.（3）16-DSA可以减轻由于缺血造成的心肌损害.     

缝隙连接阻断剂对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的探讨缝隙连接阻断剂对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,细胞免疫荧光染色法检测大鼠主动脉平滑肌细胞缝隙连接蛋白43的表达,荧光漂白后恢复技术检测缝隙连接介导的细胞间通讯。四唑盐比色法测定细胞增殖能力,逆转录聚合酶链反应法检测平滑肌α-肌动蛋白的表达,并观察缝隙连接特异性阻断剂18α-甘草次酸对上述指标的影响。结果大鼠血管平滑肌细胞体外培养3天后可表达缝隙连接蛋白43。荧光物质能够通过缝隙连接在相邻细胞间进行传递,孤立细胞荧光恢复率显著低于相邻细胞(7.30%±0.58%比80.61%±6.57%,P<0.01);而18α-甘草次酸能够抑制缝隙连接介导的细胞间通讯,18α-甘草次酸组荧光恢复率显著低于对照组(61.43%±7.62%比80.61%±6.57%,P<0.05)。18α-甘草次酸可抑制血管平滑肌细胞增殖,并且可促进平滑肌α-肌动蛋白信使核糖核酸的表达。结论缝隙连接阻断剂可促进大鼠血管平滑肌细胞由合成型向收缩型转化,提示缝隙连接在调节血管平滑肌细胞表型转化过程起一定作用。     

异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏缝隙连接通透性的影响

缝隙连接 (GJ)是连接相邻细胞的通道 ,它由细胞间的缝隙连接蛋白 (Cx)构成。这些通道在体内参与了生物信息传播等重要的生理过程。由不同种Cx组成的GJ通道明显不同于由单种Cx组成的同型GJ通道的通透特性。Cx密度和分布的改变与心律失常相关。磷酸化作用可使GJ通道尤其是异型GJ通道的通透性下降。     

缝隙连接阻断剂辛醇对大鼠脑缺血再灌注后核转录因子κB通路的影响

目的探讨缝隙连接阻断剂辛醇对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB通路的影响。方法选择健康雄性SD大鼠72只随机分为假手术组、对照组、DMSO组和辛醇组,每组18只,于建立脑缺血模型前30min,辛醇组腹腔注射辛醇溶液,对照组及假手术组腹腔注射等量生理盐水,DMSO组腹腔注射等量5%DMSO溶液。采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)进行行为学评估,检测各组脑组织含水量、脑梗死体积,Western blot检测P65、磷酸化P65、IκB-α、磷酸化IκB-α蛋白表达。结果假手术组无脑梗死灶。与假手术组比较,辛醇组、对照组及DMSO组脑组织含水量、mNSS及脑梗死体积明显增加(P0.05),且对照组和DMSO组磷酸化P65和磷酸化IκB-α蛋白表达明显增加,P65和IκB-α蛋白表达明显降低(P0.05)。辛醇组mNSS、脑组织含水量、脑梗死体积、磷酸化P65和磷酸化IκB-α蛋白表达明显低于对照组和DMSO组;辛醇组P65和IκB-α蛋白表达明显高于对照组和DMSO组(72.13±2.01 vs 50.39±1.83、49.97±1.92,68.24±2.23 vs 43.45±1.53、42.56±1.48,P0.05)。对照组与DMSO组mNSS、脑组织含水量、脑梗死体积、P65和磷酸化P65蛋白表达、IκB-α和磷酸化IκB-α蛋白表达比较,无统计学差异(P0.05)。结论缝隙连接阻断剂辛醇能减轻缺血再灌注损伤,机制可能与调节NF-κB信号通路有关。     

