Expression of fibroblast 3 growth factor receptor of spinal astrocytes in rats with neuropathic pain

目的 观察成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)在坐骨神经分支选择结扎后神经病理性疼痛中大鼠脊髓的表达变化.方法 40只SD雄性大鼠,分为假手术对照组(sham)和手术组(SNI),每组20只.使用坐骨神经分支选择结扎方式建立大鼠神经病理性疼痛模型,观察sham组和SNI组大鼠术前1d以及术后1、3、5、7d的行为学改变并检测2组大鼠的机械痛阈,采用免疫荧光双标观察2组大鼠术后7d脊髓背角星形胶质细胞FGFR3和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的共表达,Western blot法检测SNI术后各时间点2组大鼠FGFR3蛋白表达.结果 术前1d2组大鼠机械痛阈无明显差异(P＞0.05),术后1、3、5、7 d SNI组大鼠机械痛阈值分别为(6.67±2.12)、(3.17±0.99)、(2.33±0.65)、(1.75±0.31),相应时间点sham组大鼠机械痛阈值分别为(12.75±2.83)、(12.33±2.84)、(12.08±2.57)、(11.50±2.65),SNI组大鼠机械痛阈在各时间点较sham组明显降低(P＜0.05);术后7d患侧脊髓背角GFAP阳性表达的细胞,FGFR3也呈阳性表达;术后1、3、5、7 d sham组大鼠脊髓FGFR3蛋白表达分别为(0.192 8 ±0.013 0)、(0.213 6±0.021 4)、(0.2946±0.025 1)、(0.2664±0.027 3),相应时间点SNI组大鼠脊髓FGFR3蛋白表达分别为(0.280 4±0.015 3)、(0.328 2±0.026 3)、(0.567 7±0.027 0)、(0.528 8±0.032 8),与sham组比较,SNI组脊髓FGFR3蛋白表达随时间增长而上调(P ＜0.05).结论 在神经病理性疼痛过程中FGFR3表达下调并可能参与GFAP的激活,提示FGFR3在神经病理性疼痛的发生以及发展过程中可能发挥着重要的作用.     

脊髓星形胶质细胞FGFR3在神经病理性疼痛中的表达改变及作用

目的观察成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)在坐骨神经分支选择结扎后神经病理性疼痛中大鼠脊髓的表达变化。方法 40只SD雄性大鼠,分为假手术对照组(sham)和手术组(SNI),每组20只。使用坐骨神经分支选择结扎方式建立大鼠神经病理性疼痛模型,观察sham组和SNI组大鼠术前1 d以及术后1、3、5、7 d的行为学改变并检测2组大鼠的机械痛阈,采用免疫荧光双标观察2组大鼠术后7 d脊髓背角星形胶质细胞FGFR3和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的共表达,Western blot法检测SNI术后各时间点2组大鼠FGFR3蛋白表达。结果术前1 d 2组大鼠机械痛阈无明显差异(P>0.05),术后1、3、5、7 d SNI组大鼠机械痛阈值分别为(6.67±2.12)、(3.17±0.99)、(2.33±0.65)、(1.75±0.31),相应时间点sham组大鼠机械痛阈值分别为(12.75±2.83)、(12.33±2.84)、(12.08±2.57)、(11.50±2.65),SNI组大鼠机械痛阈在各时间点较sham组明显降低(P<0.05);术后7 d患侧脊髓背角GFAP阳性表达的细胞,FGFR3也呈阳性表达;术后1、3、5、7 d sham组大鼠脊髓FGFR3蛋白表达分别为(0.192 8±0.013 0)、(0.213 6±0.021 4)、(0.294 6±0.025 1)、(0.266 4±0.027 3),相应时间点SNI组大鼠脊髓FGFR3蛋白表达分别为(0.280 4±0.015 3)、(0.328 2±0.026 3)、(0.567 7±0.027 0)、(0.528 8±0.032 8),与sham组比较,SNI组脊髓FGFR3蛋白表达随时间增长而上调(P<0.05)。结论在神经病理性疼痛过程中FGFR3表达下调并可能参与GFAP的激活,提示FGFR3在神经病理性疼痛的发生以及发展过程中可能发挥着重要的作用。     

