ERK通路在调节子宫内膜癌增殖凋亡侵袭中的作用

背景与目的 探讨胰岛素/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在调节子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和侵袭中的作用.方法 将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、1×10<'6>mol/L胰岛素单独刺激组以及不同浓度MEK抑制剂PD98059预处理后再用胰岛素刺激组.Western blot检测各组ERK磷酸化(P-EPK)水平,MTF试验观察细胞增殖、流式细胞仪观察细胞凋亡、transwell小室观察细胞侵袭情况.结果 胰岛素可引起子宫内膜癌细胞ERK活化并以浓度依赖模式被PD98059完全阻断.胰岛素显著促进子宫内膜癌细胞增殖.PD98059可以阻断胰岛素诱导的细胞增殖,在24 h、48 h、72 h三个时间点均有统计学差异(F=204.160;33.850;90.764,均P<0.001).胰岛素显著抑制子宫内膜癌细胞凋亡,并以浓度依赖模式为PD98059所阻断(F=165.99,P<0.001).胰岛素明显增加子宫内膜癌细胞侵袭,PD98059可以部分阻断胰岛素诱导的细胞侵袭(F=23.841,P<0.001).结论 胰岛素可以促进子宫内膜癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,此过程是ERK途径依赖的;胰岛素可以增加子宫内膜癌细胞侵袭能力.此过程是部分ERK途径依赖的.     

ERK/MAPK信号通路活性表达与鼻咽癌细胞增殖凋亡的关系

目的:探讨鼻咽癌细胞中ERK/MAPK信号传导通路异常激活与细胞增殖凋亡的关系.方法:SP法检测36例鼻咽癌、42例对照鼻咽黏膜上皮中p-ERK,Cyelin D1 和Ki-67蛋白的表达.用不同浓度阻滞刺PD98059处理CNE-2Z细胞,Hoechst33342/PI荧光双染法观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡,蛋白质印迹法检测Cyclin D1蛋白表达,免疫细胞化学法检测tyERK、Cyclin D1 和Ki-67蛋白的表达.结果:鼻咽癌组织中p-ERK、Cyclin D1和Ki-67的阳性表达率分别为69.44%(25/36)、80.56%(29/36)和80.56%(29/36),鼻咽黏膜上皮组织中则分别为23.80%(10/42)、19.05%(8/42)和9.52%(4/42),P<0.01.鼻咽癌组织中p-ERK-与Cyelin D1、Ki-67蛋白的表达呈正相关,r分别为0.604和0.668,P均<0.01.不同浓度PD98059作用于CNE-2Z细胞后,可观察到凋亡细胞,检测到凋亡峰,Cyclin D1蛋白表达的减少呈剂量依赖性,p-ERK、Cyclin D1和Ki-67蛋白的阳性表达细胞数减少.结论:鼻咽癌组织及CNE-2Z细胞中存在p-ERK蛋白的高表达和活化异常,p-ERK可能通过上调Cyclin D1和Ki-67的表达促进鼻咽癌细胞增殖并抑制凋亡.ERK信号通路有可能成为鼻咽癌治疗的新靶点.     

PD98059抑制MAPK/ERK信号通路对胃癌细胞生物学功能的影响

目的：研究MAPK/ERK信号通路中关键信号分子MEK和ERK在胃癌SGC-7901细胞中的表达及PD98059抑制MAPK/ERK通路对胃癌细胞生物学功能的影响。方法：体外培养胃癌细胞株SGC-7901,不同浓度（0、25、50、100、200、300和400 mmol/L）PD98059处理24 h后CCK-8法检测细胞增殖率变化;再用0、25、50和100 μmol/L PD98059处理24 h后采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测MEK和ERK mRNA的表达量;Western blot检测MEK和ERK蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。同时设正常胃黏膜上皮GES-1细胞为对照。结果：与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌SGC-7901细胞中MEK和ERK mRNA的表达升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）;p-MEK、p-ERK蛋白的表达亦显著升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。0~200 μmol/L PD98059处理SGC-7901细胞后,细胞增殖率随着抑制剂浓度的升高而降低（P < 0.05）。当PD98059浓度处于200~400 μmol/L时抑制作用逐渐趋于平稳。0~100 μmol/L PD98059作用后MEK、ERK mRNA的表达量低于对照组（P < 0.05）,随着PD98059浓度升高,ERK mRNA表达量逐渐降低（P < 0.05）。Western blot检测结果显示50和100 μmol/L PD98059作用后p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低（P < 0.05）。且抑制剂PD98059使胃癌SGC-7901细胞发生G0/G1期阻滞,可诱导细胞凋亡。结论：MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中激活,PD98059通过抑制MAPK/ERK信号通路的活性可影响胃癌细胞的生物学功能。     