缝隙连接阻滞剂Heptanol对心脏血流动力学的影响

目的:观察缝隙连接阻滞剂Heptanol对离体SD大鼠心脏机械功能及缺血心肌组织的影响。方法:(1)建立离体SD大鼠心脏Langendorff灌流模型,灌流含有Heptanol的K-H灌流液,观察离体SD大鼠心脏收缩及舒张功能。(2)结扎左前降支,建立局部心肌缺血模型,观察Heptanol对缺血心脏的机械功能的作用。(3)透射电镜观察Heptanol对缺血心肌结构的影响。结果:(1)Heptanol可以降低正常心脏的左室压力最大上升速率(dp/dt max)和左室收缩峰值(LVSP),对左室舒张末压(LVEDP)没有明显影响。(2)缺血心脏的LVSP、dp/dt max下降,LVEDP上升。Heptanol对缺血心脏的LVSP、dp/dtmax、LVEDP均无明显影响。(3)透射电镜观察可见缺血使心肌组织遭到破坏,Heptanol可以减轻组织损伤。结论:(1)Heptanol可以使正常心脏的收缩功能下降,对舒张功能无明显影响,不会使缺血心脏的机械功能进一步下降。(2)Heptanol可以减轻由于缺血造成的心肌组织破坏。     

异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏缝隙连接的调变

目的 检测由缝隙连接蛋白(connexin，Cx)43和Cx45组成的多种异型缝隙连接通道(her—eromultimeric gap junction channels，HGJC)和磷酸化对缝隙连接(gap junction，GJ)的调变作用。方法 将转染了编码为Cx43或Cx45的DNA后的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道。显微注射若丹明123(rhodamine123，Rh)检测经200nmol／L十四(烷)酰佛波醇乙酸酯(12-0-tetrade—canoylphorbol-13-acetae，TPA)处理前后，在紫外光显示下由Cx43和Cx45所组成的不同GJ通道对荧光染料的偶联率(coupling ratio)。结果 在不同的GJ中，同型GJ通道Cx43(homotypie Cx43，HoCx43)偶联率最高。从Cx45侧注入荧光染料的单侧异型GJ通道45(mono-heteromeric Cx45-Cx43／45，MH45)偶联率较之从Cx43／45侧注入荧光染料的MH45、双侧异型GJ通道Cx43／45(bi-heteromeric Cx43／45，BH43／45)及同型GJ通道Cx45(homotypic Cx45，HoCx45)等的偶联率是最低的。根据HoCx43或HoCx45通道的偶联率对各型通道偶联率进行标准化处理。BH43／45和MH43通道的偶联率均较HoCx43降低。对MH45通道来说，从Cx43／45侧注射的通道偶联率大于从Cx45侧注射的偶联率。TPA处理后HoCx43的偶联率降低，而当Cx43和Cx45组合成BH43／45和MH43通道后其偶联率下降更显著。结论 Cx43和Cx45共同表达可构成BH43／45、MH43和MH45等异型通道，而这些通道可降低细胞间的通讯并对磷酸化的作用不敏感。单侧异型GJ通道的偶联率取决于染料注射的方向。     

缝隙连接与心脏的传导

细胞之间动作电位或兴奋的传导称为胞间传导 ,可兴奋细胞间的电耦联是通过一种特殊的胞间结构而实现 ,这种结构即是缝隙连接 (gapjunction ,GJ)。现已证实 ,心脏的正常传导和引起心律失常的异常传导都与缝隙连接直接相关。目前 ,缝隙连接是心电学基础与临床研究的共同热点。一、缝隙连接的基本概念心肌细胞间的连接主要由闰盘 (intercalateddisk)构成。闰盘由桥粒 (desmosome)、粘附膜 (fasciaadherents)和缝隙连接三部分组成。桥粒是紧密贴附在一起的细胞膜 ,能将各个心肌细胞紧密连接在一起 ,其功能目前尚不明了 ,但其电阻很高 ,离子很难…     

