沙眼衣原体抑制etoposide诱导的HeLa229细胞凋亡的研究

目的 探讨沙眼衣原体D血清型感染对宿主细胞凋亡的影响.方法 用凋亡诱导剂依托泊苷(e-toposide)作用于沙眼衣原体(D血清型)感染的和未感染的Hela229细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察核浓缩和凋亡小体,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果 未感染CT的Hela229细胞经etoposide作用后,用荧光显微镜观察到明显的核浓缩和凋亡小体;流式细胞仪检测的凋亡率为90.64%,与未经诱导剂作用的Hela229细胞比较差异有显著性(P<0.05).而CT感染24 h的Hela229细胞,经etoposide作用后未观察到核浓缩和凋亡小体;流式细胞仪检测的凋亡率为11.50%,与未感染CT的Hela229细胞诱导后的凋亡率比较差异有显著性(P<0.05);而与未经诱导的CT感染Hela229细胞比差异较无显著性(P>0.05).结论 沙眼衣原体感染Hela229细胞后能抑制etoposide诱导的细胞凋亡.     

沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的研究

目的探讨沙眼衣原体D血清型感染对宿主细胞凋亡的影响。方法沙眼衣原体D血清型感染的Hela229细胞经凋亡诱导剂依托泊苷（etoposide）作用后，Hoechst33．258染色、荧光显微镜观察核浓缩和凋亡小体，流式细胞仪检测凋亡率。结果经依托泊苷作用后，未感染的Hela229细胞有凋亡形态学特征，沙眼衣原体感染的Hela229细胞则无明显凋亡形态学改变，两者的凋亡率比较有统计学意义（P〈0．05）。结论沙眼衣原体感染后能抑制诱导剂诱导的宿主细胞凋亡。     

对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白表达的影响

目的：研究蛋白酶体抑制剂MG132对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白Bim、Puma表达的影响，探讨沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的可能机制。方法：以沙眼衣原体（D血清型）感染Hela229细胞，用不同浓度MG132作用后，Western-blot检测Bim、Puma蛋白质表达水平的变化。结果：沙眼衣原体感染12h后Bim、Puma的表达降低；24h后完全消失。MG132能抑制Bim、Puma的表达下降。结论：沙眼衣原体感染Hela229细胞后可降低促凋亡蛋白Bim、Puma蛋白质的表达；MG132可阻止这一作用，Bim和Puma的降解依赖蛋白酶体的活性。     

沙眼衣原体感染Hela229细胞诱导SOCS-1，3的表达

目的：探讨SOCS的表达与沙眼衣原体抑制宿主免疫功能导致持续性感染之间的关系。 方法:应用RT-PCR和Western blotting检测沙眼衣原体感染和未感染Hela229细胞SOCS-1，3 mRNA水平和蛋白质水平的表达；免疫荧光检测反义寡核苷酸阻断SOCS-1，3表达后对沙眼衣原体增殖的影响。 结果：沙眼衣原体感染Hela229细胞后可诱导SOCS-1，3的表达，阻断SOCS-1，3表达后沙眼衣原体增殖受到抑制。 结论：沙眼衣原体感染Hela229细胞后可诱导SOCS-1，3的表达，SOCS-1，3的表达是沙眼衣原体抑制宿主免疫功能，使得其在宿主体内持续存在的原因之一。     

黄芩苷对沙眼衣原体宿主细胞抗凋亡活性的抑制作用

目的:探讨黄芩苷对沙眼衣原体感染诱导宿主细胞抗凋亡效应的影响,并分析其可能的作用机制。方法:沙眼衣原体D型菌株感染HeLa229细胞并予以黄芩苷干预后,Hoechst33258染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测活化Caspase3表达水平,Western blot检测CPAFc及唯BH3域前凋亡蛋白(Bim、Bik、Puma)的表达水平。结果:黄芩苷干预能显著提高沙眼衣原体感染宿主细胞凋亡百分比及感染细胞内活化Caspase-3水平,抑制CPAF表达并阻碍Bim、Bik、puma的降解。结论:黄芩苷明显抑制沙眼衣原体宿主细胞的抗凋亡活性,而阻碍CPAF对唯BH3域前凋亡蛋白的降解可能是其重要机制。     

沙眼衣原体感染对Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达的影响

目的 探讨沙眼衣原体(Ct)感染对上皮细胞系Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达的影响。方法 用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法,对感染Ct的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达水平进行检测。结果 Ct感染的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降,并且IL-10抗体能部分抑制这种下降。结论 Ct感染可下调Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达,下调与感染过程中分泌的IL-10有关,这可能是衣原体持续感染的一种重要原因。     

