三磷酸肌醇和bax基因表达变化在genistein抑制裸鼠肝癌增长中的作用

目的: 探讨三磷酸肌醇( IP3) 和Bax基因表达变化在genistein治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方法:以裸鼠移植人肝癌为对照, 对照组腹腔注入含0.04%DMSO的RPMI1640培养基0.05ml/g，Genistein治疗组腹腔注入genistein 1mg/kg/d，3周后观察肝癌增长情况，并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3 含量,RT-PCR分析癌组织Bax mRNA表达，Western blotting 分析肝癌组织不bax蛋白表达。结果: 治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积(12.6±11.6) mm3 vs (52.3±26.5) mm3，重量(42.7±27.8) mg vs (91.3±31.4) mg）. P<0.01]，IP3 含量显著低于对照组[（13.4±1.4）pmol/mg protein vs （35.3±6.6）pmol/mg protein. P < 0.01]，bax mRNA表达显著高于对照组[RI（灰度与面积之积的相对强度）0.88±0.2 vs 0.56±0.15. P < 0.05]，bax蛋白表达显著高于对照组[RI（灰度与面积之积的相对强度）2.86±0.80 vs 1.37±0.48. P < 0.05]。结论: Genistein能减少IP3 生成,上调肝癌组织bax基因表达,抑制裸鼠移植人肝癌增长。     

肝癌的基因表达谱研究

以基因表达谱芯片对人正常肝及肝癌组织基因表达的差异进行研究比较.将4096条人cDNA用点样仪点在特制的玻片上制备成表达谱芯片;利用肝和肝癌组织的mRNA通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制备成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,重复4次实验,通过计算机数据处理判定基因是否在上述2种组织中有表达差异,筛选出差异表达的基因903条.基因芯片技术可同时定量研究数以千记的基因表达水平,从而鉴定参与肿瘤发生的基因.     

Genistein在调节肝癌HepG2细胞Fas基因表达及诱导细胞凋亡中的作用

目的: 探讨三磷酸肌醇( IP3) 和Fas基因表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法:以肝癌HepG2 细胞培养72h为对照,以20,40.60,80μmol/ L genistein作用于 HepG2 细胞72h和60μmol/L genistein 作用于 HepG2 细胞6h、12 h、24 h、48 h、72 h，应用同位素试剂盒IP3 - [3H] Birtrak检测细胞IP3 含量，RT-PCR分析Fas mRNA表达，Western blotting 分析细胞Fas蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果: 各浓度的genistein作用于肝癌HepG2 细胞72 h，IP3 含量显著高于对照组[（17.7±1.3）pmol/106cells、（11.2±0.9）pmol/106cells、（4.9±0.5）pmol/106cells、（4.8±0.3）pmol/106cells vs （29.4±0.5）pmol/106cells]，Fas mRNA表达显著高于对照组[RI（灰度与面积之积与β-actin的相对强度）0.25±0.002、0.30±0.01、0.28±0.04、0.30±0.03 vs 0.19±0.01]，Fas蛋白表达显著高于对照组[RI1.08±0.01、 1.11±0.02、1.05±0.06、1.03±0.01 vs 0.17±0.01]，细胞凋亡率显著高于对照组[（10.1±0.9）%、（18.7±1.6）%、（28.7±2.5）%、（27.9±2.0）% vs （2.6±0.1）%]；60 μmol/L genistein 作用于肝癌HepG2 细胞6h、12 h、24 h、48 h、72 h，6h后IP3 含量显著高于对照组[（22.6±0.9）pmol/ 106cells、 (12.0±1.4) pmol/ 106cells、(7.5 ±0.8) pmol/ 106cells、(5.6 ±0.5) pmol/ 106cells、(4.3 ±0.6) pmol/ 106cells vs (29.2 ±0.6) pmol/ 106cells。P < 0.01）；12h后Fas mRNA表达显著高于对照组[RI0.24±0.01、0.24±0.01、0.24±0.02、0.30±0.001 vs 0.20±0.01]，6h后Fas蛋白表达显著高于对照组[RI 0.55±0.08、 1.01±0.03、1.62±0.03、1.46±0.09 、1.56±0.04 vs 0.18±0.01]，24 h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组[(7.4 ±0.5) %、(20.5 ±2.0) %、(30.7 ±1.6) % vs (2.6 ±0.1) %。P < 0.01]。结论: Genistein能减少IP3 生成,上调Fas基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

