体外培养癌细胞株建株后的保种传代经验探讨

1982年因课题需要,我院进行了人癌细胞的建株工作.我省个旧市是全国肺癌高发区,在省卫生厅的资助下,我们选择了肺癌为建株目标.经过一年多10余次对肺癌手术切除癌组织的精心培养,终于在1982年从一名个旧女工肺癌患者手术切除癌组织中,成功建立了我省第一株人肺腺癌(GLC-82)细胞株,该成果1983年获卫生部科技成果乙等奖、云南省科技成果二等奖.18年来,人肺腺癌(GLC-82)细胞株在体外培养传代已达500代以上,基本做到无霉菌及细菌污染,经检测也未发现支原体污染.我们相继建立了肺泡癌细胞侏(HSS-84)等癌细胞株,经过10多年癌细胞建株及体外培养保种传代工作,从实验技能方面总结出一些经验,在本文中提出与同行共同探讨相互学习.     

天花粉蛋白体外抗人癌细胞株的作用

天花粉蛋白是从瓜萎根块中提得的一种蛋白,具有抑制人癌细胞生长作用。本实验中显示天花粉可以抑制肺癌细胞株(A549)、大肠癌细胞株(HT-29),骨肉癌细胞株(HOS)和人羊膜细胞株(WISH)生长,其IC_(50)分别为18.3,42.1,41.4和79.7μg/ml。以上结果中天花粉蛋白对癌细胞的 IC_(50)明显低于正常羊膜细胞,说明对癌细胞具有选择性。本药对以上细胞的杀伤作用较弱,当剂量为200μg/ml 时对 HT-29,A549和 WISH 的IC_(50)仅分别为11.5%,4.4%和9.3%。     

高强度聚焦超声对体外培养人肝癌细胞的作用

目的：探讨高强度聚焦超声的不同照射剂量对体外培养人肝癌细胞的作用。方法：观察人肝癌细胞经受不同剂量的高强度聚焦超声照射后的温度变化、死亡率、形态变化及其生长曲线。结果：随着高强度聚焦超声照射剂量增大，温度增加，其生物学效应越明显。结论：高强度聚焦超声能够杀灭肿瘤细胞，肿瘤细胞的死亡率与治疗剂量呈正相关。     

茶多酚对膀胱癌细胞株T24和SCaBER体外生长抑制的实验研究

目的　研究茶多酚对膀胱癌细胞株生长的抑制作用及其可能的分子机制。方法　采用MTT法和流式细胞术 ,分析膀胱癌细胞株 (T2 4及SCaBER )经不同浓度的的茶多酚作用前后 ,细胞生长抑制率、细胞凋亡率、细胞周期以及细胞PTEN蛋白表达变化的影响。结果　培养液中加入 0、5 0、10 0、2 0 0、40 0 μg·ml-1茶多酚 ,T2 4细胞和SCaBER细胞的生长抑制率分别为 0、11.2 %、3 3 .4%、3 6.9%、67.5 %和 0、16.5 %、19.1%、3 0 .3 %、3 1.4%。流式细胞仪直方图上见亚二倍体峰 ,2株癌细胞均出现凋亡 ,凋亡率分别为 6.8%、2 5 .1%、2 8.6%、3 6.6%、41.1%和 2 1.4%、2 7.2 %、2 8.5 %、3 6.8%、47.7% ;同时 ,随茶多酚作用浓度的提高 ,阻滞于G1期的 2株癌细胞均明显增加 ,细胞分裂增殖指数 (PI)均降低 ;而细胞PTEN蛋白表达水平分别由 ( 3 7.66± 0 .49)、( 3 8.2 8± 0 .61) (TP ,0 μg·ml-1)增加至 ( 163 .92± 3 .3 6)、( 177.3 6± 10 .79) (TP ,40 0 μg·ml-1) (P均 <0 .0 1)。结论　茶多酚对T2 4及SCaBER细胞生长具有抑制作用 ,其机制之一可能是通过上调PTEN蛋白表达阻滞细胞由G1期进入S期和诱导细胞凋亡。TP抑制T2 4细胞株生长较SCaBER细胞敏感     

人肺癌细胞体外培养及其应用

人癌细胞体外培养是研究癌变机理和癌细胞生物学特性的重要方法。在肺癌细胞培养方面,1955年Frisch首先报告了肺腺癌患者胸水细胞建成的MABEN细胞系,1962年国内何申也报道了人肺鳞癌细胞系。随后,又有众多关于肺癌细胞建系的报道。本文就近年来人肺癌细胞体外培养技术的改进和应用研究两方面作一综述。一、人肺癌细胞体外培养(一)材料和方法肺部原发癌、转移癌,恶性渗液,淋巴结活检,骨髓穿刺及其它转移部位切取的癌组织标本均可用作体外培养的     

