LDL受体活性检测新方法

用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法测定人外周血淋巴细胞分裂抑制率，从而判断细胞膜ＬＤＬ受体活性，同时设＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法进行对照。共检测正常人７５例，家族性高胆固醇血症（ＦＨ）纯合子７例，杂合子１２例，人群中高血脂患者５２例。结果表明ＭＴＴ比色法可以替代＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法进行人群ＦＨ患者的筛检，初步确定ＦＨ患者的诊断标准为淋巴细胞分裂抑制率大于２０％，并从高血脂人群中检出了３例ＦＨ患者。     

一个纯合家族性高胆固醇血症家系低密度脂蛋白受体基因突变的检测

目的 检测家族性高胆固醇血症(familial hypercholestero-lemia,FH)患者低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的基因突变.方法 提取家系中,临床通过典型特征和血脂检测诊断为家族性高胆固醇血症患者的基因组DNA,首先检测载脂蛋白B100(apoB100)基因R3500Q突变,以排除家族性apoB100缺陷症(Familial defective apoB100,FDB).然后用降落聚合酶链反应(TOUCH-DOWN PCR)扩增该基因的启动子和全部18个外显子,再用单链构象多态性(SSCP)方法分析PCR产物,并对电泳结果异常者进行DNA测序分析.用ANTHEPROT 5.0软件对突变LDLR进行二级结构分析,然后对突变LDLR进行SWISS MODEL在线三级结构预测.结果 通过SSCP和DNA测序发现该家系患者13号外显子存在A606T的纯合突变,采用ANTHEPROT5.0软件的GORⅠ法对突变型和野生型蛋白质进行二级结构分析,可见突变蛋白的突变区域部分螺旋结构被转角结构和无规卷曲取代,其二级结构发生了改变.突变LDLR三级结构预测未发现主链结构的变化.结论 结果表明.LDLR基因A606T的突变可能是此高胆固醇血症家系的致病原因所在.     

椎基底动脉供血不足患者LDL水平测定

2005年1月-2006年5月于我科住院的椎基底动脉供血不足患者43例(A组),均经TCD检查证实,男24例,女19例;年龄(41-75)岁,平均(52±10)岁;病程＜24 h;临床表现为头痛、头晕、恶心、呕吐、颈部不适、心慌、耳鸣、视物模糊、晕厥等;排除明显的肝、肾或心功能衰竭、肿瘤、结核、肝病等疾病.     

低密度脂蛋白的Na125I标记方法

低密度脂蛋白(low-density lopoprotein,LDL)受体是广泛存在于各种组织细胞膜的跨膜糖蛋白.据报道,LDL受体活性与血浆胆固醇水平及冠心病的发生有明显关系,测定细胞LDL受体对动脉粥样硬化发病机理的研究及诊断家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)等具有重要意义.现采用Na125Ⅰ标记LDL,用放射受体测定方法检测人淋巴细胞受体活性,以研究缺血性脑、心血管疾病患者的LDL受体功能状态及其在发病中的意义.此方法敏感、结果可靠、重复性好,可作为早期发现家族性高胆固醇血症的诊断特异指标[1].     

低密度脂蛋白受体基因全长cDNA 序列分析法检测1例家族性高胆固醇血症患儿基因突变

目的建立低密度脂蛋白受体(LDLR)基因全长cDNA序列分析方法并对1例家族性高胆固醇血症(FH)患儿进行基因检测。方法设计7对LDLR基因cDNA引物并验证;对1例临床诊断为FH的患儿进行家系调查和临床体检,提取外周血DNA和RNA,DNA扩增结合测序分析LDLR基因并找出其突变位点;RNA经PCR反转录为cDNA后扩增LDLR基因,将扩增产物进行正、反双向核苷酸序列分析,并与GenBank中LDLR基因的正常序列对比找出突变位点后与传统DNA测序方法结果比对。结果 LDLR基因全长cDNA序列分析方法检测LDLR基因为2 583个碱基,与标准序列完全一致;本例患儿确诊为"FH纯合子",cDNA测序结果与传统DNA测序结果相符,均为第2外显子终止突变和第6外显子点突变及框移突变。结论 LDLR基因全长cDNA序列分析法检测FH患儿突变,与传统DNA方法检测结果相符,可为FH的基因诊断提供新的方法依据。     

