六氟化硫脂质微泡的制备研究

目的 制备六氟化硫脂质微泡,为靶向微泡的研制奠定基础.方法 以二硬脂酰磷脂酰胆碱、聚乙二醇磷脂酰乙醇胺为膜成分,六氟化硫为气体核心,薄膜一超声法制备微泡.以SonoVue作对照,观测自制微泡的形态、粒径、浓度、pH值、渗透压等各项理化参数.在二次谐波模式下观察微泡显影体外水囊及兔肾实质,测量分析增强图像峰值灰度.结果 自制微泡和SonoVue均大小均匀,圆形,中空透亮,平均直径分别为2.25μm和2.50 μm,粒径分布分别为0.4～10 μm和0.2～10 μm,90%微泡直径分别控制在6 μm和8 μm以内.初始浓度分别为5 x 108～10 X 108/ml和1 x 108～5 x 108/ml,配置后的稳定性均为6 h.显影水囊灰度值分别为121.67±6.76和122.33±4.53(P>0.05),兔肾造影增强峰灰度分别为72.00±7.21和74.65±10.93(P>0.05).结论 脂质微泡制备成功,具有良好的理化特性及显影效果.     

两种携B类清道夫受体Ⅰ超声造影剂的特性及对大鼠颈动脉造影的对比研究

目的对比研究六氟化硫微泡和全氟丙烷微泡的理化特性、携基因能力及在大鼠颈总动脉造影中的显影效果,旨在提供一种可动态实时监测的基因载体。方法全氟丙烷和六氟化硫微泡均采用薄膜分散法制备,观察其形态、浓度、平均粒径及携B类清道夫受体Ⅰ(SR-BⅠ)能力,并对比研究其在大鼠颈总动脉显影效果及持续时间。结果全氟丙烷阳离子脂质体微泡的粒径范围为0.712～5.56μm,平均粒径1.312μm,浓度为(3.12±0.39)×109/ml;六氟化硫阳离子脂质体微泡的粒径范围为0.915～96.86μm,平均粒径7.422μm,浓度为(7.43±0.28)×107/ml。当SR-BⅠ与这两种阳离子脂质体微泡的摩尔比为1:3时,微泡内SR-BⅠ含量达到饱和。体内造影显示全氟丙烷微泡可快速充填颈总动脉管腔,持续时间达180s以上。而六氟化硫微泡显影效果不明显。结论与六氟化硫阳离子脂质体微泡相比,全氟丙烷阳离子脂质体微泡在体内造影有很好的显影效果,并且与SR-BⅠ结合稳定,可望成为一种新型的载基因超声微泡造影剂。     

载血卟啉脂质微泡的制备及一般特性的实验研究

目的 制备一种载声动力药物的脂质超声微泡并测定其包封率、粒径大小、观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡的方法制备载血卟啉的脂质超声微泡,用荧光分光光度仪测定其包封率,用倒置显微镜及马尔文激光粒径测量仪测量粒径大小、分布和Zeta电位;观察60Co射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度和平均粒径的改变,并观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(3.24±0.79)×109/ml,粒径范围为1.5～5.3μm,平均粒径为(2.84±0.4)μm;脂质载血卟啉(1mg)微泡的包封率为(30.25±4.45)%;Zeta电位为-(15.4±2.4)mV.经60℃射线灭菌后观察微泡形态、粒径及包封率无明显变化,其平均粒径大小及包封率分别为(2.24±0.3)μm,(27.39±2.91)%.静脉注射此载药微泡后,小鼠肝脏可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法制备的载血卟啉脂质微泡,包封率较高,粒径分布均一,体内显像效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药.     

载诺帝脂质微泡的制备及特性的实验研究

目的 制备载诺帝(去甲二氢愈创木酸)脂质微泡并测定其包封率、载药量及观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡法制备载诺帝脂质微泡,测定其粒径大小、分布和Zeta电位、包封率、载药量;超声造影观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(2.53±0.52)×109个/ml,粒径为(2.61±0.32)μm,Zeta电位为+(17.52±2.04)mV;脂质微泡诺帝的包封率(27.1±2.01)%,载药量为(10.9±0.90)%;微泡经外周静脉注射后,兔肝可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法可以成功制备携带诺帝的脂质微泡,微泡可以通过肺血管床,符合静脉注射要求,在家兔体内获得了良好的显像效果.     

