小鼠局灶性脑缺血再灌注后IL-33及其受体的时程表达

目的检测白细胞介素-33(IL-33)及其膜受体ST2和可溶型受体sST2在小鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时程的表达特征。方法利用线栓法闭塞大脑中动脉(MCAO)30 min诱导建立小鼠可逆性局灶性脑缺血再灌注损伤模型,通过半定量RT-PCR检测脑缺血再灌注后6 h、24 h和3 d缺血脑组织中IL-33及其膜受体ST2、凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3的mRNA表达水平,并通过免疫组织化学染色观察了IL-33在不同缺血脑区(运动皮质、感觉皮质、海马和纹状体)的时程表达情况;ELISA法检测了小鼠MCAO模型再灌注后不同时间点血清中IL-33及其可溶型受体sST2的表达水平。结果 IL-33 mRNA在缺血后6 h和3 d表达减少,但在24 h无明显改变;凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8在缺血后3个时间点均显著增高,且Caspase-3在6 h和3 d的mRNA表达水平较24 h高;ST2 mRNA在缺血后6 h无减少,但在24 h和3 d有明显减少;除了MCAO 24 h组运动皮质和纹状体阳性染色增加外,IL-33阳性细胞数在缺血后不同时程各脑区均有不同程度减少;缺血后外周血中IL-33的表达量无明显升高或降低,而sST2的表达水平在缺血后6 h即已显著升高。结论脑缺血再灌注后IL-33/ST2信号通路被下调,其与sST2表达增多的效应发挥和神经元凋亡有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌后转录因子ATF4的表达变化

目的观察鼠脑缺血再灌注后ATF4mRNA及蛋白的表达变化。方法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,RT-PCR法、免疫组化染色分别测定鼠脑缺血半暗带区再灌注后不同时相ATF4mRNA及蛋白的表达变化。结果模型组ATF4mRNA与蛋白于再灌注后1h表达增加;ATF4mRNA表达于再灌注后6h达高峰,其蛋白表达于再灌注后24h达高峰。结论鼠脑缺血再灌注可诱导ATF4在缺血半暗带区表达,提示ATF4可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

脑缺血再灌注后IL-8与微血管炎症损伤关系的实验研究

目的 探讨白细胞介素-8(IL-8)在大鼠全脑缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)血管内皮细胞损伤过程中的作用。方法 将大鼠随机分为假手术组和脑缺血30min再灌注1、3、6、12、24、48、72 h组，动物模型采用全脑缺血模型三血管阻塞法，用免疫组化法检测脑组织IR不同时间点层粘连蛋白表达以标记锻血管损伤与修复过程，同时用原位杂交方法检测IL-8mRNA的表达变化。结果 IR后1hIL-8mRNA表达出现上调，24h达高峰。层粘连蛋白在假手术组呈强阳性表达，IR后3h表达下降，24～48h表达最低，72h表达开始恢复。结论 IR微血管炎症损伤主要发生在早期，此过程中IL-8mRNA表达上调，说明IL-8参与了脑缺血后微血管炎症损伤过程。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后MDM2的表达

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后(murine double-minute 2,mdm2)mRNA表达的时间分布特征。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,RT-PCR技术检测mdm2 mRNA的表达。结果 Mdm2 mRNA在半暗带区缺血再灌注后6h表达开始增加,12h达高峰,24h开始下降,7d仍有表达。结论脑缺血再灌注后mdm2 mRNA表达增加可能是机体对缺血损伤的保护性反应。     