单链构象多态性技术在家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因13外显子点突变筛查中的应用

目的 探讨单链构象多态性(SSCP)技术在家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因13外显子点突变筛查上的应用价值.方法 以16例临床诊断为家族性高胆固醇血症(FH)患者为研究对象,提取外周血DNA,扩增LDLR基因第13号外显子片段,组合最优条件进行SSCP电泳并银染.对异常条带进行DNA序列测定确定其突变性质和位置.结果 优化SSCP电泳条件为:不含甘油8%凝胶,在10℃条件下电泳;含5%甘油的8%凝胶,在常温条件下电泳(交联度均为49:1).凝胶厚度均不超过0.4 mm,电泳电压为5 V/cm,在此条件下进行SSCP电泳均可以得到满意电泳图谱.对发现的异常条带,结合DNA测序证实有4例患者LDLR基因第13外显子分别发生A606T,D601N,Y601D,或G636V错义突变,同时均存在1959碱基C→T同义突变.另外4例患者13外显子仅存在1959碱基C→T同义突变.结论 通过优化各种条件进行的PCR-SSCP银染方法,是高胆固醇血症病LDLR基因13外显子点突变初步筛查的有效手段.     

降落聚合酶链反应技术在低密度脂蛋白受体基因点突变研究中的应用

目的 建立降落(TOUCHDOWN)聚合酶链反应(PCR)方法，快速检测家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因点突变。方法 设计LDL-R基因2l对引物，根据TOUCHDOWN原理设计包括启动子和18个外显子特异性片段在内的PCR程序，通过试验选择PCR最佳反应条件，在同一程序中分别对21个片段进行扩增，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，纯化后DNA产物测序分析该方法的特异性。结果 编设退火温度范围从68℃降至54℃的PCR程序，优化PCR扩增条件，电泳检测采用同一程序同时分别扩增的LDL-R基因21个片段条带清晰，测序证实了此组片段的特异性。结论 成功建立降落PCR方法，提示此法为LDL-R基因突变筛查提供了快速可靠的手段。     

清道夫受体SR-AⅡ基因定点突变的研究

目的:利用聚合酶链反应技术对清道夫受体SR-AⅡ基因进行定点突变的研究。方法:利用聚合酶链反应定点突变技术,首先设计4条(其中2条包含预定突变位点)引物,通过3轮PCR反应扩增出含有所需突变位点的片段,通过酶切连接方法将其重组到pEGFP-C1中形成pEGFP-SR-AⅡ-335质粒。结果:在真核表达载体pEGFP-SR-AⅡ-335基础上获得了SR-AⅡcDNAA1201G和A1202C的突变体,测序结果表明在序列中发生了预期的突变,使SR-AⅡ受体蛋白第335位的赖氨酸变为丙氨酸。结论:SR-AⅡ定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

聚合酶链反应-单链构象多态性结合银染技术检测低密度脂蛋白受体基因点突变

家族性高胆固醇血症 (Familialhypercholesterolemia ,FH)是一种常染色体显性遗传病 ,是导致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)和早发冠心病的重要危险因素 ,其发病机理主要为低密度脂蛋白受体 (Lowdensitylipoproteinreceptor,LDL R)基因突变引起LDL R功能异常。本研究应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)结合银染技术对一例临床诊断为FH的先证者的LDL R基因进行研究 ,以探讨其分子病理机制。一、材料和方法1.研究对象 :由我室门诊收集 ,先证者系女性 ,1992年出生 ,籍贯北京。先证者黄色瘤累及肘、膝、踝关节等处易受…     

1例家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变体功能研究

目的分析基因突变对低密度脂蛋白受体(LDLR)功能的影响,探讨其对家族性高胆固醇血症(FH)的可能致病机制。方法对1名FH患者进行基因检测,构建真核细胞表达载体,经定点诱变获得突变受体质粒,并将突变受体质粒转染入人胚肾(HEK293)细胞中,用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察突变蛋白细胞定位,用流式细胞术检测突变蛋白表达及内吞活性变化。结果基因测序显示该名患者发生了LDLR基因Y398X突变;CLSM结果显示突变蛋白部分滞留于内质网中;流式细胞术结果显示细胞表面LDLR表达量减少至5.5%,内吞活性减少至20.1%。结论在临床确诊的FH患者中检测到LDLR致病性基因Y398X突变,在中国为首次报道。该突变造成LDLR转运缺陷,从而导致血浆中胆固醇代谢障碍,继而诱发FH的发生。     

