甲孕酮对人卵巢癌3AO细胞C—erb B—2表达和形态学的…

采用流式细胞和电镜技术，检测了甲孕酮处理前后人卵巢癌３ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂ Ｂ－２表达和形态学改变情况。结果表明甲孕酮可使部分３ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂ Ｂ－２表达下降；部分３ＡＯ细胞发生形态学改变，提示甲孕酮具有低调部分人卵巢癌３ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂ Ｂ－２表达和诱导部分３ＡＯ细胞分化的作用。     

乳腺癌C－erbB－2基因过度表达的初步研究

目的研究乳腺癌Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的过度表达，探讨该基因对乳腺癌诊断、鉴别诊断和预后判断的意义。方法乳腺癌标本９８例，乳腺良性病变２６例，正常乳腺组织１０例，应用免疫组化ＳＰ法，检测癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达情况。结果乳腺癌Ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性率（５９．２％）明显高于乳腺良性病变（３．９％）和正常乳腺组织（０％）（Ｘ２＝２７．０６，Ｐ＜０．０１，Ｘ２＝１２．７８，Ｐ＜０．０１）。乳腺癌中高恶性的浸润性导管癌、硬癌阳性率８２．４％，７５％，低恶性的小叶原位癌、粘液腺癌皆阴性，Ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达与乳腺肿瘤大小、腋窝淋巴结转移明显相关（Ｘ２＝７．０６，Ｐ＜０．０１；Ｘ２＝４．９４，Ｐ＜０．０５），与雌激素、孕激素受体亦关系密切（Ｘ２＝４．８０，Ｐ＜０．０５；Ｘ２＝３．９１，Ｐ＜０．０５）。结论Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因过度表达可作为乳腺癌诊断、鉴别诊断和预后判断的有效指标。     

甲孕酮对K562/AO2细胞及P-gp、Bcl-2耐药蛋白表达的影响

目的：探讨甲孕酮对白血病 K562/ AO2细胞凋亡率及 P - gp、Bcl -2耐药蛋白表达的影响。方法以 MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、P - gp 及 Bcl -2表达。结果甲孕酮能够提高 K562/AO2细胞的凋亡,能够下调 K562/ AO2细胞 P - gp、Bcl -2的表达。结论甲孕酮能提高 K562/ AO2细胞化疗敏感性,促进其凋亡,对 K562/ AO2细胞有一定的逆转耐药作用。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞细胞外信号调节酶1和2活性的影响

目的 观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞中丝裂原激活的蛋白激酶家族成员细胞外信号调节酶(ERK)1和2活性,以及ERKI/2抑制剂PD98089对3AO细胞增殖的影响.方法 采用Western印迹法检测地塞米松(Dex)作用前后及未经药物处理(对照)组的ERKI和2蛋白活性,细胞增殖通过细胞计数完成.结果 Dex(1X10-7mol/L)处理3AO细胞5 min即出现ERK1和ERK2磷酸化程度降低.且两者呈同步变化;随着时间延长,ERK1和ERK2磷酸化程度明显降低,4 h时分别为处理前的26%和15%,具有时间依赖性;同时具有浓度抑制性,其中最大抑制出现在浓度为1X10-6 mol/L时,抑制率为85%;糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486不能逆转这些效应.应用ERKI/2抑制剂PD98059处理3AO细胞,能够显著抑制细胞增殖,抑制程度与Dex组相同;而PD98059与Dex合用时可以增强两者单独应用时的抑制效应.结论 Dex能够以不依赖GR的方式,快速抑制ERK蛋白活性,ERK信号通路可能参与抑制细胞增殖的过程.     

