真核细胞表达质粒pCMV4增强hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力

目的：比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。方法：分别构建pcDNA3-hCGβ-C3d3、pCaMV4-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒，并转染真核细胞瞬时表达系统COS-7细胞，以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ-C3d3质粒。对6周龄BLAB／C小鼠行DNA免疫。于末次免疫后6周采血，用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。结果：对COS-7体外表达效率分析，由pCMV4介导的hCGβ-C3d3表达效率明显高于pcDNA3。动物DNA免疫结果，pCMV4-hCGβ-C3d3刺激动物机体产生的免疫应答强度及免疫效果显著高于pcDNA3-hCGβ-C3d3。结论：pCMV4真核表达质粒hCGβ-C3d3体外表达效率及动物DNA免疫效力均显著高于pcDNA3真核表达质粒。     

分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答

目的：提高hCGβ在真核细胞中的表达效率，观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法：构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3。分别用pCMV4-DPPLSS-hCGβ-C3d3、pcMV4-DPPLSS-hCGβ和pcMV4-DPPISS-hCGβ联合pcMV4-DPPISS-C3d3免疫BALB／c小鼠，各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500μmol，间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果：含有DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3较无DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3在COS-7细胞中的表达效率明显提高。50μmol是BALB／c小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALB／c小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβ-C3d3免疫组IgG1／IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论：分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。     

hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达

目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ3蛋白疫苗的体液免疫效应

目的：通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法：采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ，在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB／c与C57BL／6小鼠进行免疫，共免疫两次，间隔4周，ELISA测定血清中的抗体滴度，比较各组的免疫效果。结果：无论是BALB／c小鼠还是C57BL／6小鼠，hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALB／c小鼠，初次和再次免疫结果显示，C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL／6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB／c小鼠，但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论：通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性，在个性差异很大的不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

C3d3-hCGβ融合蛋白免疫BALB/c小鼠增强抗hCG-β TH2型体液免疫效应

目的 通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性并实现免疫效应向TH2型体液免疫偏倚。方法 在CHO细胞中表达、纯化hCGβ、C3d3和hCGβ-C3d3融合蛋白。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、单用hCGβ、hCGβ联合C3d3和hCGβ加用弗氏完全佐剂免疫BALB／c小鼠，共免疫2次，间隔4周。ELISA测定血清中抗hCGβ抗体滴度。末次免疫后3周处死小鼠制备单个脾细胞悬液，体外用hCG刺激培养48h，ELISA检测上清中TH1型(IFN-γ、IL-2)和TH2型(IL-Ⅱ，4、IL-10)细胞因子分泌水平。结果 C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍，C3d3的佐剂能力是弗氏完全佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫)。借助C3d3分子佐剂，hCGβ-C3d3融合蛋白可产生很明显的TH2型体液免疫优势效应。结论 分子佐剂C3d3可以大幅增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性，使免疫效应向TH2型体液免疫偏倚。     

hCGβ-C3d融合蛋白在CHO细胞中的表达

为了提高hCGβ的免疫原性 ,构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒pcDNA3 hCGβ C3d3,使其转染稳定表达系统中国仓鼠卵细胞 (CHO )后 ,检测融合蛋白分泌情况。CHO细胞转染了pcDNA3 hCGβ C3d3质粒后 ,经 4 8h培养 ,1 0× 10 6个CHO细胞可分泌 6 6 0ng的重组融合hCGβ C3d3蛋白。细胞免疫化学技术分析显示 ,表达产物既有hCGβ的组分也有C3d的成分。经SDS PAGE及免疫印迹试验发现CHO细胞培养上清液中含有三组蛋白成分 ,其相对分子质量分别为12 0 0 0 0、90 0 0 0和 6 5 0 0 0。利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接 ,构建了pcDNA3 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,为提高hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础     