6株NDV鄱阳株对肝癌细胞杀伤作用的初步研究

目的：研究从江西鄱阳湖野鸭分离的6株NDV对肝癌细胞的杀伤效应，进-步筛选NDV溶瘤毒株。方法：用MTT法研究6株NDV鄱阳株对两株传代肝癌细胞株Novikoff和HepG-2及一株正常肝细胞株HL-7702的杀伤效应。结果：6株NDV鄱阳株对肝癌细胞株Novikoff和HepG-2有湿著杀伤效应，而对人正常肝细胞HL-7702无明显影响；病毒对细胞的杀伤活性与病毒作用剂量和病毒作用时间成正比；病毒在肝癌细胞中有明显复制增殖现象；Novikoff肝癌细胞对NDV敏感性强于HepG-2肝癌细胞。结论：6株NDV鄱阳株对Novikoff及HepG-2肝癌细胞产生显著的杀伤作用，而对正常肝细胞HL-7702未见明显影响。     

胃泌素在胃癌细胞株的表达及抗胃泌素McAb对胃癌细胞株生长的影响

目的探讨胃泌素在人胃癌细胞株(SGC7901)的表达以及17肽胃泌素和抗胃泌素McAb对胃癌细胞株生长的影响。方法以自制的抗胃泌素McAb为一抗,采用免疫组化链亲和素生物素复合物法(streptavidinbiotincomplex,SABC),检测胃泌素在人胃癌细胞株SGC7901的表达,并用17肽胃泌素和抗胃泌素McAb作用于SGC7901细胞株,通过MTT法检测细胞增殖水平。结果胃泌素在SGC7901细胞株呈强阳性表达,17肽胃泌素在1×10-9mol/L～1×10-5mol/L浓度范围内能显著促进该细胞株的生长,抗胃泌素McAb不仅能抑制胃癌细胞的生长,而且还可抑制17肽胃泌素对细胞的促生长作用。结论胃泌素通过自分泌方式促进人胃癌细胞株SGC7901的生长,抗胃泌素McAb能抑制胃癌细胞的生长,以抗胃泌素McAb为基础的肿瘤靶向生物治疗有进一步研究的价值。     

6株NDV鄱阳株对肝癌细胞杀伤作用的初步研究

目的:研究从江西鄱阳湖野鸭分离的6株NDV对肝癌细胞的杀伤效应,进一步筛选NDV溶瘤毒株。方法:用MTT法研究6株NDV鄱阳株对两株传代肝癌细胞株Novikoff和HepG-2及一株正常肝细胞株HL-7702的杀伤效应。结果:6株NDV鄱阳株对肝癌细胞株Novikoff和HepG-2有显著杀伤效应,而对人正常肝细胞HL-7702无明显影响;病毒对细胞的杀伤活性与病毒作用剂量和病毒作用时间成正比;病毒在肝癌细胞中有明显复制增殖现象;Novikoff肝癌细胞对NDV敏感性强于HepG-2肝癌细胞。结论:6株NDV鄱阳株对Novikoff及HepG-2肝癌细胞产生显著的杀伤作用,而对正常肝细胞HL-7702未见明显影响。     

国产蜂胶对肝癌细胞体外杀伤作用的研究

采用MTT细胞毒实验分别测定不同浓度的国产蜂胶对体外培养人肝癌细胞株细胞的杀伤率，并与商业化标准蜂胶（Sigma#P-1010）比较。结果示国产蜂胶和标准蜂胶对肝癌细胞喜闻乐见 有杀伤作用，且呈浓度-抑制率相关关系。而对正常细胞的影响较小。     

人癌细胞集落培养的改进

人肿瘤集落形成试验(Human TumorClonogenic Assay HTCA)的双层琼脂培养法国内已见报道。我们在此基础上作了改进,以单层琼脂进行HTCA亦取得成功。考虑到很多基层单位尚未具备CO_2培养箱,我们用普通隔水式电热恒温箱培养人癌集落也取得一定经验,现将实验过程介绍如     

新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用

目的：研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法：通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果：NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论：NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。     

几种癌细胞株中脆性组氨酸三联体基因的初步研究

人类多种常见肿瘤中存在染色体 3ｐ14区域等位基因杂合性丢失 (ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ,ＬＯＨ) ,提示该区域内可能存在一个或以上抑瘤基因。 1996年Ｏｈｔａ等[1] 在家族性遗传性肾细胞癌中克隆了一个位于 3ｐ14.2区域的基因 ,称为脆性组氨酸三联体 (ｆｒａｇｉｌｅｈｉｓｔｉｄｉｎｅｔｒｉａｄ ,ＦＨＩＴ)。该基因跨越ＦＲＡ3Ｂ脆性位点和与遗传性肾细胞癌相关的ｔ(3;8)移位断裂点 ,含10个外显子 ,其中第 5～ 9号外显子形成编码框 ,起始密码子ＡＴＧ位于第 5号外显子 ,组氨酸三联体构成蛋白功能域 ,由第 8号外显子编码…     

新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用

目的:研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法:通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果:NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论:NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。     

