灵芝多糖对小鼠M1巨噬细胞活性的研究

目的研究灵芝多糖对小鼠M1巨噬细胞活化及对T细胞增殖的影响。方法吉姆沙染色巨噬细胞后,显微镜观察巨噬细胞吞噬现象;ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-10、IL-12和TNF的水平;MTT法检测M1巨噬细胞诱导T细胞的增殖作用。结果灵芝多糖能促进小鼠M1巨噬细胞对金色葡萄球菌的吞噬作用;体外实验显示,100μg/ml灵芝多糖可以诱导小鼠巨噬细胞分泌IL-10和TNF-α;灵芝多糖介导的巨噬细胞和T细胞的联合培养与脾脏细胞混合培养有显著性差别。结论灵芝多糖能诱导小鼠巨噬细胞活化,产生M1型细胞因子,介导T细胞活化增殖。     

香菇多糖对荷瘤鼠脾细胞因子和NK活性的调节作用

目的 探讨香菇多糖对荷瘤鼠脾细胞因子和NK活性的调节作用.方法 昆明小鼠40只,随机分为4组:正常对照组,肿瘤(S180)模型组,环磷酰胺对照组,香菇多糖实验组.MTT法检测各组小鼠脾脏NK细胞杀伤活性,放免法检测各组小鼠脾组织匀浆TNF-α、IL-2和IL-6含量,ELISA法检测IL-10的含量.结果 香菇多糖能使荷瘤鼠脾组织匀浆中TNF-α、IL-2、IL-6水平升高,使IL-10的水平显著下降,P值均<0.01.荷瘤鼠应用香菇多糖后,脾NK活性恢复接近正常.结论 香菇多糖对脾NK活性具有促进效应,可影响多种脾细胞因子的分泌水平,提高机体免疫功能.     

大青叶水煎剂调节小鼠免疫细胞分泌IL-2、TNF-α的体外研究

目的 :通过研究大青叶 (Folium Statidis,FS)水煎剂体外对 C5 7小鼠免疫细胞分泌 IL-2、TNF-α水平的影响 ,探讨大青叶在细胞因子水平免疫调节作用的机制。方法 :3H-Td R掺入法测定不同浓度大青叶水煎剂对小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的毒性作用 ,MTT方法 (TNF的敏感细胞株 L 92 9,IL-2的依赖株 CTLL-2 )分别检测 IL-2、TNF的生物学活性。结果 :大青叶水煎剂在 0 .4～ 1 .6mg/ml浓度时 ,能促进正常小鼠被 Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL-2 ,但未见到对小鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α有明显作用。结论 :大青叶水煎剂通过促进淋巴细胞 IL-2的分泌 ,可以上调小鼠免疫功能 ,同时对巨噬细胞分泌 TNF致炎效应和免疫病理损伤无明显影响     

雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠免疫功能的影响

目的研究雷公藤甲素对CIA小鼠免疫功能的影响.方法分离和培养原代小鼠脾T、B淋巴细胞测定细胞增殖活性(MTT法);流式细胞技术(FCM)检测外周血中CD4 、CD8 T细胞亚群含量;放射免疫分析法(RIA)测定脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量.结果雷公藤甲素能抑制ConA、LPS诱导刺激的脾T、B淋巴细胞增殖活性;抑制CD3 、CD4 T细胞和降低CD4 /CD8 比值,但对CD8 T细胞有增强作用;降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6水平.结论雷公藤甲素能抑制CIA小鼠的免疫功能,其作用机制可能是通过调节CD4 /CD8 比值平衡失调、抑制T、B细胞的增殖活性和内源性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的水平而实现的.     

蝉翼藤对小鼠脾细胞体外增殖和淋巴因子分泌水平的影响

目的探讨蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和分泌白细胞介素-2(IL-2)与肿瘤坏死因子β(TNF-β)的影响。方法向小鼠脾细胞加入刀豆蛋白(ConA)和蝉翼藤醇提取物进行培养,以MTT法检测淋巴细胞增殖反应,用ELISA法测定IL-2和TNF-β分泌水平。结果蝉翼藤醇提取物能增强ConA诱导的小鼠脾细胞的体外增殖和分泌IL-2和TNF-β的水平。结论蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞活性有增强作用。     