分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗的体液免疫效应

目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV16HishCGβC3d3和phCMV16HishCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβC3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALBc与C57BL6小鼠进行免疫,共免疫两次,间隔4周,ELISA测定血清中的抗体滴度,比较各组的免疫效果。结果:无论是BALBc小鼠还是C57BL6小鼠,hCGβC3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALBc小鼠,初次和再次免疫结果显示,C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALBc小鼠,但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性,在个性差异很大的不同品系小鼠,C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

hCGβ-03d3基因免疫BALB／c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hcGβ-C3d3和pCMV4-hOGβ免疫BALB／c小鼠，免疫剂量为50pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周，MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖；ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hcGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周，hCGβ-C3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组；而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hcGβ-C3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

hCGβ-C3d3基因免疫BALB/c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hCG-βC3d3和pCMV4-hCGβ免疫BALB/c小鼠,免疫剂量为50 pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周,MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖;ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hCGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周,hCG-βC3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组;而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hCG-βC3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能

目的:探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法:用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌Lb.hCGβ和Lb.hCGβ-C3d3以两种剂量(109个和1010个)经鼻腔滴注接种6~8周龄雌性BALB/c小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况。结果:用1010个Lb.hCGβ-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合。结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能。     

hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化

目的：构建带有6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒，在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达。方法：利用高效真核表达载体phCMV1，构建phCMV1-6His-hCGβ和phCMV1-6His-hCGβ-C3d3，脂质体法转染CHO细胞，G418(800μg/ml)筛选抗性克隆。放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量，Western blotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ-C3d3融合蛋白。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。结果：酶切及测序结果显示，phCMV1-6His-hCGβ及phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确。在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达，phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的1．6倍。表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白。结论：hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ-C3d3融合蛋白免疫动物的体液免疫效应和抗生育效果奠定了基础。     

SARS相关冠状病毒M蛋白基因重组核酸疫苗的实验研究

目的：构建针对SAILS相关冠状病毒M蛋白基因的重组核酸疫苗，观察其免疫小鼠后肌体的抗体产生情况，探讨其作为抗SAILS病毒疫苗的可能性。方法：通过分子生物学的方法构建SARS相关冠状病毒M蛋白基因真核表达质粒pcDNA3．1／M。经肌注免疫健康BALB／c小鼠，在免疫后的2．4、6周取小鼠血清，用ELISA法检测其中的抗体。结果：接种含M基因的真核表达质粒pcDNA3．1／M的低剂量组和高剂量组的小鼠血清在接种2周后就可检测出SARS-CoV特异性IgG，第4周时，这种特异性IgG水平有升高趋势，第6周时，血清中的抗体含量与4周时无大的差异。高剂量组产生抗体与低剂量组产生抗体无显著差异。pcDNA3．1空载体接种的对照组未检测出特异性抗体（其OD值低于0．18）。结论：构建的真核表达质粒pcDNA3．1／M能诱导小鼠产生了针对SARS的抗体。     

CCR9/CCL25介导小鼠经生殖道hCGβ避孕疫苗粘膜免疫后B细胞归巢

目的：探讨hCGβ粘膜避孕疫苗体液免疫的分子机制。方法：分别用1010个重组乳酸杆菌Lb.pIlac、Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜途径免疫6～8周龄BALB/c小鼠,3周后相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测加强免疫后2周阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度;ELISPOT检测分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞数;RT-PCR筛查小鼠子宫B细胞上18种趋化因子受体和相关趋化因子CCL25;FCM和ELISA分析CCR9/CCL25的表达。结果：经小鼠生殖道粘膜接种1010Lb.pIlac-hCGβ可在生殖道局部诱导产生抗hCGβIgG和IgA抗体,且以IgG抗体为主;局部存在抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞,而以IgG抗体分泌细胞为主;粘膜免疫后,小鼠生殖道局部B细胞上CCR9表达增高,粘膜局部相应配体CCL25表达亦增高。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜免疫可诱导有效的免疫应答;粘膜局部CCR9/CCL25可介导B细胞归巢至生殖道局部,这可能增强hCGβ粘膜避孕疫苗的避孕效果。     

日本血吸虫中国株次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶真核重组质粒的构建及其动物免疫保护性研究