载基因及穿膜肽脂质超声造影剂制备的实验研究

目的 研究自制的脂质超声造影剂载基因及穿膜肽的能力,评价其物理性质及显影效果.方法 采用机械振荡法制备载基因及穿膜肽的脂质超声造影剂,检测微泡形态、分布、浓度、粒径、表面电位及载基因和穿膜肽的能力,并观察其对兔心脏的显影效果.结果 自制载基因及穿膜肽脂质超声微泡造影剂的粒径为(2.27±0.38)μm,浓度为(3.07±0.42)×109个/ml,表面电位为(1.95±0.13)mV.该造影剂中基因的包封率为32%,穿膜肽的包封率为35%.体内造影显示该造影剂能有效增强心肌显影.结论 自制载基因及穿膜肽脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,载基因及穿膜肽的效率高,可作为携带基因等生物活性物质的载体材料.     

载10-羟基喜树碱脂质超声微泡的处方制备及一般特性研究

目的 研究载10-羟基喜树碱(HCPT)脂质超声微泡的处方制备工艺,筛选出最佳处方制备载药微泡,研究微泡的一般特性及显影效果,并检测微泡的药物包封率和载药量.方法 以机械振荡法制备载HCPT脂质超声微泡;采用正交试验优选处方;采用紫外分光光度法和反相高效液相色谱法测定微泡的包封率和载药量;在光学显微镜下计数并观察微泡的外观和分布情况;以马尔文激光粒径测量仪测量微泡粒径大小和Zeta电位;观察并比较微泡经60Co射线灭菌前后其外观、形态、平均粒径和包封率的改变;并观察微泡在兔肝脏的增强显影效果.结果 以最佳处方制备的载10-羟基喜树碱(2 mg)微泡的药物包封率为86.70%,载药量为21.70%;浓度为(3.07±0.58)×109/ml,粒径范围为(1.10±0.20)μm,平均粒径为1.10 μm;Zeta电位为-(3.90±0.80)mV;超声定向辐照微泡后,药物吸光度值明显增加;经60Co射线灭菌后观察微泡形态、平均粒径及包封率无明显变化;静脉注射此载药微泡后,兔肝脏超声显影持续增强.结论 采用机械振荡法制备的载HCPT脂质微泡,包封率和载药量较高,粒径分布均匀,体内显影效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药,为进一步研究奠定了基础.     

冷冻干燥法制备载紫杉醇脂质微泡的实验研究

目的 探讨冷冻干燥法制备载紫杉醇脂质微泡的可行性,并对其质量和安全性进行评价.方法 采用冷冻干燥法制备携带紫杉醇的脂质微泡,在光学显微镜和荧光显微镜下观察其形态、大小以及紫杉醇在微泡上的定位,用血球计数板、激光粒度分析仪和pH计测定其浓度、粒径及分布、表面电位、pH值,通过反相高效液相色谱法检测包封率,锥虫蓝排斥试验观察载紫杉醇脂质微泡对血管平滑肌细胞的毒性作用.结果 载紫杉醇脂质微泡的粒径为2～10μm,平均粒径(2.79±0.14)μm,浓度为(7～8)×109/mL,表面电位为(-5.9±0.21)mV,pH值为5.54±0.18,包封率为(36.1±4.74)%,对血管平滑肌细胞无毒性作用.结论 采用冷冻干燥法可成功制备携带紫杉醇的脂质微泡,其粒径大小符合静脉注射要求,体外细胞毒性试验证实该载药脂质微泡的安全性.     