上皮性卵巢癌C-erbB-2、 p53、ER及PR表达

近年来,卵巢癌特异性抗原抗体检测的研究十分活跃,已成为卵巢癌的早期诊断、疗效观察及判断预后的新手段,也是研究基因治疗的基础.笔者应用SP法检测卵巢癌C-erbB-2、p53、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)的阳性表达,以探讨其临床应用价值. 1 资料与方法 1.1 组织标本与临床资料观察组系1992～1998年间在本院住院诊治的上皮性卵巢癌(以下简称卵巢癌)患者共45例,年龄48～75岁,平均57.1±6.5岁.手术切除的病变组织标本按常规方法制作石蜡切片,切片厚4μm,HE染色,依据Scully等病理诊断标准和FIGO分期法进行分期[1,2].临床Ⅰ期患者均采取子宫、双附件、大网膜、阑尾切除术和盆腔淋巴结取材活检.晚期患者在施行上述手术中如不可能将肿瘤全部切除,则尽可能使残留瘤体<2cm3,并行肿瘤细胞减灭术.手术后各期患者均按PAC方案进行化疗,共6个疗程.所有患者定期随访3年.     

C—erbB—2蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

为探讨Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义，采用免疫组化ＬＳＡＢ法对１０６例乳腺癌标本进行了Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白检测。结果：Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达阳性率为６３．２１％；     

C—erbB—2,PCNA在乳腺癌中的表达及临床意义

应用免疫组化Ｓ—Ｐ法对７９例乳腺癌作了Ｃ—ｅｒｂＢ—２癌基因蛋白及ＰＣＮＡ的临床病理研究，结果发现Ｃ—ｅｒｂＢ—２在乳腺癌的阳性率占４１．７７％，其中浸润性导管癌表达最高，占阳性中的５１．３５％。ＰＣＮＡ在乳腺癌的表达阳性率为４９．３７％，其中浸润性导管癌占阳性病例的５９．４６％。乳腺癌组织学分级愈高，Ｃ—ｅｒｂＢ—２及ＰＣＮＡ阳性表达率愈高，且二者是正相关关系，说明癌基因Ｃ—ｅｒｂＢ—２与ＰＣＮＡ的测定对乳腺癌的预后及指导术后治疗有重要意义。     

人膀胱癌原癌基因C—erbB—2蛋白产物的表达意义

用免疫组化ABC法对56例膀胱癌和14例正常膛胱组织进行癌基因C-erbB-2蛋白产物研究，结果表明：35％的膀胱癌显示阳性反应，正常膀胱组织呈阴性反应。其阳性表达率与肿瘤病理分级，临床分期及预后及方面差异有显著性（P＜0．01），此外，阳性表达者肿瘤易复杂，提示：C－erbB-2蛋白产物对判定膀胱癌恶性程度，浸润深度及预后有重要参考价值。     

P^53和C—erbB—2在乳腺癌中的表达及意义

目的：探讨癌基因C-erbB-2和抑癌基因P^53蛋白产物在乳腺癌中的表达及意义,方法：应用免疫组化S－P法检测67例乳腺癌中P^53和C－erbB-2的表达。结果：67例乳腺癌中P53和C－erbB-2表达的阳性率分别为58．2％和28．4％,二者的阳性表达在有淋巴转移和无淋巴转移组间比较差异有显著性（P＜0．01）,结论：P^53和C-erbB-2的表达可作为判断乳腺癌预后的指标。     

C-erbB-2在乳腺良恶性病变中的表达

1目的　研究 C- erb B- 2在乳腺良恶性病变中表达的规律及与乳癌病人预后的关系。 2方法　应用免疫组化法测定乳腺良性病变、癌前病变及乳癌中 C- erb B- 2基因表达。 3结果　乳腺良性病变组织中 C- erb B- 2均为阴性表达 ,癌前病变及乳癌中阳性率分别为 10 % ,38% ;C- erb B- 2表达与临床预后因素无相关性 ;C- erb B- 2表达阳性乳癌病人术后生存期显著短于阴性组 (χ2 =3.435～ 6 .5 31,P<0 .0 5 ) ;C- erb B- 2表达对不同分期、有无淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体阴阳性病人的术后生存期均有明显影响 (χ2 =3.872～ 6 .5 11,P<0 .0 5 )。 4结论　 C-erb B- 2可作为乳癌独立的、分子水平的预后指标     

人体乳腺癌及卵巢癌组织中C—erb B2基因的扩增

应用C-erb B2探针分析14例乳腺癌,15例卵巢癌组织及相应正常对照组织,结果发现29％乳腺癌及40％卵巢癌组织中出现基因扩增,作者认为检测C-erb B2基因扩增有可能作为上述两种癌组织的潜在性基因诊断的标志物。     