Bim对热疗诱导的人宫颈癌Hela细胞凋亡的作用

目的研究Bim在热疗诱导的人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。方法用不同温度(41、42.5、43.5℃)水浴对Hela细胞加热刺激,处理后继续培养24 h。用Hoechst 33258染色细胞核,计数细胞凋亡率;采用Western blot方法检测Bim及Caspase-3蛋白的表达水平;用lipofectamine 2000转染干扰片段后观察干扰效率及对凋亡的保护作用。结果人宫颈癌Hela细胞受到不同温度(41、42.5、43.5℃)刺激后,分别引起约(16.81±0.23)%、(29.52±0.56)%和(31.22±0.67)%细胞凋亡。Bim mRNA及蛋白质呈温度依赖地表达上调。小分子干扰Bim的表达后,细胞凋亡率从(30.51±0.54)%下降到si-Bim-1(12.52±0.67)%、si-Bim-2(15.23±0.43)%。结论 Bim介导了热疗诱导的人宫颈癌Hela细胞凋亡,可能在热疗治疗宫颈癌中发挥重要作用。     

ABT737通过激活JNK/c-Jun通路上调Bim诱导宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨JNK/c-Jun信号通路激活Bim在ABT737诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。【方法】用MTT法检测ABT-737对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot方法检测JNK、phospho-JNK、c-Jun、phospho-c-Jun以及Bim蛋白的表达;用RT-PCR检测Bim在mRNA水平的变化;用JNK特异性抑制剂SP600125和siRNA瞬时转染抑制JNK及c-Jun的活性。 【结果】ABT-737能抑制Hela细胞的生长,诱导HeLa细胞发生凋亡。ABT737可激活JNK激酶活性其下游靶分子c-Jun,凋亡相关基因Bim在mRNA水平和蛋白水平的表达也随之上调。应用JNK特异性抑制剂SP600125和靶向JNK及c-Jun的siRNA抑制JNK或c-Jun的活性或表达后,ABT737诱导的Bim上调及细胞凋亡亦被有效阻断。【结论】ABT737通过JNK/c-Jun信号通路上调凋亡相关基因Bim的表达,诱导HeLa细胞发生凋亡。     

蓝舌病毒湖北株对小鼠前列腺癌RM-1细胞的杀伤效应

目的:体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对小鼠前列腺癌细胞RM-1的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶瘤的机制。方法:观察RM-1细胞感染BTV-HbC3的细胞病变效应;MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;DNA Ladder分析病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪测定病毒对RM-1细胞凋亡的影响。结果:BTV-HbC3感染RM-1细胞后有明显的细胞病变效应;DNA Ladder分析为阶梯状条带;透射电镜发现胞质内有大量病毒颗粒和典型细胞凋亡形态变化;流式细胞仪可见明显的细胞凋亡。结论:BTV-HbC3在体外能有效的感染RM-1细胞,并能诱导RM-1细胞凋亡。     

白花蛇舌草抑制Hela细胞肿瘤活性的体外实验研究

目的探讨中药白花蛇舌草抑制人宫颈癌Hela细胞肿瘤活性的作用及分子生物学机制。方法MTT法检测白花蛇舌草对宫颈癌Hela细胞生长的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,化学比色法测定Hela细胞活性氧（ROS）产生状态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化染色并用计算机图像分析观察p53基因表达。结果白花蛇舌草可抑制Hela细胞的生长,其效果与药物的浓度和作用的时间相关,倒置显微镜下Hela细胞出现细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测到凋亡峰,白花蛇舌草作用后细胞内ROS水平下降,而突变型p53表达降低。结论一定浓度的白花蛇舌草对人宫颈癌Hela细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞内ROS水平和p53基因调控有关。     

4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的 研究Ｎ-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺（4HPR）对人宫颈癌细胞凋亡的影响。方法 应用光学显微镜、激光共聚焦显微镜、电子显微镜、荧光显微镜从细胞形态学方面观察4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法分析4HPR诱导人宫颈癌细胞凋亡的细胞特征、生物化学特征及凋亡细胞百分率。结果 电子显微镜和激光共聚焦显微镜镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;光学显微镜和荧光显微镜下可见凋亡小体;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的“阶梯状”图谱;流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征,在DNA直方图上,G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型;凋亡百分率结果显示4HPR可诱导宫颈癌细胞凋亡,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.01）。结论 4HPR可诱导人宫颈癌细胞凋亡, 且呈时间和浓度依赖性。     

抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞作用研究

目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体—mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用。方法:制备抗人DR5单抗-mDRA-6;检测Jurkat细胞表面DR5表达率;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT法计算mDRA-6对Jurkat细胞存活的影响;FITC-AnnexinⅤ及PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对Jurkat细胞凋亡率影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对Jurkat细胞DNA片段化的作用。结果:Jurkat细胞表面DR5表达率为94.8%;mDRA-6使Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用,1.563 mg/L的mDRA-6可使Jurkat细胞死亡60.50%;AnnexinⅤ及PI双染显示0.3mg/L的mDRA-6作用10 h,Jurkat细胞凋亡率达43.22%;10 mg/L mDRA-6作用HL-60细胞3h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的“梯形”条带。结论:抗DR5单抗-mDRA-6能够诱导Jurkat细胞凋亡。     