雌激素对SD大鼠肾小球硬化的影响

目的探讨雌激素替代治疗对SD大鼠肾小球硬化的影响.方法 18只12周龄雌性SD大鼠随机分为3组(1)去卵巢组(简称Ovx组);(2)去卵巢+雌激素组(简称Ovx+E2组);(3)假手术组(简称 Control组).自由取食与饮水.检测手术前,3月后再次测量血压后处死,检测血清雌二醇浓度、电镜下观察肾脏皮质超微结构的变化.结果 (1)去卵巢组的SD大鼠血清雌二醇水平明显低于假手术组,雌激素替代治疗后血清雌激素浓度明显升高,与假手术组相比没有明显差别;(2)卵巢切除前3组血压之间没有明显的差别.3月后,SD大鼠去卵巢组血压明显高于手术前及假手术组,雌激素替代治疗后血压降低,与假手术组没有明显的差别;(3)电镜下肾脏超微结构的变化假手术组大鼠肾脏皮质电镜检查未见异常;去卵巢组大鼠出现肾小球硬化的表现;雌激素替代治疗后与去卵巢组比较超微结构没有明显的改善.结论 SD大鼠去卵巢后血压升高,给予雌激素替代治疗后可抑制血压升高;SD大鼠去卵巢后,肾脏出现纤维化的病理改变,雌激素替代治疗后不能抑制肾小球纤维化的进程.     

雌激素对SD大鼠肾小球硬化的影响

目的探讨雌激素替代治疗对SD大鼠肾小球硬化的影响。方法18只12周龄雌性SD大鼠随机分为3组：(1)去卵巢组(简称Ovx组)；(2)去卵巢 雌激素组(简称Ovx E2组)；(3)假手术组(简称Control组)。自由取食与饮水。检测手术前，3月后再次测量血压后处死，检测血清雌二醇浓度、电镜下观察肾脏皮质超微结构的变化。结果(1)去卵巢组的SD大鼠血清雌二醇水平明显低于假手术组，雌激素替代治疗后血清雌激素浓度明显升高，与假手术组相比没有明显差别；(2)卵巢切除前3组血压之间没有明显的差别。3月后，SD大鼠去卵巢组血压明显高于手术前及假手术组，雌激素替代治疗后血压降低，与假手术组没有明显的差别；(3)电镜下肾脏超微结构的变化：假手术组大鼠肾脏皮质电镜检查未见异常；去卵巢组大鼠出现肾小球硬化的表现；雌激素替代治疗后与去卵巢组比较超微结构没有明显的改善。结论SD大鼠去卵巢后血压升高，给予雌激素替代治疗后可抑制血压升高；SD大鼠去卵巢后，肾脏出现纤维化的病理改变，雌激素替代治疗后不能抑制肾小球纤维化的进程。     

雌激素对SD大鼠血脂代谢的影响

目的探讨雌激素对SD大鼠血脂代谢的影响。方法24只12周龄雌性SD大鼠随机分为3组（1）去卵巢组（简称Ovx组），（2）去卵巢＋雌激素组（简称Ovx＋E2组），（3）假手术组，作为对照组。3月后断头取血，检测，血清雌二醇、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白。结果去卵巢后的SD大鼠血清雌二醇水平明显低于假手术组，雌激素替代治疗后血清雌激素浓度明显升高，与假手术组相比没有明显差别。去卵巢组大鼠血清胆固醇水平明显高于假手术组，雌激素替代治疗后胆固醇水平降低，与假手术组相比无差异；大鼠去卵巢后血清甘油三酯稍有升高但没有统计学意义，去卵巢雌激素替代治疗组与假手术组相比较血清甘油三酯明显升高，与去卵巢组比较稍高，但没有统计学意义；去卵巢组大鼠血清高密度脂蛋白水平明显低于假手术组，给予雌激素替代治疗后血清高密度脂蛋白水平明显升高与假手术组没有明显的差别。结论雌激素替代治疗能调节SD大鼠的血脂代谢，降低胆固醇，升高高密度脂蛋白，但可使甘油三酯进一步升高。     