BDNF对脊神经根结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化的影响

目的观测脊神经根结扎(SNL)大鼠脊髓背角中脑源性神经营养因子(BDNF)与星形胶质细胞活化标记蛋白胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)表达的变化,以及BDNF清除剂TrkB/Fc对GFAP表达和疼痛的影响。方法取18只SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组和SNL组(n=6)。分别于术前、术后第1～6天测定大鼠50%机械缩爪阈值(50%PWT),末次测定后取腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP和BDNF的表达。另取18只SD大鼠,随机分为对照组、SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组(n=6),其中对照组仅行鞘内置管术;SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组分别在行SNL术前,予鞘内注入PBS或TrkB/Fc 10μL,术后1次/d×6 d,每次注药前1 h测定50%PWT,末次给药后1 h取大鼠腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP的表达。结果术后第1～6天,SNL组手术同侧后肢50%PWT均较术前基础值显著下降(P<0.01);术后第6天,SNL组手术同侧脊髓背角BDNF和GFAP表达均较空白对照组显著升高(P<0.01);SNL+TrkB/Fc组大鼠手术同侧50%PWT与基础值比较无明显变化(P>0.05),手术同侧脊髓背角GFAP表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BDNF活化的脊髓星形胶质细胞对SNL诱发的神经病理性疼痛具有调控作用。     

Endoglin重组蛋白对SNI大鼠的镇痛作用及机制研究

目的 观察鞘内注射内皮糖蛋白（Endoglin）重组蛋白对选择性坐骨神经损伤（SNI）大鼠疼痛、脊髓背角小胶质细胞活化和促炎因子表达的影响。方法 将66只成年雄性SD大鼠随机分为三组：假手术组（Sham组）、SNI模型组（SNI组）和干预组（ENG组）,每组22只,并预先进行鞘内置管。随后,SNI组大鼠构建SNI模型,并间断鞘内给予生理盐水20μL;ENG组在SNI模型的基础上给予20μL Endoglin重组蛋白（2μg/mL）;Sham组则仅做SNI的伤口对照,不损伤神经,并且给予等量生理盐水。于SNI术前1 d,术后3、7、14 d采用Von Frey纤维丝测定机械缩足阈值（PWT）;免疫荧光染色观察术后14 d时脊髓背角小胶质细胞的激活;同时,Western blot检测脊髓转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、p-Smad2的蛋白表达;ELISA检测脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的释放水平。结果 在术后3～14 d时,SNI组和ENG组的PWT值均明显低于Sham组,但相比于SNI组,ENG组的PWT明显增加,...     

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞P2X4受体的表达及意义

目的 探讨神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞离子型嘌呤受体(ionotropic purinoceptor,P2X)P2X4的表达及其意义.方法 雌性SD大鼠20只,随机分为坐骨神经保留性损伤(SNI)组和对照组.SNI组大鼠于左后肢制备SNI模型,对照组大鼠仅暴露坐骨神经后立即缝合手术切口.术后观测机械疼痛阈值的变化,于术后第7天断头处死大鼠,截取L4～6段脊髓,分离左右侧脊髓.采用免疫组化法检测脊髓背角P2X4受体及蛋白激酶p38MAPK的表达.结果 与对照组相比,SNI模型组大鼠机械刺激50%缩爪阈值显著降低(P＜0.01).SNI模型组大鼠手术侧脊髓背角活化的小胶质细胞表面P2X4受体的表达水平(456.86±32.21)较非手术侧(106.27±12.16)明显增高(P＜0.01),同时SNI模型组大鼠手术侧脊髓背角p38MAPK表达水平(399.95±32.42)较非手术侧(123.63±15.47)明显增高(P＜0.01).结论 神经病理性疼痛大鼠模型脊髓背角活化小胶质细胞P2X4受体表达增加,可能通过激活p38MAPK促进了疼痛的发生.     