和厚朴酚对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时间下对Hela细胞增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色和DNA ladder检测和厚朴酚作用下Hela细胞的凋亡。结果MTT结果显示和厚朴酚可明显抑制Hela细胞的增殖,且抑制率存在剂量和时间依赖性;流式结果表明10μg/mL和20μg/mL和厚朴酚作用细胞24h后,凋亡细胞的比例分别为22.5%和62.2%,而对照组为8.7%;和厚朴酚处理过的Hela细胞,经Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯状条带。结论和厚朴酚具有抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡的作用。     

Apoptosis is the most efficient death-pathway in tumor cells after topoisomerase II inhibition

OBJECTIVE: To compare the efficiency of apoptosis and other modes of cell death in killing tumor cells after the induction of DNA damage by topoisomerase inhibitors like etoposide. METHODS: This study was carried out in the Tumor Biology Department, National Cancer Institute, Cairo University, Cairo, Egypt, from September 2005 to August 2007. The breast cancer MCF7, the cervix carcinoma, human cervical adenocarcinoma Hela, and the brain tumor U251 cell lines were exposed to etoposide. Apoptosis was detected using the flow cytometry and the DNA ladder formation methods. Cell viability was determined by a colorimetric assay, and the residual DNA double-strand breaks dsb were measured by gel electrophoresis. RESULTS: The Hela cells were the most, the MCF7's were moderately, whereas the U251's were the least sensitive to etoposide. Apoptosis was detected only in Hela cells whereas the other 2 cell lines showed a very low level of apoptosis only 3% increase above the control cells. At equitoxic drug concentrations namely IC50, the Hela cells showed the lowest amount of non-repaired DNA dsb, and the MCF7's showed the highest amount, whereas the U251 cells showed a moderate amount. CONCLUSION: These results indicate that although other modes of cell death exist, apoptosis is the most efficient and requires lower drug concentrations and fewer numbers of non-repaired dsb to give the same killing effect. Clinically, this means that tumors that can execute apoptosis may require lower doses of topoisomerase inhibitors than those that lost the ability to exercise apoptosis.     

渥曼青霉素对化疗药物诱导BGC823细胞凋亡的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对足叶乙甙和阿霉素诱导的人胃癌细胞BGC823凋亡的影响。方法:常规培养人胃癌细胞BGC823,将细胞分为6组:①空白对照组(不加任何药物);②渥曼青霉素组(终浓度为40 nmol/L);③足叶乙甙组(终浓度为20μmol/L);④渥曼青霉素(终浓度为40nmol/L)+足叶乙甙组(终浓度为20μmol/L);⑤阿霉素组(终浓度为0.3μmol/L);⑥渥曼青霉素(终浓度为40nmol/L)+阿霉素组(终浓度为0.3μmol/L)。分别以上述药物干预24 h后,提取各组细胞的蛋白,以NaI法提取各组细胞的DNA。采用DNA琼脂糖凝胶电泳分析各组的细胞凋亡现象,用Western blot检测各组细胞中Caspase-3蛋白的活化表达。结果:DNA琼脂糖凝胶电泳示空白对照组细胞见较弱的DNA梯状谱(DNA Ladder),其他5组细胞均出现明显的DNA梯状谱;阿霉素与足叶乙甙干预后,胃癌细胞BGC823的Caspase-3活性较空白对照组增强,加用渥曼青霉素处理后,Caspase-3活性进一步增强。结论:PI3K抑制剂渥曼青霉素可增强化学治疗药物足叶乙甙和阿霉素对胃癌细胞的凋亡诱导作用,提高其化疗疗效。为寻求新的高效胃癌化疗方案提供理论依据。     

核仁素表达下调对C2C12细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用反义寡核苷酸技术以抑制C2C12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24 h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论：核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。     

As4S4诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究雄黄主要成分硫化砷（As4S4）抑制宫颈癌Hela细胞株增殖和诱导凋亡时对细胞内端粒酶活性的影响。方法用不同浓度的As4S4作用于Hela细胞株不同时间段后光镜观察细胞形态变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率；流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率；DNA梯状电泳（DNAladder）检测凋亡的发生；PCR—ELISA法测定细胞内端粒酶活性变化。结果As4S4可抑制Hela细胞增殖，作用呈明显的时效和量效关系，24hIC50为30mg／L；As4S4诱导Hela细胞的凋亡率明显增加并呈浓度依赖性；DNAlad-der呈梯状条带；细胞内端粒酶活性明显受抑制。结论As4S4具有抑制Hela细胞增殖和促进凋亡作用，其机制可能与抑制细胞内端粒酶活性有关。