甲型肝炎疫苗的免疫原性

甲型肝炎病毒(HAV)HFS/GBM株在人胚肾细胞中传10代,正常人成纤维细胞(HFS)上传25代,经终末稀释传5代纯化后,经黑猩猩和人体试验证明已减毒。培养液中的HAV,经硫酸铵沉淀浓缩,0.05%β丙内酯灭活,再经氯化铯(CsCl)密度梯度离心纯化后作免疫接种试验。灭活后残余感染性检测:灭活的HAV接种在HFS上37℃吸附4小时,洗     

甲型肝炎疫苗候选株的性质

本文描述了在人成纤维(HFS)细胞中增殖的甲型肝炎疫苗候选株的生物物理、生化和电镜观察的研究结果。用放射免疫法(RIA)检测HAV抗原,用微量板孔培养的HFS细胞滴定HAV感染性(TCID_(50)),用12烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定HAV蛋白质的分子量。含HAV的上清液取自HAV感染的HFS细胞培养液,待RIA检测HAV抗原滴度达1∶7时,每周收获一次。经硫酸铵沉淀、超速离心6500倍浓缩后,HAV的RIA抗原滴度达1∶     

用细胞培养法制备甲型肝炎灭活疫苗

作者将从FRhK6细胞培养中分离出的甲型肝炎病毒(HAV)CR326株,在LLC-MK2细胞中用转瓶连续培养21天,细胞收集于PBS中,低速离心取其沉淀物。再经溶解、超声破碎和SDS凝胶电泳等一系列纯化过程得到高纯度的HAV。经福尔马林37℃72小时灭活,氢氧化铝吸附,制成高纯度氢氧化铝吸附的HAV灭活疫苗。将此疫苗经不同程度稀释后,给5周龄的ICR雌性小鼠作腹腔接种,每个稀释度接种10只小鼠,并对10只小鼠注射氢氧化铝稀释液作为对照。接种后4周采血,用标准的HAVAB法及改良的HAVAB法(HAVAB-M)     

一种简单的组织培养方法测定甲型肝炎病毒的热敏感性

研究甲型肝炎病毒(HAV)热灭活条件的资料,可作为水质是否能安全饮用的基础,而且关系到一些食品的加工方式是否恰当的问题。作者利用HAV能在FRhK-4细胞上生长的有利条件,研究了HAV在PBS和牛奶中的加热灭活条件。从感染性粪便分离HAV、经FRhK-4细胞传代适应后,从感染细胞收集组织培养液(TCF),液体经过冻、融、超声处理和2,000g离心20分钟,其上清用作接     

甲型肝炎病毒在肝癌细胞培养中的分离和传代

本文报道了直接从急性甲型肝炎病人粪便中分离的甲型肝炎病毒(HAV),在人原发性肝癌细胞系PLC/PRF/5细胞中的传代以及对几次传代后细胞内和上清液中HAV的检测结果.将3例急性甲型肝炎病人的粪便标本制成20%悬液后,分别用免疫电镜(IEM)和酶免疫试验(EIA)检测HAV颗粒和HAV抗原.PLC/PRF/5细胞培养于含5%胎牛血清(FCS)、5%小牛血清(NCS)、100IU/ml青     

重组白细胞介素-2的纯化和生物活性研究

本文在对重组白细胞介素-2(rIL-2)纯化的基础上,用rIL-2进行LAK 细胞活性诱导及NK 细胞活性等研究,现将结果报道如下。材料和方法1.rIL-2的纯化,rIL-2包含体用8moL/L盐酸胍溶解后,上sephede XG-100柱,分部收集,合并活性峰,对50mmoL/L Tris-HClpH8.2溶液透析后,用W650蛋白质纯化系统(wa-ters 公司)进一步纯化。2.rIL-2活性测定:MTT 比色分析法进行,效应细胞为CTLL-2,用酶标仪(英国Flon 公     

甲型肝炎灭活疫苗对血清阴性志愿者的免疫原性

作者用人胚肺成纤维细胞培养增殖甲型肝炎病毒(HAV)HFS/GBM株,经浓缩纯化后,以1∶2000福尔马林灭活,制成0.3μg/ml蛋白量(相当于10～20cm~2细胞培养的产量)的灭活疫苗,置-20℃保存.同时,在部分疫苗中加入1mg/ml的氢氧化铝佐剂,置4℃保存备用.     