神经病理性痛大鼠脊髓背角钾氯共转运体的表达

目的 观察左侧坐骨神经分支选择结扎切断(SNI)模型致神经病理性痛大鼠的脊髓背角钾氯共转运体(KCC2)表达的变化.方法 将27只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为SNI组(18只)和假手术组(9只).SNI组大鼠暴露坐骨神经及其3个末端分支(腓肠神经、腓总神经和胫神经),结扎并切断腓总神经和胫神经,保留腓肠神经完整;假手术组大鼠仅暴露坐骨神经及其分支,不切断.应用vonFrey纤毛检测SNI术后不同时间段的大鼠机械痛阈值;应用免疫印迹技术观察SNI术后不同时间相应的脊髓腰膨大(L4、L5)节段脊髓背角KCC2的表达.结果 术后1、3、5、7 d,SNI组大鼠左侧后肢的缩足阈值呈显著下降趋势,分别为(3.23±0.49)、(0.60±0.09)、(0.38±0.07)、(0.21±0.06)g,并且在随后的观察期内一直维持在这一低水平.术后1、3、5 d,SNI组大鼠腰膨大节段脊髓的左侧背角KCC2的表达量(即KCC2表达量与内参a-tublin表达量的比值)为0.97±0.09、0.32±0.10、0.53±0.15,分别较右侧的1.27±0.08、0.63±0.09、1.11±0.18显著减少(P值均＜0.05);术后3 d,右侧的表达量为0.63±0.09,较假手术组的1.15±0.13显著下降(P＜0.05);至术后7 d,脊髓背角两侧KCC2的表达量基本恢复正常水平.结论 SNI模型可致病理性神经痛早期损伤侧脊髓背角KCC2的表达明显减少,可能在慢性神经病理性痛的发展过程中发挥作用.     

鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体和降钙素基因相关肽表达的影响

目的:观察鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:将54只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=9):舒芬太尼组[S+保留神经损伤(spared nerve injury model,SNI)组]、舒芬太尼+PKC抑制剂组(SP+SNI组)和PKC抑制剂组(P+SNI组)在SNI模型制作后14 d内每天分别鞘内注射舒芬太尼1μg、舒芬太尼1μg+PKC抑制剂11μg、PKC抑制剂11μg,注射药物容量均为20μL。对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理痛模型组(SNI组)则在上述相同时间点分别注入0.9%的生理盐水20μL。在模型制作前1 d和模型制作后14 d内,对各组大鼠进行疼痛行为学观察,并用免疫组织化学法观察各组大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达。结果:与C组和S组比较,SNI组在SNI术后均出现机械刺激痛阈降低(P<0.01),且脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加(P<0.01)。与SNI组比较,S+SNI组、P+SNI组和SP+SNI组注药后机械刺激痛阈提高(P<0.01),脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物表达降低(P<0.05或0.01),且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,同时可显著抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。     

帕瑞昔布钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白及脊髓炎性反应的影响

目的评价帕瑞昔布钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及脊髓炎性反应的影响。方法成年雄性SD大鼠42只,体重250～300 g,采用随机数字表法分为3组(n=14):假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、帕瑞昔布钠组(P组)。CCI组和P组采用坐骨神经慢性压榨性损伤(CCI)法制备大鼠神经病理性疼痛模型;S组仅分离坐骨神经但不结扎;P组在术后经鼠尾静脉注射帕瑞昔布钠10 mg/(kg·d),连续3 d;S组、CCI组在相同时点经尾静脉注射等容量的生理盐水。于术前1 d、术后4、7、14 d测定热痛阈、机械痛阈。于术后14 d测定热痛阈和机械痛阈1 h后取L4-6脊髓组织,采用免疫组化SP法测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白表达;ELISA法检测脊髓中环氧合酶-2 (COX-2)、白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果与S组比较,CCI组和P组术后4 d、7 d、14 d时热痛阈、机械痛阈明显缩短(P<0.05),术后14 d时脊髓背角GFAP表达明显增加(P<0.05),脊髓中COX-2、IL-1β及TNF-α含量升高(P... 更多     

鞘内注射布托啡诺对SNI模型大鼠脊髓背角NMDAR表达的影响

目的 采用免疫组织化学方法 ,观察鞘内注射布托啡诺时SNI模型大鼠痛阈及脊髓背角NMDAR表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠20只,随机分为4组:假手术组(C组,n=5)、生理盐水组(NS组,n=5)、布托啡诺12μg组(B1组,n=5)、布托啡诺24μg组(B2组,n=5).根据改良Yaksh法进行鞘内置管.置管5 d后,C组不结扎神经.其他3组按Woolf等方法 建立神经病理性疼痛模型(SNI),制模2 d后,C组和NS组用25μL微量注射器鞘内注射20μL生理盐水,B1、B2组则分别用微量注射器鞘内注射10μL布托啡诺12和24μg,然后用10μL生理盐水冲管(共20μL).在3 0 min后,行疼痛行为学观察.注药后2 h处死大鼠,用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角NMDAR的表达.结果 NMDAR1主要分布于细胞膜及胞浆.显微镜下及免疫组化观察,NS组大鼠脊髓背角NMDAR免疫阳性细胞数密度与C组比较明显增加:B1组和B2组的阳性细胞数量与NS组比较阳性细胞数量减少,并且两者之间差异也有显著性(P＜0.05);NS组,B1组和B2组的阳性细胞光密度值较C组增高(P＜0.05).结论 鞘内注射24μg布托啡诺可减轻SNI模型大鼠痛觉过敏,且呈剂量依赖性;SNI模型引起大鼠脊髓背角神经元NMDAR表达上调;鞘内注射布托啡诺可降低SNI大鼠脊髓背角神经元NMDAR表达上调.     