大鼠短暂脑缺血后海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达的时间规律

目的 探讨大鼠脑缺血-再灌注后脑海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达规律。方法 采用左侧大脑中动脉插入丝线结扎(LMCAO)方法制作大鼠脑缺血-再灌注缺血模型，分别按照30min至7d的不同灌注时间取材，应用原位杂交方法标记各实验组大鼠脑组织海马区c-for mRNA表达数量；应用免疫组化方法标记各实验组大鼠脑组织中海马区FOS阳性神经元数量。结果 c-fos mRNA阳性细胞在MCAO缺血再灌注1h开始表达，2h达高峰，至2d时c-fos mRNA阳性细胞表达基本消失；c-fos免疫活性细胞从2h开始表达，4h达高峰，4d时表达基本消失。脑缺血—再灌注后c-fos mRNA与FOS蛋白在海马区表达具有一定的时间上规律性。结论 本研究证明了大鼠MCAO缺血—再灌注后可诱发FOS蛋白和c-fos mRNA表达增加，且基因和蛋白的表达均具有一定的时间规律性和相关性。     

BDNF及其受体TrkB mRNA在脑缺血后适应大鼠模型中的表达变化

目的检测脑源性性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脑缺血后适应大鼠模型再灌注不同时间窗的表达,探讨BDNF/TrkB在脑缺血后适应中的作用。方法 Wistar大鼠随机分成对照组、缺血-再灌注组(IR)和缺血后适应组(IP),后两组根据再灌注时间的不同各分为6h、12h、24h、48h、72h 5个亚组。线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型。TTC染色测定脑梗死体积,原位杂交法检测BDNF/TrkB mRNA的表达。结果 IP组大鼠梗死体积较IR组明显减小(P0.05)。IP组各时间点BDNF mRNA及TrkB mRNA表达较IR组均明显升高(P0.05)。结论脑缺血后适应能增加脑缺血-再灌注后BDNF及TrkB的表达,减轻脑梗死体积,BDNF/TrkB在脑缺血后适应后脑缺血-再灌注损伤中发挥了重要保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后BDNF mRNA及其蛋白的表达变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白的表达变化.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,用原位杂交法和免疫组化法观察脑缺血后3、6、12h及1、3、7d共6个时间点BDNF mRNA及其蛋白的表达变化.结果 缺血半暗带BDNF mRNA及其蛋白的表达均于缺血再灌注后3h开始明显上升,6h表达继续增强,12h达高峰,3d后表达开始减弱(P＜0.05或0.01),7d后降至基础水平.结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带BDNFmRNA及蛋白表达均明显增加,提示其可能参与了脑缺血后神经保护.     

大鼠脑缺血再灌注后Nogo-A及其受体mRNA和蛋白表达的变化

目的探讨脑缺血再灌注后大鼠缺血中心区及周围区大脑皮质髓鞘相关的抑制分子Nogo-A及其受体NgR的mRNA和蛋白表达的变化规律及意义。方法采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,分为假手术对照组、缺血2h再灌注6h、12h、24h、48h、72h、7d和14d组．通过HE染色进行病理观察,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测mRNA,免疫组织化学的方法检测蛋白表达,观察脑缺血再灌注后缺血中心区及周围区大脑皮质Nogo-A及其受体NgR的变化。结果Nogo-A mRNA及蛋白表达在缺血中心区6h即有下降(与对照组相比,P＜0．05),并随再灌注时间延长表达逐渐减少,24h降低最为明显并持续至14d；而缺血周边区,再灌注48h前无显著性变化．72h表达增加(与对照组相比,P＜0．05),7d增加更为显著,14d降至正常。NgR mRNA及蛋白表达在缺血中心区再灌注6h后开始下降(与对照组相比,P＜0．05),48h降低最为明显；而缺血周围区NgR mRNA及蛋白表达在各个时间点无显著变化(P＞0．05)。结论脑缺血后灶周Nogo-A mRNA及蛋白表达增加持续至再灌注后7d以上,针对其表达的规律进行干预可能成为脑梗死后改善轴突生长的有效措施；灶周NgR的表达无显著变化,显示Nogo-A的作用尚有其他受体介导。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2蛋白在大脑皮质的表达