一种载基因脂质超声造影剂的制备及特性的实验研究

目的制备一种可作为基因载体的脂质超声造影剂,对其理化性质和兔肾显影效果及载基因的能力进行研究。方法采用机械振荡法制备一种可作为基因载体脂质超声微泡造影剂,观察60Coγ射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度、平均粒径和电位改变,并观察其对正常兔肾显影效果,检测其结合基因的能力。结果自制脂质微泡的平均粒径范围为2.11~6.43μm,平均粒径2.79μm,粒径分布均匀,浓度约为(3.16±0.29)×109/ml;经60Coγ射线灭菌后在显微镜下观察微泡形态,粒径大小无明显变化;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肾实质回声;基因结合量效优化结果显示,造影剂的最大基因结合的效率为22%,最大基因结合量为0.45μg/ml。结论自制脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载基因效率高,可望成为一种新型的超声微泡造影剂以及基因或药物治疗的载体。     

载药脂质微气泡的制备及其应用

目的制备载紫杉醇脂质微气泡并测定其包封率、载药量、药物释放及观察其体内超声显像效果。方法制备载紫杉醇脂质微气泡,测定其包封率,载药量,粒径大小、分布和Zeta电位;观察苏丹黑对脂质微气泡的染色,以及超声辐照后苏丹黑的释放情况;观察辐照后载药脂质微气泡各层溶液药物的释放;并观察其在小鼠肝内的显像效果。结果载药脂质微气泡的浓度为2.3×109~3.5×109/ml,粒径范围为90%以上2~6μm,平均粒径为2.95μm。脂质微气泡紫杉醇的包封率大于90%,载药量为(26.5±0.7)%;Zeta电位为-(21.8±1.1)mV;苏丹黑染色后光镜下可见微气泡壁被染成黑色,超声辐照后微气泡稀释液变黑,并且超声辐照载药脂质微泡溶液后,上层和中间层的药物释放明显增加;静脉注射此载药微气泡后,小鼠肝可见良好、持续的增强显像效果。结论采用机械振荡法制备的紫杉醇脂质微气泡,包封率和载药量均较高,粒径分布好,体内显像效果好,超声辐照能促使微泡中的药物释放,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药。     

脂质微泡-载紫杉醇纳米粒包裹紫杉醇的肝素纳米粒与脂质微泡复合物的制备

目的 制备一种新型包裹紫杉醇的肝素纳米粒-微泡复合物,并对其理化性质进行检测.方法 以肝素为原料制备生物素化包裹紫杉醇的肝素纳米粒,动态光散射仪测定其粒径及电位,透射电镜观察其形态,紫外分光光度计测定载药量.采用机械震荡法制备生物素化脂质微泡.借助生物素-亲和素桥接作用将两者偶联,制备复合物体系,激光共聚焦显微镜观察Oregon green绿色荧光标记的载药纳米粒与DiI红色荧光标记的脂质微泡的连接效果,用库尔特粒度分析仪进行粒度分析.结果 肝素纳米粒的粒径为120 nm,电位为-35 mV,电镜观察呈球形,大小均匀,分散度好,载药量为8.84％.激光共聚焦显微镜观察肝素纳米粒成功连接在微泡表面.库尔特粒度分析仪测定微泡粒径为(2.20±0.93)μm,浓度为(11.31±1.0)×108个/ml,复合物的粒径为(2.26±0.86) μm,浓度为(7.78±1.2)×108个/ml.结论 成功制备具有较好药物运载性能的新型载紫杉醇肝素纳米粒-微泡复合物.     

载紫杉醇脂质微泡的改良制备研究

目的 探讨加入三醋酸甘油酯改良制备载紫杉醇脂质微泡的可行性,及其对载药微泡质量、载药量、包封率的影响.方法 采用冷冻干燥法制备携带紫杉醇的脂质微泡,分别于制备过程中加入或不加入三醋酸甘油酯,测定载药微泡的包封率、载药量、粒径大小、分布和Zeta电位、pH值.结果 改良法(加入三醋酸甘油酯)制备的载紫杉醇脂质微泡与常规冻干法制备的载药微泡相比较,微泡粒径显著减小,二者的平均粒径分别是(1.1±0.4)μm和(2.8±0.4)μm,P<0.01;其表面电位显著增高(19.1±0.3)mV和(-5.9±0.2)mV,P<0.01;包封率和载药量显著增高,包封率分别为(95.0±1.2)%和(36.1±4.7)%,载药量为(5.60±0.10)%和(0.50±0.04)%,P<0.01.结论 制备过程中加入三醋酸甘油酯可显著提高载药微泡的包封率和载药量.     