华鼠尾草对体外人胃癌细胞和鼻咽癌细胞抗癌作用的研究

 本文报道利用体外培养的人胃癌细胞和鼻咽癌细胞,通过细胞生长曲线测定和~3H-TdR掺入实验,研究了中药华鼠尾草(石见穿)的抗肿瘤作用。证明:不同浓度的药液对体外培养的癌细胞具有抑制或直接杀伤作用。     

肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激研究

[目的]研究肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激的意义.[方法]以BCG和高聚生作为佐剂,用60Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激Balblc小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL-2、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB小鼠单克隆抗体,使之激活并增殖.应用苔盼蓝染色法计算细胞的增殖程度(TDLN T淋巴细胞);应用肿瘤肺转移动物模型观察激活后的TDLN T细胞的抗肿瘤效应;应用流式细胞仪检测TDLN T细胞经激活后胞内表达细胞因子水平的变化.[结果]多种单抗联合刺激TDLN T细胞在肾癌肺转移动物模型体内具有较强免疫活性,并产生明显抑瘤效应,抑瘤率达(68.8±4.3)%(P＜0.05).TDLN T细胞的数目也得到了增殖,其中含有IL-2、高聚生、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB单抗的实验组被激活的T淋巴细胞的数量较不含4-1BB单抗的其它实验组增加快,增殖倍数达229±19(P＜0.01).并且此组细胞内表达IFN-γ的水平也较其他实验组高,表达率达(48.23±5.1)%(P＜0.01).[结论]抗4-1BB单抗对激活后的TDLN T细胞中IFN-γ的表达水平的提高起关键作用.该研究为肾癌的肿瘤疫苗研制和体内治疗奠定了实验基础.     

保尔佳抑制体外培养人肝癌细胞的生长

保尔佳是从动物脾脏中提取的活性肽,为证明其直接抗肿瘤细胞生长作用,我们观察了人肝癌细胞株在含保尔佳培养液中的生长情况。１　材料与方法１．１　材料人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４和ＳＭＭＣ－７７２１由第四军医大学病理教研室提供。对照组为含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液,实验组另加入３０μｇ／ｍｌ的保尔佳。１．２　噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法和流式细胞术（ＦＣＭ）获取对数生长期人肝癌细胞制成１×１０４／ｍｌ浓度的细胞悬液,按１０００个／孔的密度接种于２４孔培养板上,过夜后细胞换液,加入实验组和对照组…     

应用MTT法分析青蒿素对人癌细胞系Hella细胞的体外细胞毒作用

MTT法是一种快速、简便的能够半自动化定量分析细胞增殖及药物细胞毒作用的方法.青蒿素是从天然植物青蒿中提取的有效成分,有关文献曾报道了青蒿素的一些生物活性[1].为了探讨青蒿素的抗癌活性,我们通过体外MTT法分析检测了青蒿素对体外培养的人癌细胞系Hella细胞的细胞毒效应,现报告如下.     

人消化道癌裸鼠移植瘤株及体外细胞系的建立

目的利用裸鼠建立人消化道癌的移植瘤株.利用荷瘤鼠皮下移植瘤组织建立人消化道癌的细胞系.方法将手术切除的新鲜肿瘤组织剪碎后植入BALB/C裸鼠皮下成瘤.将荷瘤鼠皮下的肿瘤组织取出剪碎后移入培养瓶中,用含15～20%胎牛血清的1640培养基进行培养,建立体外细胞系.结果建成消化道移植瘤株6株,其中直肠癌2株,结肠癌1株,直肠癌肝转移灶1株,胃癌1株,肝细胞癌1株.建成二例细胞系,分别为直肠癌细胞系(HRC-00)和肝细胞癌细胞系(HHC98).结论建成的消化道癌移植瘤株和细胞系均具有人原发癌的结构特点及生物学行为,可作为人消化道癌的体内外研究对象.     

亚甲兰对人肺癌细胞(LTEP-a_3)的体外杀伤作用的研究

用直接杀伤,细胞生长的抑制及克隆形成能力的抑制等方法,试验了亚甲兰体外的抗肿瘤效应,发现其抗瘤作用有剂量及时间依赖性两种特征1μg/ml亚甲兰处理4小时,从肺腺癌细胞LTEP—a_3克隆存活为对照的10^(-1),48小时为10^(-2)72小时为10^(-3),亚甲兰浓度在1μg/ml以以上,延长作用时间显著增强了其对癌细胞的杀伤力,当处理时间在24小时或为上时,杀伤效应与浓度相关,亚甲兰对a_3癌细胞主要损伤部位为线粒体。     

细胞生长液与粘附胶原对大肠肿瘤细胞体外生长的影响

本文以ＲＰＭＩ１６４０培养液为基础，探讨了补加因子及粘附胶原对大肠癌细胞体生长和贴壁的影响，结果表明：在基础培养液中添加１０％的补充液可显著促进大肠癌细胞的生长，降低癌细胞对培养液的需求量；并表明，鼠尾胶原可明显促进癌细胞克隆形成率。对于组织贴壁培养，粘附胶原组成功率（６６．７％），亦明显比无胶原被复组（４１．７％）为高。