链霉菌 I06A-03304 产生的二酮哌嗪类化合物的纯化及结构鉴定

目的分离鉴定链霉菌106A-03304发酵液中具血管内皮细胞生长因子受体-2胞内酪氨酸激酶（VEGFR2-CD）抑制活性的次生代谢产物。方法采用大孔吸附树脂、羟丙基葡聚糖凝胶（SephadexLH-20）、C-18反相色谱（ODS）、高压液相色谱（HPLC）等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化;通过二级质谱（ESI＋-MS2）、紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、核磁共振波谱（NMR）对其结构进行鉴定,以酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测其次生代谢产物对VEGFR2-CD的抑制活性。结果分离得到两个二酮哌嗪类化合物：3304A和3304C;化合物3304A的化学结构与环（脯氨酸-亮氨酸）一致,化合物3304C的化学结构与环（脯氨酸-苯丙氨酸）一致,均对VEGFR2-CD表现出-定的抑制活性。结论化合物3304A和3304C是具有VEGFR2-CD抑制活性的二酮哌嗪类次生代谢产物,并为本研究首次报道。     

蛋白质提取分离和结构鉴定技术

蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子.作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应,调节代谢,抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用.因此,蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象.本文针对近年来有关蛋白质提取分离纯化和结构鉴定技术所取得的进展作简要综述.     

玉米须黄酮类成分的提取分离与结构鉴定（I）

玉米须ZeamaysL 为禾本科玉蜀黍属植物玉米的花柱和柱头 ,含有多种化学成分 ,如挥发油、皂苷、生物碱、黄酮类、多聚戊糖、尿囊素、有机酸等。其味淡、性平 ,有利尿、泄热、平肝、利胆之功效 ,可用于治疗肾炎、胆结石、糖尿病、黄疸、麻疹、乳糜血尿、血崩等症[1] 。现代药理研究证明玉米须有显著的利尿[2 ] 、降血糖[3] 、抑菌[4 ,5] 、降压[6 ] 、增强免疫[6 ] 、抗癌[7] 等功效。玉米须是我国传统的中药材 ,全国各地均广泛栽培玉米 ,因此 ,作为玉米副产物的玉米须的资源十分丰富 ,但对它的开发利用非常有限 ,仅少量入药外 ,大部分被白白…     

香青兰化学成分分离纯化及结构鉴定

目的 对香青兰(Dracocephalum moldavica L.)化学成分进行分离纯化和结构鉴定.方法 采用大孔吸附树脂AB-8.Sephadex LH20-层析和硅胶柱层析等方法分离化合物,并结合波谱学方法和化学法鉴定其结构.结果 从香青兰中分离并鉴定6个化合物,咖啡酸(caffeif acid)(I),咖啡酸-4-Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷(caffeic acid-4-Ο-β-D-glucopyranoside)(Ⅱ)·β-谷甾醇(β-sitosterOL)(Ⅲ).齐墩果酸(Oleanolic acid)(Ⅳ),金合欢素(acacetin)(Ⅴ).胡萝卜苷(Daucoster01)(Ⅵ).结论 分离纯化所得到的化合物纯度高,从析对有效成分的含量测定以及体内外药理实验铺垫了基础.     

越桔茎叶化学成分提取、分离及结构鉴定

越桔Vaccinium vitis-idaea L.系杜鹃花科(Ericacea)越桔属植物,俗称红豆、牙疙瘩、温普、熊果等,为常绿矮生小灌木,广泛分布在黑龙江及内蒙古大兴安岭地区.其性温,味苦涩,有利尿解毒之功效,对其研究已有很多报道.临床上用于治疗急、慢性呼吸道感染性疾病.为研究其有效成分,作者将其化学成分进行提取、分离并进行了结构鉴定.     