ERK信号转导通路在CXCL12促进子宫内膜癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的:探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR4 (CXCL12/CXCR4)生物学轴通过细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号转导通路发挥促子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的作用.方法:应用外源性CXCL12处理子宫内膜癌Ishikawa细胞株,通过Western blotting检测不同时间位点ERK1/2的磷酸化水平和Survivin蛋白的表达;通过ELISA检测细胞培养上清液中MMP-2的分泌水平.同时分析AMD3100和PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平、Survivin蛋白水平和MMP-2分泌水平的影响.结果:外源性CXCL12刺激后,可迅速上调ERK1/2的磷酸化水平(t=0.887,P＜0.01),促进Survivin蛋白和MMP-2蛋白的表达(t=0.861,P＜0.01;t=0.297,P＜0.01),且三者均呈时间依赖性.PD98059和AMD3100均能明显抑制外源性CXCL12诱导后ERK1/2的磷酸化水平,而且在两者共同作用下,能完全抑制ERK1/2的磷酸化水平,阻断ERK通路的激活,下调Survivin蛋白和MMP-2蛋白的表达.结论:CXCL12/CXCR4生物学轴通过激活ERK通路上调Survivin蛋白和MMP-2蛋白表达,从而引发Ishikawa细胞一系列增殖和侵袭的生物学效应.     

细胞外信号调节激酶1/2在瘦素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖中的作用

背景与目的:流行病学研究提示瘦素与子宫内膜癌的发生有关,但其作用机制尚不清楚.瘦素作为促有丝分裂原,能够显著促进多种细胞的生长增殖.本研究的目的在于探讨细胞外信号调节激酶1/2(extraeellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)在瘦素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用.方法:免疫荧光染色检测Ishikawa细胞中瘦素受体的表达;于Ishikawa细胞中分别加入不同浓度的瘦素(0、10、50、100、150 ng/ml),作用不同时间(6、12、24h),MIT法检测各组细胞的增殖情况:同时应用ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2磷酸化,观察其对瘦素促进Ishikawa细胞增殖的影响;应用免疫印迹技术检测100 ng/ml瘦素作用于Ishikawa细胞不同时间后(20、40、60 min)ERK1/2的活化水平(以P-ERK1/2与ERK1/2的比值表示).结果:免疫荧光检测结果证实Ishikawa细胞存在瘦素受体的表达:瘦素能明显促进Ishikawa细胞的增殖.在0～100 ng/ml范围内瘦素浓度越高.细胞增殖越显著,100 ng/ml瘦素作用24h其增殖效应最大(A值=0.73±0.02),100 ng/ml组与150 ng/ml组差异无统计学意义(P=0.129);PD98059能明显抑制瘦素对Ishikawa细胞的增殖作用.100 ng/ml瘦素和100μmol/L PD98059作用24h后,细胞增殖率为(6.88±0.86)%;Ishikawa细胞经100 ng/ml瘦素处理后,ERK1/2活化程度明显增高.结论:瘦素可能通过激活ERK1/2信号转导途径促进子宫内膜癌细胞的增殖.     