黄芪多糖对内毒素诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β及NO的影响

目的:观察不同浓度黄芪多糖对内毒素(LPS)诱导巨噬细胞产生炎症因子的影响。方法:培养人单核巨噬细胞系U937细胞,体外诱导成熟。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导的U937细胞上清液中炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量。采用Griess试剂检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量。结果:与对照组相比,LPS作用于经PMA诱导成熟的U937细胞后,细胞上清液中TNF-α、IL-1β及NO的含量明显增加(P<0.01)。黄芪多糖作用后,TNF-α、IL-1β及NO的含量明显下降,与LPS组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:黄芪多糖能抑制LPS诱导的巨噬细胞产生TNF-α,IL-1β及NO。     

糖槭多糖对RAW264.7炎症因子分泌的影响

目的:通过考察糖槭叶多糖(ASP-A)和糖槭果多糖(ASP-B)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子的影响,明确其抗炎作用机制。方法:MTT法测定不同浓度两类多糖对RAW264.7细胞的毒性作用,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-1α(TNF-1α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果:糖槭多糖能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放细胞炎症因子NO,TNF-1α,PGE2,IL-1β的分泌量。结论:ASP-A和ASP-B在浓度小于200 mg·L-1对RAW264.7细胞无显著毒性,且可以通过抑制细胞因子NO,TNF-1α,PGE-2,IL-1β的分泌发挥抗炎作用。     

桑柏生发方对毛发再生过程中VEGF等细胞因子的影响

目的:观察桑柏生发方对毛发再生过程中血管内皮生长因子(VEGF)等细胞因子的影响。方法:建立完善的体外培养毛乳头细胞技术体系,采用不同浓度的桑柏生发方提取(水提,醇提)液作用于体外培养的4-6代人毛乳头细胞72 h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定体外培养的人毛乳头细胞增殖活性;ELISA法检测细胞上清液IL-1β、VEGF和TNF-α蛋白含量;反转录(RT)-PCR半定量检测细胞IL-1β、VEGF和TNF-αm RNA表达。结果:与空白对照组比较,桑柏生发方提取液均能显著促进人毛乳头细胞增殖(P0.05),促进细胞VEGF的分泌与表达、抑制分泌IL-1β、促进分泌TNF-α(P0.05)。结论:桑柏生发方提取液有刺激人毛乳头细胞增殖的作用,可能机制为促进细胞因子VEGF、TNF-α分泌,抑制IL-1β的分泌而刺激毛发再生。     

杨梅素对小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖的影响

目的:研究杨梅素体外对小鼠脾脏淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞活化的影响。方法:取健康小鼠,MTT法检测杨梅素对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用;中性红法测腹腔巨噬细胞吞噬活性;Griess试剂法测NO释放量;Elisa法测TNF-α、IL-1β和IL-4的含量。结果:杨梅素对未活化及丝裂原(Con A、LPS)活化的淋巴细胞增殖均有明显促进作用;可剂量依赖性地增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β产生,抑制IL-4的释放。结论:杨梅素可能通过促进小鼠脾淋巴细胞增殖和提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,提高机体免疫功能。     

仙茅多糖对巨噬细胞分泌几种活性因子的影响

目的:观察仙茅多糖对体外培养的巨噬细胞分泌几种活性因子的影响,以期探索仙茅多糖活化巨噬细胞的部分机制。方法:将仙茅多糖体外与RAW264.7巨噬细胞共同培养36h,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-1的含量,Griess比色法检测培养上清中NO的含量。结果:与空白对照组比较,仙茅多糖高、中剂量组TNF-α、IL-1和NO等活性因子的水平明显升高(P0.05或P0.01),且与阳性对照组的调节趋势相似。结论:仙茅多糖刺激巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1和NO等活性因子可能是其活化巨噬细胞的重要机制。     