SNI大鼠神经痛维持期脊髓背角TRPV1的活化形式及低频电针干预作用

[目的]探讨神经痛维持期脊髓背角辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid type1,TRPV1)的活化形式及低频电针的干预作用。[方法]将SD大鼠随机分为正常组(normal组)、假手术组(sham SNI组)、模型组(SNI组)和电针组(2Hz EA组),每组8只。建立大鼠坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)模型,取术侧足三里、昆仑穴进行2Hz电针干预,每日1次,连续14天,检测大鼠术侧后足缩腿阈(paw withdrawal threshold,PWT),观察大鼠痛觉超敏反应。运用免疫印迹法检测术侧脊髓背角TRPV1、p-TRPV1及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)水平,用免疫荧光法检测术侧脊髓背角TRPV1及PKC阳性细胞表达情况。[结果]SNI模型大鼠维持期出现痛觉过敏,PWT下降(P0.01),术侧脊髓背角TRPV1水平、PKC水平均升高(P0.01),p-TRPV1水平无显著变化(P0.05),sham SNI组大鼠PWT无明显变化。低频电针提高SNI模型大鼠的PWT(P0.01),降低脊髓背角TRPV1与PKC水平(P0.01)。[结论]神经痛维持期脊髓背角TRPV1活化以表达上调为主。低频电针能改善维持期神经痛,其机制可能与其有效下调PKC介导的TRPV1信号通路有关。     

鞘内注射BN52021对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓c-fos表达的影响

目的:研究血小板活化因子受体拮抗剂BN52021鞘内给药对保留性神经损伤(SNI)神经病理痛大鼠痛阈及脊髓c-fos表达的影响。方法:将40只Sprague-Dawley大鼠鞘内置PE-10导管后随机分为4组:Sham组,SNI组,SNI+DMSO组和SNI+BN52021组,建立SNI疼痛模型,手术后第1、3、5、7、10和14天鞘内给药并测痛阈,第14天取大鼠L4～6段脊髓,免疫组化染色检测Fos免疫阳性细胞。结果:SNI神经损伤大鼠机械缩爪阈降低(P<0.05),同侧脊髓背角浅层内Fos阳性神经元明显增多(P<0.05);BN52021鞘内注射减少脊髓背角神经元c-fos的表达,同时伴有大鼠触觉异常痛敏的减轻。各组大鼠辐射热缩爪潜伏期无明显差异。结论:鞘内注射BN52021可减轻SNI大鼠触觉异常痛敏,抑制神经损伤后脊髓背角c-fos表达增强。     

鞘内注射BN50730对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓TNF-α表达的影响

目的观察鞘内注射BN50730对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓TNF-α表达的影响,探讨脊髓血小板活化因子（PAF）及其受体参与痛觉信号调节的可能机制。方法鞘内置管后的SD大鼠24只随机等分为4组：假手术组（Sham组）,坐骨神经分支选择损伤模型（SNI）组,SNI＋二甲基亚砜（DMSO）组和SNI＋BN50730组,建立SNI疼痛模型,手术后1、3、5、7、10和14d鞘内给药并测痛阈,第14天取大鼠腰段脊髓,冷冻切片,免疫组化法检测脊髓TNF-α表达。结果SNI神经损伤大鼠机械缩爪阈明显降低（P〈0．05）,同侧脊髓背角TNF-α表达增强（P〈0．05）;鞘内应用BN50730降低脊髓背角TNF-α的表达,同时伴有大鼠痛行为的改善。各组大鼠辐射热缩爪潜伏期无明显差异。结论BN50730对SNI神经病理痛有治疗作用,TNF-α的表达下调可能与其镇痛机制有关。     