HER-2/neu对雌激素依赖性子宫内膜癌细胞信号通路MAPK/ERK调控的研究

目的:探讨HER-2/neu对雌激素依赖性子宫内膜癌细胞信号通路MAPK/ERK的调控机制。方法:EGF(表皮生长因子)处理Ishikawa细胞株及转染HER-2/neu的Ishikawa细胞株,Western blot检测转染前后细胞中COX-2、p-ERK/ERK蛋白的表达。ELISA方法检测细胞培养上清液中雌二醇的含量。用MAPK/ERK的抑制剂PD98059抑制信号通路,分别以50μmol/L,于不同时间(5、10、20、30、60min)及不同浓度(5、10、50、100μmol/L)作用30min后,Western blot检测COX-2的表达水平、ELISA检测雌二醇水平。结果:转染HER-2/neu的Ishikawa细胞株COX-2、p-ERK/ERK的蛋白表达量及细胞上清液中雌二醇的含量明显高于未转染的Ishikawa细胞株(P<0.05)。应用PD98059抑制MAPK/ERK通路,随PD98059浓度的增加及作用时间的延长,两组细胞COX-2及雌二醇的表达均逐渐减少,且抑制作用与浓度及作用时间呈依赖关系;但转染组COX-2与E2降幅大于未转染组(P<0.05)。结论:HER-2/neu可能通过MAPK/ERK两条通路来诱导COX-2的转录,进而导致雌激素的分泌增多,使细胞无限生长。     

MEK/ERK抑制剂影响胃癌细胞对5-FU敏感性及其机制的探讨

目的:探讨MEK/ERK特异性抑制剂PD98059在5-氟尿嘧啶(5-FU)抗胃癌细胞增殖中的作用。方法:应用5-FU与MEK/ERK抑制剂(PD98059)处理胃癌细胞,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测ERK和p-ERK的表达。结果:随着5-FU浓度的增加,5-FU对3种胃癌细胞系的增殖抑制率逐渐增大。5-FU作用MGC803细胞72 h的抑制率显著高于48和24 h,t值分别为16.477和25.349,P值分别为0.002和0.001。与对照相比,5-FU作用MGC803细胞48和72 h可引起显著的凋亡,t值分别为-20.576和-40.389,P值分别为0.015和0.001。5-FU处理胃癌MGC803细胞48 h,与对照相比pERK表达一过性下降然后升高。20μmol/L的PD98059联合5-FU作用48 h,可明显抑制pERK的表达,抑制率为22%;同时可明显增加细胞凋亡,增加率为20%。结论:MEK/ERK信号传导通路在5-FU作用胃癌细胞的过程中被激活,联合应用MEK/ERK信号通路抑制剂可部分逆转ERK的活化,增加胃癌细胞凋亡,从而增加胃癌细胞对5-FU的敏感性。     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法：流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK（P-ERK）及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果：MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论：ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法:流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(P-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果:MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论:ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

MEK抑制剂增加乳腺癌细胞MCF-7对表柔比星的敏感性

背景与目的: 化疗是目前乳腺癌治疗的重要手段之一,通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤功效.有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号传导通路作鼢用于核内转录因子,与细胞增殖和凋亡关系密切.因此MAPK信号传导通路在化疗中所起的作用日益受到人们的重视,期望抑制此通路能改善化疗药物的疗效,从而低毒高效的治疗肿瘤.本研究通过检测表柔比星与MEK抑制剂PD98059对人乳腺癌细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)活性的影响(MEK、ERK分别是MAPK{~号传导通路中的环节),探讨MEK抑制剂PD98059在表柔比星抗人乳腺癌细胞中的作用.方法: 应用表柔比星与MEK抑制剂(PD98059)处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞,应用Western印迹法检测MEK2和p-ERK表达情况,应用MTT法检测细胞增殖状态.结果: 表柔比星处理细胞后,MCF-7的ERK蛋白活性上升,加用MEK抑制剂PD98059,细胞对表柔比星的敏感性增加.结论: MAPK信号传导通路在表柔比星杀伤敏感细胞的过程中被激活,联合应用MAPK信号传导通路抑制剂可以增加表柔比星敏感性.