目的 克隆日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（SjHGPRT）全长编码基因，研究其DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护作用。方法 将全长SjHGPRT基因克隆到真核表达载体pcD—NA3上，构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT，用经双酶切、PCR和测序鉴定正确的真核表达质粒免疫昆明小鼠3次，每次间隙2周，第3次免疫后第2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染，感染后42d处死小鼠，收集成虫、肝脏和24h粪便，计算减虫率和减卵率。结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT。动物免疫实验结果显示：pcDNA3-SjHGPRT疫苗组减虫率23．17％、肝减卵率41．64％、粪减卵率40．57％，每雌虫子宫内卵减卵率26．95％，与对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。每雌虫子宫内卵减卵率及肝、粪减卵率明显高于减虫率，表明pcDNA3-SjHGPRT疫苗可能主要在抗血吸虫卵胚发育或抗生殖方面起作用。结论 日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶DNA疫苗可诱导抗血吸虫卵胚发育或抗生殖作用，具有潜在的疫苗研究与开发价值。     

人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa CDR3基因片段的克隆及其DNA疫苗制备

目的：为探讨B细胞淋巴瘤细胞膜表面免疫球蛋白可变区的互补决定区3能否在动物体内激发特异性抗独特型抗体，以人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa为模型，克隆其膜表面免疫球蛋白重链可变区互补决定区3(CDR3)基因片段作为抗原基因，构建DNA疫苗质粒。方法：以RT-PCR的方法获得互补决定区3(CDR3)基因片段，进而克隆了小鼠单核细胞趋化因子(MCP-3)基因作为佐剂分子，以重组PCR的方法获得CDR3和MCP-3基因的融合基因片段，克隆在真核表达载体pcDNA3．1中构建DNA疫苗质粒，然后通过脂质体转染的方法验证该质粒在真核细胞中的表达情况。结果：应用分子生物学的方法获得了以Namalwa细胞mIgCDR3作为抗原基因的DNA疫苗质粒。结论：人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa CDR3基因的DNA疫苗构建正确，体外瞬时转染实验证明该质粒能够在真核细胞中正确表达。所构建的重组表达质粒为下一步的抗B细胞淋巴瘤基因疫苗的体内动物实验工作打下基础。     

抗人B细胞淋巴瘤DNA疫苗的构建

目的 :探讨人B细胞淋巴瘤活检组织中肿瘤细胞膜表面免疫球蛋白VH(smIgVH)基因片段能否在动物体内激发特异性抗独特型抗体。方法 :以RT PCR法获得IgVH 基因片段 ,以小鼠单核细胞趋化因子 (MCP 3)基因作为佐剂分子 ,进行重组PCR获得MCP 3和VH 基因片段的融合基因 ,克隆在真核表达载体 pcDNA3.1中 ,构建DNA疫苗质粒 pcDNA/MCP BVH。通过脂质体转染验证该质粒在真核细胞COS 7中的表达。结果 :通过上述方法获得了以活检组织肿瘤细胞mIgVH区基因片段 ;成功地构建了DNA疫苗质粒 pcDNA/MCP BVH。体外瞬时转染实验证明 ,该质粒能够在真核细胞COS 7中正确表达。结论 :成功地构建重组表达质粒 pcDNA/MCPBVH,在体外能够正确表达 ,为进一步研制抗B细胞淋巴瘤基因疫苗奠定了基础     

小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-Ⅱ核酸疫苗中的应用

目的：构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）DNA疫苗免疫效果的影响.方法：以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA.采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm-T,将其亚克隆入pcDNA3中,构建出小鼠MIP-1α的真核表达质粒Pm;将其转染COS-7细胞,并用Boyden趋化小室法检测MIP-1α的生物学活性.然后用其与HSV-ⅡgD的DNA疫苗一起免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体、脾T细胞增殖反应及病毒攻击小鼠后对小鼠的保护率,观察MIP-1α对HSV-Ⅱ DNA疫苗免疫效果的影响.结果：成功构建了小鼠MIP-1α的重组真核表达质粒;免疫BALB/c小鼠发现,其作为分子佐剂可加强HSV-ⅡgDNA疫苗的免疫效果.结论：小鼠MIP-1α可作为HSV-Ⅱ gD DNA疫苗的分子佐剂,为研制新型有效的HSV-Ⅱ DNA疫苗提供一定的依据.     

