甘氨酸对氧糖剥夺诱导大鼠神经元损伤的抗凋亡作用

目的 探讨甘氨酸对氧糖剥夺诱导神经元损伤的作用及机制。方法 采用体外培养的大鼠原代神经元建立氧糖剥夺模型,随机分为正常对照组、氧糖剥夺组和甘氨酸处理组,应用MTT、流式细胞术等方法检测甘氨酸对神经元活性、生存率、细胞凋亡的影响; 应用蛋白质印迹测定甘氨酸对凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Bad、Bax的影响。结果 甘氨酸能够提高大鼠原代神经元活力和存活率,减少细胞凋亡,并且能够增加抗凋亡因子Bcl-2,降低促凋亡因子Bax的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 甘氨酸对氧糖剥夺神经元有明显的保护作用,该作用可能与促进抗凋亡因子、抑制促凋亡因子释放有关。     

c-Fos基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型及迁移的影响

 目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞（VSMC） c-Fos基因,探讨c-Fos基因表达抑制后c-Fos siRNA 对平滑肌细胞表
型转换及迁移的作用。方法设置正常对照组、阴性siRNA 组及阳性siRNA 转染组。应用RT-PCR半定量法检测VSMC
中c-Fos和α平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin）mRNA 的水平,采用Western blot 检测琢-SM-actin、碱性成纤维细胞生长因子
（bFGF）、内皮素1（ET-1）蛋白活性的变化,应用免疫荧光染色检测平滑肌分化标志蛋白琢-SM-actin,同时应用Transwell 检测平
滑肌细胞迁移能力。结果c-Fos siRNA 转染后阳性siRNA转染组c-Fos基因表达水平降低,而正常对照组与阴性siRNA组比
较c-Fos基因表达水平无统计学差异。siRNA 转染使c-Fos表达减弱后,VSMC 中α-SM-actin mRNA 和蛋白表达较正常对照组及
阴性siRNA组显著上调,bFGF、ET-1 表达减弱,VSMC 迁移速度减慢。结论RNA 干扰介导的c-Fos基因沉寂可在诱导VSMC
分化的同时抑制VSMC 迁移。     

ERK1/2在AngⅡ诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达及意义

 目的观察细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化,阐明血
管内皮细胞凋亡对动脉粥样硬化诊治的意义。方法制备AngⅡRPMI1640 培养液（1*10-6 mol/L）培养人脐静脉内皮细胞,采用
四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258荧光染色
观察凋亡细胞形态学变化,利用细胞免疫化学法分析凋亡调控基因、表达的变化,Western blot 测定磷酸化ERK1/2 水
平。结果AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡率明显高于对照组（P < 0.01）;与对照组相比, mRNA表达呈持续性降低;Bcl-2/Bax
比值下降,ERK1/2 磷酸化水平于诱导12 h时明显上升,18 h 达高峰（P < 0.01）,24 h 下降至稳定,总ERK1/2 蛋白水平无明显
变化。结论ERK1/2 信号转导途径参与AngⅡ诱导内皮细胞凋亡的发生、发展,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax 比值来实
现。     

血管紧张素II受体1 抑制剂对雌激素作用下的子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

 目的探讨雌激素及血管紧张素域受体1（AT1-R）抑制剂saralasin 对HEC-1A细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方
法应用免疫细胞化学方法检测AT1-R、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、细胞外信号调节
激酶（ERK）蛋白在HEC-1A 细胞中的表达;应用MTT 法、流式细胞技术检测雌激素作用于HEC-1A 细胞不同时间后细胞增殖、
细胞周期和凋亡的变化,以及saralasin对雌激素诱导下的HEC-1A 细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;Western blot 分析雌激素
作用后HEC-1A细胞中ERK、p-Akt 蛋白表达的变化,及saralasin 对雌激素诱导下的HEC-1A细胞中ERK、p-Akt 蛋白表达的影
响。结果AT1-R、PI3K、p-Akt、ERK蛋白在HEC-1A细胞中均有阳性表达;雌激素能够促进HEC-1A细胞增殖,使G0~G1期的
细胞比例下降,S 期的细胞比例升高,凋亡减少,ERK蛋白的表达上调;而saralasin 可明显地抑制雌激素诱导的HEC-1A细胞的
增殖,使细胞周期停滞在G0~G1期,S 期的细胞比例下降,凋亡增多,ERK蛋白的表达下调。结论雌激素可以通过AT1-R促进
HEC-1A 细胞增殖,AT1-R 抑制剂saralasin 可以抑制雌激素的促细胞增殖作用,并促使HEC-1A 细胞发生凋亡,其机制可能是通
过阻断丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路引起ERK蛋白表达的下调,从而抑制细胞增殖,因此saralasin 可能有助于雌激素受
体低表达的子宫内膜癌的治疗。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对急性高眼压大鼠视网膜损伤的保护作用

