人附睾蛋白4单克隆抗体与免放试剂盒的制备及其对卵巢癌诊断的临床价值探讨

目的 制备人附睾蛋白4(HE4)单克隆抗体并研制免放分析试剂盒, 探讨其在卵巢癌临床诊断中的价值。 方法 用重组人HE4免疫小鼠, 通过细胞融合杂交瘤技术制备并筛选可以配对的HE4单抗, 用125I标记其中一株单抗, 研制HE4免放试剂盒, 并评价其检测的灵敏度。通过检测临床血清标本来评价其对卵巢癌诊断的灵敏度和特异度。 结果 筛选出了一对亲和力与特异性高的HE4单抗, 其免放试剂盒检测的灵敏度为3.65 pmol/L, 其对卵巢癌的临床诊断的灵敏度可达90.83%, 特异度为99.17%。 结论 制备的单克隆抗体亲和力高, 研制的免放试剂盒各项指标较好, 可用于卵巢癌的早期临床诊断和疗效观察, 降低卵巢癌患者的病死率。     

用于脾显像的~(99m)Tc-RBCs简便有效的标记方法

介绍了~(99m)Tc在Sn-α-D-葡萄糖-1-磷酸盐(Sn-GP)的参与下标记人红血细胞(RBCs)的新方法和16位正常志愿者做脾显像的实验结果.此法的特点是把细胞的标记和热处理合并为一个步骤,以便在最短的时间内获得显像效果.作者同时比较了GP与PYP(Sn-焦磷酸盐)两种方法的标记效率,结果表明,按照Sn-GP方法用~(99m)Tc标记RBCs可达到高标记率(95.5±1.5%),而在相同条件下用Sn-PYP方法的标记率较低,并且产率变化幅度相对大(61.5±25.0%)     

鸡抗HBs抗体的制备及在人HBsAg检测中的应用

对所制备的抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体1G11和3A6进行鉴定,标记后建立了检测鸡蛋黄IgY的间接ELISA方法.用乙型肝炎疫苗免疫25周龄蛋鸡,血清及蛋黄中第8d出现特异性抗体,在第60d效价达1×10~(-5).利用鸡抗HBs抗体,建立了检测血清HBsAg的夹心ELISA方法.检测HBsAg的最低浓度达0.5ng/ml.且特异性较目前商业化试剂盒高     

超顺磁性氧化铁标记小鼠淋巴细胞MR成像特性探讨

目的 探讨超顺磁性氧化铁(SP IO)标记小鼠脾脏淋巴细胞及其体外MR成像的可行性.方法 取5只小鼠脾脏淋巴细胞,采用100、50、25、15、10、5μg/ml的SPIO联合3μg/ml的多聚赖氨酸(PLL)标记淋巴细胞,确定最佳标记浓度.普鲁士蓝染色鉴定细胞内铁.取30份新鲜、标记、未标记淋巴细胞行台盼蓝染色检测细胞存活率的变化.用对照组及2×106、5×106和10×106个/ml的标记后淋巴细胞接种于琼脂糖凝胶中行3.0 T MR T2 WI、T2+WI及磁敏感加权成像(SWI)序列扫描,相同细胞浓度不同序列及相同序列不同细胞浓度时各取21个感兴趣区测量MR信号值.采用组间独立样本t检验比较细胞存活率;单因素方差分析比较MR信号值差异.结果 SPIO联合PLL成功标记小鼠淋巴细胞,最佳SPIO浓度为5μg/ml.普鲁士蓝染色显示细胞内存在蓝染铁颗粒,阳性率为(93.6±2.1)％.30份台盼蓝染色细胞样本,新鲜分离的淋巴细胞存活率为(94.8±3.1)％,细胞培养6h后,标记组和未标记组淋巴细胞存活率分别为(88.7±2.7)％和(88.9±3.2)％.标记组同未标记组细胞间存活率差异无统计学意义(t =0.281,P＞0.05),但标记组、未标记组存活率同培养前相比,其下降均有统计学意义(t值分别为8.125、7.253,P值均＜0.05).相同浓度细胞,T2WI信号降低最弱,SWI信号降低最明显.结论 SPIO联合PLL能有效标记小鼠淋巴细胞,且不影响其存活率,标记细胞体外3.0T MR成像可行,以SWI序列最敏感.     