PPARγ基因静默抑制裸鼠肝癌肺转移

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ）基因静默对肝癌裸鼠模型肺转移的影响。方法构建PPARγ短发夹状RNA表达质粒并转染HCCLM3细胞（pshPPARγ组）,以空质粒转染为对照组。观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积,肺转移灶数量及分级。结果pshPPARγ组种植瘤体积为（1．86±0．65）cm^3,肺转移灶数量为（37．2±0．7）个／肺,分级为1—2级;对照组体积为（4．86±1．15）cm^3,肺转移灶数量为（107．8±6．1）个／肺,分级多为3—4级,两组种植瘤体积和转移灶数量、分级的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PPARγ基因静默可降低肝癌种植瘤肺转移数量。     

染料木素抑制HER2阳性人乳腺癌与卵巢癌细胞增殖作用的研究

目的研究染料木素对人HER2高表达乳腺癌与卵巢癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用流式细胞分析技术、western blotting及细胞增殖与凋亡检测试剂盒等检测方法,对染料木素作用于HER2表达阴性的MCF-7细胞与通过稳定转染HER2而获得的MCF-7-1以及BT-474、SKOV-3等HER2阳性表达细胞的效果进行了剂量或时间反应关系的研究。结果浓度为0.1～10μg/ml的染料木素对HER2表达水平低的MCF-7细胞增殖的影响不大,而对HER2高表达的MCF-7-1、BT-474和SKOV-3细胞的增殖有显著的抑制作用(与DMSO对照组相比,P<0.01),且表现出剂量依赖性反应关系。用10μg/ml的染料木素作用12～48 h可以诱导BT-474细胞凋亡或坏死(与DMSO对照组相比,P<0.01),且表现出时间依赖性反应关系。结论染料木素能够明显抑制HER2阳性肿瘤细胞的增殖,这一作用可能是通过下调肿瘤细胞HER2信号转导而介导的。     

Hedgehog信号传导通路在肝癌发生中的作用

目的研究Hedgehog信号传导通路在肝癌发生中的作用，以及抑制该通路对肿瘤细胞生长的影响。方法用免疫组织化学的方法研究了14例肝癌组织切片；使用RT—PCR和Westernblot方法分别研究了9例新鲜肝癌组织标本、4个肝癌细胞系和正常肝二倍体细胞中Hedgehog信号传导通路成员的转录和表达情况。结果免疫组织化学染色显示14例肝癌组织切片中，Hedgehog信号传导通路成员Gli阳性6例（42．9％），Ptch阳性10例（71．4％），Ihh阳性10例（71．4％），Smo阳性12例（85．7％）。RT—PCR和Westemblot的结果显示，在肝癌组织和肝癌细胞系中，Ihh、Ptch、Smo、Gli、Hip基因的转录和蛋白表达可检测到差异。环耙明（KAAD—cyclopamine）可使Hedgehog信号传导通路各成员的表达出现不同程度的降低。结论原发性肝癌中Hedgehog信号传导通路是活化的，环耙明有阻断Hedgehog信号传导通路的作用。     

凋亡抑制因子survivin在肝癌中的表达和意义及其与c-myc的相关性

目的检测肝细胞癌中凋亡抑制因子survivin的表达,研究其与肝癌临床病理特征的关系;同时研究survivin与原癌基因c-myc表达的相关性。方法采用免疫组织化学技术和Western Blotting技术,检测59例肝癌组织及癌旁非癌组织中survivin和c-myc蛋白的表达。结果59例肝癌组织中36例表达survivin蛋白,其中29例c-myc表达阳性,7例c-myc表达呈阴性或弱阳性;23例不表达survivin蛋白或弱阳性表达者,c-myc的表达5例阳性,18例阴性或弱阳性,而在癌旁非癌组织中未检测到survivin蛋白的表达。survivin的表达与HCC镜下门静脉癌栓及局部肿瘤复发密切相关(P<0.05),而与肿瘤大小,肿瘤包膜,肝硬化及病理分期无关(P>0.05)。HCC中survivin和c-myc表达呈明显正相关(P<0.05)。结论survivin在肝细胞癌中通过加强c-myc的功能促进肝癌的发生发展,survivin有望成为HCC诊断和治疗的新靶点。     