紫衫醇与顺铂诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的研究

目的 :研究两种不同的抗癌药物诱导细胞凋亡的规律 ,为卵巢癌的化疗提供理论依据。方法 :紫衫醇与顺铂分别作用于体外培养的卵巢癌SKOV3 细胞系 ,通过组织细胞化学染色、荧光染色、电子显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等方法进行检测和观察。结果 :经两种抗癌药物处理的卵巢癌SKOV3 细胞出现典型的细胞凋亡特征 ,在顺铂处理 0～ 36小时内 ,细胞凋亡呈均一的持续性增强 ,在 5～ 2 5nmol ml剂量范围内呈依赖性增强 ,凋亡率最高达 72 %。紫衫醇诱导细胞凋亡亦具有时间和剂量依赖性 ,2 5nmol ml浓度处理 12小时 ,凋亡率最高达 5 5 % ;但时间过长 (>12小时 )或浓度过大 (>5 0nmol ml) ,凋亡率下降。结论 :紫衫醇与顺铂能有效地诱导肿瘤细胞凋亡 ,诱导细胞凋亡是化疗药物治疗癌症的重要机制之一     

鼻咽癌组织中C-erb B-2的表达与血管生成的关系

目的 探讨C-erb B-2在鼻咽癌组织中的表达与肿瘤血管形成的关系.方法 应用免疫组化方法检测77例鼻咽癌患者活检石蜡包埋标本的C-erb B-2、血管内皮生长因子的表达,应用因子相关抗原(F8)显示血管内皮细胞,根据F8阳性的血管内皮细胞计数来测定肿瘤微血管密度.结果 C-erb B-2在鼻咽癌组织中的阳性表达率为36.36%(28/77),血管内皮生长因子在鼻咽癌组织中的阳性表达率为32.48%(25/77),血管内皮生长因子表达阳性率也越高,C-erb B-2表达阳性者微血管密度值也高(P=0.648＞0.05).结论 C-erb B-2可能在鼻咽癌血管生成中起到促进作用.     

siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用

目的 研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子（VEGF）基因表达的影响。方法 利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段,转录针对VE F mRNA的siRNA．通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC7901细胞,设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照．用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT—PCR检测转染后VEGF mRNA表达水平的变化．ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果 所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长,并使细胞周期阻滞于G0／G1期;VEGF mRNA的表达也受到有效抑制,明显减少;同时,对应的VEGF蛋白水平也显著降低,作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论 体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。     

p53、mdm2蛋白在睾丸肿瘤中的表达及意义

目的　探讨 p53、mdm2蛋白在睾丸肿瘤中的表达及其临床价值。 方法　应用免疫组化技术法检测 42例睾丸肿瘤 p53、mdm2蛋白阳性表达水平。结果　发现 p53、mdm2蛋白表达阳性率分别为 45 .2 % (1 9/ 4 2 )和 61 .9% (2 6/ 4 2 ) ,其阳性率与肿瘤病理分级和临床分期呈显著正相关 (P <0 .0 1 ) ,p53蛋白阳性表达与mdm2蛋白阳性表达呈高度正相关 (P <0 .0 1 )。结论　p53、mdm2蛋白检测有助于判断睾丸肿瘤的恶性程度及预测患者的预后。     

RNA干扰EGFR基因对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响

目的 构建表皮生长因子受体(EGFR)基因的小干扰RNA(siRNA)质粒,转染人卵巢癌细胞株skov3后检测RNA干扰(RNAi)对EGFR基因表达及细胞对化疗药物敏感性的影响.方法 体外构建EGFR小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入skov3细胞.实验分为正常对照组、非特异性转染组和特异性转染组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EGFR mRNA的表达,使用免疫细胞化学法(ICC)检测EGFR蛋白的表达.使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定EGFR shRNA转染skov3细胞后细胞对顺铂敏感性的改变.结果 EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱(F=87.73,q=16.81、15.33,P＜0.01),EGFR蛋白表达明显下调(F=69.29,q=14.71、13.57,P＜0.01);顺铂敏感性比正常对照组提高了约3倍.结论 靶向EGFR基因的序列特异性shRNA可有效抑制skov3细胞中EGFR基因的表达,增强skov3细胞对顺铂的敏感性.     

