Cpne5蛋白在新生及成年小鼠各组织及其在不同胎龄胎鼠脑组织中的表达

目的:检测小鼠Cpne5蛋白在脑发育过程及不同组织中的表达水平,为Cpne5基因的功能研究提供线索。方法:提取新生、成年小鼠多种组织蛋白及11.5,12.5,13.5,14.5,15.5,17.5 d胎鼠脑组织蛋白,用免疫印迹法检测Cpne5蛋白表达量。结果:Cpne5蛋白表达于新生4 d小鼠的全部受检组织,大、小脑表达量最少,眼和肺的表达量高。成年小鼠检测结果相似,Cpne5蛋白的组织分布广泛,但脑组织含量低,表达量以卵巢、睾丸为高,其次为肺和心脏。胎脑的Cpne5蛋白表达量在胎鼠11.5、12.5 d较高,13.5 d降低,14.5至17.5 d再次升高,出生后又降低。结论:Cpne5蛋白在新生和成年小鼠广泛表达于各种受检组织,脑组织表达量最低;小鼠胎脑发育过程中Cpne5蛋白表达呈现先高后低,再升高再降低的变化趋势。     

麦芽酚可抑制活性氧引起的SH-SY5Y细胞凋亡

近年来研究表明，氧化应激在阿尔茨海默病等神经退行性疾病发生发展中具有重要作用。本文研究了麦芽酚对过氧化氢(H2O2)引起的人神经瘤细胞株(SH-SY5Y)凋亡时细胞形态、磷脂酰丝氨酸(PS)外翻和DNA损伤的保护作用。结果发现麦芽酚浓度为2mmol／L，作用2h后，可以保护细胞免受H2O2引起的氧化损伤。实验结果表明麦芽酚可作为一种抗氧化剂，有效保护H2O2引起的SH-SY5Y的凋亡。     

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的：探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的死亡受体5（DR5）单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法：光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果：DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论：交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。     

肿瘤抑制剂GA对SH-SY5Y细胞凋亡的影响及分子机制研究

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,但是分化细胞对同样剂量的GA不是很敏感 [细胞存活率依次为 (82 0±6 0 ) %比较 (6 5 0± 3 0 ) % ,P <0 0 2 ;(6 7 9± 3 1) %比较 (4 3 4± 3 9) % ,P <0 0 3;(4 3± 0 8) %比较 (0 4±0 1) % ,P <0 0 5 ]。Western印迹分析和免疫荧光实验显示 ,GA能抑制细胞中c Jun和c Fos的表达 ,并且GA剂量越高 ,其抑制越明显 ;同时GA也诱导了p5 3的核聚集。与未分化细胞相比 ,在相同剂量GA处理后分化细胞中c Jun和c Fos的表达均比未分化细胞略高 ;但是分化细胞中p5 3的核聚集却不如前者明显。提示未分化细胞对同样剂量的GA比分化细胞更敏感 ,可能与分化细胞能抵抗GA引起的c Jun、c Fos的降低以及p5 3的核聚集有关。     

胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

 目的：观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法：培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）与对照组相比,不同浓度（3、6、9、12、15 mmol/L）的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间（1、2、3、6 h）ATP（6 mmol/L）也可使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。（2）ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多（P<005）,随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强（P<005）,形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。（3）与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰（P<005）,6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强（P<005）,6 h时达高峰。结论：胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。     

交联抗DR5单抗YM366EC诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化。结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加。结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9。     

交联抗DR5单抗YM366EO诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制.观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响.进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化.结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡.Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加.结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9.     

T细胞Trail受体表达及Trail诱导的T细胞凋亡

目的 :观察人T细胞Trail(TNF relatedapoptosis inducingligand)受体表达及Trail诱导T细胞凋亡的作用。方法 :通过荧光双标记 ,使用流式细胞仪检测Trail受体阳性细胞和凋亡细胞。结果 :静息Jurkat细胞表达高水平Trail受体〔(49 19±12 2 5 ) %〕 ,激活Jurkat细胞对Trail受体表达无影响。Trail诱导显著的Jurkat细胞凋亡〔(90 0 1± 2 6 71) %〕。正常人外周血淋巴细胞 (PBL)仅激活后表达Trail受体〔(2 5 2 7± 6 42 ) %〕 ,但无细胞凋亡发生。结论 :人T细胞表达Trail受体 ,Trail受体和Trail的相互作用对细胞凋亡有调控作用。     

