AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

目的　观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP或 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG1112对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 6 0 μmol·L-1,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3。AG1112对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP和酪蛋白分别呈混合性和非竞争性抑制作用。结论　由于AG1112对重组人CK2显示出很强的抑制作用 ,因此重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点     

氨氯吡咪对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制动力学

目的　了解氨氯吡咪对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来测定CK2的活性。结果　氨氯吡咪对重组人CK2全酶具有抑制作用 ,IC50 为 2 5 7 5 7μmol·L-1 。氨氯吡咪对重组人CK2全酶的动力学研究表明 :它与GTP呈竞争性抑制作用 ,抑制常数Ki 值为 2 36 30 μmol·L-1 ;与酪蛋白呈非竞争性抑制作用 ,抑制常数Ki 值为 1 6 3 6 3μmol·L-1 。结论　氨氯吡咪除了能抑制cAMP或ATP依赖的酶以外 ,还可以抑制以GTP为磷酸供体的蛋白激酶。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点     

AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

目的观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的 [32P]放射活度来检测.结果重组人CK2是一种Ca2+、c AMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1112对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为6.0 μmol·     

Tyrphostin AG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的:观察TyrphostinAG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法:利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-³²P]ATP或[γ-³²P]GTP的[³²P]放射活度来检测。结果:重组人CK2是一种Ca²⁺、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG34对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC₅₀为1.0 μmol·L^-1,抑制作用远大于CK2已知抑制剂5 ,6 -二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。AG34对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论:AG34不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

Tyrphostin AG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的 :观察TyrphostinAG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。 方法 :利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果 :重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG34对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 1.0 μmol·L 1,抑制作用远大于CK2已知抑制剂 5 ,6 -二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)。AG34对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 :AG34不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂 .重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

槲皮素-7-硫酸酯钠盐对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的　观察槲皮素 7 硫酸酯钠盐 (SQMS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制。方法　通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP的 [3 2 P]放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性。结果　SQMS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用 ,IC50 为 1 37μmol·L-1。CK2的动力学研究表明 :SQMS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论　SQMS是CK2的抑制剂 ,SQMS的抑制作用与ATP呈竞争性、与酪蛋白呈非竞争性     

吩噻嗪类化合物抑制肿瘤细胞多药耐药及蛋白激酶C活性的三维构效关系研究

体外条件下吩噻嗪类衍生物（PTZs)逆转多药耐药（MDR）活性的实验结果表明，2位取代各种基因逆转MDR作用强度依次为：COC3H7＞CF3＞COCH3＞H，边链哌嗪环4‘位取代基作用强度为：CH3＞COOC2H5＞C2H4OH，选出代表性化合物测定对鼠脑蛋白激酶C（PKC）的抑制活性，进行PTZ s抑制PKC活性的初步三维构效关系研究，利用计算化学和分子图形学手段探讨PKC抑制剂与PKC蛋白分子间可能的相互作用模式，本研究为进一步探索PTZs,PKC和MDR三者间的内在机制和设计有效PKC抑制剂或多药耐药逆转剂提供了新的途径。     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英文)

目的　为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法　利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 +、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 2 0 .8μmol·L- 1,抑制强度介于已知CK2抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)之间。AG114对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈混合竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论　AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点     

山萘黄素是一种有效的体外重组人蛋白激酶CK2的抑制剂(英文)

目的　为了筛选蛋白激酶CK2的抑制剂,观察山萘黄素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及其酶动力学机制。方法　利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,通过测定转移到CK2底物上的[γ32 P]ATP的32 P的放射性活性来检测CK2的活性。向反应体系中加入不同浓度的山萘黄素,观察其对CK2的抑制效果;通过固定酪蛋白浓度为2g·L- 1 ,ATP浓度为1 0 ,2 0 ,4 0和80 μmol·L- 1 或固定ATP的浓度为1 0 μmol·L- 1 ,改变酪蛋白浓度( 1 ,2 ,4和8g·L- 1 ) ,观察其酶动力学机制。结果　山萘黄素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50 =1 .9μmol·L- 1 )。抑制作用强于已知的CK2抑制剂白杨素、桑色素和金雀异黄素。酶动力学分析表明,山萘黄素与ATP(Ki=1 .1 μmol·L- 1 )及酪蛋白(Ki=3 .1 μmol·L- 1 )均呈非竞争性抑制CK2的活性。初步的化合物结构分析表明,2′和3位上的羟基对山萘黄素及芹黄素发挥其抑制效果产生实质性的负面影响。结论　山萘黄素是一种新的体外蛋白激酶CK2的有效抑制剂。黄酮类CK2的抑制剂可能通过不同的位点作用于CK2 ,这种作用主要取决于其羟基的数目和位置     

Tyrphostin AG1478对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-~(32)P]ATP或[γ-~(32)P]GTP的~(32)P放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca~(2 )、[KG*2]cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1478对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC_(50)为25.9μmol/L,抑制作用接近于已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3),稍小于5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB).AG1478对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP和酪蛋白均呈竞争性抑制作用,是一种双底物抑制剂.结论:AG1478不仅是高效特异的表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且也是一种新型有效的蛋白激酶CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便的筛选和开发有效CK2抑制剂的分子靶点.     

槲皮素-7,4′-二硫酸酯钠对重组人CK2全酶的抑制作用及动力学分析

目的观察槲皮素-7,4′-二硫酸酯钠(sodium quercetin-7,4′-disulphate,SQDS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制。方法通过测定转移到CK2底物上的［γ-³²P］ATP的³²P放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性。结果重组人CK2是一种Ca²⁺,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。SQDS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用,IC₅₀为4.4 μmol·L^-1,抑制作用大于已知CK2抑制剂DRB和A3。CK2的动力学研究表明:SQDS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论SQDS是有效的CK2抑制剂,对于开发更有效的CK2抑制剂及将SQDS用于临床提供了一定的实验依据。     

木犀草素对蛋白激酶CK2的抑制作用

目的观察体外以及细胞内木犀草素对蛋白激酶CK2活性的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ3-2P]ATP的32P的放射性活度,探讨木犀草素对重组人CK2全酶以及HL-60细胞内CK2活性的抑制作用,并采用L ineweaver-Burk作图法分析其酶动力学机制。结果木犀草素能显著抑制重组人CK2活性(IC50=0.86μmol.L-1)以及HL-60细胞内的CK2活性,其对细胞内CK2的作用效果要强于阳性对照TBB。酶动力学分析表明,木犀草素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19μmol.L-1),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11μmol.L-1)。结论木犀草素是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。