人脑神经生长因子的分离和纯化及其生物学活性的鉴定

人胎脑经离心，透析和离子交换纤维素层析等方法，分离纯化２．５Ｓ神经生长因子。根据７ＳＮＧＦ和其活性亚单位β－ＮＧＦ的等电点的不同，分离得到２．５Ｓ的ＮＧＦ。用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电脉测得其分子量约１３．３。用等电聚焦电泳测得其等电点分别为９．０、９．２和９．３５。     

红车轴草异黄酮的分离、纯化及结构鉴定

红车轴草Trifolium pratense L.为豆科车轴草属多年生草本植物,又名红三叶、红花苜蓿、红菽草、红荷兰翘摇、金雀菜、三叶草。红车轴草原产于小亚西亚和西南欧,在欧洲各国及俄罗斯、澳大利亚、新西兰、美国等国海洋性气候地区广泛栽培。红车轴草在我国新疆、吉林、云贵高原、湖北鄂西山地都有野生,另外我国江淮流域、华南、西南等地均有栽培,是我国长江流域以南地区优良的豆科牧草。红车轴草主要含有异黄酮类、蛋白质、氨基酸、糖类和维生素等多种成分。其中红车轴草异黄酮因具有改善妇女更年期综合症特别是降低潮热的发病率,抑制前列腺癌…     

紫杉醇高产菌发酵产物的分离、纯化和鉴定

真菌ST026（Altemaria alternate var.monosporus）的发酵产物,经过常压正相硅胶柱,中压正相硅胶柱,中压反相ODS柱色谱和重结晶等4步纯化得紫杉醇（纯度99.0%）,4步总收率0.003 9%（以发酵浸膏计）,紫杉醇的回收率为38.5%。     

核小体的提取纯化及鉴定

目的探索一种操作简便、实用的核小体提取方法.方法取无菌新鲜鸡血,提取细胞核,用葡萄球菌核酶消化后裂解、离心,获得上清组分用连续性密度梯度蔗糖进行分离,收集分子量350 bp左右的组分.结果2%琼脂糖电泳显示该组分含有长度为150 bp的双链DNA,15%SDS-PAGE电泳显示该组分含有组蛋白H2A、H2B、H3和H4;本实验分离的核小体在0 ℃条件下存放4周未见DNA成分和组蛋白成分发生解聚.结论该方法可以正确的分离出核小体,且具有良好的稳定性,为深入研究核小体在SLE自身抗体产生中的作用打下基础.     

苦瓜子抗人免疫缺陷病毒蛋白30的分离纯化及其切割超螺旋DNA的活性研究

目的：分离纯化苦瓜子抗人免疫缺陷病毒(HIV)蛋白30(MAP30)并对其切割超螺旋DNA的活性作初步分析。方法：采用离子交换层析及凝胶过滤层析等方法从苦瓜子中分离纯化MAP30，并经SDS-PAGE、Western blots等鉴定，将质粒pUC18与不同浓度MAP30孵育，进行琼脂糖电泳分析其切割DNA的活性。结果：得到相对分子质量为30000的目的蛋白MAP30，证实其具有使超螺旋DNA断裂为缺口环状及线状DNA的活性。结论：MAV30对DNA(RNA)的切割作用可能是其发挥生物学效应的主要机制之一。     

红树植物白骨壤化学成分的分离鉴定

目的：研究红树植物白骨壤(Avicennia marina)叶子部位次生代谢产物的结构多样性。方法：采用多种色谱方法进行分离纯化,通过波谱方法,并对照文献鉴定化合物结构。结果：分离并鉴定了21个苯丙素和萘醌类化合物,包括3个新化合物,分别是erythro-guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether (1),marinnone A (16)和marinnone B (17);18个已知物,分别是threo-guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether (2),eleutheroside E₂ (3),(+)-lirioresinol A (4),dihydroxymethyl-bis (3, 5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl) tetrahydrofuran-9-O-β-glucopyranoside (5),(+)-lyonire sinol 3α-O-β-D-glucopyranoside (6),(-)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside (7),epi-pinoresinol (8),leucoseceptoside A (9),jionoside C (10), salsaside A (11),ilicifolioside A (12),acteoside (13),isoacteoside (14),ethyl ferulate (15),avicennone D (18),avicenone E (19),avicennol C (20), stenocarpoquinone B (21),其中化合物1和2互为差向异构体,16和17互为同分异构体。结论：化合物1,16,17为新化合物,13个已知化合物2~12,14,15为首次从该属植物中获得。     

