末端转移酶原位标记法检测细胞凋亡

目的：建立一种用末端转移酶标记对凋亡的细胞进行原位检测方法，方法：在末端转移酶催化下，将地高辛修饰的核苷酸掺入凋亡细胞中的ＤＮＡ断裂缺刻，再用显色法检测被标记的ＤＮＡ，从而检出调亡细胞。结果：本实验建立了一种灵敏，特异，有效的凋讯检测方法。结论：末端转移介导的原位标记法是研究凋亡的一个非常有用的工具。     

原位DNA末端转移酶法检测细胞凋亡的影响因素

利用原位ＤＮＡ末端转移酶（ＩＳＴｄＴ）法检测肝硬变、肝癌组织标本及小鼠小肠粘膜上皮细胞凋亡。结果发现２５ｍｇ·Ｌ＾－１蛋白酶Ｋ消化１５ｍｉｎ，ＴｄＴ反应后采用中火档微波处理５ｍｉｎ可获最佳结果。对上述条件的最佳选择进行了探讨。     

原位DNA末端转移酶法检测细胞凋亡的影响因素

利用原位ＤＮＡ末端转移酶（ＩＳＴｄＴ）法检测肝硬变、肝癌组织标本及小鼠小肠粘膜上皮细胞凋亡。结果发现２５ｍｇＬ－１蛋白酶Ｋ消化１５ｍｉｎ，ＴｄＴ反应后采用中火档微波处理５ｍｉｎ可获最佳结果。对上述条件的最佳选择进行了探讨     

原位细胞凋亡的检测—POD法

细胞凋亡是许多正常的生理过程所必须的 ,在许多病理条件下 ,凋亡抑制的调节失衡在癌症、艾滋病、心脏病、中枢神经系统的退行性变等疾病中起着重要的作用 [1 ] 。由于细胞凋亡可由抗癌药物、放射及高热等启动 ,因此细胞凋亡的研究已趋向于热门。在检测细胞凋亡的众多方法中 ,POD法因其简便、快速及高敏感性而获得了较为广泛的应用。我教研室采用细胞凋亡原位杂交检测试剂盒 (北京中山公司提供 )对 5 0例子宫颈癌的病例分 5次进行了检测。每次均设阳性及阴性对照 ,使实验成功率达到了 10 0 %。介绍如下。1　方法1.1　石蜡切片脱蜡置蒸馏水…     

胸腺凋亡细胞DNA裂解的TUNEL原位标记

运用末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＥＮＬ）对糖皮质激素诱导的实验性胸腺细胞凋亡的组织切片进行标记，选择性地显示了凋亡细胞，表明ＴＵＮＥＬ可在细胞水平对组织切片中的凋亡进行检测，对细胞凋亡的判定，需结合细胞的形态结构特点，与坏死进行鉴别。     

原位末端标记—TUNEL法检测脊髓凋亡细胞

原位ＤＮＡ末端标记ＴＵＮＥＬ法是目前检测细胞凋亡的一种常用方法 .其基本原理是利用细胞凋亡过程中ＤＮＡ断裂暴露的末端 ,用已标记荧光的碱基与之互补连接 ,而后直接用荧光显微镜观察或用相应荧光抗体与之结合 ,再通过快红等显色剂显色了解有无ＤＮＡ断裂从而了解细胞凋亡 .由于一个凋亡试剂盒所做切片有限 ,因而 ,凋亡试剂显得相对较为昂贵 .进而 ,摸索一些实验方法以增加实验的成功率成为了学者们关心的问题 .本文介绍用本室摸索总结的实验方法检测脊髓的凋亡细胞 .1　材料和方法用 5只成年雄性健康家猫脊髓的Ｌ3节段 ,常规脱水后 ,石…     

应用原位末端转移酶标记和DNA电泳检测白内障晶体上皮细胞凋亡

目的：探讨老年性白内障晶体上皮细胞凋亡与白内障发生的关系。方法：应用原位末端转移酶标记和DNA片段凝胶电泳法，对50例老年性白内障和20例正常透明晶体上皮细胞进行凋亡细胞检测。结果：用Tunel法检测老年性白内障晶体上皮细胞，凋亡细胞比例为8．4％—37．8％，而正常透明的晶体上皮细胞中凋亡细胞百分率≤0．01％，两组有统计学差异；琼脂糖凝胶电泳结果显示，在老年性白内障组中出现了典型的DNA梯状条带，而正常组晶体上皮细胞DNA无此现象。结论：晶体上皮细胞凋亡与老年性白内障的发生发展有关。     

