榄香烯复合瘤苗主动免疫的抗肿瘤效应

为研究我们研制的榄香烯(elemene)复合瘤苗主动免疫抗瘤效应的分子机制及其与热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的可能关系,本文首先观察、比较厂榄香烯或/和热休克复合瘤苗主动免疫的抗瘤效应.1 材料与方法1.1 主要药品和试剂1%榄香烯注射液(批号940823,大连金港制药).25%戊二醛(E Merk).RPMI 1640全培基(Gibco RPMI 1640含15 mmol/L Hepes,2 mmol/L谷氨酰胺、常规量抗菌素、20%小牛血清,杭州四季青公司).1.2 实验动物和瘤株BALB/c系小鼠(H-2~d)和异基因型小鼠腹水型肝癌H22(H-2~-)高淋巴转移亚系以及615系小鼠(H-2~k)和其同基因型L615 T淋巴细胞性白血病,均由本室常规传代、保种.实验动物体重20～26g,按体重分类后随机分组,每组20只,雌雄各半.1.3 瘤苗制备和主动免疫实验     

榄香烯对肿瘤细胞生物学特性的影响及其瘤苗免疫效应机制的研究

为研究我们创制的榄香烯(elemene,E)复合瘤苗主动免疫抗瘤效应的分子机制及其与热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的可能关系,本文通过光镜、电镜和流式细胞术(FCM)以热休克为比照,研究了抗癌中药有效组分榄香烯对小鼠H22腹水型肝癌(H-2~-)和L615白血病(H-2~k)细胞某些生物学特性(生存率、形态结构、坏死、凋亡、细胞周期等)的影响;在此基础上着重观察比较了:1.榄香烯或/和热休克H22和L615瘤苗的主动免疫保护效应.2.榄香烯复合瘤苗诸因素(榄香烯、MMC、戊二醛)与热休克对两种肿瘤细胞膜HSP70和HSP90表达的影响.3.分离纯化榄香烯、MMC诱导的H22肿瘤细胞的HSP70-肽复合物体内验证其主动免疫预防效应.     

榄香烯瘤苗抗原冲激的树突状细胞对HCA-F的免疫保护作用及其机制的研究

树突状细胞(Dendritic cell,DC)在肿瘤主动特异性免疫治疗中起重要作用,肿瘤抗原冲激的DC作为一种新型瘤苗颇受研究者的重视.本实验中我们选择小鼠肝癌H22的高淋巴道转移亚系HCa-F(H-2~-)为主要肿瘤模型,采用榄香烯瘤苗可溶性上清冲激小鼠脾脏DC,研究抗原冲激的DC对HCa-F的免疫保护作用及机制.主要实验方法和结果如下:①从未处理的HCa-F细胞及其榄香烯瘤苗中提取可溶性上清冲激正常小鼠脾脏DC,所得DC分别称为HCa-F上清冲激的DC和瘤苗上清冲激的DC(以下简称HDC和TDC).②转输HDC或TDC(5×10~5个细胞/只)给正常615系小鼠,7d后用HCa-F(5×10~5个细胞/只)攻击,观察小鼠瘤重及存活时     

过继性免疫化疗(Ⅰ)单倍型淋巴细胞输注治疗白血病研究

为了探讨由化疗与单倍型淋巴细胞输注联合组成的过继性免疫化疗方案,对白血病的治疗作用.方法:①建立亲代Balb/C(H-2~d)供鼠→615(H-2~k)× Balb/c(H-2~d)F_1 代(H-2~(kb) 受鼠输注相关GVHD动物模型,和615(H-2~k)×Balb/c(H-2~d)F_1 代(H-2~(kd)受鼠L615白血病模型.②单倍型淋巴细胞经不同剂量(60)~Coγ照射后,体外观察γ照射对T淋巴细胞增     

痘苗病毒及/或β一榄香烯瘤苗主动免疫的研究—Ⅱ对L615的免疫保护效应

痘苗病毒(VV)可用于修饰肿瘤细胞使其异种化。莪术油及其有效单体β-榄香烯(β-elemene)瘤苗也能产生明显的免疫保护效应。本文用615近交系小鼠的白血病株(L615)为模型,联合应用VV及β-榄香烯处理瘤苗,以增强免疫效应,为VV及/或β-榄香烯的临床应用提供了某些可行性的实验依据。     

β-榄香烯对肝癌细胞SK-hep-1的迁移和侵袭力的影响

目的:观察β-榄香烯对肝癌SK-hep-1细胞的侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其对MMP2基因的调节.方法:将SK-hep-1细胞分为3组:control组、β-榄香烯(80μg/ml)组、TGF-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)(10μg/ml)组,RT-PCR检测各组细胞的MMP2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)mRNA表达;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对β-榄香烯作用的肝癌细胞迁移和侵袭能力进行分析.结果:β-榄香烯作用肝癌细胞中MMP2mRNA表达低于control组和TGF-β1组(P<0.05).β-榄香烯组穿膜细胞数(50±10)少于control组(150±16)及TGF-β1组(300±13),(P<0.05).β-榄香烯组细胞的迁移数(92±8)明显低于control组(180±14)及TGF-β组(300±20),差异具有统计学意义(P<0.05).结论:β-榄香烯能下调肝癌细胞SK-hep-1的MMP2mRNA表达,降低肝癌细胞的侵袭、迁移能力.     