地塞米松介导胸腺细胞凋亡过程中线粒体和细胞结构蛋白的变化

目的：研究地塞米松(DEX)介导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中线粒体质量和结构蛋白变化特点。 方法： 以地塞米松（DEX）诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死，JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势（△Ψm）和线粒体质量，利用CFDA-SE染色流式细胞术检测细胞结构蛋白变化。 结果： 在1×10-6mol/L DEX诱导下，小鼠胸腺细胞在6 h凋亡比率为(51.25±5.51)%，对照组为(12.03±2.00)%，差异显著（P<0.01）； DEX组坏死比率为(30.25±3.67)%，对照组为(10.11±1.11)%，差异显著（P<0.01）。DEX组在6h时点的线粒体质量显著低于对照组（P<0.01），FL1平均荧光强度分别为（561.62±54.27）和（900.25±38.80）。DEX同时引起线粒体膜电势的显著下降（P<0.01），对照组FL2平均荧光强度为（267.51±26.48），DEX组为（133.17±12.29）。成熟T细胞培养48 h，CFDA-SE法仅检测到亲代单一细胞峰；而在Con A刺激条件下出现3个子代峰。对照组小鼠胸腺细胞在CFDA-SE染色培养6 h条件下，存在(5.25±1.15)％的低荧光强度细胞群，而在DEX刺激下，该群细胞占（47.39±9.76）％，并且在直方图结果上形成明显的细胞峰。 结论： DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中，线粒体质量和细胞结构蛋白均有所下降；CFDA-SE染色流式细胞术可以作为基于细胞结构蛋白变化的凋亡定量检测方法。     

EGb761通过改善线粒体功能抑制无血清SH-SY5Y细胞的凋亡

目的标准化银杏叶提取物EGb761被认为有神经保护作用,但作用机制不明。本研究旨在检测EGb761对无血清人类神经母细胞瘤SH-SY5Y型细胞的生长和凋亡的作用,以了解其神经保护机制。方法本研究通过检测线粒膜电位、细胞色素C氧化酶和线粒体ATP合成率来评估线粒体机能;通过检测细胞周期来了解细胞的生长状态。结果我们发现,EGb761使血清剥夺诱导细胞的细胞周期停留在G0/G1期而减弱其凋亡,这有可能是通过改善线粒体的功能而实现的。结论 EGb761通过调节线粒体机能促进营养因子非依赖的神经元存活。这些结果可能为EGb761的神经保护作用增添一个新的视角。     

别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

目的 明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制.方法 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平(nifedipine),采用...     

利多卡因对SH-SY5Y细胞的损伤作用

目的: 采用SH-SY5Y细胞体外培养模型,通过观察细胞形态、测定细胞活力和细胞凋亡率,探讨不同浓度利多卡因对SH-SY5Y细胞的损伤作用。方法: SH-SY5Y细胞离体培养, 分为4组, 即: 正常培养组(对照组, 未经药物处理); 0.5%、1%、2%利多卡因组(L1、L2、L3组), 分别用相应浓度的利多卡因处理SH-SY5Y细胞10 min。在药物处理10 min后观察细胞形态, 并分别在药物处理后5 min (T1)、10 min (T2)、药物处理结束后15 min (T3)、药物处理结束后12 h (T4)测定细胞活力及细胞凋亡率。结果: 正常培养SH-SY5Y细胞胞体粗大, 呈多角形, 出现树突状突起, 神经突起, 多而粗大, 分布成网络, 各实验组SH-SY5Y细胞则变圆, 回缩, 轴突渐消失。各实验组不同浓度的利多卡因对SH-SY5Y细胞活力均有明显影响, 利多卡因处理5 min后, 各组细胞活力明显下降, 且随剂量增加, 细胞活力下降明显增加。对照组细胞凋亡率在各时点保持在5.9%~6.3%之间, 实验组细胞在利多卡因处理后各时点细胞凋亡率明显增加, 且随着浓度的增加,细胞凋亡率也增加。结论: 0.5%、1%、2%利多卡因对SH-SY5Y细胞均有损伤作用, 且随浓度的增加,损伤程度加重。     

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在紫杉醇诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用及其机制

目的探讨转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在紫杉醇诱导宫颈腺癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定紫杉醇的最佳浓度和处理时间;PCR技术构建pCI neo/CREB(PN)重组质粒及pCI neo/CREB-M(PM)定点突变质粒;流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测磷酸化CREB(pCREB)、CREB、cyclins以及CDKs蛋白表达。结果紫杉醇抑制HeLa细胞增殖的有效条件为0.1μmol/L处理24 h。0.1μmol/L紫杉醇诱导G2/M细胞数量增加,并呈时间依赖性;cyclin A表达量下调,cyclin B1、D1和pCREB表达量上调。此外,紫杉醇的处理对cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4和CREB表达量并无显著性改变。然而,PM联合紫杉醇处理后显著性地反转了紫杉醇单独处理引起的cyclin A下调、cyclin B1和cyclin D1的上调,并且细胞周期G2/M期阻滞显著性减少。结论转录因子CREB介导的靶向细胞周期蛋白表达在紫杉醇诱导的细胞周期阻滞过程中扮演重要角色。     

siRNA下调FLAP的表达诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡

目的研究5-脂氧合酶激活蛋白(5′-lipoxygenase activating protein,FLAP或ALOX5AP)的表达抑制对胰腺癌细胞PANC-1凋亡的诱导作用。方法通过siRNA抑制胰腺癌细胞FLAP的表达,用流式细胞仪检测Annexin-V标记的凋亡细胞,用Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达和裂解水平。结果FLAPsiRNA有效抑制了胰腺癌细胞PANC-1中FLAP的表达。转染了FLAP siRNA的胰腺癌细胞出现凋亡。在细胞凋亡过程中,Bcl-2水平下降,而细胞色素C、caspase-3水平逐渐增高。结论FLAP的表达抑制可以诱导乳腺癌细胞通过Bcl-2和caspase-3途径发生凋亡。     