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用

目的:观察乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(tyPe Ⅱ collagen,CⅡ)对大鼠佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)滑膜细胞因子的作用.方法:限制性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,SDS-PAGE凝胶电泳法和紫外分光光度计法鉴定;采用完全弗氏佐剂(complete Freud′s adjuvant,CFA)足垫皮下注射诱导AA大鼠模型;收集滑膜细胞上清液,L929细胞毒性法检测滑膜细胞上清液中TNF-α生物活性,MTT法检测滑膜细胞上清液中IL-1β生物活性;ELISA法检测滑膜细胞上清液细胞因子水平.结果:提取的CⅡ分子量约为118kD～120 kD,紫外光谱吸收仪测定提取的CⅡ吸收峰为230nm,均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;乌梢蛇CⅡ各剂量组体外对滑膜细胞上清液TNF-α和IL-1β活性没有直接作用;乌梢蛇CⅡ中剂量组可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结共培体系上清液TNF-α和IL-1β活性(P＜0.01),乌梢蛇CⅡ低、高剂量可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结(PP)共培体系上清液IL-1β活性(P＜0.05);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与模型组比较,TNF-α活性下降(P＜0.05);中剂量组与模型组比较,IL-1β活性下降(P＜0.05);模型组与空白对照组比较,滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平显著升高(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与模型组比较,均能抑制滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能显著抑制滑膜上清液IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量能显著升高滑膜上清液TGF-β(P＜0.01);结论:乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子无直接作用,灌服乌梢蛇CⅡ可以抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性.     

天麻素对同型半胱氨酸诱导的细胞因子表达的影响

目的：研究天麻素对同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响,并对其结果与银杏叶提取物EGb761进行比较。方法：将体外培养的小鼠小胶质瘤细胞（BV-2细胞）分成空白对照组、同型半胱氨酸组、EGb761组（100mg／L）和天麻素低、中、高（2．5、5、10mmol／L）剂量组,培养72h。应用RT—qPCR方法评价IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中上述细胞因子的蛋白浓度。结果：与对照组相比,同型半胱氨酸组细胞内IL—18、IL-6和TNF—dmRNA表达和细胞培养上清液中蛋白浓度明显增加;与同型半胱氨酸组相比,EGb761组和天麻素各组细胞因子mRNA表达及培养上清液中蛋白浓度均降低,尤其是高剂量天麻素组与EGb761组作用相当,结果均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：天麻素能抑制同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α表达,在一定浓度条件下其作用不亚于银杏叶提取物。     

华中枸骨黄烷类成分体外抗炎与自由基清除活性

为研究华中枸骨中多个黄烷类成分(1～6)体外抗炎与自由基清除活性,并初步分析其构效关系.采用脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型,MTT法测定细胞毒性作用,Griess法测定NO生成量,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α,IL-1β,IL-6,PGE2的含量;体外测定清除DPPH自由基,超氧阴离子自由基和羟自由基活性.结果表明黄烷1,3,4,6体外显示很强的抗炎活性,能显著抑制NO,TNF-α,IL-1ββ和IL-6的分泌,化合物1的抑制作用最强,黄烷2和5显示相对较弱的抑制活性,体外自由基清除活性顺序与抗炎活性相似.因此,黄烷1,3,4,6是华中枸骨抗炎和自由基清除活性的活性成分,构效关系初步分析表明4'-羟基为黄烷类化合物显示抗炎和自由基清除活性的主要结构部位.     

当归多糖组分促进淋巴细胞增殖及对IL-2和IFN-γ的诱生作用

目的:观察当归多糖及其3个组分对淋巴细胞增殖和细胞因子IL-2、IFN-γ的影响.方法:机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液;MTT法检测细胞增殖;酶联免疫法测定培养上清液中IL-2和IFN-γ的浓度.结果:当归多糖及其3个组分在30～100 μg/ml剂量范围内,能显著促进脾细胞的增殖;其中组分AP-3能够显著促进巨噬细胞、混合淋巴细胞的增殖反应,剂量依赖性地增加细胞上清液中IL-2和IFN-γ的浓度.结论:当归多糖能够活化巨噬细胞和T细胞,还可以通过细胞因子IL-2、IFN￣γ发挥免疫调节作用.     

