欧文氏菌发酵生产紫杉醇工艺的优化

考察了植物内生细菌欧文氏菌(Erwinia taxi)生产紫杉醇的摇瓶发酵和30 L罐发酵工艺条件。结果显示,培养基中添加不同的前体对紫杉醇产量影响显著。较高浓度的乙酸钠(>0.01 mmol/L)和较低浓度的苯丙氨酸(<0.05 mmol/L)有利于紫杉醇积累。在此基础上进行了30 L罐发酵试验,得优化培养基配方(g/L):大豆蛋白胨20,工业酵母抽提物5,氯化钠0.5,氯化钾0.1,葡萄糖4,氯化镁1,乙酸钠0.1,苯丙氨酸5×10-4;pH 6.5。发酵培养条件:接种量5%,发酵温度22℃,通气速率0.17 vvm,转速50 r/min,发酵时间60 h。在此条件下,30 L发酵罐中紫杉醇的产量为102 g/L。     

延龄草多糖水提醇沉工艺研究

目的优选延龄草多糖的水提醇沉工艺条件。方法采用正交实验设计,以多糖得率为综合评价指标,对水提醇沉提取工艺的影响因素即提取温度、料液比、提取时间和醇沉体积分数进行考察和优化。结果最佳工艺条件为料液比1∶15,100℃,提取2h,2次,用体积分数80%乙醇沉淀,可使延龄草多糖得率达到4.96%。结论该提取工艺可行,实验结果为确定延龄草多糖的水提醇沉工艺提供了实验依据。     

通气量对新霉素种子罐代谢影响的研究

目的 研究不同通气量对生产新霉素的费氏链霉菌生理状况的影响,优化种子罐控制条件和移种时机,从而提高发酵水平,节约动力消耗,为工业化生产奠定基础。方法 在4个50L发酵罐中,控制装液量35L,转速400r/min,培养温度35℃,对同一批种子分别探究了通气比在0.5VVM(F2罐)、0.75VVM(F3罐)、1.0VVM(F4罐)、1.25VVM(F1罐)下,4罐还原糖、总糖、pH、菌浓、氨基氮、黏度、新霉素B产量、杂质C的变化趋势。结果 得出通气比大小对前20h孢子萌发速率影响小,20h后菌体开始进入对数生长期后,通气比较高(1.25VVM)有利于缩短pH回升时间,最大菌浓更高,杂质C组分更低。结论 前20h通气比控制在0.5VVM,20h后通气比控制在1.25VVM,最佳移种时机为35~40h。     

通气量对新霉素种子罐代谢影响的研究

目的 研究不同通气量对生产新霉素的费氏链霉菌生理状况的影响,优化种子罐控制条件和移种时机,从而提高发酵水平,节约动力消耗,为工业化生产奠定基础。方法 在4个50L发酵罐中,控制装液量35L,转速400r/min,培养温度35℃,对同一批种子分别探究了通气比在0.5VVM(F2罐)、0.75VVM(F3罐)、1.0VVM(F4罐)、1.25VVM(F1罐)下,4罐还原糖、总糖、pH、菌浓、氨基氮、黏度、新霉素B产量、杂质C的变化趋势。结果 得出通气比大小对前20h孢子萌发速率影响小,20h后菌体开始进入对数生长期后,通气比较高(1.25VVM)有利于缩短pH回升时间,最大菌浓更高,杂质C组分更低。结论     

深层通气发酵的传氧和放大(续完)

5.深层通气发酵罐的放大5、1、放大的标准深层通气发酵包含许多必须在放大中加以考虑的因素:气体、液体和细胞之间的传质和传热;气体、液体和细胞的混合;气泡、细胞和液滴在非均相发酵过程中的分散;搅拌对微生物的剪切效应等等。因此,还没有发现一个普遍适用的放大方法。目前放大实际上是以单位培养基体积的搅拌功率消耗或容积传氧速率为标准。有人认为以传氧速率作为放大的标准比以搅拌功率消耗怍为标准更为合理,虽然后     

维泰醇对小鼠淋巴白血病细胞促进凋亡的作用及其机制

维泰醇(alternol)是利用红豆杉树皮中一种微生物菌诱变株,经过发酵、纯化等工艺分离出的新型单体化合物。本研究探讨维泰醇对小鼠淋巴白血病(L1210细胞)的作用及其机制。采用MTT法检测维泰醇对细胞活力的影响，用形态学方法、 DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡，以Western blotting法检测与凋亡相关蛋白的表达。维泰醇对L1210细胞的增殖有明显抑制作用；处理后的细胞表现出凋亡特有形态学改变，细胞凋亡比率的增加有时间依赖性；维泰醇能降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)，增加细胞内活性氧(ROS)的水平，并引起细胞DNA发生片段化，形成典型的梯状条带；维泰醇能下调Bcl-2/Bax表达比率，并且上调caspase-3和caspase-9的表达，但是对caspase-8的表达没有明显的影响。维泰醇可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导L1210细胞凋亡。     