615系小鼠接种遵医肿瘤755(ZM_(755))后脾细胞玫瑰花环反应的动态变化

大量实验与临床研究表明,带瘤机体的免疫机能状态随肿瘤的发展而不断改变。探讨其规律和机理,对肿瘤发病学、肿瘤免疫学的理论与临床实践均有一定的意义。本文观察了615系小鼠于接种遵医肿瘤755(ZM755)后,带瘤宿主脾细胞E和EAC玫瑰花环反应的动态变化,发现随着肿瘤的不断增长,两者均明显地、进行性地抑制。现将结果扼要报告如下。一、材料和方法(一)动物和瘤株1.动物:615系小鼠,自北京中国医学科学院药物研究所引入,在本实验室内按近交系要求饲养繁殖。2.瘤株:遵医肿瘤755(ZM755),系615系小鼠腿部自发恶性间叶瘤在同系小鼠中移植而成。现已传至220代。ZM755常规接种于615     

榄香烯对小鼠瘤株Hca-A2/p化疗的影响

目的:观察榄香烯对小鼠肝细胞癌的治疗作用,为临床肝癌的治疗提供理论依据。方法:做荷瘤小鼠动物模型,癌瘤内多点多次注射给药,用RT-PCR方法测其多药耐药基因(multidrugs resistancegene,mdr1)的表达,同时观察抑瘤率、肿瘤坏死情况和小鼠死亡率。结果:荷瘤组(LT)、化疗组(C)、榄香烯组(E)和化疗药 榄香烯组(CE)的mdr1分别为(92·9%、100·0%、14·3%和14·3%),其中E、CE与LT的mdr1比较,P<0·05;LT (42·9%)与C (85·7%)的mdr1比较P<0·05。C、E和CE抑瘤率分别为(35%、27·2%和41·8%)与LT比较P<0·05。C、E和CE的死亡率分别为(15%、10%和5%)与LT(40%)比较P<0·05。病理示CE肿瘤坏死明显,大体见肿瘤腐肉状,色晦暗,质软,小鼠生存活跃。结论:瘤株Hca-A2/p的mdr1的自然表达率为92·9%。化疗使mdr1强表达增加。榄香烯可降低mdr1的表达并有良好的抗肿瘤的作用,与化疗药合用抗肿瘤作用更佳。     

3个615系小鼠乳癌瘤株雌激素受体状态测检报告

本文报告615系小鼠的三个可移植性乳腺癌实体瘤型及一个腹水型的乳腺癌瘤株ER测定的结果。一、材料与方法一、标本:系大连医学院病理生理教研室所建615系小鼠三个乳腺癌实体瘤Ca759、Ca763、Ca761及一个腹水型Ca761。它们都是615系小鼠自发乳腺癌经同系移植而建立的小鼠乳腺癌模型。Ca759经病理组织学鉴定属B型乳腺癌,已传200代以上,生长稳定,平均生存期为26.9±3.6天。Ca763生长速度最快,平均生存期17.0±2.1天。病理组织学为     

榄香烯乳注射液抗癌作用的研究

目的探讨榄香烯乳注射液对小鼠移植性肿瘤及肿瘤细胞株的抗癌作用.方法体内抑瘤试验:选肝癌H22、肉瘤S-180、艾氏腹水癌等瘤株.腹腔注射给药,观察记录对腹水癌的生命延长作用及对实体瘤的抑制作用.体外细胞毒试验:选用K562白血病、Hela宫颈癌细胞株,采用MTT法,计算对肿瘤细胞株平均细胞生长抑制率.结果榄香烯乳注射液能明显延长腹水型荷瘤小鼠的生存时间.对K562白血病、Hela宫颈癌细胞株有一定的抑制作用.结论榄香烯乳注射液对肿瘤细胞体内抑瘤试验、体外细胞毒试验均有明显的抑制作用.     