雌激素对SD大鼠血脂代谢的影响

目的探讨雌激素对SD大鼠血脂代谢的影响.方法24只12周龄雌性SD大鼠随机分为3组(1)去卵巢组(简称Ovx组),(2)去卵巢+雌激素组(简称Ovx+E2组),(3)假手术组,作为对照组.3月后断头取血,检测,血清雌二醇、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白.结果去卵巢后的SD大鼠血清雌二醇水平明显低于假手术组,雌激素替代治疗后血清雌激素浓度明显升高,与假手术组相比没有明显差别.去卵巢组大鼠血清胆固醇水平明显高于假手术组,雌激素替代治疗后胆固醇水平降低,与假手术组相比无差异;大鼠去卵巢后血清甘油三酯稍有升高但没有统计学意义,去卵巢雌激素替代治疗组与假手术组相比较血清甘油三酯明显升高,与去卵巢组比较稍高,但没有统计学意义;去卵巢组大鼠血清高密度脂蛋白水平明显低于假手术组,给予雌激素替代治疗后血清高密度脂蛋白水平明显升高与假手术组没有明显的差别.结论雌激素替代治疗能调节SD大鼠的血脂代谢,降低胆固醇,升高高密度脂蛋白,但可使甘油三酯进一步升高.     

罗格列酮联合阿米洛利治疗对老年SD大鼠心脏结构及功能的影响

目的：通过保钾利尿剂阿米洛利治疗长期应用罗格列酮的老年SD大鼠,在观察其疗效和安全性的同时评价阿米洛利对罗格列酮导致心肌损伤的保护作用,并探讨可能的机制。方法将40只SD大鼠分为对照组、罗格列酮组、阿米洛利组、阿米洛利联合罗格列酮组,每组10只。3周龄起灌胃给药,时间6个月。每月采血行生化检测,观察血电解质、尿电解质、肾功能、血糖、血脂等指标。6个月后行心脏超声检查观察大鼠心脏功能。大鼠处死后称取心、肝、肾,留取组织行病理检查,观察各脏器的病理学状态。观察罗格列酮和阿米洛利对相关指标的影响。结果药物干预SD大鼠6个月后,罗格列酮组出现明显血钠偏高,联合用药组血钠水平介于罗格列酮组与对照组之间。心脏超声检查发现罗格列酮组大鼠的左室后壁收缩期厚度与舒张期厚度、收缩期室间隔厚度与舒张期室间隔厚度均有所增加,而联合用药组心脏超声各项指标与对照组差异无统计学意义。心肌组织学检查中罗格列酮组出现心肌组织受损,而联合用药组基本无心肌组织破坏。结论罗格列酮可加重心肌损伤,联用阿米洛利可减轻罗格列酮治疗中对心脏的副作用。     

特异性Kv1.3通道阻断剂对大鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究特异性Kv1.3通道阻断剂对高脂喂养大鼠主动脉动脉粥样硬化(AS)发生的影响。方法构建AS大鼠模型,Wistar大鼠被随机分为正常对照(Control)组,AS组,AS药物治疗〔AS+Sh K(L5)〕组(n=10)。利用组织病理学方法观察三组大鼠主动脉组织病变;通过实时荧光定量PCR、Western印迹法检测大鼠主动脉组织Kv1.3通道和相关炎症因子表达水平;通过ELISA法检测大鼠外周血炎症因子水平。结果与Control组比较,AS组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平均显著增高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低,而AS组和AS+Sh K(L5)组之间血脂水平均无差异(P>0.05)。大鼠主动脉组织HE染色显示AS组大鼠主动脉内膜增厚,中层平滑肌排列紊乱,炎症细胞浸润;AS+Sh K(L5)组较AS组主动脉组织病变有所减轻。mRNA水平,AS组Kv1.3道通和炎症因子干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-2、IL-10、IL-4、IL-1β的表达量明显高于Control组,而在AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。蛋白水平中AS组Kv1.3道通和炎症因子(IFN-γ、IL-2和IL-10)的表达量明显高于Control组,而AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。AS组大鼠外周血炎症因子(IL-2、IFN-γ和IL-10)的水平较Control组升高,而AS+Sh K(L5)组较AS组有所降低。结论特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)能有效地抑制免疫细胞的活化,降低炎症因子的表达水平,从而减轻病变血管组织的炎症反应,同时可降低外周血炎症因子的水平,特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)对AS的发生有一定的抑制作用。     