星形细胞瘤及其瘤细胞凋亡的研究:透射电镜与原位细胞凋亡检测

目的 :探讨星形细胞瘤瘤细胞及其凋亡的超微结构变化 ,为阐述肿瘤内在的生物学行为寻找形态学依据 ,分析瘤细胞凋亡与肿瘤恶性转化的关系。方法 :收集本院神经外科手术标本 ,应用透射电镜及原位细胞凋亡试剂盒对星形细胞瘤进行观察和检测。结果 :电镜下发现瘤细胞胞浆内胶质丝与发育不良 /幼稚的细胞器并存 ;瘤细胞核核内假性包涵体 ;瘤细胞间缺乏细胞连接。原位细胞凋亡检测显示 ,星形细胞瘤中低分级组瘤细胞凋亡的细胞密度明显高于高分级组 (P <0 .0 1)。结论 :瘤细胞凋亡的细胞密度随着肿瘤级数的增高而降低 ,提示星形细胞瘤瘤细胞的增殖和凋亡失衡 ,即瘤细胞无限制性增生和 /或瘤细胞不能进入凋亡。这可能是星形细胞瘤发生发展的重要因素。     

DNA末端原位标记技术研究慢性再生障碍性贫血骨髓CD34^＋细胞凋亡

目的观察慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓CD34+细胞凋亡状况,探讨CAA可能的发病机制.方法采用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化39例CAA患者的骨髓CD34+细胞,用DNA末端原位标(TUNEL)技术分析骨髓CD34+细胞原位凋亡状况.结果CAA患者骨髓细胞的凋亡率为(39.24±12.70)%,健康对照组为(8.50±2.30)%,组间比较差异有显著性(P＜0.01).凋亡细胞可见核染色质皱缩、凝聚,但未见到核碎裂现象及典型的凋亡小体.结论CAA患者骨髓CD34+细胞的过度凋亡是其质或/和量缺陷的原因之一.     

缺血预处理对大鼠神经细胞凋亡的影响

目的通过观察缺血预处理后大鼠局灶脑缺血后神经细胞凋亡变化,探讨脑缺血预处理减少神经细胞凋亡的机制。方法成年健康SD大鼠72只,随机分为预处理组、缺血组、假手术组,用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血动物模型,每组在造模成功后24h、48h、72h取出大鼠脑组织,应用原位末端转移酶标记技术（TUNEL染色）观察各个时间观察点细胞的凋亡情况。结果原位末端转移酶标记技术（TUNEL染色）结果显示,缺血组凋亡细胞数最多,预处理组次之,假手术组最少。各组凋亡细胞数随时间呈上升趋势。结论脑缺血预处理可抑制神经细胞凋亡。     

尖锐湿疣挖空细胞的原位末端标记观察

目的 进一步证实尖锐湿疣挖空细胞的凋亡实质。方法 选自广州市东山区人民医院病理科常规活检经免疫组化和原位杂交组化确诊为尖锐湿疣20例共28个标本。每例分别重新切片，采用原位末端标记技术(TUNEL法)进行染色，光镜下观察，结合上次报告中的电镜照片，进行仔细分析。结果 在电镜下呈核膜皱缩，染色质边集、胞质空泡化的挖空细胞均显示原位末端标记阳性信号。结论 尖锐湿疣挖空细胞为人类乳头状瘤病毒(HPV)感染表皮细胞后所发生的一种特异的凋亡变化，可能与人体防御系统有关。     

引物原位标记法产前诊断18号染色体数目异常

目的：探讨引物原位标记法（PRINS）结合经腹脐血穿刺，应用于脐血中期细胞快速产前诊断18号染色体数目异常的可行性。方法：B超监护下经腹采集胎儿脐血共16例，外周血34例，应用18号染色体特异性引物，标记分裂中期细胞18号染色体，PRINS结果与中期细胞染色体G带分析结果进行比较。结果：16例脐血中，PRINS检测2例为18号三体，34例外周血中，1例为18三体，与染色体核型分析一致。结论：PRINS是一种简便、快速、可靠的产前诊断染色体数目异常的临床检测方法，值得进一步研究与推广。     

地方性甲状腺肿组织中细胞凋亡的检测

目的 :探讨地方性甲状腺肿病变中细胞凋亡发生的意义。方法 :利用DNA末端标记法 (TUNEL法 )检测2 5例地方性甲状腺肿、43例甲状腺癌、15例甲状腺腺瘤、11例癌旁甲状腺组织中的凋亡细胞 ,计算其凋亡率。结果 :地方性甲状腺肿、甲状腺癌、甲状腺腺瘤、癌旁甲状腺组织的细胞凋亡率分别为 :(9.81± 4.36 ) %、(17.73± 6 .6 2 ) %、(12 .43± 3.6 9) %、(11.37± 6 .6 9) % ,其中地方性甲状腺肿的细胞凋亡率低于甲状腺癌 (P <0 .0 1) ,地方性甲状腺肿、甲状腺腺瘤、癌旁甲状腺组织各组间凋亡率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡与增殖的平衡在地方性甲状腺肿病变的发生发展中起着重要作用     