重组人干扰素α2b大批量发酵条件的研究

目的 探索大批量发酵生产毕赤酵母菌所表达的重组人干扰素a2b的培养条件并确定诱导时间.方法 选用5L玻璃发酵罐作为人干扰素α2b发酵工艺研究系统,用30L不锈钢发酵罐做验证.探索了培养基中基础盐(Fermentation Basal Salts Medium FBS)的浓度对菌株生物量的积累和重组蛋白表达量的影响,并用确定了利用甲醇进行诱导的时间.结果 培养基中基础盐浓度在FBS原始浓度的60%左右时,菌株的细胞浓度及目的蛋白表达量均最好;诱导39h就可获得高表达.在优化工艺条件下,用30L罐放大,验证方法改进后对人干扰素α2b表达量的影响,此时总蛋白得量为600mg·L-1～800mg·L-1,与过去同样30L罐的表达量相比,增加了30%左右.     

响应面法优化替考拉宁发酵培养基及其扩大培养

目的 通过响应面法,优化替考拉宁发酵培养基,并对发酵工艺参数进行优化,来提高其发酵产量。方法 以游动放线菌TC19-3p-103为试验菌株,采用单因素试验确定发酵培养基考察因素的参考范围;利用最陡爬坡试验确定响应面试验的中心区域;利用Box-Behnken响应面法,确定了发酵培养基中的有机氮源最佳浓度组合;并对起始搅拌转速与通气量这两个发酵工艺参数进行单因素考察;在发酵过程中,采用流加技术控制碳源浓度。结果 经优化的发酵培养基,其摇瓶产量提高了31.6%;50L罐发酵工艺参数优化后,发酵水平达到8558 mg/L。结论 优化后的发酵工艺,显著提高了替考拉宁的产量,为其工业化生产奠定了基础。     

应用大孔吸附树脂纯化川芎有效部位

目的探讨大孔吸附树脂对川芎提取物的纯化条件及纯化效果。方法以阿魏酸作为考察指标,通过阿魏酸在树脂上的吸附量和解吸率筛选树脂的种类;以阿魏酸的转移率为指标考察药液的pH值、上柱吸附流速、树脂药材质量比、树脂柱径高比、清洗液的pH值、清洗液用量及流速、洗脱液种类、洗脱液用量及流速等纯化条件对纯化川芎效果的影响,与醇提水沉法进行纯化效果的比较。结果采用HPD300大孔吸附树脂作为吸附树脂,树脂药材质量比为2∶1,树脂柱径高比为1∶7,上柱药液和清洗液pH值为3.0,质量分数为50%的乙醇溶液作为洗脱液,上柱吸附流速为每小时2倍床体积,清洗和洗脱流速为每小时8倍床体积。在该纯化条件下,阿魏酸的转移率为91.67%,与醇提水沉法相当;固形物中阿魏酸的含量约为醇提水沉法的4.1倍,固形物的质量(固形物得率)比醇提水沉法减少了约76%。结论通过纯化条件的优化,大孔吸附树脂法可提高阿魏酸的纯化效果,优于醇提水沉法。     

竹黄多糖发酵工艺的优化研究

目的:优化竹黄多糖的发酵工艺。方法:培养竹黄菌菌丝体液,以菌丝干重和多糖得率为指标,分析竹黄多糖发酵过程中碳源、氮源、pH值对多糖积累的影响。结果:蔗糖、玉米粉、酵母膏均有利于菌丝的生长和多糖的形成。通过正交试验确定了竹黄多糖最佳发酵培养基:蔗糖3%、玉米粉3%、酵母膏0.5%、麸皮2%、(NH4)2SO40.2%、MgSO4.7H2O0.05%、KH2PO40.1%;在10L发酵罐上竹黄多糖含量最高达10g.L-1。结论:该工艺稳定,可为工业生产提供理论依据。     

GS A－B－C空气过滤系统在抗生素发酵生产中的应用

应用ＧＳＡ－Ｂ－Ｃ空气过滤系统于抗生素发酵生产。经０．５、５、３０ｍ~３罐５０批实验，染菌率由２５％、１８％和５０％均下降至１０％。并已验明染菌都不是由空气过滤器造成。该系统已使用１年多，压降无明显变化，Ｃ过滤器无需经常消毒，节约了蒸气和电力，大大提高了生产的成功率。     

金霉素发酵过程的代谢特性及调控策略

利用金霉素链霉菌在50L自控发酵罐中发酵生产金霉素。分析了发酵过程的糖、氧、氮和磷的代谢特性以及菌体生长和金霉素生物合成的规律。结果表明，菌体前期的代谢控制显得非常重要，并对金霉素合成的整个过程起决定性作用。在参数相关理论的基础上，通过对发酵过程的实时优化，适宜增强前期的菌体生长，使物质代谢流有利于流向金霉素形成的途径，从而使金霉素的产率）效价）提高了10．3％。     