鞘内注射AG-490对骨癌痛小鼠脊髓水平星形胶质细胞活化和热痛觉的影响

目的：探讨脊髓水平IL-6-酪氨酸激酶-2( Janus kinase 2,JAK2)信号通路调控星形胶质细胞活化的机制及其 对骨癌痛的影响。方法：将NCTC 2472纤维肉瘤细胞注入C3H/HeNCrlVr雄性小鼠股骨骨髓腔制作骨癌痛模型,以 不含纤维肉瘤细胞的等体积α-MEM培养基行骨髓腔内注射制作假手术模型。采用热缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)评估疼痛水平。取腰段脊髓组织(L3~L5水平),分别应用Real-time RT-PCR和Western印迹检测脊髓水平 星形胶质细胞中纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和JAK2 mRNA与蛋白表达变化。鞘内注射给予JAK2 拮抗剂AG-490,观察小鼠痛行为学及脊髓水平GFAP mRNA和蛋白表达的变化。结果：骨癌痛模型组小鼠术后10, 14,21 d的PWL均较假手术组显著缩短(P<0.05);骨癌痛模型组的脊髓组织GFAP和JAK2 mRNA和蛋白表达显著增加 (P<0.05);鞘内注射30或90 nmol AG-490可以显著缩短骨癌痛模型组小鼠PWL,同时可以抑制脊髓组织GFAP mRNA和 蛋白的表达(P<0.05)。结论：脊髓水平IL-6-JAK2信号通路可能在骨癌痛的维持中发挥重要作用;IL-6-JAK2信号转导通 路可能通过抑制星形胶质细胞的活化来发挥镇痛作用。     

鞘内注射代谢性谷氨酸受体亚型5拮抗剂对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓水平星形胶质细胞活化的影响

目的 探讨代谢性谷氨酸受体亚型5(mGluR5)拈抗剂MTEP的抗癌痛作用及其机制.方法 C3H/HeNCrlVr雄性小鼠60只,随机分为:(1)正常组:正常饲养21d;(2)MTEP+Tumor组:癌痛组从第14d开始鞘内注射MTEP150nmol,1次/d,共7次;(3)生理盐水+Tumor组:以等体积的生理盐水代替MTEP;(4)MTEP+Sham组:用等剂量MTEP给予假手术组;(5)生理盐水+Sham组:用等体积的生理盐水给予假手术组.每组12只小鼠.用热辐射刺激仪测定缩足潜伏期(PWTL).各组小鼠均在第21d行为学测试后取脊髓标本,分别应用Real-time PCR和western blot检测胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA及蛋白的表达.结果 各组小鼠基础PWTL差异无统计学意义(P＞0.05).在术后14d,与正常组相比,假手术组PWTL差异无统计学意义(P＞0.05),而癌痛组PWTL明显降低(P＜0.05).在术后21 d,和正常组相比,MTEP+Sham组、生理盐水+ShaT组PWTL、脊髓GFAP表达差异均无统计学意义(P＞0.05);生理盐水+Tumor组PWTL[(6.18±1.29)s]明显低于正常组[(15.91±1.65)s]、生理盐水+Sham组[(16.57±1.86)s]和MTEP+Sham组[(17.05±2.43)s](P＜0.05),脊髓水平GFAP表达则高于上述3组;MTEP+Tumor组PWTL[(9.39±1.94)s]高于生理盐水+Tumor组,脊髓水平GFAP表达则低于生理盐水+Tumor组(P＜0.05).结论 鞘内注射MTEP具有抗癌痛作用,抑制脊髓水平星形胶质细胞活化可能是其机制之一.