nm23-H 1基因在肝癌预后监测中的研究进展

肝细胞癌（HCC）是消化系统常见的恶性肿瘤,在我国人群中的发病率和病死率很高,nm23-H 1作为一种抑癌基因,其表达水平与肿瘤转移呈显著负相关。目前国内外主要通过免疫组织化学方法进行 nm23-H 1基因检测。有研究表明,在胃癌、肝癌、胆囊癌和结直肠癌等肿瘤中 nm23基因的高表达能有效抑制肿瘤转移。本文就 nm23-H 1基因及其在肝癌预后判断中的研究进展概述如下。     

Mep1A基因在肝癌中的表达及其功能研究

目的 研究甲基多巴α亚基(Mep1A)基因在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞生长的影响,为了解肝癌发病的分子机制奠定理论基础.方法 利用半定量PCR方法和real-time PCR方法检测Mep1A基因在人正常组织和47例癌与癌旁组织中的表达情况,运用RNA干扰和过表达技术观察分析肝癌细胞的克隆形成,通过流式细胞术检测这些细胞周期的变化.结果 在47例癌与癌旁组织中,半定量PCR结果显示Mep1A在33.3%(10/30)的癌组织中高表达,real-time PCR结果显示Mep1A在51.1%(23/45)的癌组织中表达高于癌旁组织2倍以上.在Huh7细胞株中干扰Mep1A基因后,细胞克隆形成能力降低,G2/M期明显增多.过表达Mep1A基因后,在Focus细胞株中细胞克隆形成能力提高,G1/S期细胞增多.结论 Mep1A基因在维持肝癌细胞恶性性状方面可能起到重要的作用,可能是一个新的肿瘤相关基因,对其深入研究可能会发现肝癌发病的新机制,并作为肝癌治疗的分子标记物和潜在的靶点.     

长链非编码RNA在肝细胞肝癌中的研究进展

肝细胞肝癌(HCC)是肝癌最常见的病理类型,患者病死率高。对HCC发生发展机制的认知局限是其不良预后的重要原因。长链非编码RNA(lncRNA)是基因调控的重要组成部分,在不同疾病患者和不同组织中的表达具有特异性。近年来,lncRNA在癌症发生发展中作用的研究逐渐深入,这为HCC早期诊断、病情控制和预后评估提供了新的方法和思路。本文就长链非编码RNA在HCC中的研究进展作一综述。     

肝细胞癌多基因甲基化研究

目的 通过研究肝癌中多基因启动子区的甲基化,说明抑癌基因甲基化在肝癌发生的普遍性。 方法分别抽提冻存的肝癌、癌旁组织和正常肝组织的DNA,利用亚硫酸氢钠具有使未甲基化的胞嘧啶转为尿嘧啶而不改变甲基化胞嘧啶的特性分别设计甲基化引物和非甲基化引物,然后分别进行PCR 反应。我们分别检测了转移抑制基因p15, SYK, TIMP-3, E-cadherin,RASSAF1 和肿瘤相关基因p53, RB1, WT1, p14, p16启动子区在60个肝癌、癌旁和6个正常肝组织的甲基化情况。 结果60个肝癌标本中10个基因的甲基化情况各不相同：从p53的8%~90%的RASSAF1;肝癌组织比癌旁组织的甲基化平均水平高,二者在统计学上有显著差异（P<0.05）。 结论肝癌中有多个基因存在甲基化,且肝癌组织甲基化水平较癌旁组织高。     