 目的探讨Rho 激酶抑制剂Y-27632 对急性高眼压大鼠视网膜损伤的保护作用。方法50 只SD大鼠随机分为正常对
照组（ n=10）、生理盐水对照组（ n=20,玻璃体腔内注射生理盐水）和Y-27632 治疗组（ n=20,玻璃体腔内注射100 nmol
Y-27632）,选取右眼做为实验眼。正常对照组直接处死取材。生理盐水对照组及Y-27632 治疗组分别用前房加压灌注法建立大
鼠急性高眼压损伤模型,并于损伤后24 和168 h取标本。HE 染色观察视网膜组织病理学的改变,测量视网膜厚度;TUNEL 染
色检测细胞凋亡情况,计算凋亡指数;Western blot 检测Caspase-3 蛋白表达的变化。结果急性高眼压损伤24 h后,Y-27632
治疗组视网膜凋亡细胞数量和Caspase-3 蛋白表达水平均低于生理盐水对照组（ P< 0.01）。损伤168 h后Y-27632 治疗组视网
膜厚度大于生理盐水对照组（ P< 0.01）。结论Y-27632 可以减轻大鼠急性高眼压引起的视网膜损伤,具有神经保护作用。     

Zebularine 调控卵巢癌细胞hMLH1基因再表达

 目的探讨去甲基化药物Zebularine（Zeb）对体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因甲基化状态的
影响及表达调控作用。方法应用不同浓度的Zeb（50 μmol/L,100 μmol/L,200 μmol/L）处理体外培养的卵巢癌细胞A2780/
cp70 后,甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）法检测用药前后细胞中hMLH1基因的甲基化状态,RT-PCR 法及
Western-blot 法检测用药前后细胞中hMLH1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果hMLH1基因在卵巢癌细胞A2780/cp70 中
呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性。经过Zeb 处理后,hMLH1基因呈去甲基化状态,其mRNA及蛋白重新表
达。结论异常甲基化是卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因失活的原因,去甲基化药物Zeb 能使hMLH1基因去甲基化从而
调控其重新表达。     

孕激素对子宫内膜癌Ishikawa 细胞TGF-β1、TβR1 表达的影响

 目的观察孕酮（MPA）对人子宫内膜高分化腺癌细胞株Ishikawa 细胞中TGF-β1、TβR1 蛋白表达的影响,探讨孕激素
治疗子宫内膜腺癌的作用机制。方法体外培养人子宫内膜高分化腺癌细胞株Ishikawa细胞,MTT 法观察细胞的增殖;流式细
胞仪（FCM）检测细胞细胞凋亡率;链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法测定Ishikawa 细胞中TGF-β1、TβR1蛋白的表
达。结果MPA 呈时间及剂量依赖性抑制Ishikawa 细胞增殖（ P < 0.05）。与对照组相比,MPA处理组细胞凋亡率上升（ <
0.01）。TGF-β1 在Ishikawa 细胞中有强表达,MPA 处理72 h后,其表达明显下调（ P < 0.01）;TβR1 蛋白在Ishikawa 细胞中有弱
表达,MPA 处理72 h后,明显上调其表达（ P < 0.01）。结论孕酮调节的TGFβ1、TβR1 蛋白的表达可能是调节细胞凋亡的机制
之一。     

hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达

 目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法
提取人胃癌细胞SGC-7901 的总mRNA 并进行反转。以反转录的cDNA 为模板PCR 扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至
pCDNA3.1-Flag 以及pGEX-4T-2 表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21 细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转
入胃癌SGC-7901 细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结
果hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3 200 bp。原核诱导出GST-hFAK 并进行纯化;
Western blot 检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130 kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位。结论
成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达     

