环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路的激活与再灌注损伤挽救激酶信号通路的关系

目的：观察脑钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）激活环磷酸鸟苷/蛋白激酶G（cyclic guanosine monophosphate/protein kinase G,cGMP/PKG）信号通路的心肌保护作用是否与细胞外调节蛋白激酶１/２（extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2）、磷酸酰肌醇-３-激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）蛋白激酶的激活有关。方法：将84只新西兰兔随机分为7组（n=12）：假手术组;对照组;BNP组;BNP+LY294002组（LY294002为PI3K抑制剂）;LY294002组;BNP+PD98059组（PD98059为ERK1/2抑制剂）;PD98059组。除了假手术组只开胸不结扎冠状动脉外,其余6组均于结扎左回旋支45 min后恢复左回旋支血流,进行再灌注180 min。全程观察血流动力学及心电变化;实验终末,各组随机抽取6只兔子心脏做左室梗死面积测定,采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑双染色法测定心肌梗死面积;每组另外6只兔子心脏取梗死边缘区组织,Western blot方法测定P-Akt/Akt、P-ERK1/2/ ERK1/2的表达。结果：心率（heart rate,HR）和平均动脉压（mean arterial blood pressure,MABP）在基线水平上无明显差异（P >0.05）。与基线水平相比,HR和MABP在缺血以及再灌注时期有明显下降（P<0.05）,而在再灌注时期维持较稳定的水平。各组之间HR、MABP差异无统计学意义（P >0.05）;与对照组相比,BNP组心律失常发生率明显减少（P<0.003 125）。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组心律失常明显增加（P<0.003 125）,BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义（P >0.003 125）;假手术组无心肌梗死。与对照组比较,BNP组心肌梗死范围明显减少（P <0.05）。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组梗死面积明显增加（P<0.05）。BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义（P >0.05）;与对照组比较,BNP组Akt、ERK1/2的磷酸化水平明显增加（P <0.05）。与BNP组相比,BNP+LY294002组Akt的磷酸化水平及BNP+PD98059组ERK1/2的磷酸化水平分别明显降低（P <0.05）。BNP+LY294002组和LY294002组Akt的磷酸化水平,BNP+PD98059组和PD98059组ERK1/2的磷酸化水平差异无统计学意义（P >0.05）。结论：BNP激活cGMP/PKG信号通路,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,且该通路的激活与再灌注损伤挽救激酶通路的激活有关。     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

摘要：目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达的影响,探讨
肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处
理,观察假手术（S）组、LY294002+假手术（LY+S）组、PD98059+假手术（PD+S）组、缺血再灌注（IR）组、缺血后处理（IPO）组、
LY294002+缺血后处理（LY+IPO）组和PD98059+IPO（PD+IPO）组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结
果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都
可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。
     

ERK1/2在AngⅡ诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达及意义

 目的观察细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化,阐明血
管内皮细胞凋亡对动脉粥样硬化诊治的意义。方法制备AngⅡRPMI1640 培养液（1*10-6 mol/L）培养人脐静脉内皮细胞,采用
四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258荧光染色
观察凋亡细胞形态学变化,利用细胞免疫化学法分析凋亡调控基因、表达的变化,Western blot 测定磷酸化ERK1/2 水
平。结果AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡率明显高于对照组（P < 0.01）;与对照组相比, mRNA表达呈持续性降低;Bcl-2/Bax
比值下降,ERK1/2 磷酸化水平于诱导12 h时明显上升,18 h 达高峰（P < 0.01）,24 h 下降至稳定,总ERK1/2 蛋白水平无明显
变化。结论ERK1/2 信号转导途径参与AngⅡ诱导内皮细胞凋亡的发生、发展,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax 比值来实
现。     