目的观察bcl-2蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注（FCIR）后表达的变化。方法大脑中动脉内线栓法（MCAO）建立缺血再灌注（IR）模型，用免疫组化（SP）法观察bcl-2蛋白不同时间的表达。既染色观察各个时间点细胞形态学变化。结果脑缺血2h再灌注2h bcl-2表达升高（P〈0．01），IR 6h达到高峰，IR 12h开始下降。结论随着脑缺血再灌注时间延长脑损伤加重，bcl-2蛋白表达减少，bcl-2蛋白表达增加对细胞存亡有重要意义。     

载脂蛋白J在实验性脑缺血再灌注大鼠脑内的表达

目的探索载脂蛋白J(Apo-J)及其mRNA在大鼠脑缺血再灌注模型各脑区的表达情况及其可能的作用机制。方法清洁级Wistar成年大鼠150只,首先分为空白对照组(NC组,10只)、假手术组(SO组,70只)、缺血再灌注组(IR组,70只);后两组再随机分为造模后3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d各7个亚组,每亚组10只。NC组及以上各亚组再各自随机分为RT-PCR组(5只)、免疫组化及TUNEL组(5只)。制作脑缺血再灌注(IR)模型,用Real Time RT-PCR检测IR区及其前后脑区Apo-J mRNA的表达;用免疫组化检测IR组再灌注周边区及SO组、NC组与之对应的相同区域Apo-J的表达,并用TUNEL法检测前述免疫组化检测区的细胞凋亡情况。结果Apo-J mRNA在IR周边区表达增加,各时点中以IR 1d亚组最高(P<0.01),各亚组均显著高于相同时点的SO组、NC组(P<0.01);并且与再灌注前区、后区比较,均显著增加(P<0.01)。Apo-J在IR组再灌注周边区的表达增加,以1d亚组最高(P<0.01),各亚组均显著高于相同时点的SO组、NC组(P<0.01)。TUNEL显示了...     

Temporal profile and cellular localization of interleukin-6 protein after focal cerebral ischemia in rats.

Although interleukin-6 (IL-6) has various neuroprotective effects against cerebral ischemia, the topographic distribution and cellular source of IL-6 after cerebral ischemia remain unclear. In the current study, the localization of IL-6 protein was immunohistochemically examined in rats after 3.5, 12, 24, and 48 hours of reperfusion after 1.5 hours of middle cerebral artery occlusion. Middle cerebral artery occlusion was induced by the intraluminal suture method. The specificity of the anti-IL-6 antibody used in the current study was confirmed by Western blot analysis and an immunoabsorption test. To identify the cellular source, lectin histochemical study and immunohistochemical study with microtubule-associated protein-2, ED1, and glial fibrillary acidic protein also were carried out. The sham group did not show any clear IL-6 immunoreactivity. After 3.5 hours of reperfusion, IL-6 immunoreactivity was first detected on the reperfused side, and it was upregulated, especially in the periinfarct region, after 24 hours of reperfusion. Also, IL-6 was expressed after 3.5 hours of reperfusion in the contralateral cerebral cortex and bilateral hippocampi. Double staining showed that the cells containing IL-6 were neurons and round-type microglia, not astrocytes. The current findings suggest that IL-6 expression in ischemically threatened neurons and reactive microglia is closely associated with brain tissue neuroprotective mechanisms against cerebral ischemia.     

降纤酶对大鼠局灶脑缺血／再灌后caspase—3 mRNA表达和细胞凋亡的影响

目的:通过观察降纤酶对大鼠脑缺血损伤后半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和细胞凋亡的影响,研究其对脑保护机制。方法:采用大鼠线栓法栓塞一侧大脑中动脉(MCAO)制作局灶脑缺血/再灌注模型,健康雄性Wistar大鼠144只,分为生理盐水组和降纤酶两组,用原位杂交和原位末端标记(TUNEL)方法,观察缺血0、1、3、6和24 h;缺血3 h再灌注3、6和24 h;缺血 6 h再灌注3、6和 24 h的caspase-3 mRNA的表达和 TUNEL染色阳性细胞数。结果:降纤酶保护组caspase-3 mRNA的表达和TUNEL染色阳性细胞数明显少于生理盐水组。结论:降纤酶可抑制大鼠脑缺血/再灌注后caspase-3 mRNA的表达和细胞凋亡。     

Cyclophilin C-associated protein and cyclophilin C mRNA are upregulated in penumbral neurons and microglia after focal cerebral ischemia.