AlphaLISA检测新型冠状病毒

目的 建立均相光激化学发光免疫分析方法(AlphaLISA)快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2).方法 采用新型冠状病毒抗体偶联发光微球,生物素标记另一抗体,以及链霉亲和素偶联感光微球构建新型冠状病毒AlphaLISA检测体系.采用SARS-CoV-2真核表达抗原和灭活病毒对AlphaLISA方法进行评价,并与商业化ELISA试剂盒进行比对.结果 确定单抗1#与多抗组别作为新型冠状病毒AlphaLISA检测的抗体对,AlphaLISA对新型冠状病毒抗原的检出限为0.39 ng/ml,具有较好的重复性,批内差1.90％～8.93％,批间差1.75％～9.04％,对不同临床样本的检测具有较好的耐受性,与ELISA试剂盒相比对灭活病毒的检测敏感性更高.结论 AlphaLISA可实现对SARS-CoV-2的高效快速检测.     

肿瘤生长抑素受体显像剂~(99)Tc~m-octreotide的制备及鉴定

目的　建立99Tcm 直接标记octreotide的最佳方法 ,评价其受体介导结合特性以及作为肿瘤生长抑素受体显像剂的可能性。方法　采用抗坏血酸钠和连二亚硫酸钠作为还原剂 ,对oct reotide进行标记 ;用大鼠脑皮质细胞膜进行体外受体结合分析 ;进行动物体内分布、药代动力学、毒性实验和临床受体显像。结果　99Tcm octreotide放化纯达 78 5 % ,纯化后为 93 8% ,室温下放置 4h为92 1%。细胞膜体外放射受体结合分析证实99Tcm octreotide与octreotide具有相同的受体介导结合特性。 3例肺癌患者临床受体显像均获得阳性结果。结论　99Tcm 直接法标记octreotide方法可行 ,稳定性好 ;99Tcm octreotide是一种很有希望的肿瘤生长抑素受体显像剂     

HBsAg酶联免疫吸附试验试剂盒分析性能评价

目的 验证乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的分析性能.方法 参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI) EP5-A2文件、第四版《全国临床检验操作规程》及相关文献对HBsAg的ELISA检测试剂盒的精密度、符合率、检出限、敏感性和特异性等进行验证.结果 HBsAg的ELISA试剂盒测量重复性CV为4.85％,中间精密度CV为13.35％;阴、阳性符合率为100％;试剂盒的敏感性和特异性均为100％,其阳性预测值100％,阴性预测值100％;试剂盒的C50-20％检测阳性结果2.5％(1/40)、C50+20％浓度的阳性结果95％(38/40),即-20％～+20％浓度范围包含了C5-C95区间,检出限为0.12 IU/ml.结论 HBsAg的ELISA试剂盒检测结果可靠,能够满足临床需求.     

多聚酶链式反应与酶联免疫吸附试验检测丙型肝炎病毒感染的比较

本文报告了用逆转录套式多聚酶链式反应(RT nested PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HCV—RNA和抗—HCV.用军科院丙肝抗体酶免试剂盒检测了2086份血清,病区和门诊病人抗—HCV阳性率为13.4%,献血员为2.2%,一些高危人群HCV感染率比较高.用军科院和肝研所两个单位的丙肝抗体酶免疫试剂盒同时检测100份血清,抗—HCV总符合率为95.0%.用PCR法检测了34份抗—HCV阳性和20份抗—HCV阴性血清,阳性符合率为70.6%,总符合率为79.6%.PCR与ELISA法检测HCV感染各有长短,目前仍需找到一种敏感、特异、简便、快速的诊断方法,以适应临床需要.     

两种血糖测定试剂盒的实验评价

血清葡萄糖测定是临床实验室较重要的常规检验项目之一。近几年由于酶法已逐步取代氧化还原法和邻甲苯胺法。我们应用保定长城临床试剂公司生产的血糖测定(GOD法)试剂盒(国家卫生部临床检验中心监制,国家定型产品,以下简称保长产品)2年,又应用兰州军区临床诊断试剂中心生产的血糖测定(GOD法)试剂盒(研制产品,以下简称兰中产品)半年多,对兰中产品进行了实验考核,两种产品进行了对照实验和相关回归分析,现介绍如下。 1 试剂盒批号及方法仪器:①保长产品,批号910202;②兰中产品,批号910214;③仪器和方法,724(24W)微机型可见光分光光度计,用进口UNI2010W加样器加样,按《全国临床检验操作规程》推荐的方法,各管平行3管,计算均值。     