L-S靶向超声造影微泡的制备及声学性质的实验研究

目的探讨将淋巴细胞选择素(Lymph-Selectin,L-S)链接到脂质超声造影微泡膜表面的可行性,并体外验证其声学性质,为淋巴结特异靶向超声造影制备靶向微泡。方法采用静电吸附法将L-S链接到普通脂质超声微泡膜表面制备成L-S靶向超声造影微泡,荧光免疫染色实验验证L-S与脂质微泡膜的结合;流式细胞仪检测不同浓度L-S与微泡的结合率;超声体外验证L-S靶向微泡声学性质。结果 L-S靶向微泡的免疫荧光染色实验为阳性;L-S抗体浓度为5、15、35 μg/ml时L-S与脂质微泡的平均结合率分别为(9.88±1.49)%、(29.59±2.23)%、(86.66±4.71)%,两两比较均有统计学意义(P0.01);体外声学造影实验中,普通微泡组(UCM)和L S靶向微泡组(TUCM)平均灰度值分别为:(75.77±7.08)dB和(73.72±8.19)dB(P0.05)。结论采用静电吸附法可将L-S链接到脂质超声微泡膜表面制备成L-S靶向超声微泡,其结合率与加入的L-S抗体浓度有关。L-S的链接不会破坏靶向微泡的声学特性。     

比较两种制备载紫杉醇超声微泡的方法

目的 比较能被超声击破的两种载紫杉醇超声微泡的制备方法,并评价其理化性质以及超声散射强度.方法 用单纯紫杉醇法Ⅰ号和三醋酸甘油酯溶解法Ⅱ号分别制备载紫杉醇脂质超声微气泡,测定其包封率、载药量、粒径大小、分布和Zeta电位、pH值,并行超声击破试验及兔VX2皮下肿瘤显像试验. 结果两种微泡显像无明显差异,可被低能量超声击破,但Ⅱ号(加入三醋酸甘油酯)脂质微泡较Ⅰ号(常规冷冻干燥法制备)载药微泡粒径显著减小[(1.07±0.38)μm vs(2.79±0.41)μm,P<0.01],表面电位增高[(19.10±0.32)mV vs (-5.90±0.21)mV,P<0.01],包封率和载药量显著增高[(95.00±1.22)% vs (36.10±4.74)%,P<0.01;(5.60±0.11)% vs (0.50±0.04)%, P<0.01]. 结论 三醋酸甘油酯溶解法制备的Ⅱ号微泡在局部药物释放中具有更大的应用价值.     

载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声造影剂的制备及其特性检测

目的 制备一种载重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂,对其物理特性、载病毒的能力及在兔肝脏的显影效果进行研究.方法 采用机械振荡法及分层吸附法制备一种载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的脂质超声微泡造影剂,用DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径和浓度;检测其结合腺病毒的能力及观察对正常兔肝脏的显影效果.结果 载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声微泡分布均匀,平均粒径为(1.17±0.82)μm,浓度为(2.50±0.12)×10~9/mL;该造影剂的最大腺病毒结合的效率为30%;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肝脏实质回声.结论 自制载重组腺病毒的微泡造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载腺病毒效率高,为超声靶向微泡破裂基因释放技术的发展开辟新思路.     