微机自控流加补料在林可霉素发酵中的应用

由电远传转子流量计检测的补料流量信号进入控制系统，经计算机处理后输出驱动信号，通过气动薄膜调节阀调节补料流量，使中间料能根据菌丝生长与代谢情况连续流加补入发酵罐。本法用于１００ｍ￣３林可霉素发酵罐上，同间歇补料相比，使菌丝生长和代谢过程控制更加平稳，发酵效价有明显提高。     

冠心宁注射液与两种输液的配伍稳定性研究

目的 考察冠心宁注射液与5%葡萄糖注射液、氯化钠注射液配伍后的稳定性.方法将冠心宁注射液与5%葡萄糖注射液(20:500、40:500)、氯化钠注射液(10∶100、20∶100)分别按临床常用比例配伍后,依照2005版药典的方法考察不同时间点混合液的外观、pH值、不溶性微粒、紫外吸收光谱、细菌内毒素限量及冠心宁注射剂...     

影响替加氟脂质体包封率的因素

目的考察各因素对替加氟脂质体包封率(EN)的影响。方法在单因素考察的基础上,采用均匀设计法进行优化实验。结果替加氟脂质体最佳制备工艺为:磷脂质量分数为4.00%、磷脂与胆固醇的质量比为6.00∶1.00、药脂的质量比为1.00∶8.40、pH值为7.40、水化温度为40℃、水化时间为60 min。优化后的包封率为37.5%。结论药脂质量比和磷脂质量分数对替加氟脂质体包封率的影响最大。     

多动安颗粒质量标准研究

目的建立多动安颗粒的质量标准。方法对处方中黄连、佛手、熟地黄、麻黄药材进行薄层色谱(TLC)法鉴别。采用高效液相色谱(HPLC)法测定处方中盐酸小檗碱的含量,色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50,V/V,每100 mL中含十二烷基硫酸钠0.4 g,pH=4.0),检测波长为345 nm,柱温为35℃,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL。结果TLC色谱图中斑点清晰,阴性对照无干扰。盐酸小檗碱进样量在0.044~0.264μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率为99.67%,RSD为2.70%(n=6)。结论该方法操作简便、专属性强、重复性好,可作为多动安颗粒的质量控制方法。     

结肠癌细胞及线粒体双级靶向脂质体的处方工艺筛选研究

目的：研究结肠癌细胞及线粒体双级靶向脂质体（HA/TPP-TPGS LP/DOX）的最佳处方工艺。方法：用薄膜分散法结合微孔滤膜法制备;以细胞抑制率为指标,用MTT法筛选最佳聚脂比;以包封率为指标,用正交试验筛选最佳胆脂比、药脂比和超声时间;以粒径为指标,筛选最佳透聚比;以复溶后粒径和包封率为指标,筛选冻干保护剂的品种;用荧光显微镜和流式细胞术考察脂质体的靶向性;用透析法考察体外释药行为。结果：最佳处方是聚脂比1∶7、胆脂比1∶10、药脂比1∶15、超声时间15 min、透聚比2∶1,冻干保护剂为蔗糖。制备的脂质体呈类球形,粒径（142.20±0.54）nm,Zeta电位-（24.06±0.25）mV,包封率（98.20±0.18）%,稳定性高,有双级靶向性和体外药物缓释性。结论：本研究制备的脂质体有包封率高、粒径小、双级靶向性和缓释性等优点,为进一步研究奠定了基础。     

基因工程菌SIPI-A0707代谢产物表柔红霉素的分离纯化工艺研究

目的 建立天蓝淡红链霉菌基因工程菌(SIPI-A0707)发酵液中表柔红霉素的分离纯化工艺.方法 调节发酵液pH值为5,用甲醇抽提表柔红霉素;先采用大孔弱酸性阳离子交换树脂D152,吸附流速为2mL/min,0.05mol/L HCl-50％丙酮解吸;然后采用氯仿-水萃取体系,萃取pH为6.5,反萃取使用pH为1.5的蒸馏水,最后采用大孔吸附树脂Microsphere-1;吸附pH为7,吸附流速3mL/min,50％甲醇解吸分步收集,浓缩冻干.结果 表柔红霉素HPLC纯度达到98.1％,总收率为40％以上.结论 此工艺在生产上可行性较高,适合工业大量制备.     

大孔吸附树脂纯化万古霉素发酵液的研究

研究6种大孔吸附树脂对万古霉素的静态吸附与解吸性能，从中选出最适树脂进行动态吸附实验，研究上样液浓度、pH值、上样体积流量对树脂动态吸附量的影响及洗脱过程。结果：选择XAD-16树脂进行动态吸附实验。适合的上样液浓度、上样液pH值、上样液体积流量分别为2．09mg／ml，9．0和2．5ml／min。以10％乙醇／0．1％盐酸／水为洗脱剂，以1．5ml／min的流速进行洗脱即可基本将万古霉素从树脂上解吸下来。结论：万古霉素发酵液经XAD-16树脂吸附洗脱后，洗脱液中万古霉素高效液相色谱峰面积百分比可达85．61％。