Study on apoptosis of human acute T-lymphocyte leukemia cell line induced by allicin

Gallicisakindofthedailyfoodstuffsofhumanbeings,andmuchimportanceisattachedtoitsvalueinmedication.Allicin,amonomerextractedfromgallic,wasusedatfirstintreatingmycoticinfection.Studiesinrecentyearshaveshowedthatithastherapeuticeffectoncardiovasculardiseasesanddiabetesmellitus,particularattentionwaspaidonitspreventiveandcurativeeffectont..o.(l--3).ThisarticlereportsthestudyofmechanismofapoptosisinducingeffectofallicinonhumanacuteT-lymphocyteleukemiacellline(6T--CEM).METHODSReagents6T--CEMwa…     

原位杂交法检测喉癌组织中人乳头状瘤病毒的研究

采用原位核酸杂交技术，地高辛标记人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）６Ｂ／１１，１６／１８型ＤＮＡ作 探针，对４４例喉癌石蜡包埋标本中ＨＰＶ－ＤＮＡ同源序列进行了检测，同时用１６例喉息肉石蜡包埋 标本作为对照。结果显示：ＨＰＶ ６Ｂ／１１杂交阳性者在喉癌组为 ８／４４（１８． ２％），喉息肉组为２／１６ （１２．５％）（Ｐ＞０．０５）；ＨＰＶ １６／１８杂交阳性者在喉癌组为 １９／４４（４３．２％），喉息肉组为 ２／１６ （１２．５％）（Ｐ＜０．０５）。提示：ＨＰＶ １６／１８型感染与喉癌的发生有密切关系，是喉癌发病学中一个不 容忽视的致癌因素。     

原位杂交法检测喉鳞癌组织中人乳头状瘤病毒的研究

目的探讨喉鳞状细胞癌与人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）亚型的关系。方法采用原位杂交技术,地高辛标记Ｈｐｖ６Ｂ／１１、１６和１８型ＤＮＡ作探针,对３２例喉鳞癌石蜡包埋标本中Ｈｐｖ－ＤＮＡ同源序列进行了检测。结果Ｈｐｖ６Ｂ／１１型杂交在喉鳞癌中阴性;Ｈｐｖ１６型杂交阳性在喉鳞癌为１４／３２（４６％）;Ｈｐｖ１８型杂交阳性在喉鳞癌为９／３２（２８％）。各型表达与肿瘤分化程度无关（Ｐ＞０．０５）。结论Ｈｐｖ１６和Ｈｐｖ１８型感染与喉鳞癌的发生有密切关系,是喉鳞癌发病学中一个不容忽视的致癌因素     

泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达

目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化.方法ECV-304细胞在高糖(25 mmol/L)和正常糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72 h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northern blot检测泛素mRNA的变化.结果高糖24、48、72 h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P＜0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72 h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72 h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P＜0.05).结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡.     

非放射性反义RNA探针的原位杂交技术探讨

以自制的反义ＲＮＡ探针研究了非放射性标记原位杂交技术。结果表明：①以小柱装置（ｍｉｎｉｃｏｌｕｍｎ）提取质粒ＤＮＡ，方法快速、简便、且纯度好；②以线性化的质粒ＤＮＡ为模板进行体外转录，加Ｂｉｏ－１４－ＣＴＰ标记，需用ｐＨ８．０的转录缓冲液；③实验中需防止ＲＮａｓｅ污染，但也可应用ＲＮａｓｅ作为实验对照和减低背景；④杂交液中以不加硫酸葡聚糖为宜，杂交温度以４２℃为佳。     

大肠肿瘤组织中EB病毒的原位杂交检测

目的探讨EB病毒感染与人大肠癌发生的关系。方法用原位分子杂交法对130例人大肠癌标本中EB病毒小分子RNA片段进行检测。结果130例标本中有6例(4.48%)癌组织呈阳性反应,其中4例为男性,4例有明显淋巴细胞浸润。结论EB病毒感染可能与我国部分大肠腺癌的发生有关,肿瘤细胞间质中大量淋巴细胞浸润可能是EB病毒感染的重要病理学特征。