血管紧张素II受体1 抑制剂对雌激素作用下的子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

 目的探讨雌激素及血管紧张素域受体1（AT1-R）抑制剂saralasin 对HEC-1A细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方
法应用免疫细胞化学方法检测AT1-R、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、细胞外信号调节
激酶（ERK）蛋白在HEC-1A 细胞中的表达;应用MTT 法、流式细胞技术检测雌激素作用于HEC-1A 细胞不同时间后细胞增殖、
细胞周期和凋亡的变化,以及saralasin对雌激素诱导下的HEC-1A 细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;Western blot 分析雌激素
作用后HEC-1A细胞中ERK、p-Akt 蛋白表达的变化,及saralasin 对雌激素诱导下的HEC-1A细胞中ERK、p-Akt 蛋白表达的影
响。结果AT1-R、PI3K、p-Akt、ERK蛋白在HEC-1A细胞中均有阳性表达;雌激素能够促进HEC-1A细胞增殖,使G0~G1期的
细胞比例下降,S 期的细胞比例升高,凋亡减少,ERK蛋白的表达上调;而saralasin 可明显地抑制雌激素诱导的HEC-1A细胞的
增殖,使细胞周期停滞在G0~G1期,S 期的细胞比例下降,凋亡增多,ERK蛋白的表达下调。结论雌激素可以通过AT1-R促进
HEC-1A 细胞增殖,AT1-R 抑制剂saralasin 可以抑制雌激素的促细胞增殖作用,并促使HEC-1A 细胞发生凋亡,其机制可能是通
过阻断丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路引起ERK蛋白表达的下调,从而抑制细胞增殖,因此saralasin 可能有助于雌激素受
体低表达的子宫内膜癌的治疗。     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处理,观察假手术(S)组、LY294002+假手术(LY+S)组、PD98059+假手术(PD+S)组、缺血再灌注(IR)组、缺血后处理(IPO)组、LY294002+缺血后处理(LY+IPO)组和PD98059+IPO(PD+IPO)组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。     

Zebularine 调控卵巢癌细胞hMLH1基因再表达

 目的探讨去甲基化药物Zebularine（Zeb）对体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因甲基化状态的
影响及表达调控作用。方法应用不同浓度的Zeb（50 μmol/L,100 μmol/L,200 μmol/L）处理体外培养的卵巢癌细胞A2780/
cp70 后,甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）法检测用药前后细胞中hMLH1基因的甲基化状态,RT-PCR 法及
Western-blot 法检测用药前后细胞中hMLH1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果hMLH1基因在卵巢癌细胞A2780/cp70 中
呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性。经过Zeb 处理后,hMLH1基因呈去甲基化状态,其mRNA及蛋白重新表
达。结论异常甲基化是卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因失活的原因,去甲基化药物Zeb 能使hMLH1基因去甲基化从而
调控其重新表达。     

PI3K／AKT及MEK／ERK信号通路在肿瘤血管内皮细胞迁移中的作用

目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）及丝裂原细胞外信号调节激酶（MEK）／细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在肿瘤血管内皮细胞迁移中的作用及机制。方法用不同浓度的PI3K／AKT信号通路抑制剂LY294002（2．50、7．50、15．00μmol／L）;MEK／ERK信号通路抑制剂PD98059（2．50、7．50、15．00μmol／L）分别处理肿瘤血管内皮细胞,以DMEM‐F12培养基,加入0．10％二甲基亚砜（DMSO）的培养基分别作为对照,通过细胞划痕试验,定向迁移试验和Transwell试验来检测不同的信号通路抑制剂对肿瘤血管内皮细胞的水平、垂直和定向迁移能力的影响。结果0．1％DMSO对内皮细胞的迁移无明显影响,其作用后内皮细胞的迁移能力与DMEM‐F12单独作用无明显区别,说明小剂量DMSO作为LY294002、PD98059的溶剂不影响肿瘤血管内皮细胞的迁移功能;应用信号通路抑制剂LY294002、PD98059处理后,内皮细胞迁移能力受抑制,且随着抑制剂浓度增高而增大;LY294002与PD98059组比较,前者迁移距离更小,细胞迁移数较后者少,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论抑制PI3K／AKT和MEK／ERK信号通路均能抑制肿瘤血管内皮细胞的水平、垂直和定向迁移,且与抑制剂浓度呈正相关;PI3K／AKT信号通路对内皮细胞迁移的影响比MEK／ERK信号通路明显。     

PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响

目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达。结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力。     

重度子痫前期患者胎盘组织缺氧适应相关基因的表达及意义

 目的探讨重度子痫前期患者胎盘组织中缺氧适应相关基因HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1的表达及意义。方法采
用免疫组化方法检测34 例重度子痫前期患者和24 例正常孕妇的胎盘组织中的HIF-1α、PHD1、PHD 2和FIH-1 蛋白的表达,
对两组的表达水平进行比较分析。结果在重度子痫前期患者和正常孕妇的胎盘组织中HIF-1α、PHD1、PHD 2和FIH-1蛋白
均主要表达在合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆中。重度子痫前期组HIF-1α和PHD 2蛋白表达（+++）者分别为16 例
（16/34）和14 例（14/34）,显著高于对照组2 例（2/24）和2 例（2/24）,差异均有统计学意义（ 约0.01）。PHD1 和FIH-1 蛋白在重
度子痫前期组中表达（+++）者分别是2 例（2/34）和2 例（2/34）,明显低于对照组14 例（14/24）和13 例（13/24）,2 组比较,差异均
有统计学意义（ P<0.01）。结论HIF-1α和PHD2 的蛋白在重度子痫前期患者胎盘组织中表达水平明显增高;而PHD1 和
FIH-1 的蛋白的表达水平却明显降低。PHD1、PHD2 和FIH-1 可能通过抑制HIF-1α的机制参与重度子痫前期的发病。     

丹红注射液通过改善线粒体功能障碍减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

[目的]研究丹红注射液(DHI)对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞线粒体功能的调节作用机制。[方法]建立原代心肌细胞H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)/MAPK激酶(MEK)抑制剂LY294002与PD98059干预后,DHI对H/R损伤心肌细胞存活的影响。采用荧光探针Rh123检测DHI对H/R损伤心肌细胞线粒体膜电位(Δφm)的影响。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测LY294002和PD98059干预后DHI对H/R损伤的心肌细胞PI3K及MEK下游丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和ERK1/2蛋白表达及活性水平的影响。应用海马生物能量检测仪测定正常与H/R损伤条件下DHI对线粒体能量代谢的影响。[结果] DHI能够明显逆转H/R引起的细胞活力和线粒体膜电位下降。阻断剂LY294002和PD98059干预后,DHI对心肌细胞活力和线粒体膜电位的改善作用明显减弱。DHI能够显著增加H/R损伤的心肌细胞Akt和ERK蛋白磷酸化水平,且这种促进作用能够被抑制剂LY294002和PD98059抑制。常氧条件下,DHI不影响心肌细胞线粒体能量代谢。H/R条件下,DHI能够显著抑制心肌细胞线粒体基础耗氧率与最大耗氧率下降,增加线粒体能量储备能力。[结论] DHI能够激活Akt和ERK1/2,抑制H/R造成的线粒体能量代谢障碍,维持线粒体储备能力,缓解H/R诱导的心肌细胞损伤。     

丝胶对2 型糖尿病大鼠海马HO-1 表达的影响

 目的探讨丝胶对2 型糖尿病大鼠海马血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法30 只雄性SD 大鼠随机分为正常对
照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组10 只。糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2 型糖尿
病大鼠模型,以血糖逸16.7 mmol/L 作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶
（2.4 g·kg^-1·d^-1）灌胃35 d。HE 染色观察海马的形态变化;分别采用Western blot 和RT-PCR 法检测海马HO-1 蛋白及mRNA的
表达。结果糖尿病模型组大鼠海马CA1 区神经细胞出现明显的病理变化,HO-1 蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组
大鼠（ P<0.01）。丝胶治疗组大鼠海马CA1 区神经细胞的病理变化明显减轻,HO-1 蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠
（ P<0.01, P<0.05）。结论丝胶可通过下调海马HO-1 的表达,减轻糖尿病时HO-1 高表达对海马神经细胞的毒性损害,发挥
对糖尿病神经系统损伤的保护作用。     