经两性离子去垢剂处理获得的HSV-1抗原的免疫原性和特征

本文报道了用两性离子去垢剂EmpigenBB裂解Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染的Vero或MRC-5细胞后获得的HSV-1制剂的免疫原性和特征。作者将5% Empigen PBS加入细胞致病作用达90%并经两次洗涤的HSV-1感染的细胞中,用超声破碎、100,000g离心和PBS透析,其上清即为粗制HSV-1抗原。将此粗制物再进行20%蔗糖密度梯度超速离心,收集顶端部分,于PBS中透析后,获得了部分纯     

脑膜炎球菌脂寡糖中的寡糖-蛋白结合物的制备、鉴定与免疫原性

作者建立了一种将含羧酸的寡糖(OS)结合到蛋白质的方法,并对其特性进行了鉴定。 OS及破伤风类毒素(TT)的纯化:用凝胶过滤法从A群脑膜炎球菌A1株培养液分离纯化制得脂寡糖(LOS),用1％醋酸水解,离心去脂质A和赤水解的LOS,冻干。冻干物溶解后,经离心和经BioGel p-4柱处理除去其中的游离2-酮-3-去氧辛酮糖酸,再冻干。从A1 LOS所得OS的产率约35％。TT经浓缩后,经Sephacryl S-300柱纯化,收集     

单剂病毒体甲型肝炎疫苗对泰国人的安全性、免疫原性和免疫应答动力学研究

作者破碎MRC-5细胞,收集甲型肝炎病毒(HAV)RG-SB株后,超速离心纯化,福马林灭活,然后与磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和来自甲型流感病毒类A/新加坡/6/86(H1N1)株中纯化的血凝素(HA)结合制成病毒体(virosome)悬液,吸附后,适当稀释成无菌、无热原的疫苗悬液(每剂0.5ml,含500放射免疫测定单位的HAV抗原、10μgHA和约300μg总磷脂)。 受试对象为79名年龄在17～35岁的泰国成年志愿者,无肝炎史且肝功能正常。于三角肌肌肉注射0.5ml疫苗,并在免疫前及免疫后30、90、180和360天分别采集静脉血,用ELISA检测抗-HAV。免疫后连续三天记录不良反应,30天后复测肝功能。     

赤子爱胜蚓中溶栓成分的提取分离与纯化

本文通过对赤子爱胜蚓(Eisenia foelide)的溶栓成分的跟踪,确定出赤子爱胜蚓中活性成分的提取、分离、纯化的方法。首先5倍量生理盐水提取3次,每次2h。纯化方法是组织匀浆用硫酸铵分段盐析后沉淀用20mM(pH8.0)Tris-Hcl缓冲液透析后经DEAESepHadex A-25柱过滤,得到活性组分,再经柱过滤,用凝胶电泳测其分子量为25KD和30KD。     

一种从病人粪便中提取甲型肝炎病毒的技术

第三代检测甲型肝炎病毒(HAV)抗体试验需要特异性强的抗原。鉴于HAV在体外培养较为困难,作者建立了一种二步蔗糖离心法从病人粪便中提取HAV抗原的技术。该HAV抗原用于酶免疫试验(EIA)测定HAV抗体(IgM和IgG),具有很好的免疫化学活性,可以稀释40～150倍后使用。第一步取病人的HAV阳性粪便,制成20%的抽提物,以2500转/分,20℃离心1小时。取沉渣再次抽提可以提高HAV产量。将上清通过40%蔗糖溶液离心(7500转/分,3小     

纯化的甲型肝炎灭活疫苗的纯度评价

在培养基灌流生物反应器中用 MRC- 5细胞培养甲型肝炎病毒 (HAV) ,然后用层析和沉淀法进行病毒纯化 ,最后 ,用甲醛灭活病毒并将其吸附于氢氧化铝佐剂上 ,制成 HAV疫苗 (VAQTATM)。　　经十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳后 ,用考马斯亮蓝或银染色及光密度测定法分析纯化的 HAV,发现 95 %以上的蛋白是病毒核壳蛋白 ,形成与 VP0、VP1、VP2和VP3相对应的 4条带 ,未发现其他杂带。用抗 MRC- 5抗体进行的蛋白印迹法也未测到来源于宿主细胞的成分。高效分子筛层析、免疫印迹等方法均未检测出纯化过程中的残留物。用高 p H阴离子交…     

