低剂量辐射对小鼠下丘脑神经元信号传递的影响

目的：探讨低剂量辐射对小鼠下丘脑神经元信号传递的影响。方法：应用竞争蛋白结合分析，放射免疫分析，原位杂交和免疫组化方法观察75mGy X射线全身照射对小鼠下丘脑神经元cAMP和cGMP含量及c-fos mRNA,FOs蛋白和前阿黑皮素（POMC）mRNA表达的影响。结果：照射后15min小鼠下丘脑cAMP含量立刻明显增高并达峰值，1h回复接近假照组水平，cGMP含量的变化与cAMP含量的变化基本相反，而cAMP/cGMP比值的变化与cAMP含量的变化基本一致，照后15min下丘脑神经元出现c-fos mRNA表达，照后8h FOs蛋白表达峰值。POMC mRNA表达在照后1h明显降低，结论：低剂量辐射可激活小鼠下丘脑神经元，促进其信号传递，以及下调下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴的功能。     

低剂量电离辐射对小鼠下丘脑cAMP,cGMP及Fos蛋白表 …

目的 研究低剂量辐射对小鼠下丘脑ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ及Ｆｏｓ蛋白表达的影响。方法 ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ和Ｆｏｓ蛋白分别采用竞争性蛋白结合分析、放免分析和免疫组织化学法。结果 ７５ｍＧｙＸ射线全身照射后，小鼠下丘脑ｃＡＭＰ含量迅速增高，１５ｍｉｎ即达峰值，而后迅速回降，１ｈ后接近假照射水平，以后出现小的波动；ｃＧＭＰ含量的变化基本与ｃＡＭＰ的变化相反；Ｆｏｓ蛋白在下丘脑诸多神经元核团内均呈阳性，照射后８     

不同游泳运动后大鼠下丘脑视上核、室旁核内Fos蛋白表达的变化

目的:观察游泳运动后大鼠下丘脑内Fos蛋白的定位、分布和时效性表达规律,探讨下丘脑对不同形式运动的调节机制。方法:将55只大鼠随机分为对照组(n=5)和运动组(n=50),运动组又分为持续运动组(n=25)和间歇训练组(n=25)。持续运动组每天游泳2次,每次150min,中间休息120min;间歇训练组每天游泳1次,负重游泳6min后休息4min,反复训练10组。免疫组织化学ABC法检测不同形式运动后即刻(0h)、0.5h、1h、2h、4h大鼠下丘脑内Fos蛋白的定位和分布,并进行图像分析。结果:(1)对照组大鼠下丘脑内Fos阳性神经元少量散在分布;运动组明显增多,在视上核(SON)、室旁核(PVN)等处成簇分布,核团界限清晰。(2)在室旁核小细胞部(pPVN),持续运动组游泳结束后1h Fos阳性神经元数目显著升高达峰值,然后回落;间歇训练组在运动结束后2h达峰值,较运动结束后即刻阳性神经元数显著增多(P<0.05),同一时刻间歇训练组表达显著高于持续运动组(P<0.05);室旁核大细胞部(mPVN)内,持续运动组Fos阳性神经元数在运动结束后持续升高,2h后显著下降,而间歇训练组各时刻阳性神经元数变化无统计学意义。(3)在SON内,大鼠游泳运动结束后4h内Fos阳性神经元数目维持在较高水平,两组内各时间点间无显著性差异(P>0.05)。结论:下丘脑SON和PVN在运动后机体调节中起重要作用,pPVN对不同形式运动性应激反应具有较高灵敏度。     

低剂量电离辐射诱导小鼠脑c－fos原癌基因的表达

应用原位杂交方法观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠脑神经元ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ水平的变化。结果发现，７５ｍＧｙ全身照射可诱导小鼠脑内广泛神经元ｃ－ｆｏｓ的表达，大脑皮质和下丘脑尤为明显。照射后１５分钟ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ即出现，１小时最为明显，２小时后逐渐减少，８小时完全消失。提示低剂量辐射可增加神经元的活性。     

低剂量电离辐射诱导小鼠脑c-fos原癌基因的表达

应用原位杂交方法观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠脑神经元ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ水平的变化。结果发现，７５ｍＧｙ全身照射可诱导小鼠脑内广泛神经元ｃ－ｆｏｓ的表达，大脑皮质和下丘脑尤为明显。照射后１５分钟ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ即出现，１小时最为明显，２小时后逐渐减少，８小时完全消失。提示低剂量辐射可增加神经元的活性。     