Immunophilin ligands, such as cyclosporin A and FK506, have neuroprotective effects in experimental stroke models, although the precise mechanism is unclear. Cyclophilin C-associated protein (CyCAP) is a natural cellular ligand for the immunophilin, cyclophilin C, and has a protective effect against endotoxins by downmodulating the proinflammatory response. Expressions of CyCAP and cyclophilin C mRNA in a rat middle cerebral artery (MCA) occlusion ischemia model were investigated by Northern blotting and in situ hybridization. Both CyCAP and cyclophilin C mRNAs were ubiquitously distributed in the neurons of the normal brain. Expression increased in neurons of the periinfarct zone up to 7 days after MCA occlusion. The neuronal distribution was confirmed by counterimmunostaining of NeuN. Both mRNAs were predominantly expressed in microglia of the ischemic core at 7 days, confirmed by immunostaining with the microglial marker, ED1. The quantification of CyCAP and cyclophilin C mRNAs at 7 days by Northern blot analysis showed the 8.5-fold increase (P<0.005, n=6) and 6.8-fold increase (P<0.005, n=6), respectively, in ischemic core compared with control. The coincidence of CyCAP and cyclophilin C expression in neurons and microglia suggests distinct roles in each cellular population. In particular, the early increase in penumbral neurons might be related to protection in periinfarct neurons.     

人工合成E-选择素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：探讨人工合成E-选择素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法：雄性SD大鼠90只，随机分为3组：①假手术组；②缺血再灌注组；③人工合成B选择素治疗组（E-选择素治疗组）。大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中B选择素治疗组建立模型前5min从股静脉注入人工合成E-选择素10mg·kg^-1。在不同时间点（缺血再灌注后2、6、12、24、48和72h）用ELISA法测定血浆IL-1β、TNF-α含量。分别在光镜和电镜下观察大鼠脑缺血再灌注区的病理形态改变。结果：缺血再灌注组与假手术组相比，血浆IL-1β、TNF-α含量明显增加（P〈0．05），E-选择素治疗组血浆IL-1β、TNF-α水平均降低（P〈0．05）。光镜和电镜下观察见缺血再灌注组额顶叶皮质和基底节区神经细胞呈缺血性改变，应用人工合成E-选择素后上述区域缺血性改变可明显减轻。结论：应用人工合成E-选择素能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后炎症细胞因子IL-1β和TNF-α的表达，减轻神经细胞缺血性改变，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

敲除let-7a减轻脑缺血再灌注后炎症反应和神经损伤

目的研究微小RNA let-7a在脑缺血再灌注后神经损伤中的作用及机制。方法将大鼠分为假手术组、对照组、anti-let-7a组和GFP组,每组各12只大鼠,假手术组大鼠为假手术组。对照组、anti-let-7a组和GFP组分别经尾静脉给予生理盐水、表达anti-let-7a的AAV-9质粒或者对照空质粒实验,然后通过线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型。模型建立24 h后,TTC法检测梗死体积,tunel法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3表达,ELISA和qRT-PCR检测脑组织中TNF-α和IL-6的表达。并通过Western blot、qRT-PCR和荧光报告基因验证let-7a对MKP1表达的调控。结果 anti-let-7a组大鼠脑梗死体积明显小于GFP组和对照组,脑组织内凋亡细胞数、caspase-3、TNF-α和IL-6的表达明显低于GFP组和对照组。let-7a可与MKP1 mRNA 3’UTR端结合,下调MKP1在PC12细胞中的蛋白表达。结论敲除let-7a可通过调控MKP1表达,抑制MAPK信号通路的激活从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应和细胞凋亡发挥神经保护作用。