高海拔地区FISH法检测乳腺癌HER2基因的方法改进

目的 在高海拔地区改良并简化乳腺癌HER2 FISH法检测的预处理步骤,节省实验时间,扩大FISH检测试剂盒的临床应用.方法 以10例HER2免疫组化染色结果为＋ ＋以上的乳腺癌标本为研究对象,采用美国PanPath公司的HER2 FISH检测试剂盒,将其中的预处理步骤改良为高压煮沸处理,比较常规法与改良法对HER2基因扩增结果的影响.结果 两种方法检测乳腺癌HER2基因的阳性率无统计学差异,并且均能使细胞间质完全消化,细胞或重叠或孤立,细胞核中红绿信号清晰.结论 改良FISH法可以替代常规预处理步骤,简化了步骤,节省了时间,扩大了FISH检测试剂盒的临床应用.     

无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的价值评价

目的：评价无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的筛检价值。方法：以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)法，厦门新创梅毒抗体ELISA1诊断试剂盒(ELISA1)及北京金豪梅毒抗体ELISA诊断试剂盒(ELISA2)对评价标本作盲法筛检，以卫生部临床检验中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。用四格表法评价真实性与可靠性指标，并对二种ELISA试剂盒的Cut-off值的合理性进行评价。结果：TRUST法、ELISA1及ELISA2试剂盒的灵敏度分别为68．2％，95．5％，100．0％，特异度分别为77．8％，94．4％，94．4％，约登指数分别为0．46，0．900．94，重复试验符合率分别为90．0％，100．0％，100．0％，二种ELISA试剂盒的Cut-off值较合理。结论：ELISA试剂盒的灵敏度、特异度及重复试验符合率要远高于TRUST法。尽管TRUST法的灵敏度与特异度较低，在无偿献血者的粗筛快检中可降低血液报废率，因而在无偿献血中的仍有很高价值，如果将ELISA试剂盒的灵敏度与特异度加以提高，将会具有更大的临床应用价值。     

~(99m)Tc-体外标记人多形核白细胞

本文报道了~(99m)Tc 体外标记多形核白细胞(PMN)的初步结果,将PMN 白细胞从全血中分离出来,再用~(99m)Tc 标记。所用方法对本文作者之一JE 研究的体外标记红细胞方法做了改进,并自1979年以来,在我们的临床生理科用于血管和心血管照相。     

GFP转基因胎鼠神经干细胞的体外磁标记及MRI

目的 探讨超顺磁性氧化铁颗粒(superparamagnetic iron oxide, SPIO)标记绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)转基因胎鼠神经干细胞(neural stem cells, NSCs)后对其生物学特性的影响及标记后MR成像效果.方法 采用多聚赖氨酸PLL(0.75 μg/ml)介导SPIO(25 μg Fe/ml)的方法标记GFP转基因胎鼠NSCs,用普鲁士蓝染色观察标记后NSCs内铁,比较标记和未标记NSCs的GFP表达、活力、增殖、凋亡及多向分化能力,并对标记的NSCs行MRI.结果 普鲁士蓝染色示标记NSCs胞质内见大量蓝色颗粒.标记与未标记细胞的活力、增殖、凋亡及多向分化能力经单因素方差分析后均显示2组细胞间无统计学差异(P值均＞0.05).MRI示1×105个/0.5 ml细胞管在T2*WI中可见明显低信号改变.结论 用PLL介导SPIO标记GFP转基因胎鼠NSCs是一种可行、安全、有效的细胞内标记方法.1.5T MR仪能够在体外观察到标记后的细胞,以T2*WI序列最为敏感.     

人血清中CuZn-SOD-I发光免疫分析法的建立

已有作者报道癌症患者血液中铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)与抗牛CuZn-SOD抗血清发生明显交叉反应.我们称这种CuZn-SOD为免疫学性质改变的CuZn-SOD(CuZn-SOD-I).为探讨其临床应用价值,建立了定量检测人血清中CuZn-SOD-I的发光免疫分析法,并比较观察了癌症及同部位非癌疾病患者血清中CuZn-SOD-I的变化.发现癌症患者血清中CuZn-SOD-I明显升高.现将方法学有关问题报道如下,关于CuZn-SOD-I测定的临床应用价值将另文报道.试剂 (1)标记牛CuZn-SOD:以ABEI作发光剂.用EDC方法标记牛CuZn-SOD(比活性大于     

99Tcm标记化合物显像检测冠心病的优化方案探讨

目的 探讨99Tcm标记化合物显像检测冠心病的优化方案.方法 选择临床可疑或确诊的冠心病患者4236例,进行99Tcm标记化合物显像8873例次,分析显像结果,提出99Tcm标记化合物显像检测冠心病的优化方案,并与临床资料对照验证.结果 在可疑冠心病诊断、心肌缺血检测、心肌梗死诊断中,该方案准确率高达94.1%.对临床特需的诊断要求如存活心肌检测、 "罪犯"血管检测、缺血性心肌病诊断、疗效监测等也有较高的准确率.结论 99Tcm标记化合物显像优化方案可以完成临床对冠心病的大部分诊断要求,克服了核素显像自身的部分缺陷,具有高效、简便、节约的优势,临床指导价值显著.     