低密度脂蛋白受体相关蛋白5、6在溃疡性结肠炎相关癌中的表达

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白（LRP）-5、LRP-6在溃疡性结肠炎相关癌中的表达及意义。方法以溃疡性结肠炎伴不典型增生（UD）和溃疡性结肠炎相关癌（UCAC）为病例组,溃疡性结肠炎（UC组）和散发性大肠癌（SCRC组）为对照组,应用免疫组化SP法检测各组肠黏膜组织中LRP-5、LRP-6的表达情况。结果 LRP-5、LRP-6在UD组有高表达,与对照组UC、SCRC比较差异有统计学意义（LRP-5：93.3%vs 23.3%、40.0%,P〈0.05;LRP-6：86.7%vs 16.7%、45.0%,P〈0.05）;LRP-6在UCAC组中亦有高表达,与UC组比较差异有统计学意义（80.0%vs 16.7%,P〈0.01）,两者在病例组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 LRP-5、LRP-6在UCAC的发病机制中可能起着较重要的作用,并可能做为一个早期生物学标记物来提示瘤变的可能。     

人低密度脂蛋白受体家族成员的研究进展

人低密度脂蛋白受体家族包括 5个成员 :低密度脂蛋白受体 (LDLR)、极低密度脂蛋白受体 (VLDLR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白 (LRP)、兆蛋白 (megalin)及载脂蛋白E受体 2 (ApoER2 )。Brown和Goldstein从功能和特性查明低密度脂蛋白受体是家族之祖[1] ,它们均是由蛋白质构成的细胞膜受体 ,在人体内有广泛的表达 ,可与多种配体相互作用 ,参与人体的多种生理功能。研究其家族成员结构、功能及检测方法 ,对疾病的诊断、治疗以及预后等均有重要的临床意义。     

羊水细胞低密度脂蛋白受体基因突变分析在家族性高胆固醇血症产前诊断中应用

目的探讨羊水细胞低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor,LDLR）基因突变分析在家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia,FH）产前诊断中的应用价值。方法 3例曾生育FH重症患儿并再次妊娠的妇女及其核心家系成员,提取其外周血基因组DNA,筛查LDLR基因突变;于妊娠16～20周在超声引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取胎儿脱落细胞DNA,分别对家系存在的LDLR基因突变进行检测,判断胎儿是否为重症FH。结果 3个家系均符合FH诊断,并分别在LDLR基因检测到2个互不相同的杂合突变位点;胎儿LDLR基因核苷酸序列分析证实,1号家系胎儿仅携带该家系1个突变位点判断为杂合（轻症）,2号家系胎儿携带该家系2个突变位点判断为复合杂合（重症）,3号家系胎儿未检到该家系的突变位点推测为正常个体。结论 FH孕妇羊水脱落细胞LDLR基因分析安全有效,可尽早发现FH纯合子患儿。     

家族性息肉病10例诊治

目的总结家族性息肉病的临床诊断与治疗经验。方法对1986年12月至2004年12月收治的10例家族性息肉病病人的诊断与治疗进行回顾性分析。结果10例行纤维结肠镜检查，诊断全结肠及直肠息肉8例，直肠及乙状结肠息肉2例。10例均行手术治疗。结论家族性息肉病有明显的家族史，临床以血便为主要表现，同时可伴有腹痛、腹泻、贫血。纤维结肠镜检查可确定诊断。手术是治疗家族性息肉病的首要方法，可根据病人的具体情况选择术式。     