1,25（OH）2D3和ATRA对HO8910生长的协同抑制作用

目的：通过单独或联合使用1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitaminD3,1,25（OH）2D3]和全反式维甲酸（all trans rinoic acid,ATRA）,研究其对人卵巢癌细胞HO8910生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及维生素D受体（vitamin D recept VDR）及维甲酸α受体受体（retinoic acid receptorα,RARα）mRNA的表达变化,探讨其作用的分子机制。方法：选用人卵巢癌细株HO8910在体外进行培养,培养时分别添加1,25（OH）2D3、ATRA或二者联合,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）进行细胞周期和细胞凋亡分析,用RT-PCR检测VDR及RARαmRNA的表达。结果：结果是单独或联合使用1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸诱导后,HO8910细胞生长均受到不同程度的抑制（P〈0.05）,并呈时间依赖关系;能够引起细胞周期时相的改变,G1细胞增多（P〈0.05）;能够诱导细胞产生细胞凋亡（P〈0.05）;能够上调VDR及RARαmRNA的表达（P〈0.05）,进而抑卵巢癌细胞增殖,其中以联合用药组最为显著。结论：说明1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸能抑制人卵巢癌细胞株HO8910生长;诱导细胞周期发生G1期阻滞,同时产生细胞凋亡作用;通过上调VDR及RARαmRNA的表达,从而抑制癌细胞增当1,25-二羟维生素D3与全反式维甲酸联合用药时,能够对HO8910细胞生长产生协同抑制作用。     

雄激素及其拮抗剂对MCF-7乳腺癌细胞株雄激素受体表达的影响

研究药理浓度的睾丸酮对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞株雄激素受体表达的作用，以及雄激素拮抗剂氟他胺和羟基氟他胺对该作用的影响。方法应用荧光激活细胞分离器（ＦＡＣＳ）检测雄激素受体阳性的细胞。结果１０－９～１０－６ｍｏｌ／Ｌ的睾丸酮使ＭＣＦ－７乳腺癌细胞雄激素受体表达下调；１０－６ｍｏｌ／Ｌ的氟他胺能显著拮抗睾丸酮下调雄激素受体表达的作用（Ｐ＜０．０１）；羟基氟他胺更显著拮抗睾丸酮的作用，使雄激素受体表达显著增多，并呈剂量相关性（１０－８ｍｏｌ／Ｌ时Ｐ＜０．０５；１０－６ｍｏｌ／Ｌ时Ｐ＜０．００１）。结论ＭＣＦ－７乳腺癌细胞株中雄激素受体存在自动调节，氟他胺和羟基氟他胺上调雄激素受体的表达。     

短发夹RNA靶向抑制EGFR基因对人卵巢癌Skov-3细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对卵巢癌细胞表皮生长因子受体(EFR)基因表达的影响及其效应.方法 体外合成EFR的DNA模板序列和pSilencer 2.1-U6neo质粒构建编码shRNA的表达载体,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染到人卵巢癌Sov-3细胞,采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学技术检测转染前后Sov-3细胞EFR基因的变化;采用AnnexinV/PI双染色标记的流式细胞仪检测siRNA诱导的细胞凋亡,PI染色检测细胞周期阻滞.结果 成功构建pSilencer-EFR短发卡状siRNA真核表达载体;靶向EFR的序列特异性的siRNA可以有效抑制Sov-3细胞EFR基因的表达;流式细胞分析显示,Sov-3细胞凋亡率明显增加,细胞周期出现明显的0/1期阻滞.结论 RNAi沉默EFR表达可以诱导卵巢癌Sov-3细胞凋亡,并使卵巢癌Sov-3细胞停滞在0/1期,RNAi可作为研究卵巢癌发生发展机制和基因治疗的有效工具.