瘤内注射榄香烯乳治疗肝癌的疗效观察

目的 观察超声引导下经皮肝穿刺瘤体内注射榄香烯乳注射液治疗肝癌的疗效,以探讨本法的临床应用价值.方法 59例肝癌病例分为瘤体内注射榄香烯乳注射液(研究组)26例和静脉输注榄香烯乳注射液(对照组)33例,治疗3周期(每周期21天)后观察疗效,分析治疗后瘤体大小和生活质量状况.结果 研究组肿块缩小率及肿块回声增强率均高于对照组(57.7％、76.9％ vs 24.2％、30.3％,均P＜0.001),瘤体内血流信号减少率、瘤体内血流峰值流速减低率和瘤体内血流阻力指数减低率亦高于对照组(61.5％、34.6％、34.6％vs30.3％、18.2％、21.2％,均P＜0.01).研究组的CR、PR、SD、PD、肝区疼痛缓解率、生活质量评分、无进展生存亦均高于对照组(均P ＜0.05).结论 瘤体内注射榄香烯乳注射液治疗肝癌有较好疗效.     

榄香烯和恩度对原发性肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨榄香烯和恩度对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用噻唑蓝还原法(MTT法)观察榄香烯和恩度对HepG2细胞活性的影响,流式细胞仪检测对细胞周期的影响,Annexin V/PI双染在流式细胞仪上检测对细胞凋亡的影响。结果:榄香烯和恩度能抑制HepG2细胞的活性,呈现时间和剂量依赖性;榄香烯和恩度主要作用肝癌细胞周期的G1期;榄香烯和恩度可诱导细胞发生早期凋亡,并呈现时间和剂量的依赖性。结论:榄香烯和恩度都能抑制HepG2细胞的增殖和诱导细胞的凋亡,两种药物联合对于肝癌细胞抑制生长和诱导凋亡表现出协同作用。     

β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,将β-榄香烯(浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml),单独作用于乳腺癌MCF-7细胞,加药24h、48h后用噻唑蓝(MTT法)法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测用药24h后对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响,选取合适的药物浓度(β-榄香烯125μg/ml),与顺铂(3μg/ml)进行联合用药。加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h后药物组对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响。结果:MTT法结果显示β-榄香烯单独用药24h、48h后,与对照组相比,实验组乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组(P<0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P<0.01)。与对照组相比,榄香烯能够使MCF-7细胞产生明显的G0/G1期阻滞(P<0.01)。结论:β-榄香烯单独或与顺铂联合作用均能抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药组,β-榄香烯和顺铂可协同(CDI<1)促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能与G0/G1期阻滞有关。     

JNK/SAPKs信号转导通路在榄香烯抗肝癌效应中的作用

目的:探讨JNK/SAPKs信号转导通路在榄香烯抗肝癌效应中的作用,为阐明榄香烯抗癌效应的分子机制提供参考.方法:气相色谱法检测榄香烯在Hca-F肝癌细胞内的分布.透射电镜观察SMMC7721凋亡细胞的超微结构变化.利用Western-blotting对榄香烯处理的HepG2肝癌细胞JNK/SAPKs进行的活性分析.利用RT-PCR检测榄香烯处理的SMMC7721肝癌细胞的DAXX基因表达.结果:榄香烯标准品在8.42 min时出现洗脱峰.榄香烯处理3 h后,SMMC7721细胞开始发生具有凋亡特征的变化.榄香烯处理组HepG2细胞的JNK/SAPKs激酶活性次于热休克处理组,高于对照组.榄香烯处理的SMMC7721细胞组未见DAXX基因的表达.结论:榄香烯能够进入细胞内.其引起的肿瘤细胞凋亡可能是通过活化JNK/SAPKs来诱导的.DAXX传人途径在榄香烯诱导的JNK/SAPKs活化过程中可能不起主要作用.     

榄香烯乳区域动脉灌注对乳腺癌细胞凋邙和增殖的影响

目的观察中药提取物榄香烯乳术前区域动脉灌注对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法应用末端转移酶介导的脱氧核苷酸末端标记法(TUNEL法)和增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡抑制基因蛋白(bcl-2)免疫组化检测方法,观察术前榄香烯乳治疗组14例和Ⅰ期手术组17例乳腺癌标本的凋亡指数,增殖指数和bcl-2蛋白表达强度的差异。结果榄香烯乳治疗组凋亡指数(7.97±1.50)明显高于Ⅰ期手术对照组(2.26±0.49);bcl-2蛋白表达(分值0.50±0.67)明显低于对照组(1.38±0.87),P值均<0.01;榄香烯乳治疗组增殖细胞核抗原指数(44.54±9.99)与对照组(42.80±6.78)差异无显著性,P>0.05;14例术前榄香烯乳治疗组等级相关分析凋亡指数与bcl-2分值呈中度负相关(rs=-0.508)。结论乳腺癌患者术前区域动脉灌注榄香烯乳可降低乳腺癌细胞bcl-2基因蛋白的表达,诱导乳腺癌细胞凋亡。     