心脏细胞的缝隙连接与心律失常

缝隙连接（Ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＧＪ）是普遍存在于心肌细胞、肝细胞、肠平滑肌细胞、晶状体细胞和一些神经元细胞间的一种细胞间通道。近年来随着对其研究的深入，ＧＪ与心血管疾病的关系，尤其是ＧＪ在心律失常发生中的作用正备受关注，本文就此作一综述。１ＧＪ的...     

SIRT3对SD大鼠体外循环心功能的影响

目的 探讨心肌线粒体去乙酰化酶 SIRT3对大鼠体外循环(CPB)所致急性心功能下降的影响及机制。方法 Sprague-Dawley(SD)成年大鼠30只,随机分为3组:对照组(sham组)、体外循环组(CPB组)、外源性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)治疗体外循环组(NAD+治疗组),每组10只（n=10）。麻醉复苏后1 h,采用彩色多普勒超声诊断仪检测左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、短轴缩短率(FS)及左心室射血分数(LVEF)。然后处死SD大鼠,取心肌组织,检测 AMPK、p-AMPK和心肌细胞膜Glut-4的蛋白表达及SIRT3和AMPK的活性。结果 与sham组相比,CPB组在CPB后血糖升高(P<0.05),心功能下降(P<0.05),具体表现为LVIDs和LVIDd值升高(P<0.05)、FS和LVEF值下降(P<0.05),CPB后SD大鼠心肌的SIRT3活性下降(P<0.05),下游的AMPK磷酸化水平及AMPK活性下降以及心肌细胞膜Glut-4的蛋白表达下降（均P<0.05）;预先采用外源性NAD+治疗,可显著降低血糖水平(P<0.05),提高CPB后SD大鼠心肌SIRT3的活性,促进心肌AMPK的磷酸化和该酶活性的升高(均P<0.05),并增加CPB大鼠心肌细胞膜Glut-4蛋白表达(P<0.05);与CPB组相比,NAD+治疗组心功能降低有所改善,表现为LVIDs和LVIDd值下降、FS和LVEF值升高(均P<0.05)。结论 NAD+治疗可明显改善SD大鼠CPB后的心功能,其机制可能与激活SIRT3,进而增加下游AMPK的磷酸化和该酶活性,以及增加心肌细胞膜Glut-4蛋白表达,并促进CPB术后心肌对葡萄糖的摄取和利用以及ATP的生成有关。     

雷米普利对大鼠AMI后心肌缝隙连接蛋白结构的影响

目的探讨雷米普利对大鼠急性心肌梗死（AMI）后心肌间缝隙连接蛋白43（Cx43）的影响。方法将24只大鼠随机分为3组,其中模型组（AMI组）开胸后结扎冠脉左前降支,对照组开胸后不结扎冠脉,治疗组开胸后结扎冠脉左前降支,同时用雷米普利灌胃（另两组用等量蒸馏水灌胃）。8周后,用免疫组化法及图像分析系统检测三组左室心肌梗死区及周边缺血区心肌Cx43表达,比较各组不同区域心肌Cx43表达。结果与对照组比较,AMI组心肌Cx43明显降低（P〈0.01）,并呈不均一分布;治疗组比AMI组显著升高（P〈0.05）。结论左室心肌梗死区心肌Cx43明显下降,周边缺血区Cx43表达增加,雷米普利可减轻心肌Cx43重构。