Abstract：

Objective To investigate effects of metabotropic glutamate receptor subtype 5 (mGluR5) antagonist MTEP on the nociceptive behavior and the expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) in spinal cord associated with bone cancer pain. Methods C3H/HeNCrlVr 60 male mice were randomly divided into 5 groups: ( 1 ) normal control group: the mice were given food and water ad libitum; ( 2 ) MTEP + Tumor group: the mice were treated by intrathecal gdministration ( once daily on the days 14 ～20 after inoculation of tumor cells)with MTEP (150 nmol); (3) physiological saline + Tumor group:the tumor mice were treated with the same volume of physiological saline; (4) MTEP + Sham group: the sham mice were treated with the same dose of MTEP;(5) physiological saline + Sham group: the sham mice were treated with the same volume of physiological saline.the mice pain behaviors were assessed with the paw withdrawal thermal latency (PWTL) at the corresponding time points, then the mice were killed and the samples of spinal cord were used to real-time PCR and western blot detection of GFAP mRNA and protein expression. Results The basic values of PWTL had no significant differences among all groups (P＜0.05). At day 14 after operation,no significant difference was found in the PWTL value between normal control group and the sham operation group. But in tumor group, the PWTL value was significantly lower than in the normal control group (P＜ 0.05 ). At day 21 after operation,the PWTL and the level of GFAP expression in the spinal cord had no significant differences among normal control group, MTEP + Sham group and physiological saline + Sham group (P ＞ 0.05 ); the PWTL ( (6. 18 ± 1.29 ) s) in physiological saline + Tumor group was significantly lower than in normal control group ( ( 15.91 ± 1.65 )s), physiological saline + Sham group ( ( 16.57 ± 1.86) s) and MTEP + Sham group ( ( 17.05 ± 2.43 ) s) (P ＜ 0.05 ), but the level of GFAP expression was higher than in the above three groups. In MTEP +Tumor group ,the PWTL (9.39 ± 1.94s) was higher than in physiological saline + Tumor group, and the level of GFAP expression was lower than in physiological saline +Tumor group (P ＜ 0.05 ). Conclusion Inhibiting spinal activation of astrocytes may be one of the MTEP anticancer pain mechanisms.     

丙戊酸钠参与脊髓水平疼痛-瘙痒调控的研究

目的 探讨丙戊酸钠( VPA)对小鼠坐骨神经分支高选择结扎切断 ( SNI)引起的神经病理性疼痛与氯喹诱发的急性瘙痒的影响. 方法 实验一:将昆明种雄性小鼠48 只随机分为6组:神经病理性疼痛组( SNI)、假手术组( Sham)、瘙痒组( CQ)、瘙痒溶媒组( NS)、疼痛瘙痒组( SQ)及空白对照组( CON);CON、SNI、Sham、SQ组在术前1 d,术后1、3、5、7、9、10 d测定左后足机械痛阈值(MWT),CON、CQ、NS、SQ组分别于右后足足底注射氯喹或生理盐水后观察小鼠舔足时间. 实验二:昆明种雄性小鼠16 只随机分为 SQ-V组和SQ-N组. SNI模型分别于术后5、6、7、8、9 d早晚8 时注射VPA( SQ-V 组)及VPA溶媒生理盐水( SQ-N组)后测定疼痛行为学,于术后第10天注射氯喹后观察瘙痒行为学. 行为检测结束后使用反转录PCR( RT-PCR)法检测脊髓L4-L6部位组蛋白去乙酰化酶2 ( HDAC2 )的表达. 结果 SNI组及SQ组在术后1 d MWT降低( P<0. 05 ) ,第5天仍在较低水平. SQ-V组较SQ-N组鞘注后MWT显著升高( P<0. 05 ).CQ组较NS组舔足时间显著延长,SQ组舔足时间明显低于CQ组(P<0. 05). SQ-V组舔足时间显著高于SQ-N组(P<0. 05). RT-PCR结果提示SNI引起HDAC2表达上调,CQ引起HDAC2表达下调. 结论 疼痛能够抑制瘙痒神经信号传导,脊髓水平HDAC2差异性表达介导疼痛-瘙痒的共同调节.     

脊髓p300在大鼠CCI所致神经病理性疼痛中的作用

目的 探索脊髓p300在大鼠慢性缩窄性神经损伤（CCI）模型所致神经病理性疼痛中的作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）和CCI组,24只大鼠鞘内置管后制作CCI模型,随机分为3组：二甲基亚砜（DMSO）组、p300乙酰转移酶抑制剂C646组和对照剂C37组.术后第7天开始鞘内给药直至第14天,观察大鼠机械痛阈变化,术后第14天利用免疫荧光及Western blot检测脊髓p300的表达分布.结果 （1）p300主要表达于神经元中,且CCI组表达量高于Sham组（P＜0.05）.（2）鞘内注射C646明显提高CCI大鼠机械痛阈,而注射C37和DMSO后大鼠痛阈无明显变化.结论 大鼠脊髓p300蛋白参与神经病理性疼痛,其机制可能与其乙酰转移酶活性有关.     