体内外两种方法标记不同~(99m)Tc-右旋糖酐用于淋巴闪烁显像的评价

本文从体内外比较两种~(99m)Tc标记右旋糖酐的方法,并对五种不同分子量和电荷的~(99m)Tc右旋糖酐用四种方法进行质控评价.最后为了和其他放射性胶体淋巴显像剂比较,用动物实验评价了各种不同~(99m)Tc标记的右旋糖酐.五种右旋糖酐(D_(70)、D_(90)、D_(500)、D_(DEAE)和D硫酸盐)的前三种用Henze和Ercan两种方法标记,后两种用Ercan方法标记.Henze方法是将100mg右旋糖酐溶于1mL等渗盐水中,用氩气脱氧净化一小时,加入溶于5μL浓盐酸的0.15mg SnCl_2,经0.22μm无菌微孔滤器滤入小瓶,同时加入约0.1mL     

用~(99m)锝-过锝酸盐在pH7.4环境中标记人血清蛋白的快速化学方法

早在1977年就已研究成功了在生理pH条件下,用~(99m)锝-过锝酸盐标记纤维蛋白原,血清蛋白和免疫γ球蛋白的电解法。这种技术主要是减少了标记期间发生的蛋白质变性的问题。进一步的研究表明,目前这种在相同条件下用氯化亚锡(SnCl_2·2H_2O)化学法也可以制备出同样的复合物。其标记率和重复性均较满意。     

大鼠间充质干细胞的体外分离培养及CFSE标记

目的 探讨体外分离、培养及荧光染料CFSE标记大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法.方法 Wistar大鼠10只.用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定.荧光染料CFSE标记MSCs,荧光显微镜检测标记率,CCK-8法检测标记细胞的增殖能力.结果 原代MSCs 72h贴壁,呈梭形,集落样生长;传代后,细胞变为形态均一,排列有序的成纤维细胞样.CFSE标记当天,荧光显微镜下大鼠MSCs呈明亮的绿色荧光,标记率达100%,随着培养时间延长,荧光强度逐渐减弱,标记率随之下降,标记4周后,标记率下降至78%;标记细胞的增殖能力与未标记细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利用密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;CFSE短期标记MSCs效率很高,且标记细胞的增殖能力不受影响,但荧光强度及标记率随着时间延长而下降.     

诱导后大鼠胰岛素分泌细胞超顺磁化氧化铁颗粒-多聚左旋赖氨酸体外标记后生物活性研究

目的 比较超顺磁化氧化铁颗粒-多聚左旋赖氨酸(SPIO-PLL)标记与未标记诱导后大鼠胰岛素分泌细胞的生物活性,探讨两者MRI成像表现.方法 分离培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSC),经二期方案诱导成胰岛素分泌细胞,SPIO-PLL标记细胞,普鲁士蓝染色显示细胞内铁;放射免疫分析法测定标记及未标记细胞的胰岛素分泌情况;同时采用临床应用型1.5 T MR仪对两组细胞群进行T1WI、T2WI、T2*WI 3个序列成像.结果 普鲁士蓝染色显示标记细胞蓝色铁颗粒位于细胞内.标记后的细胞能分泌胰岛素,经统计学分析分泌量与未标记细胞无显著性差异.标记后的细胞在以T2*WI序列信号降低最明显,信号强度变化率最大.结论 SPIO-PLL可以有效标记诱导后大鼠胰岛素分泌细胞,且对其生物学活性无明显影响,临床应用型1.5 T MR仪可对标记细胞群进行体外成像.     

白细胞的标记及其临床应用

深部脓肿的定位诊断是一般医学检测方法难于实现的。通过用核医学方法对作为脓肿的生物学基础的白细胞进行标记示踪,有助于解决上述难题。近十余年来,对白细胞标记方法的探讨和临床应用的研究非常活跃,本文将有关问题的进展情况综述如下。