亮菌多糖IPS-B2对小鼠腹腔巨噬细胞活性及其相关基因转录的影响

目的：观察亮菌多糖IPS-B2对巨噬细胞分泌细胞因子、一氧化氮(NO)生成以及巨噬细胞中白介素-1β(IL-1β)，白介素-6(IL-6)，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NO合成关键酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录的影响。方法：采用ELISA和Griess法检测IPS-B2对小鼠腹腔巨噬细胞生成细胞因子IL-1β，IL-6，TNF-α和细胞毒效应分子NO的影响；采用SYBR Green Ⅰ指示的Real-time RT-PCR技术研究IPS-B2对小鼠腹腔巨噬细胞中IL-1β，IL-6，TNF-α和NO合成关键酶iNOS基因在mRNA转录水平上的作用。结果：IPS-B2能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液中IL-1β，IL-6，TNF-α和NO的含量，增强IL-1β，IL-6，TNF-α和NO合成关键酶iNOS基因的转录水平。结论：IPS-B2可能是通过提高巨噬细胞分泌生物活性物质，并促进此类生物活性物质的基因转录，从而实现其抗肿瘤的重要作用。     

大黄牡丹汤含药血清对巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的研究大黄牡丹汤临床治疗炎症性疾病的部分机制。方法常规制备大黄牡丹汤水煎剂,分大、中、小剂量灌胃干预小鼠并制备含药血清,在96孔板中将含药血清与小鼠腹腔巨噬细胞共孵,收集培养上清,采用Griess比色法检测巨噬细胞NO分泌量、ELISA法检测巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌量。结果与正常血清对照组比较,大黄牡丹汤含药血清能剂量依赖性地促进正常巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β和IL-6(P0.01);能抑制LPS活化的巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β(P0.05或P0.01),但对LPS活化的巨噬细胞分泌IL-6无显著影响(P0.05)。结论大黄牡丹汤对活化前后的巨噬细胞分泌炎症因子的干预作用,可能是该方调控炎症反应的主要机制之一。     

重楼总皂苷对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及IL-1β的影响

目的:探讨重楼总皂苷对细菌内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)分泌TNF-α、IL-1β的影响.方法:分离并纯化大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ),与重楼总皂苷共同孵育,2小时后予LPS(100ng/ml)诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β,以ELISA酶联免疫吸附测定法检测上清液中TNF-α、IL-1β浓度.结果:重楼总皂苷对LPS诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β具有显著的抑制作用(P＜0.01).结论:重楼总皂苷可以抑制腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β的活性.     

香菇多糖对部分肝切除老年小鼠术后炎症反应及认知功能的影响

目的观察香菇多糖对部分肝切除老年小鼠术后炎症反应及认知功能的影响。方法建立老年小鼠肝部分切除术模型,采用Morris水迷宫测试小鼠的认知功能,ELISA法检测外周血中炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,Western blot技术检测海马组织中TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白的表达。结果术后手术组小鼠潜伏期显著性延长(P0.01),穿台次数明显减少(P0.01),香菇多糖明显抑制肝切除术诱导的小鼠术后潜伏期延长(P0.05)和穿台次数减少(P0.05)。术后外周血和海马组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达均明显升高,香菇多糖能够明显降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,差异具有统计学意义。结论香菇多糖能够有效改善部分肝切除老年小鼠术后认知功能障碍,其机制与抑制外周血和海马组织中炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放有关。     

藏药忍冬果对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子的影响

目的:研究藏药忍冬果水提物(FLM)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子的影响。方法:运用吞噬中性红试验观察FLM对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,用小鼠腹腔巨噬细胞分泌物对小鼠胸腺细胞增殖及对L929细胞杀伤作用的影响分别测定IL-1及TNF-α的活性,用RT-PCR技术观察药物对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA和IFN-γmRNA表达的影响。结果:FLM在1～100μg.mL^-1剂量内对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有明显促进作用,同时能诱导巨噬细胞分泌IL-1及TNF-α,并促进细胞因子TNF-αmRNA和IFN-γmRNA的表达。结论:FLM对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子都有促进作用。     

喜炎平注射液对巨噬细胞分泌炎性因子的影响

目的：研究喜炎平注射液对LPS诱导的小鼠单核巨噬细释放炎性因子的抑制作用。方法：用LPS刺激体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264．7释放TNF—α、IL-6、NO等前炎性因子，检测不同浓度的药物对巨噬细胞释放以上炎性细胞因子的抑制作用。通过ELISA的方法检测TNF—α、IL-6的含量，采用Griess法检测培养液上清中NO的含量，以MTT法评价细胞毒性。结果：喜炎平注射液在3—200μg／ml的浓度范围内可明显抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264．7释放炎性因子TNF—α、IL-6及NO，并呈现良好的剂量依赖关系。结论：喜炎平能明显抑制巨噬细胞释放炎性细胞因子TNF—α、IL-6和NO。