miR-19a对慢性压迫性损伤大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制

目的 观察miR-19a对慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛的作用,并探讨其潜在机制.方法 75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组,行假手术;CCI组,坐骨神经结扎法构建CCI大鼠模型;CCI+inhibitor组,CCI大鼠鞘内注射miR-19a inhibitor.于术前当天(0 d)和术后3、7、14、21 d观察机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热刺激反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)的变化.采用RT-qPCR检测腰椎脊髓中促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA及JAK2和STAT3表达的变化,Western blot检测SOCS3蛋白水平的表达,荧光素酶报告基因技术验证miR-19a的靶基因.结果 与假手术组比较,CCI组大鼠脊髓的miR-19a表达显著上升(P＜0.05),MWT显著降低,TWL显著缩短(P＜0.05).与CCI组比较,CCI+ inhibitor组MWT显著升高,TWL显著延长(P＜0.05).RT-qPCR检测结果表明,CCI可显著促进促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA的表达;而与CCI组比较,CCI+inhibitor组IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均显著降低(P＜0.05).另一方面,与假手术组比较,CCI组大鼠术后脊髓中JAK2和STAT3 mRNA水平明显增加;与CCI组比较,CCI+ inhibitor组术后脊髓中JAK2和STAT3的表达显著降低(P＜0.01).荧光素酶报告基因检测结果表明JAK2/STAT3上游的负调控因子SOCS3是miR-19a的靶基因.Western blot检测结果表明CCI组大鼠脊髓中SOCS3水平较假手术组升高,且SOCS3水平在CCI术后第7天达到最高,而后呈下降趋势;与CCI组比较,CCI+inhibitor组SOCS3表达明显上升(P＜0.05).结论 miR-19a inhibitor能缓解CCI大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏,该作用与SOCS3介导的JAK2/STAT3通路有关.     

锌影响坐骨神经损伤模型小鼠脊髓P物质表达的实验研究

目的研究锌对选择性坐骨神经分支损伤（spared nerve injury,SNI）小鼠脊髓P物质（substance P,SP）表达的影响。方法 48只CD1小鼠分为4组,采用SNI手术制备神经病理性疼痛（neuropathic pain,NPP）小鼠模型：对照组（Con）给予假手术（单纯分离坐骨神经）,适锌喂养神经分支损伤（N-NPP）组锌饲料30 mg/（kg.d）喂养2周后给予SNI手术,低锌喂养神经分支损伤（L-NPP）组锌饲料0.85 mg/（kg.d）喂养2周后给予SNI手术,高锌喂养神经分支损伤（H-NPP）组硫酸锌水溶液227 mg/（L.d）喂养2周后给予SNI手术。应用原子吸收光谱、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测术后7d锌对脊髓SP表达的影响。结果高锌喂养能显著增加血清和脊髓中锌的含量,脊髓SP表达下调（P〈0.01）;而低锌喂养加重血清和脊髓的缺锌状况,脊髓SP表达上调（P〈0.01）。结论锌能抑制SNI后小鼠脊髓SP的表达。     

鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛大鼠的镇痛作用

目的通过观察鞘内注射氟代柠檬酸（FC）对骨癌痛大鼠机械性痛敏的影响,探讨脊髓胶质细胞在骨癌痛中的作用。方法 （1）20只大鼠分为假手术组和骨癌痛组两组,骨癌痛组分别在注射Walker256细胞后第7、14、21天各处死5只大鼠取腰段脊髓,假手术组术后第7天取腰段L4～L5脊髓,分别测定两组星形胶质细胞标志物胶原纤维酸性蛋白（GFAP）和小胶质细胞标志物补体受体-3单克隆抗体（OX-42）的表达。（2）12只骨癌痛模型大鼠,成功建模置管后第14天随机分为PBS组和FC组两组,鞘内分别注射PBS、FC1nmol（10μl）,在给药前后测定大鼠机械性缩足反射阈值（PWMT）。结果 （1）骨癌痛组与假手术组比较,大鼠脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞活化明显,平均吸光度值较假手术组显著增加（P〈0.01）。（2）FC组大鼠鞘内注射FC1 nmol后,PWMT较PBS组和给药前显著升高（P〈0.01）。结论脊髓胶质细胞的激活参与了骨癌痛疼痛信息处理过程。