白藜芦醇抑制胃癌细胞株MKN45增殖的机制研究*

目的 通过研究白藜芦醇抑制胃癌MKN45细胞增殖及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响,探讨白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法 体外常规培养胃癌MKN45细胞,将细胞分为对照组、MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059组（PD98059组）、白藜芦醇低剂量组（100?μmol/L）、 白藜芦醇高剂量组（400?μmol/L）。各组细胞处理1、2和4?h后,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blotting法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白的表达,细胞免疫化学法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白荧光强度的变化。结果 与对照组比较,PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞在处理1、2和4?h后,细胞增殖受到抑制（P?<0.05）,且呈时间剂量依赖性;PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞Ras、Raf、MEK和ERK1/2表达下降,差异有统计学意义（P?<0.05）,且白藜芦醇的作用呈剂量依赖性（P?< 0.05）;MEK和ERK1/2蛋白主要定位于细胞质中,且PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞ERK1/2的荧光强度均减弱。结论 白藜芦醇呈剂量依赖性抑制胃癌细胞株MKN45的增殖,可能与抑制MEK/ERK信号通路,减弱Ras、Raf、MEK和ERK1/2的表达有关。     

LY294002对套细胞淋巴瘤增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的观察磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9及信号通路相关蛋白pAkt、Notch1、HES1的变化。结果 LY294002能明显抑制Jeko-1细胞的增殖;经0、5、10和20μmol/L的LY294002作用24h后,Jeko-1细胞的凋亡率分别为(3.25±1.27)%、(11.34±2.35)%、(22.81±2.74)%、(43.61±3.48)%,差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测发现凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达上升,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt磷酸化水平下降,Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下降。结论LY294002可以特异性抑制PI3K/Akt信号通路,也可下调Notch1信号通路的活性,抑制Jeko-1细胞增殖,促进细胞凋亡。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对胃癌细胞SGC7901中Skp2和NAG-1表达的影响及其效应

目的 研究PI3K/Akt信号转导通路靶向抑制剂LY294002对胃癌细胞SGC7901中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和非甾体抗炎药诱导基因-1(NAG-1)表达的影响.方法 将LY294002作用于胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术AnnexinV2FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,Western blot检测p-Akt(Ser473)和总Akt(t-Akt)的表达情况.结果 LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;10、30、50 μmol/L的LY294002作用12 h后细胞凋亡率分别为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%和(64.1±0.79)%,显著高于空白对照组的(2.3±0.36)%,差异均有统计学意义(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达,而t-Akt的表达未发生改变;LY294002可上调NAG-1 mRNA的表达,并下调Skp2 mRNA的表达.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路可改变胃癌细胞株SGC7901中Skp2和NAG-1的表达,并能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化及调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关.     

喉鳞状细胞癌中STK15 蛋白和BUBR1 蛋白的表达及相互作用

 目的探讨STK15 和BUBR1蛋白的表达与喉癌发生、发展的相关性以及喉癌组织中STK15 和BUBR1蛋白的相互作
用。方法选取40 例病理诊断为喉鳞状细胞癌组织标本及癌旁正常组织标本，应用免疫组织化学SP法检测STK15 和BUBR1
蛋白的表达水平，应用免疫荧光双标实验判定STK15 和BUBR1 蛋白的共定位。结果STK15 蛋白平均光密度值喉癌组织高于
癌旁正常组织（ P< 0.05），BUBR1 蛋白平均光密度值喉癌组织低于癌旁正常组织（ P< 0.05），即喉癌组织中STK15蛋白表达水
平高于癌旁正常组织，而BUBR1 蛋白表达水平低于癌旁正常组织。免疫荧光双标结果表明STK15蛋白和BUBR1蛋白均在细
胞质及细胞核中表达，且2 种蛋白标记的荧光可以重叠，提示两者可能存在相互作用。结论STK15 蛋白高表达、BUBR1 蛋白
表达下调可能与喉癌的发生、发展相关。STK15 和BUBR1 蛋白可能相互作用，共同影响喉癌的发生、发展。     