DahlS高血压大鼠生精细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达

目的　为阐明高血压导致生精障碍的确切机制。方法　应用原位末端标记法 (TUNEL)、免疫组织化学、流式细胞检测及电镜等方法 ,对DahlS高血压大鼠生精细胞凋亡的定性、定位、定量及其相关蛋白Bcl 2的表达进行了研究。结果　实验组随高血压病程延长 ,血压升高 ,生精细胞凋亡率增高 ,15、17周龄明显高于对照组 (P <0 0 5 )。Bcl 2蛋白表达降低 ,15、17周龄与对照组相比差异显著 (P <0 0 5 )。随糖尿病病变加重 ,Bcl 2表达减少 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bcl 2表达率低。随糖尿病病程进展和年龄增加 ,表达均呈增加趋势 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bax表达率高。结论　高血压可导致凋亡抑制基因Bcl 2表达降低 ,从而使生精细胞凋亡增加 ,这可能是高血压导致生精障碍的机制之一     

细胞凋亡相关的信号通路

目前研究较多的细胞凋亡信号通路有wnt及JNK两条。Wnt信号通路有经典wnt通路,wnt/PCP通路和wnt/钙离子通路三个分支,引起细胞凋亡的机制主要有β-连环蛋白/tcf的转录调节途径,APC激活途径两种。JNK信号通路通过MKKKs-MKKs-MAPK转导。激活的JNK信号通路通过磷酸化转录因子、细胞骨架相关蛋白、酶等多种底物来调节细胞的生理过程,最终导致细胞凋亡。     

Picroside II Protects SH-SY5Y Cells From Autophagy and Apoptosis Following Oxygen Glucose Deprivation/Reoxygen Injury by Inhibiting JNK Signal Pathway

To explore the neuroprotective effect of picroside (Picr) II on C-Jun NH2-terminal kinase (JNK) signal pathway after oxygen glucose deprivation/reoxygen (OGD/R) in SH-SY5Y cells. In vitro, SH-SY5Y cells were used to establish the OGD/R model, which was divided into the control group, model group, Picr group, and SP600125 (SP) group. Cellular viability was measured by CCK8. Cytotoxicity was assessed with LDH assay kit. Ad-GFP-mRFP-LC3 was used to monitor autophagosome and autolysosome. Apoptoic cells were detected by Annexin V-FITC/PI apoptosis detection kit. The expressions of phospho-JNK and phospho-c-Jun were determined by western blot (WB) and immunofluorescence. The expressions of phospho-MKK4, phospho-Bcl-2, Bax, Beclin-1, and LC3 I/II were determined by WB. In the control group, only limited apoptosis and autophagy was observed, and the expression of associated proteins was very low. After OGD/R, the cellular viability of SH-SY5Y cells was reduced, whereas the cytotoxicity, apoptosis, and autophagy were increased, accompanied with an increase of phospho-MKK4, phospho-JNK, phospho-c-Jun, phospho-Bcl-2, LC3 II, Beclin-1, and Bax. During the reoxygen, treatment with Picr II or SP600125 could strengthen the cellular viability of SH-SY5Y cells, but repress the cytotoxicity, apoptosis, autophagy, and the expressions of associated protein. OGD/R could induce apoptosis and autophagy of SH-SY5Y cells by activating JNK signal pathway. Picr II could protect SH-SY5Y cells from autophagy and apoptosis following OGD/R by inhibiting JNK signal pathway. Anat Rec, 302:2245–2254, 2019. © 2019 American Association for Anatomy     

敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A5（ANXA5）对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。 方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂。转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Real-time PCR和Western bloting检测各组p21^cip1 mRNA和P21^cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1（cyclinD1）蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。 结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白均显著降低（P<0.05）,cyclinD1（P<0.05）也显著降低。 结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展。     

125I粒子对食管癌Eca-109细胞凋亡及细胞周期的影响

研究,125I粒子诱导体外培养的人食管癌Eca-109细胞凋亡及对其细胞周期的影响.设置A组:对照(不加粒子),B组:低剂量(7.4×106Bq 125I粒子1枚),C组:中剂量(14.8×106Bq 125I粒子1枚),D组:高剂量(29.6×106Bq 125I粒子1枚),细胞培养1周后收集细胞,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期.4组凋亡细胞阳性指数(AI)分别为0.17%、1.17%、4.35%、4.72%,B、C和D组与A组之间均有非常显著性差异(P<0.01);C组与B组,D组与B组比较,均有非常显著性差异(P<0.01),D组与C组比较无显著性差异(P>0.05).随粒子剂量增加,G2/M期细胞所占比例增高,各组之间有非常显著性差异(P<0.01).125I粒子可以诱导体外培养的人食管癌Eca-109细胞凋亡,其诱导凋亡的能力可能是通过把细胞阻滞在G2/M期实现.