CyclinDl在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌患者预后的关系

目的探讨CyclinDl在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌患者预后的关系。方法取133例肝细胞癌患者的癌组织（HCCs）及癌旁组织（PTLTs）病理切片,用免疫组化染色技术分析CyclinDl的表达,统计分析CyclinDl表达强度与肝细胞癌患者临床病理因素之间的关系,并以Kaplan－Meier生存曲线及Log－rank法检测不同CyclinDl表达组的生存差异。最后以单因素及多因素Cox回归模型分析影响肝细胞癌患者预后的独立危险因素。结果免疫组化染色结果发现51例肝癌患者的癌组织中CyclinDl表达阳性,表达率为38．3％（51／133）,而在癌旁组织中仅有4例CyclinDl表达阳性,表达率为3％（4／133）,肝癌组织中Cy－clinDl表达率显著高于癌旁组织（P=0．01）。Mann-WhitneyU检验发现肝癌组织中CyclinDl的高表达与AFP水平（P=0．006）之间呈正相关,且有统计学意义。而CyclinDl表达与性别（P=0．394）、年龄（P=0．232）、肿瘤大小（P=0．842）、肿瘤数目（P=0．479）、包膜（P=0．085）、脉管侵犯（P=0．331）、淋巴结转移（P=0．168）和Edmondson-Steiner病理分级（P=0．521）不相关;Kaplan-Meier生存曲线发现CyclinDl表达强度与患者生存相关,即表达强者预后差（P=0．001）;单因素及多因素Cox回归分析发现肿瘤数目、脉管侵犯、CyclinDl表达是影响HCC患者预后的独立危险因素（P值分别为0．003,0．010和0．017）。结论CyelinDl在肝细胞癌中表达升高,其表达与肝细胞癌患者预后呈负相关,并且是肝细胞肝癌预后的独立危险因素。     

生物钟基因Per3在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的研究生物钟基因Per3在肝细胞癌（HCC）中的表达与临床意义。 方法选取2010年1月1日至2013年12月31日在深圳市人民医院肝胆外科行肝癌根治性切除术且经病理证实的120例肝癌患者的癌组织及癌旁组织。采用免疫组化法检测肝癌和癌旁组织中Per3蛋白的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier时间生存曲线分析Per3表达与患者预后的关系。 结果肝癌组织中Per3蛋白的表达较癌旁组织显著降低,两者比较差异具有统计学意义（χ²=13.02,P<0.01）。在肝癌组织中Per3蛋白低表达的患者肿瘤数目≥2个、瘤体>5 cm及伴门静脉侵袭的发生率显著升高,差异均具有统计学意义（χ²=12.095,P=0.001;χ²=6.305,P=0.012;χ²=4.461,P=0.035）。Per3低表达的HCC患者总体生存率（OS）与无瘤生存率（DFS）均显著降低（P=0.011、0.036）。 结论Per3蛋白在肝癌组织中呈低表达,与患者肿瘤数目、大小、门脉侵袭密切相关,并影响患者的OS和DFS,可以作为HCC患者肝切除术后的预后指标。     

PCR检测原发性肝细胞癌WWOX基因表达及意义

目的检测染色体普通型脆性位点FRA16D(16q23.3-q24.1)上WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及意义。方法用RT-PCR、荧光定量PCR方法分别对40例原发性肝细胞癌癌组织(以下简称肝癌组织)、癌旁组织中WWOX基因的Δ6-8变异情况及其mRNA表达差异进行检测。结果WWOX mRNA在肝癌组织的表达(0.318±0.0559)显著低于癌旁组织(1.0),P<0.05;而且在肝癌组织中Δ6-8变异体的出现频率为20%(8/40),显著高于癌旁组织2.5%(1/40),P<0.05。结论WWOX基因的低表达、变异可能在肝癌的发生发展中起重要作用,并有可能作为肝癌的早期诊断指标之一。     

凋亡相关蛋白bax在肝细胞癌的表达及其意义

目的：探讨原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞凋亡相关蛋白bax的表达情况及其意义。方法：采用免疫组化ABC法检测bax蛋白在66例肝癌组织和24例正常肝组织,以及3种人肝癌细胞系HCC－9204、SMMC－7721、HHCC和1种人正常肝细胞系QZG的表达情况,并分析肝癌组织的bax蛋白表达阳性率与其病理分级间的关系。结果：bax蛋白在正常肝组织中表达阳性率为70．8％（17／24）,在肝癌组织中表达阳性率为43．9％（29／66）,二者差异显著（P＜0．05）。肝癌组织的bax蛋白表达阳性率与其病理分级间未见明显相关性（P＞0．05）。肝细胞系HCC－9204、SMMC－7721、HHCC的阳性细胞计数率分别为43．2％、58．3％和47．1％。正常肝细胞系QZG的阳性细胞计数率为61．0％。结论：与正常肝组织相比,肝癌组织可出现bax蛋白表达下降。肝癌细胞系和正常肝细胞系均可见中等程度的bax蛋白表达。     