联合检测LDL和hs—CRP在ACS临床应用

目的探讨联合检测血清低密度脂蛋白胆固醇和超敏c反应蛋白在急性冠脉综合征（ACS）诊断中的价值。方法测定85例ACS患者和85例健康对照组者血清LDL—C以及hs—CRP浓度,计算联合LDL—C以及hs—CRP诊断ACS的效能。结果健康对照组与ACS组闻血清LDL—C以及hs—CRP浓度有统计学差异。LDL—C与hs—CRP联合诊断ACS的灵敏度和特异度分别为81．1％％和72．2％,阳性预测值PPV和阴性预测值NPV分别为61．0％％和89．0％。结论鞋合瓷测血清LDL—C与hs—CRP可帮助早期诊断ACS。     

乳腺癌激素受体检测及其临床意义

随着对乳腺癌研究的不断深入 ,相继发现了多种与其相关的分子生物学标志物 ,这对乳腺癌临床治疗和判断预后具有重要指导意义。其中对激素受体的研究尤为重要。1　激素受体研究的背景与概况激素受体主要包括雌激素受体 (estrogenreceptor ,ER)和孕激素受体 (progesteronereceptor,PR) ,迄今为止 ,它们是与乳腺癌的发生、发展及预后最为密切的分子生物学标志物 ,也是目前唯一被广泛接受的作为判断乳腺癌预后的标志物。虽然在 1896年Bentson发现乳腺细胞的增长及癌变与激素密切相关 ,但直到 195 9年才发现与雌激素结合而发挥作用的成分 ,并将…     

阿魏酸钠对HepG2细胞低密度脂蛋白受体mRNA表达的影响

目的探讨阿魏酸钠(Sodium ferulate,SF)对HepG2细胞低密度脂蛋白受体(low density lipoproteinreceptor,LDLR)mRNA表达的影响。方法培养HepG2细胞,不同浓度阿魏酸钠干预后,通过RT-PCR技术,半定量检测LDLR mRNA的表达。结果阿魏酸钠100μg/ml可上调HepG2细胞LDLR mRNA表达26%,200μg/ml可上调46%。结论阿魏酸钠具有上调LDLR mRNA表达的作用,且呈量效依赖关系。     

XTT比色法在细胞活性检测中的应用

XTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞还原形成水溶性的甲产物，在此基础上建立的XTT比色法，较MTT法更加敏感、简便。本文介绍了XTT比色法的基本原理、应用方法以及应用状况。     

再改良MTT法检测NK细胞活性

目的对MTT还原法检测NK细胞活性的方法进行改良.方法通过对NK细胞、K562细胞浓度的选择、效靶细胞共同孵育时间的选择,探讨MTT还原法检测NK细胞活性的最佳条件.结果通过实验确定NK细胞活性测定的最佳条件为NK细胞浓度为2×106/ml,效靶细胞比例为101,效靶细胞在37℃5%CO2饱和湿度的温箱内孵育5h后再加入MTT孵育5h,然后离心、比色、计算.应用本方法检测了25例正常献血员的NK细胞活性为32.5±5.6(%),与3H-TdR掺入抑制法结果相关性良好(r=0.912,P＜0.001).结论本改良法操作快速、简便,结果稳定、可靠,是一种有应用价值的测定NK细胞活性的方法.     

oxLDL对滋养细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1和凋亡基因表达的调控及意义

[目的]研究氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)对滋养细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和凋亡基因半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤相关蛋白(Bax)及Bc1-2表达的调控,并探讨其意义.[方法]以具有妊娠细胞滋养细胞特性的绒癌细胞株JEG-3细胞培养并传代;免疫组织化学、RTPCR和Western-blot检测JEG-3细胞LOx-1和凋亡基因的表达.[结果]免疫组织化学显示LOX-1和凋亡基因Caspase-3在JEG-3细胞浆及细胞膜中均有表达;RT-PCR与Western-blot结果一致,oxLDL可剂量和时间依赖地诱导JEG-3细胞LOX-1、Caspase-3和Bax蛋白及mRNA的表达,下调Bc1-2蛋白及tuRNA的表达,LOX-1抑制剂角又菜胶可逆转上述作用;oxLDL对JEG3细胞LOX-1表达的调控与Caspase-3和Bax的趋势一致,而与Bc1-2的趋势相反.[结论]oxLDL可诱导滋养细胞LOX-1的表达,并可能导致滋养细胞凋亡增加,为进一步解释子痫前期的发病机制提供了实验基础.