FANCF-shRNA 表达质粒的构建及MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立

 目的构建针对人FANCF基因的shRNA 表达质粒（ FANCF-shRNA）,转染FANCF-shRNA 使人乳腺癌MCF-7 细胞
FANCF基因沉默,从而建立MCF-7--RNAi瞬时转染细胞模型。方法实验分两部分： FANCF-shRNA 表达质粒的构建：
根据相关文献报道,使用Ambion 公司的在线设计软件,设计并合成能够编码针对FANCF基因的小发夹RNA（ FANCF-shRNA）
的DNA 模板,将其插入到p SliencerTM 4.1-CMV neo 表达质粒中,形成pSliencerTM 4.1-CMV-FANCF-shRNA 重组质粒;将该重组
质粒转化到感受态细胞JM109 中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR 及FANCF基因
测序方法筛选出插入正确的FANCF-shRNA 表达质粒;MCF-7--RNAi 瞬时转染细胞模型的建立：碱裂解法提取-
shRNA 表达质粒,通过脂质体介导将该质粒转染入人乳腺癌MCF-7 细胞中,RT-PCR 法检测FANCF基因mRNA 表达水平,确
认FANCF基因沉默。结果含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR 扩增片段约为250 bp,并且其FANCF基因测序结果显示插入片段碱
基排列顺序正确,没有突变,说明FANCF-shRNA 表达质粒构建成功;与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA 质粒后第2 天、
第3 天、第5 天和第7 天, FANCF基因mRNA 表达水平均明显减低,表达抑制率分别为（36.51±6.84）%、（37.03±6.61）%、
（53.03±9.33）%和（39.51±10.13）%（ 约0.05）,说明FANCF基因沉默,MCF-7--RNAi 瞬时转染成功建立。结论成功构
建了FANCF-shRNA 表达质粒并建立MCF-7--RNAi 细胞模型,为研究FANCF基因在乳腺癌发生发展及耐药产生与调控
中的作用奠定实验基础。     

TRPM8通过cAMP-PKA/UCP4信号调控氧糖剥夺/复糖复氧诱导的神经元凋亡

目的探究TRPM8在氧糖剥夺/复糖复氧诱导神经元PC12细胞凋亡中的分子机制。方法体外建立氧糖剥夺/复糖复氧模 型模拟脊髓缺血再灌注损伤,流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡,RT-PCR和western blot检测TRPM8、UCP4和cAMP、p-PKA、 Bax、Bcl-2 的表达变化;向PC12 细胞分别加入AMTB（TRPM8 阻断剂）和转染UCP4 质粒,western blot 检测cAMP、p-PKA、 UCP4、Bax、Bcl-2的表达水平;抑制PKA信号,检测UCP4、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果氧糖剥夺/复糖复氧导致脊髓神经 元PC12 细胞发生凋亡,TRPM8 过表达,UCP4 表达下降,抑制cAMP-PKA 信号。抑制TRPM8 表达,则细胞凋亡减少, cAMP-PKA信号被激活,且UCP4的表达有所恢复。抑制TRPM8和cAMP-PKA信号,UCP4的表达减少,细胞凋亡增加。结论 在氧糖剥夺/复糖复氧模型中,PC12细胞TRPM8过表达,且通过cAMP-PKA/UCP4诱导神经元PC12细胞凋亡。     

黄芪甲苷对PC12细胞缺糖缺氧损伤的保护作用

目的：探究黄芪甲苷对PC12细胞缺糖缺氧损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养PC12细胞,应用无糖Earle’s稀释Na2S2O4建立缺糖缺氧模型,尼莫地平做阳性对照,使用不同浓度的黄芪甲苷进行预保护。显微镜下观察细胞形态差异;以MTT法测定细胞活力;酶标法测定上清液中LDH含量;Western-blot法测定Bcl-2与Bax蛋白表达量。结果：黄芪甲苷能够提高PC12细胞在缺糖缺氧环境下的细胞存活率,降低LDH漏出量;能够增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2比值。结论：黄芪甲苷对PC12细胞的缺糖缺氧损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与其抑制细胞凋亡有关。     

磷酸肌酸的脑保护作用研究

[目的]建立小鼠脑缺血、脑缺血再灌注模型以及细胞缺氧缺糖模型,研究损伤时磷酸肌酸(PCr)对脑的保护作用及其机制.[方法](1)小鼠尾静脉注射PCr后,进行双侧颈总动脉结扎,以4h为限记录小鼠的生存时间;濒死小鼠断头取脑组织,测定丙二醛(MDA)含量.(2)小鼠尾静脉注射PCr,夹闭两侧颈总动脉,夹闭30 min后复灌...     

黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路对PC12 细胞OGD/R 损伤的保护机制研究

目的：探究黄芪甲苷（astragaloside IV,AS-IV）对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma 12,PC12）细胞缺氧缺糖复供（oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R）损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/ 蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称Akt）及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白（B-cell lymphoma-2,Bcl-2） PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法：体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组（OGD/R）,尼莫地平阳性对照组（5 μmol·L-1）和黄芪甲苷组（1.00、0.10、0.01 μmol·L-1）,除空白组外其余各组均建立体外PC12 细胞OGD/R 模型。CCK-8 试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342 和碘化丙啶（propidium iodide,PI） 双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot 检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 （cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）的蛋白表达情况。结果：黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2 的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3 的表达。PI3K/Akt 通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论：黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路有关。     

谷氨酰胺对细胞缺糖损伤的保护作用

目的观察谷氨酰胺（glutamine，Gln）对细胞缺糖（glucose desprivation，GD）损伤的保护作用．并探讨可能的作用机制。方法在以无糖培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）细胞建立细胞缺糖损伤模型的基础上，首先以噻唑蓝比色（MTT）法、流式细胞法、细胞线粒体跨膜电位检测等方法观察Gln对缺糖损伤细胞模型的作用；再以大鼠大脑中动脉线栓法建立动物脑缺血模型．观察Gln对动物缺血性损伤的保护作用；同时用免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测细胞中应激基因葡萄糖调节蛋白75（grp75）的表达变化。结果Gln能使离体细胞在缺糖应激下存活率增加、凋亡率降低，线粒体跨膜电位稳定；动物实验显示Gln能减轻动物因缺血造成的脑损伤；免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测结果表明Gln可以上调细胞中grp75的表达。结论Gln对细胞缺糖损伤和动物缺血性脑损伤具有一定的保护作用，这种保护作用可能与上调细胞中的应激基因grp75的表达有关。     

膜微粒抑制缺氧无血清诱导的骨髓间充质干细胞的凋亡

目的：明确心肌梗死后血液来源的膜微粒（MPs）抑制缺氧无血清诱导的骨髓间充质干细胞（BMSCs）凋亡的作用并探讨其相关机制。方法：利用结扎SD大鼠左冠脉前降支的方法来制作急性心肌梗死模型,然后提取血液中的MPs。提取培养SD大鼠的BMSCs,并建立缺氧无血清的干细胞凋亡模型。分别按照不同浓度（即0.5 μg/mL、1 μg/mL和2 μg/mL）的MPs对干细胞进行预处理,分别利用Hoechst染色、Tunel检测、AnnexinV/PI流式细胞学、Western blot检测caspase-3来揭示MPs抑制BMSCs的凋亡作用,并用Akt信号通路的通路抑制剂AZD5363来初步探讨其抗凋亡的相关机制。结果：大鼠心肌梗死后血液来源的MPs能够有效抑制缺氧无血清诱导的BMSCs的凋亡（P＜0.01）;并且其抗凋亡作用呈现出浓度依赖性,0.5 μg/mL 浓度的MPs亦能达到显著抗凋亡作用（P＜0.05）。其机制主要是通过激活Akt信号通路来实现。结论：心肌梗死后血液来源的MPs能有效抑制缺氧无血清诱导的BMSCs的凋亡。     

高迁移率族蛋白B1通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达促进氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞的凋亡

目的：研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）在氧糖剥夺/复氧后对星形胶质细胞凋亡的影响,同时通过检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax表达变化探讨其可能的作用机制。方法：将体外培养新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞分为正常组、模型组、干扰组、对照组,用携带大鼠HMGB1的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）慢病毒载体干扰星形胶质细胞抑制HMGB1表达后进行氧糖剥夺/复氧处理,氧糖剥夺6 h、复氧24 h后检测。通过Western blotting法检测RNA干扰效果,通过MTT细胞存活实验检测细胞损伤,通过TUNEL法检测细胞凋亡,最后通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达。结果：与正常组比较,模型组经过氧糖剥夺/复氧处理后星形胶质细胞内HMGB1表达明显升高（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率下降（P<0.001）,TUNEL法检测凋亡细胞数增多（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl 2/Bax蛋白比值下降（P<0.001）;与模型组比较,RNA干扰有效抑制HMGB1蛋白表达（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率升高（P<0.001）,TUNEL法标记凋亡细胞数减少（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax蛋白比值升高（P<0.001）。结论：氧糖剥夺/复氧后HMGB1的释放可以导致星形胶质细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达有关。     