声诺维在肝脏超声造影中的影响因素及注意事项

超声造影剂在经历了第1代游离微气泡造影剂和第2代为包裹空气微气泡造影剂之后,第3代超声造影剂的微泡内为血液弥散性极差的高分子氟烷气体[1],使造影剂在稳定性和有效性方面有了突破性的进展,开辟了超声造影的全新领域.超声造影剂声诺维(SonoVue),是由磷脂包裹的六氟化硫(SF6)微泡,可以在低机械指数条件下产生非线性振动,增强血液的回声强度和多普勒信号强度,从而动态观察肝脏及其肿瘤的血流灌注,有助于肿瘤良恶性的鉴别[2,3],提高了超声诊断的准确性和敏感性.但在超声造影过程中,仪器设备各种条件的选择和参数的设定,如机械指数(mechanicalindex,MI)、增益(gain,Gn)、动态范围(dynamic range,DR)、发射聚焦(focus)、深度,均可影响造影效果,进而影响诊断结果. 　　……     

环境因素对脂质造影剂的稳定性和回声效率的影响

背景目前,利用超声造影剂微泡进行药物或基因的靶向递送的研究越来越多。将载有药物或基因的造影剂微泡在靶向器官上游血管中注入,在靶向器官定位超声,流经靶向器官的造影剂微泡在超声作用下被破坏,产生空化效应,增加血管壁的通透性,促进药物或基因进入到靶向器官和组织中。以磷脂为材料的超声造影剂微泡在药物或基因的靶向给药方面具有显著优势,如磷脂材料无免疫原性、制备工艺简单、容易联接大分子DNA等。本课题组已研制出磷脂为材料的脂质造影剂微泡,利用其可将反义寡聚核苷酸高效地转染到乳腺癌细胞中。目的理想的超声造影剂微泡不但具有良好的超声图像对比增强效果,更应具有足够的稳定性,以便储存供临床应用。本研究利用自制的脂质造影剂微泡研究环境因素对其稳定性和回声效率的影响,并探讨其成因。方法体外试验参照脂质体稳定性考察方法,考察温度、光照和60Co辐射对本品稳定性的影响,以显微形态、微泡浓度和平均粒径作为考察指标。温度设置:放置于低、中、高3种温度下(即0℃、20℃和40℃)保持10d,考察贮存温度对脂质造影剂微泡的影响。光照设置:在(4500±500)Lx强度下强光照射10d,考察光照对脂质造影剂微泡的影响。辐射条件设置:60Co辐射灭菌是冻干粉针剂常用的灭菌方法,本品经过150万rad的60Co辐射,观察辐射对脂质造影剂微泡的影响。动物体内实验采用实时匹配成像技术(CnTi)研究环境因素对脂质超声造影剂回声效率的影响。5只新西兰雄性兔,通过耳静脉的团注脂质造影剂微泡,观察和记录不同实验条件下肝实质区CnTi成像增强强度和持续时间。采用超声仪内置的时间-强度分析软件进行统计分析。结果体外实验结果表明,各实验组微泡浓度均能达到2×109个/ml,且95%的微泡粒径小于8μm。以20℃或40℃贮存组微泡浓度最高,但是各组条件的显微形态和平均粒径结果相差不明显(表1,图1);动物CnTi成像实验表明,40℃贮存组肝实质区成像增强强度和持续时间最高,其次是20℃贮存组和60Co辐射灭菌组,而强光照射组和0℃贮存组成像增强强度和持续时间最差(表2,图2)。不同的温度实验结果的解释与磷脂的相转变温度(Tc)有关;本品磷脂材料的Tc为42℃～45℃,当环境温度小于本品磷脂的Tc时,磷脂膜为胶晶相结构,排列紧凑而有序,具有较好的弹性(图3)。但是温度降到接近0℃时,磷脂胶晶相结构会变得松脆。而温度超过Tc时,磷脂膜会从胶晶相向液晶相转变,磷脂膜会液化消失。因此尽管其显微形态和平均粒径相差不明显,0℃贮存时因磷脂膜变得松脆而导致其回声效率显著降低,成像增强强度和持续时间最差。贮存于20℃和40℃时,磷脂膜具有较好的弹性,因此成像增强强度和持续时间较好。光照会诱发磷脂的氧化反应,降低脂质微泡膜的弹性。因此强光照射组显示出与0℃贮存实验组相近的结果,即尽管其显微形态和平均粒径变化不大,但是CnTi成像增强强度和持续时间差。60Co辐射对脂质超声造影剂影响较小,显微形态、平均粒径和CnTi成像效果均未见显著影响,说明60Co辐射可以作为本品的灭菌方法。结论本品在避光条件下常温保存,其稳定性较高,并能采用60Co辐射灭菌。     