人源分子佐剂hC3d3促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性

目的探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3对人外周血单个核细胞（PBMC）中的B细胞与T细胞表面协同刺激分子表达及对hCGβ抗原反应性的影响。方法从人肝细胞cDNA文库克隆hC3d基因片段；构建pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3真核表达质粒，表达和纯化重组蛋白抗原hCGβ及hCGβ-hC3d3融合蛋白。实验分组：将B细胞、B＋T细胞组或PBMC，分别应用hCGβ、hCGβ-hC3d3或美洲商陆（PWM）等抗原进行体外处理48h。用流式细胞术分析培养后的上述淋巴细胞表面的CD80、CD86、CD154、CD25等协同刺激分子的表达；用ELISA检测培养上清中IL-2的含量。结果本研究成功克隆了hC3d基因，构建了真核表达质粒pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3；经转染CHO细胞，获得了目的蛋白高效分泌表达。经鉴定及纯化成功获得了较高纯度的目的蛋白hCGβ及hCGβ-hC3d3。hCGβ-hC3d3蛋白能够显著上调B细胞表面CD80、CD86分子的表达，尤其是CD86分子的表达（P〈0．01）；能明显增强T细胞表面CD154、CD25分子的表达（P〈0．05）。hCGβ-hC3d3蛋白提高B细胞抗原提呈能力及T细胞活化后分泌IL-2的能力（P〈0．05）。结论人源分子佐剂hC3d3明显促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性。     

T细胞淋巴瘤DNA疫苗的实验研究

目的：研究T细胞淋巴瘤TCR Vβ DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应。方法：将：BALB／C小鼠随机分为pcDNA3．1组、pcDNA3．1／TCR Vβ8组、pcDNA3．1／TCR Vβ8 CpG 质脂体组和全硫代CpC组，共4组(每组6只)，双侧股四头肌注射疫苗免疫，于第0、2、4周各免疫1次，共3次。每次免疫前及免疫开始后至第8周，取鼠血，应用间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成情况。结果：pcDNA3．1／TCR Vβ组、pcDNA3．1／TCR Vβ CpC 脂质体组小鼠血清中均产生了特异性抗体，抗体滴度在第4周开始增高，第6周时达到高峰。同一时间段相比，特异性抗体滴度后者显著高于前者。结论：证明了DNA重组质粒pcDNA3．1/TCR Vβ可诱导小鼠产生特异性抗T细胞淋巴瘤TCR Vβ8抗体；CpG和脂质体增强了TCR Vβ8 DNA疫苗诱导的体液免疫反应。     

共表达不同水平的IL-12对于HBV DNA疫苗质粒免疫原性的影响

目的 在HBsAg DNA疫苗质粒中共表达IL-12佐剂分子,研究IL-12的表达水平对于HBV DNA疫苗质粒免疫原性的影响.方法 构建携带来源于中国地区C型HBV参照序列CHN-HBV07-C经密码子优化的preS2-S基因的DNA疫苗质粒pHBV,并将3个不同IL-12表达水平的佐剂分子表达盒序列分别克隆入该疫苗质粒中,通过瞬时转染293T细胞以检测重组质粒IL-12分子及乙肝表面抗原的表达情况.将不同IL-12表达水平的疫苗质粒免疫BALB/c雌性小鼠,IFN-γ的ELISPOT方法检测HBsAg抗原特异性的细胞免疫应答,化学发光定量ELISA法检测HBsAg特异的抗体水平.结果 成功构建3个不同IL-12表达水平的HBV DNA疫苗质粒,293T细胞转染结果显示:不携带IL-12分子表达盒的对照疫苗质粒pHBV的HBsAg表达水平可达70 ng/ml;低表达IL-12的疫苗质粒pHBV-12l的HBsAg表达水平为18 ng/ml;而高表达IL-12的重组疫苗质粒pHBV-12h的HBsAg表达水平仅为6 ng/ml.BALB/c小鼠的免疫结果表明:高表达IL-12分子的疫苗质粒pHBV-12h所诱导的细胞免疫及体液免疫水平相对于对照疫苗质粒pHBV均显著降低了.低表达IL-12分子的疫苗质粒pHBV-12l所诱导的抗体水平也显著降低了,但其细胞免疫应答水平却显著提高了.结论 在同一疫苗质粒中,高表达IL-12分子的质粒可能会影响到抗原蛋白的表达,而低表达IL-12分子的疫苗质粒却能增强细胞免疫应答.因此,平衡好佐剂分子及抗原蛋白的表达水平对于诱导高水平的免疫应答是个重要的因素.