血链球菌血链素的分离纯化及其化学组成的测定

目的:分离纯化血链球菌血链素,并对其组成成分进行检测。方法:通过羟基磷灰石(HA)柱层析、SephadexG-150凝胶柱层析、中空纤维柱超滤脱盐、浓缩,分离并纯化血链素,SDS-PAGE检测其纯度及亚基分子量并检测其分子量,同时以紫外线吸收法及苯酚-硫酸法检测血链素蛋白及糖含量。结果:血链素分子量为180kDa,亚基分子量为110kDa和70kDa,其中蛋白含量为87.51%,糖含量为12.49%。结论:纯化的血链素是一种由两个亚基组成的糖蛋白。     

人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定

目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础.方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMP-myc/His片段,插入pMH3表达载体.利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株.以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性.结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株.镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95％以上且具有生物学活性.结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具.     

贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

目的：分离纯化贻贝多糖MP—I，并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法：采用热水提取，Sevage法除蛋白分离得粗多糖，DEAE-Sepharose、SepharoseCL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP—I。用GC及TLC法进行单糖组分的分析，用MTT法进行体外抗肿瘤活性的研究。结果：得到贻贝多糖纯品MP—I，多糖的得率为2．14％。单糖组分分析显示MP—I主要由葡萄糖组成，MP—I（0．5，0．1，0．02mg／m1）对体外HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞均有不同程度抑制作用（P〈0．01），其中高浓度组对HO-8910、MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别达到30．55％和36．38％。结论：贻贝多糖MP—I主要由葡萄糖组成，对HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞有体外抑制作用。     

气单胞菌基因种分离鉴定及耐药性研究

目的：探讨气单胞菌基因种与表型生化反应关系。方法：建立气单胞菌基因种鉴定方法;本实验采用被筛选的9种表型生化反应,鉴定45株气单胞菌基因种;采用MicroScan Gram Negative Panel 21微量液体稀释法报告气单胞菌基因种体外对名种抗生素的敏感性。根据NCCLs文件报告MIC、敏感、耐药。结果：本地区气单胞菌基因种主要是HG1、HG4、HG9、HG12、HG13;未见HG2、HG3、HG5、HG6、HG7、HG8、HG10、HG11。结论：气单胞菌基因种对头胞噻肟、头胞曲松、环丙沙星、替卡西林、复方新诺明敏感性为100%,对头孢噻吩耐药,对其它抗生素呈现不同程度的耐药。     

板蓝根多糖分离纯化及其性质的研究

目的从板蓝根中提取分离水溶性多糖,并分析其理化性质,为板蓝根质量控制与进一步开发利用提供参考。方法主要采用DEAE纤维素离子交换色谱柱,Sephadex G 75凝胶色谱柱分离纯化,应用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、IR、TLC、UV等方法对板蓝根多糖进行组成结构分析及理化性质研究。结果从板蓝根水溶性多糖中分离纯化得到4种不同的均一多糖组分PS1、PS2、PS3、PS4,色谱分析表明均由单一木糖组成。其中PS1、PS2、PS3、PS4相对分子质量分别为1.2×104、2.6×104、4.2×103、2.5×103。结论4种均一多糖首次从板蓝根中分离得到。     

大鼠精原细胞的分离纯化

目的：探讨大鼠精原细胞的分离纯化。方法：采用酶消化法制备10d Wister大鼠睾丸单细胞悬液；Percoll液不连续密度梯度分离精原细胞；用贴壁速度的差异纯化精原细胞。光电镜观察精原细胞的形态结构特征；应用酪氨酸蛋白激酶(c-kit)免疫化学鉴定精原细胞。结杲；精原细胞主要分布在28％～36％(Ⅱ带)间的Percoil梯度；分离纯化的精原细胞形态结构与组织切片上精原细胞一致，其纯度达55．68％；c-kit在精原细胞呈阳性表达，在睾丸体细胞呈弱阳性或阴性表达。结论：利用酶消化法、Percoll液不连续密度梯度及细胞贴壁速度的差异，分离纯化的精原细胞满足体外实验要求；精原细胞表达特异的c-kit受体。