纳米脂质微泡超声造影剂制备及其显影效果的实验研究

目的 制备一种纳米级脂质超声微泡造影剂,并将其与普通脂质微泡在正常兔肝的造影效果进行比较,以评价其造影效果.方法 经机械振荡法制备纳米脂质微泡,检测其形态、粒径、表面电位等物理特性.分别经兔耳缘静脉团注自制纳米脂质、普通脂质微泡造影剂(2.5 ml/kg),动态观察肝的实质回声增强情况,并用DFY型超声图像分析诊断仪对造影效果进行定量分析.结果 纳米脂质微泡平均粒径为415.8 nm,平均电位为-(13.7±1.6)mV.造影后观察:该纳米微泡能明显增强兔肝的二维灰阶显像,与普通脂质微泡比较,纳米微泡达峰时间较晚,峰值持续时间较短,增强持续时间较普通脂质微泡长,纳米微泡对肝的增强峰值强度略低于普通微泡.结论 自制纳米微泡形态好,粒径均一,显影效果理想,为肿瘤的靶向性研究提供了一个前期基础.     

机械振荡法制备激肽原酶载药微泡的实验研究

目的:探讨机械振荡法制备激肽原酶载药微泡的最佳参数。方法:机械振荡法制备激肽原酶载药微泡,利用不同的振荡时间,激肽原酶与微泡不同的混合比例,检测载药微泡的携带率、激肽原酶的效价、载药微泡的粒径及粒径分布、浓度、pH值、包封率。结果:振荡时间在45 s,载药微泡携带率最高,为(93.46±1.7)%。激肽原酶与微泡混合比在4∶1的条件下,激肽原酶效价最高且达到合格标准。载药微泡的表面电位为(-56.47±8.23)mV,平均粒径为(13.2±7.3)μm,粒径范围为6~20μm,浓度为(6~7)×108/mL,pH值为(6.20±0.01),包封率为(52.5±0.8)%。结论:采用机械振荡法可成功制备激肽原酶载药微泡,该载药微泡药物携带率高,稳定性较好,且能维持良好的药物效价。     

机械振荡法制备脂膜超声造影剂的初步实验研究

目的探讨机械振荡法制备脂膜超声造影剂的可行性,初步评价其制备效果。方法机械振荡仪系胶囊式调合器改装而成,造影剂制备后,用光镜观察微泡大小、形态,血球计数板测定微泡浓度,激光粒度分析仪测定粒径及分布、表面电位、pH值,在体实验观察造影剂对兔正常肝脏的增强效果。结果造影剂微泡的粒径均小于8μm,平均粒径为(1.67±0.11)μm,平均浓度为(2.56±0.15)×1010/ml,表面电位为(-37.5±0.3)mV,pH值为6.46±0.21,其对肝实质的增强持续时间达60min,而且重复性好。结论机械振荡法是制备脂膜超声造影剂的一种很有效的方法。     

载竹红菌素脂质微泡的制备及对兔VX2肝肿瘤的显影实验

目的 制备一种载光动力药物的脂质超声微泡,测定物理特性,并观察其对兔VX2肝肿瘤的显影效果及过程.方法 采用机械振荡的方法 制备载竹红菌素脂质微泡,并测定其粒径大小、分布、Zeta电位和包封率、稳定性及超声辐照后药物释放情况.采用不同超声模式观察微泡在兔VX2肝肿瘤的显像效果及过程.结果 载药微泡的粒径为(1052.4±322.7)nm,Zeta电位为 (21.1±7.4)mV,包封率为(88.1±4.6)%,超声辐照能够促使微泡释放药物,对兔VX2肝肿瘤的显影效果好.结论 载竹红菌素脂质微泡包封率高、微泡能够释放药物、显像好,符合理想的药物载体,为实时监控下的体内定位光动力治疗疾病提供了一种新的思路.