原代乳腺癌细胞对β-榄香烯体外敏感性研究

目的:探讨β-榄香烯在乳腺癌临床治疗中的作用。方法:采用手术切取的乳腺癌组织制备原代乳腺癌细胞悬液,MTT法体外药敏实验检测原代乳腺癌细胞对β-榄香烯及数种临床常用化疗药的不同敏感性,并进行比较分析。结果:原代乳腺癌细胞对β-榄香烯的敏感性低于5-FU、ADM及MMC,且有显著性差异(P<0.01);乳腺癌细胞对β-榄香烯具有中度敏感性而与常用化疗药物相近,且无显著性差异(P>0.05)。结论:β-榄香烯对乳腺癌的临床治疗具有中度敏感性可作为二线药。     

细胞毒T淋巴细胞治疗脑胶质瘤的实验研究

前文研究表明,榄香烯/丝裂霉素瘤苗在小鼠体内可诱导出杀伤G422瘤细胞很强的异源CTL,故选用CTL做脑内治疗胶质瘤实验.用微量注射器在小鼠右额叶直接穿刺,脑内注射G422细胞后第2天,再在原来穿刺部位分别注射CTL rIL-2,CTL,rIL-2,生理盐水(对照组)治疗.结果表明:单纯CTL治疗小鼠的生存期较rIL-2和对照组的生存期明显延长(P<0.005),CTL rIL-2较单纯CTL治疗明显延长且有长期生存(P<0.025).病理检查未见正常脑细胞损伤和残     

榄香烯或／和热休克对肿瘤细胞凋亡的影响

为了进一步研究榄香烯的抗癌和诱导肿瘤主动免疫效应及其分子机制 ,我们设想它可能与榄香烯作为一种应激原(stressor)诱导肿瘤细胞产生热休克蛋白 (heatshockprotein ,HSP)及HSP -肿瘤肽之间有一定的关系。因此我们对小鼠H2 2腹水型肝癌细胞和L6 15白血病细胞进行不同浓度的榄香烯 (elemene)或 /和不同时间的热休克 (4 2℃ )处理 ,用光镜和透射电镜观察其对形态结构变化的影响 ,并分别采用直接免疫荧光法流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡百分率。结果表明 ,不同浓度的榄香烯和不同温度、不同时间的热休克处理对肿瘤细胞的形态、结构的影响不…     

榄香烯对裸鼠胃癌原位移植瘤血管生成的抑制作用

 目的 观察榄香烯对裸鼠胃癌原位移植瘤生长和血管生成的抑制作用。 方法 采用裸小鼠胃癌原位移植模型,随机分为0.9%氯化钠溶液(NS)组、5-Fu组、榄香烯组和联合组 ,腹腔注射给药。比较各组移植瘤瘤重的差异;免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度 (Microvessel Density,MVD) 和VEGF、p53蛋白表达,RT-PCR法检测VEGF mRNA表达。 结果 联合组裸鼠胃癌移植瘤的瘤重显著低于NS组(P＜0.05);榄香烯组、联合组瘤组织MVD、VEGF蛋 白、p53蛋白及VEGF mRNA表达亦明显低于NS组(P＜0.05);各组移植瘤的瘤重与瘤组织MVD呈正 相关(r=0.669,P＜0.01)。 结论 榄香烯能抑制裸鼠胃癌原位移植瘤生长和血管生成,其机制可能与抑制裸鼠胃癌组织VEGF和突 变型p53的表达有关。     

反义硫代寡核苷酸与榄香烯乳剂合用抗乳腺癌活性的体外研究

目的:研究以HER2mRNA为靶点的反义硫代脱氧寡核苷酸(S-ODNs)HA6722单用及与榄香烯乳剂合用时对HER-2过表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖的抑制作用。方法:选择HER2过表达的MDA-MB-453细胞与HER2低表达的MDA-MB-231细胞,MTT法观察HA6722单用及与榄香烯乳剂合用时对两种肿瘤细胞增殖的影响。结果:HA6722及榄香烯单用均可以剂量依赖方式抑制MDA-MB-453细胞的体外增殖,IC50值分别为41.8±8.1nmol·L-1和79.4±12.1nmol·L-1(n=3,mean±s)。加用低剂量的HA6722可增强榄香烯乳剂对MDA-MB-453细胞的抑制作用,IC50值由合用前的79.4±12.1nmol·L-1降至51.6±8.2nmol·L-1(n=3,P<0.05)。相反,在HER2低表达的MDA-MB-231细胞则没有这种增强作用;在IC50浓度下二者之间的联合指数(CI)为0.72±0.38(n=3)。结论:反义寡核苷酸HA6722与榄香烯乳剂合用对HER-2过表达乳腺癌细胞的体外增殖抑制具有协同作用。