一种新的甲型肝炎侯选疫苗的高度免疫原性及良好耐受性

作者在52名甲型肝炎病毒(HAV)抗体阴性的健康志愿者中评估了一种新的福马林灭活、以明矾为佐剂的甲型肝炎全病毒疫苗(VAQTA)的免疫原性及耐受性.疫苗病毒从1例感染HAV CR326F株的病人粪便中分离获得,经恒河猴肾细胞(FRhK6)及人二倍体成纤维细胞(MRC-S)连续传代得到足够量的减毒HAV,由化学方法裂解细胞培养液获取病毒,再经聚乙二醇浓缩,高压液相层析纯化至纯度达90%,福马林37℃灭活5天,期间除菌过滤两次.受试者初免剂量为1ml,经三角肌注射,6个月后加强免疫1次.初免后两周,受试者除1人外(98%),抗HAV抗体浓度均超过设定的最低保护水平10IU/L,抗体几何平均浓度(GMC)为165IU/L.4周后受试者100%抗体阳转,抗体GMC增加4倍,达728IU/L.初免后6个月,50名加强免疫的志愿者除1人外(98%),抗HAV抗体均维     

用非离子梯度离心法大规模纯化灭活的HAV

甲型肝炎病毒(HAV)的密度为1.32～1.34g/ml,在CsCl梯度介质中由于铯阳离子结合到HAV抗原上,可出现少量密度较大的颗粒。Renografin-76是一种非离子梯度介质,适用于连续流梯度离心以大规模纯化HAV,用6.7mM PBS稀释Renografin使成400ml10%、250ml 40%和380ml 62.5%的梯度,铺于一个静止的J-1转头,转头逐渐加速到45000rpm,以每小时1升的速度泵入2升灭     

采用PLC/PRF/5细胞培养甲型肝炎病毒连续生产血清学诊断用抗原

作者以甲型肝炎病毒(HAV)CF53株感染人肝癌细胞系PLC/PRF细胞后,将细胞在含有2.5%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640营养液中32℃培育6～12个月。自开始培养后20天起,每周收获培养上清液,总共可收获5～101上清液。上清液经2000×g离心10分钟,澄清后贮存于-70℃。用放射免疫法(RIA)检出每代的HAV抗原(HAAg)滴度约为50;而传染性病毒滴度则由10~(3.7)半数组织培养感染量(TCID_(50))/ml增至10~(6.0)TCID_(50)/ml。     

制备大量高纯度正常密度的嗜酸性细胞

作者用不连续密度梯度离心法与抗体被动选择相结合,用CD16单克隆抗体进行被动选择,以纯化嗜酸性细胞,得到高纯度、高含量的制品.用白细胞分离法取健康献血者白细胞成份,通过3次离心去除血小板.用磷酸盐缓冲液悬浮白细胞,取33ml悬液加16ml淋巴细胞分离液,密度为1.077～1.080,置于50ml锥形离心管中离心,可将单核细胞分离.用Hank's平衡缓冲液(HBSS)洗粒细胞两次后,每单位体积的压积细胞用2～3倍体积     

甲型肝炎病毒的血凝作用及血凝抑制抗体试验

本文首次报道甲型肝炎病毒(HAV)HM175株在类似于其他肠道病毒致血凝的条件下,具有使多种红细胞发生凝集(HA)的特性.作者由此特性建立了检测HAV特异性抗体的血凝抑制(HAI)试验.感染HAV的MRC-5细胞培养液经澄清、离心、磷酸盐缓冲液悬浮及100倍浓缩制成血凝素,用同法以未感染细胞培养液制成对照抗原制剂.用人O型红细胞及豚鼠和鹅的红细胞进行检测,结果表明,HAV使人O型红细胞发生凝集的最佳pH为5.4～     

甲型肝炎灭活疫苗的制备及其免疫原性

应用人二倍体MRC-5细胞,待生长融合成单层细胞后,接种甲型肝炎病毒(HAV)LSH/S株,经32℃旋转培养,换液,冲洗补加液体,离心,最后在-80℃低渗液中冻存。     

用病毒RNA抽提及分子杂交法检测甲型肝炎病毒

本文报告了从感染甲型肝炎病毒(HAV)标本中抽提病毒RNA(HAV RNA),及用分子杂交法检测HAVRNA的技术,并与免疫电镜(IEM)、放射免疫测定法(RIA)的敏感性作了比较。作者用略经修改的胍盐/热酚法(酚/氯仿多次抽提),从感染HAV HM-175株的培养细胞胞浆、狨猴粪便和肝脏、感染MS-1株病人的粪便和血清中提取HAV RNA,然后进行分子杂交。用插入野毒株HM-175cDNA的重组质粒PBR322制成HAV探针,用[α-~(32)P]dCTP标记。用放射自显影观察杂交结果。作者将感染HAV的培养细胞阳性对照