TGF-茁1诱导胃癌细胞上皮间质转化与CD133表达研究

目的研究转化生长因子-茁1（TGF-茁1）促进胃癌侵袭能力,诱导胃癌MKN-45细胞发生上皮间质转化（EMT）的机制及其与PI3K/Akt信号通路调控肿瘤起始细胞标志物CD133表达的关系。方法设空白对照,应用TGF-茁1处理MKN-45细胞(TGF-茁1处理组),观察其对细胞形态学的影响;Transwell检测细胞侵袭能力的改变;RT-PCR及Westernblot检测细胞EMT相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin、p-Akt及CD133的表达水平;PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后再应用TGF-茁1处理细胞（TGF-茁1+LY294002处理组）,检测p-Akt与CD133表达水平的变化;免疫磁珠分选CD133+与CD133-亚群细胞,检测CD133+组与CD133-组细胞EMT相关因子的表达差异。结果TGF-茁1处理72h后,TGF-茁1处理组细胞由上皮形态转化为间质形态。TGF-茁1处理组Snail、N-cadherinmRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;而E-cadherinmRNA、蛋白表达水平均低于对照组（均P＜0.05）;Transwell检测发现TGF-茁1处理组穿膜细胞数高于对照组（P＜0.05）;TGF-茁1处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;TGF-茁1+LY294002处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均低于TGF-茁1处理组（均P＜0.05）。CD133+组Snail、N-cadherinmRNA、蛋白表达水平均高于CD133-组（均P＜0.05）,而E-cadherinmRNA、蛋白表达水平均低于CD133-组（均P＜0.05）。结论TGF-茁1诱导胃癌细胞发生EMT,并通过PI3K/Akt信号通路调控CD133表达从而增强胃癌MKN-45细胞的侵袭能力。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

二烯丙基二硫通过细胞外信号调节激酶途径调节HepG2细胞Survivin表达

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法W estern b lot法检测survivin、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）和p-ERK1/2的表达;AO/EB染色观察细胞形态学变化。结果ERK1/2抑制剂PD98059抑制DADS诱导survivin表达的作用。PD98059与DADS联合应用可以促进HepG2细胞凋亡。结论DADS诱导HepG2细胞survivin的表达与ERK1/2信号通路有关。     

邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯（di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP）对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响及机制。方法 体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,分为5组：不加干预药物（对照组）、加17β-雌二醇（17β-estradiol,E₂组）、加DEHP（DEHP组）、同时加E₂和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K）抑制剂LY294002（E₂ + LY294002组）、同时加DEHP和LY294002（DEHP + LY294002组）。检测各组细胞0、2、5 d时光吸收度值（absorbance value,AV）,5 d时DNA增殖指数（proliferation index,PI）,凋亡指数（apoptotic index,AI）、Capase-3蛋白、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（protein-serine-threonine kinase,Akt）以及磷酸化Akt（phosphor-AktSer473,p-AktSer473）蛋白表达。结果 E₂和DEHP组2、5 d时AV值及5 d时PI值均较对照组明显增高（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显降低（P<0.01）,各组AI及Caspase-3蛋白表达无明显变化。5 d时p-AktSer473蛋白表达,E₂和DEHP组较对照组增加（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显减少（P<0.01）,各组Akt蛋白表达无明显变化。结论 DEHP可促进人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞体外增殖,作用与雌激素相仿。该促增殖效应可能通过PI3K/Akt信号通路起作用,与细胞凋亡途径无关。     

ERK1/2信号通路参与LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的调节

目的：探讨ERK1/2信号通路与LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的关系。方法：采用RT-PCR和蛋白免疫印迹方法观察ERK1/2信号通路特异性抑制剂PD98059对LPS诱导的iNOS表达的影响。结果：PD98059能够以剂量依赖方式抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达。结论：LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达部分依赖了ERK1/2信号通路。