辐射对EL-4、J774A.1细胞CD2、CD48表达的影响

目的　通过时程及量效研究观察不同剂量X射线照射对EL 4和J774A 1细胞株中表面分子CD2、CD4 8的影响。方法　采用荧光免疫流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果　 (1)EL 4细胞CD2分子表达结果显示 ,0 0 75GyX射线照射后CD2合成在照射后 4h即开始升高 ,至 8～ 16h达峰值 (P <0 0 5～ 0 0 1) ,2Gy照射后则从照射后 4h开始下降 ,至 8h达最低点 (P <0 0 1) ,一直持续较低至 4 8h恢复 ;8h量效结果显示 ,在低剂量区 0 0 5 0 ,0 0 75Gy使CD2表达上调 ,而高剂量范围中 1,2Gy使CD2表达下调。 (2 )J774A 1细胞CD4 8分子表达结果显示 ,0 0 75GyX射线照射后CD4 8合成在照射后 2h即开始升高 ,至 4h达峰值 (P <0 0 5 ) ,随后急剧下降 ,8h恢复至假照射水平 ,16～4 8h下降明显低于假照射水平 (P <0 0 5 ) ,2Gy照射后则从照射后 2h开始下降 ,至 8h达最低点(P <0 0 1) ,随后有所恢复 ,但直至 4 8h仍未能恢复至假照射水平。 4h量效结果显示 ,在低剂量区0 0 5 0 ,0 0 75 ,0 10 0Gy使CD4 8表达上调 ,而高剂量范围中 1～ 6Gy均使CD4 8表达下调 (P <0 0 5～0 0 1)。结论　X射线照射可引起CD2、CD4 8不同的辐射效应 ,两者的相互作用体现出低剂量辐射具有不同于高剂量辐射的兴奋效应。     

不同剂量X射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程

目的研究Ｘ射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程，以揭示低剂量辐射免疫增强效应的分子机理。方法应用Ｆｕｒａ－２ＡＭ荧光探针，采用荧光分光光度法检测了小鼠胸腺细胞内游离钙浓度。结果７５ｍＧｙ全身照射后可使细胞内游离钙浓度增高，２４小时达峰值，７２小时回降至对照水平。结论低剂量辐射可促进Ｔ淋巴细胞信号传递     

电离辐射对小鼠组织金属硫蛋白-1mRNA表达的影响

目的 探讨X射线全身照射对小鼠肝、脑、胸腺及脾脏金属硫蛋白(MT)-1 mRNA表达的影响及其剂量效应关系。方法 采用Northem杂交方法检测了X射线全身照射后小鼠肝、脑、胸腺及脾脏MT-1 mRNA水平变化。结果 4GyX射线照射后肝脏及胸腺MT-1mRNA水平逐渐升高，照射后4h达峰值，分别为假射组的1．82及1．72倍，24h基本恢复至正常水平；0．5～6Gv照射后4h，肝脏及胸腺MT-1mRNA水平均呈剂量依赖性增加，6Gy照射后MT-1mRNA水平分别为假照组的2．13和1．62倍。但X射线全身照射后小鼠脑及脾脏MT-1mRNA水平未见明显变化。结论 X射线全身照射可提高小鼠肝脏和胸腺MT-1 mRNA水平，但对小鼠脑及脾脏MT-1mRNA表达无影响.     

低剂量电离辐射对小鼠下丘脑和免疫器官POMC转录水平的影响

目的观察７５ｍＧｙＸ射线全身照射后小鼠下丘脑和免疫器官ＰＯＭＣ转录水平的变化。方法地高辛标记碱性磷酸酶显色原位杂交。结果假照组下丘脑和免疫器官即有ＰＯＭＣ转录水平的表达，且下丘脑主要定位弓状核。７５ｍＧｙ全身照射后下丘脑ＰＯＭＣｍＲＮＡ含量减少，１小时内降低明显，１２小时仍在继续下降。免疫器官ＰＯＭＣｍＲＮＡ含量在照射后逐步增加，８小时达顶点，而后开始回降。脾脏变化最明显。结论低剂量电离辐射照射后下丘脑ＰＯＭＣ的减少可能是下丘脑－垂体－肾上腺皮质（ＨＰＡ）轴功能下调的直接原因，从而诱发免疫功能增强。     

弥漫性脑创伤与二次脑损伤发生机制研究

为研究弥漫性脑创伤 (DBI)与二次脑损伤 (SBI)后鼠脑代谢型谷氨酸受体 1a(mGluR1a)、cAMP、cGMP含量变化及I类mGluRs拮抗剂MCPG的治疗作用 ,将大鼠随机分为假手术对照、单纯DBI、脑损伤合并SBI及MCPG作用组。脑损伤后 ,以低血压作为SBI指标 ,于伤后不同时间进行免疫组化和放射免疫研究。结果发现 ,与对照组比较 ,单纯DBI组脑皮层mGluR1a阳性神经元表达在伤后 1h增加 ,2 4h达高峰 (P <0 .0 1) ,伤后2 4hcAMP水平下降 ,cGMP升高 ,cAMP/cGMP比值下降 ;合并SBI组 ,mGluR1a阳性神经元表达在伤后 0 5h即明显增加 ,6h达高峰 (P <0 0 1) ,cAMP改变也更加明显 ;MCPG可减少SBI后损伤神经元的数目。提示mGluR1a参与了细胞兴奋性毒性和代谢应急 ,是加重脑损害的关键因素。     