三七总皂苷抑制心肌细胞凋亡的作用机制研究

目的 探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)对无糖无血清/缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用.方法 将心肌H9e2细胞株分为正常对照组(control)、模型组(model)和PNS不同浓度(0.05、0.25、2.25 g/L)组.对照组采用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基于普通二氧化碳培养箱培养,模型组采用无糖无血清培养基培养,同时进行缺氧处理诱导细胞凋亡,给药组按照模型组方法处理的同时给予不同浓度的PNS.细胞处理结束后收集细胞,Annexin V/PI染色后流式细胞仪检测不同浓度PNS干预后各组细胞的凋亡率.DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧的水平.Western blot检测Akt和磷酸化Akt(P-Akt)的表达水平.结果 PNS能够抑制缺血环境诱导的心肌细胞凋亡,且呈剂量依赖性.对照组、模型组和PNS处理组细胞凋亡率分别为(8.01±1.44)%、(65.71±3.36)%(vs control P<0.001)、(65.00±1.24)%、(52.51±1.76)%(vs model P<0.01)、(23.99±0.76)%(vs model P<0.001).DCFH-DA染色结果显示,模型组细胞能够观察到明显的绿色荧光信号,而PNS组荧光信号与模型组比较明显减弱,说明PNS具有清除ROS的作用.Western blot结果显示与对照组比较,模型组p-Akt蛋白表达水平明显降低;与模型组比较,PNS组p-Akt蛋白表达水平显著升高,而PI3K特异性抑制剂LY294002明显抑制PNS促进p-Akt表达的作用.结论 PNS通过促进p-Akt的活性从而抑制缺血诱导的心肌细胞凋亡.     

红景天苷对NaCN及缺糖诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：研究红景天苷对PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法：以NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞技术,考察红景天苷对细胞凋亡的保护作用;采用比色法测定Caspase活性、Western-blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,考察红景天苷抗凋亡的机制。结果：红景天苷可以有效地改善NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡,抑制Caspase活性,降低胞浆中细胞色素C的水平。结论：红景天苷可能通过线粒体途径抑制NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡。     

小豆蔻明诱导K562细胞凋亡及其相关凋亡蛋白的表达

目的：探讨小豆蔻明诱导K562细胞凋亡与PTEN、p-Akt、NF-κB、Bcl-2等抑凋亡蛋白及促凋亡蛋白表达量的关系。方法①普通光镜观察小豆蔻明作用K562细胞48h后的细胞形态学变化。②采用MTT法检测小豆蔻明作用K562细胞48h后的凋亡情况,计算IC50。③应用流式细胞仪检测小豆蔻明作用K562细胞48h后的细胞凋亡率。④采用RT-PCR技术检测小豆蔻明作用K562细胞48h后Bcl-2、Bax的mRNA表达量。⑤采用Westernblot技术检测小豆蔻明作用K562细胞48h后PTEN、p-Akt、NF-κB、Bcl-2的蛋白表达量。结果小豆蔻明作用K562细胞48h后,形态学出现明显凋亡现象。MTT提示K562细胞增殖抑制明显且呈量效和时效关系。早期凋亡率与空白组比有显著增加（P＜0.05）,呈剂量依赖关系。Bcl-2mRNA的表达较空白组明显下降（P＜0.05）,BaxmRNA的表达较空白组明显升高（P＜0.05）,呈现浓度依赖性。PTEN蛋白表达量随小豆蔻明的浓度增加明显增加,而p-Akt、NF-κB、Bcl-2蛋白表达量则减少。结论小豆蔻明通过增加PTEN蛋白的表达量,同时下调p-Akt、NF-κB、Bcl-2蛋白的表达量促进K562细胞的凋亡,且呈剂量依赖性。     

Bcl-2基因转染骨髓干细胞治疗激素性股骨头坏死的疗效研究

研究Bcl-2 基因转染的骨髓间充质干细胞（BMSCs）结合髓芯减压法对兔早期激素性股骨头坏死的疗效。方法使用共计40只家兔复制早期激素性股骨头坏死模型,其中成功的模型家兔共28 只。随机分为4 组：空白对照组6 只,不作任何处理;髓芯减压组6 只,单纯减压;BMSCs 治疗组8 只,在减压同时植入BMSCs;Bcl-2 治疗组8 只,在减压同时植入Bcl-2 基因转染的BMSCs。植入后分别在第8、12 周各取股骨头标本行病理学检查及骨细胞凋亡检测,观察骨细胞生长及凋亡情况。结果成功复制兔早期激素性股骨头坏死动物模型;培养出BMSCs后进行传代;Bcl -2 基因转染成功;治疗12 周后,Bcl-2 治疗组动物的一般情况改善,组织切片和细胞凋亡检测结果显示,Bcl-2 治疗组的空骨陷窝和骨细胞凋亡数量与其他3 组比较,差异有统计学意义（p <0.05）。结论使用髓芯减压将Bcl-2 基因修饰的BMSCs 移植到兔早期激素性股骨头坏死动物模型体内,具有较好的成骨治疗作用。