布加综合征并发肝癌的危险因素分析

目的:评价布加综合征(Budd-Chiari syndrome,BCS)患者肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的发病情况及HCC发生的危险因素。方法:回顾性分析1988年7月-2018年5月收治的224例的BCS患者的临床资料,对其中199例无其他HCC危险因素的患者进行分析。连续型变量以平均数和标准差的形式表达,分类型变量以绝对值和相对比例的形式表达。累积发病率用Kaplan-Meier法,两组之间比较用Log-rank检验法。对于HCC发病的危险因素用Cox比例风险模型。结果:总共199例患者中167例患者成功介入治疗,32例患者行抗凝及对症治疗。2例介入治疗围手术期死亡患者(术后16 h及48 h死于弥漫性血管内溶血和多器官脏器衰竭)及17例治疗后失访患者未纳入本研究,余下的180例患者最终进行分析。随访过程中,11例发生了HCC,发病率为6.1%。根据Kaplan-Meier法,5-,10-,20-,30-年肝癌累积发病率分别为0.6%,4.2%,7.0%,18.4%。通过单因素及多因素Cox比例风险模型分析,经介入治疗后的肝静脉或下腔静脉的再狭窄的发生是HCC发生的独立危险因素(P<0.05)。发生再狭窄的BCS患者与未发生再狭窄的患者相比,HCC的累积发病率更高(P<0.05)。结论:对于BCS患者,HCC是一个远期并发症,而且肝静脉回流道的再次狭窄是HCC发生的独立危险因素,因此应重视长期随访,及时发现早期HCC,同时对于发生再狭窄的患者应积极处理,方可获得更满意的疗效。     

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3和磷脂酰肌醇蛋白多糖-5在人肝癌组织中的表达及意义

目的分析磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)和磷脂酰肌醇蛋白多糖-5(GPC-5)在肝细胞癌(HCC)组织中及癌旁正常肝组织中的表达规律,探讨其在HCC发生发展过程中的意义。方法以自身配对法收集30例HCC患者经手术切除后的癌灶及癌旁正常肝组织,以HE染色观察肝组织的临床病理学特征,免疫组织化学法检测GPC-3和GPC-5的表达及分布。结果 (1)癌细胞排列呈球团状和条索状,向周围肝组织浸润,部分区域有出血、坏死,并伴有肝细胞增生灶、增生结节及非典型增生结节。(2)在原发性肝癌组织中可见GPC-3阳性表达,其阳性率为70%,高于癌旁正常组织(10%)(P<0.01)。GPC-5在原发性肝癌组织中阳性表达,其阳性率为86.7%,高于癌旁正常组织(7%)(P<0.01)。结论在HCC组织中,GPC-3与GPC-5同时高表达,提示GPC-3和GPC-5均在HCC进展过程中发挥了重要的作用。     

小肝癌的超声诊断

目的探讨超声对≤２．０ｃｍ小肝癌的诊断价值。方法对５６例≤２．０ｃｍ的原发性肝癌进行灰阶超声和彩色多普勒超声分析,这些病例均经手术和病理证实。结果灰阶超声对小肝癌的检出率为８４％（５２／６２）,诊断符合率为８１％（４２／５２）;彩超对小肝癌的血流检出率为８２％（１８／２２）,平均阻力指数为０．７６;灰阶超声联合彩超诊断符合率为８７％（４５／５２）,尤其对１．０～２．０ｃｍ小肝癌诊断符合率可达８９％（４１／４６）。结论超声对≤１．０ｃｍ的小肝癌的检出和诊断仍有一定的困难,而彩色多普勒超声对明确小肝癌的诊断有明显的协助作用。