X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞NO产生的影响

目的：观察７５ｍＧｙ、２．０ＧｙＸ射线全身照后不同的时间,小鼠腹腔巨噬细胞ＮＯ产生的时程变化及不同剂量照射后２４ｈ时ＮＯ、ｉＮＯＳ的含量变化。方法分光光度法及免疫组织化学方法。结果：ｉＮＯＳ和ＮＯ产的生与剂量呈正相关。２．０Ｇｙ照射后,ＮＯ从６ｈ到４８ｈ随时间推移产生量逐渐增加,４８ｈ达峰值,为对照的３．８倍,而后回降。结论电离辐射可刺激巨噬细胞合成ｉＮＯＳ及产生ＮＯ。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞p53、waf1、gadd45基因转录水平的影响

目的：研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p53、wafl、gadd45基因转录水平的影响，以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理。方法：采用Northern blot和半定量RT-PCR方法分别检测p53、wafl、gadd45基因转录水平变化。结果：2Gy射线全身照射后2-72hp53基因转录水平均有不同程度的升高，wafl基因在照射后2h开始升高，4h达峰值，一直持续到照后48h开始恢复，gadd45转录水平除在照射后2h一过性升高外，从8h即开始不同程度下降，照射后72h开始恢复。分别以0.5-6.0Gy X射线全身照射后12h取小鼠骨髓细胞作量效研究表明，p53的改变在照射后各组虽有不同程度的升高，但未见明显的剂量依赖，wafl基因转录呈明显的剂量依赖性升高，6.0Gy X射线照射后达对照组的3.41倍，gadd45未见升高趋势。结论：在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期G1阻滞后p53-wafl通路起重要作用，而gadd45可能不参与该过程调控。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响

目的　研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响 ,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G2 期阻滞的分子机理。方法　采用流式细胞仪检测了X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。采用半定量RT PCR方法分别检测cyclinB1、cdc2基因转录水平变化。结果　 2GyX射线全身照射后 4及 1 2hG2 +M期细胞百分率升高 (P <0 0 5) ;0 5～ 6Gy照射后 1 2hG2 +M细胞百分率呈剂量依赖性增加 (P <0 0 5～P <0 0 1 )。 2GyX射线照射后 2～ 48h小鼠骨髓细胞cyclinB1转录水平在各个时间点未见明显变化 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cyclinB1基因转录在各剂量点均未见明显改变 ;2GyX射线照射后小鼠骨髓细胞cdc2转录水平从照后 4h即开始不同程度下降 ,1 2h达最低值 (为假照射组的 46 % ) ,照射后 48h开始恢复 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cdc2基因转录水平在各剂量点均明显降低 ,分别达到假照射组的40 %～ 70 %。结论　电离辐射可诱导小鼠骨髓细胞发生G2 期阻滞 ,cdc2激酶活性下降在G2 期阻滞中起重要作用。     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G_1期阻滞中的作用

目的　探讨 p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中的作用。方法　采用North ernblot检测 p2 1WAF1mRNA水平的变化 ;采用流式细胞术检测 p2 1蛋白表达及细胞周期的变化。结果　 4 0GyX射线照射后 12h、2 4h、48hG1期EL 4细胞百分数明显高于假照射组 ;p2 1WAF1mRNA水平从照射后 1h开始升高 ,4h达峰值 ,持续至照后 12h ;p2 1蛋白表达在照射后 2～ 48h明显增高。结论　 4 0GyX射线照射可诱导EL 4细胞G1期阻滞 ,p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

X射线全身照射对免疫细胞共刺激分子表达的影响

目的：探讨低剂量电离辐射对免疫细胞表面分子的影响，方法：用流式细胞术FITC－CD28／PE－CTLA－4双染染法观察了小鼠胸腺和脾细胞的CD28和CTLA－4表达变化，用免疫细胞化学（ABC）法观察了小鼠腹腔巨噬细胞B7－1和B7－2的表达变化。结果：低剂量电离辐射和较高剂量电离辐射均能增强腹腔巨噬细胞B7分子的表达；同时发现，低量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CD28的表达，而CTLA－4的表达降低，脾细胞较胸腺细胞更明显。较高剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CTLA－4的表达，同时抑制两种细胞CD28的表达，以脾细胞为更显著，结论：共刺激分子CD28和B7的表达上调可能是低剂量电离辐射免疫兴奋效应机理中的重要因素。