UVB:辐射对人角质形成细胞HaCaT的DNA损伤及其机制

目的研究不同剂量UVB辐射对人角质形成细胞HaCaT DNA损伤的影响及机制。方法采用紫外辐照装置照射人角质形成细胞Ha Ca T建立急性紫外辐射细胞模型;MTT法检测不同剂量紫外辐射对细胞存活的影响;免疫荧光和流式细胞术分别检测细胞核内磷酸化γH2AX焦点形成及蛋白表达水平;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测不同剂量不同时间照射后早期细胞凋亡百分数;免疫印迹法分别检测Caspase-3活化水平。结果 UVB辐射可抑制HaCaT细胞的存活,有一定的量效关系;相对较大剂量的UVB辐射可观察到明显的焦点形成;UVB照射后各剂量点磷酸化γH2AX的表达均明显高于未照射的对照组;UVB辐射可通过Caspase-3活化诱导细胞发生早期凋亡,照射后20 h,早期凋亡细胞百分数明显增加,特别是在UVB相对较大剂量范围内更明显,并有随照射剂量增高而增加的趋势。结论 UVB辐射可通过诱导DNA双链断裂抑制人HaCaT细胞存活,并通过激活Caspase-3而诱导细胞凋亡,细胞凋亡延迟,可能导致细胞更易于发生突变进而形成皮肤肿瘤。     

低剂量照射诱导人淋巴细胞53BP1焦点形成的剂量-效应关系研究

目的:探讨低剂量60Coγ射线照射诱导人永生化淋巴细胞AHH-1中P53结合蛋白1（53BP1）焦点水平与照射剂量之间的关系。方法:用⁶⁰Coγ射线照射AHH-1细胞,照射剂量分别为0 m Gy、10 m Gy、25 m Gy、50 m Gy、100和200 m Gy,吸收剂量率为20 m Gy/min,37℃修复30 min后进行免疫荧光染色,利用激光共聚焦扫描显微镜分析细胞中53BP1焦点形成情况。结果:在剂量为0²00 mG y的⁶⁰Coγ射线照射30 min后,AHH-1细胞中53BP1焦点在每个细胞中的数目为0⁴个,均符合泊松分布。从50 m Gy照射剂量开始53BP1焦点水平显著性增加,且焦点水平与照射剂量具有剂量-效应关系,剂量-效应曲线为y=(0.03×10^-2)x+2.32×10^-2（R²=0.9236,P<0.01）。结论:在低剂量电离辐射作用下,53BP1焦点水平具有较好的剂量-效应关系。     

60Co γ-射线体外诱导人外周血淋巴细胞XPC基因表达的实验研究

目的研究核苷酸切除修复(NER)XPC基因在60Coγ-射线照射致人外周血淋巴细胞损伤中的表达变化规律,探讨XPC作为新的电离辐射生物剂量计的可行性。方法不同剂量(0~8 Gy)60Coγ-射线照射后,采用实时定量荧光PCR法,检测不同剂量及5 Gy60Coγ-射线照射后不同时间外周血淋巴细胞XPC基因表达水平。结果随着照射剂量的增加,外周血淋巴细胞中XPC表达明显增高;照射后4 h XPC表达即开始增高,24 h达峰值,以后逐渐下降,照射后72 h仍高于0 h组。结论60Coγ-射线可诱导人外周血淋巴细胞XPC的表达增强,并具有剂量-效应关系及时间规律,有望成为新的辐射生物剂量计。 更多还原     

60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响

目的研究60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和照射组,照射组细胞分别用60Co γ射线5Gy、10Gy、20Gy单剂量照射心肌细胞,照射后48h检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,流式细胞仪检测60Coγ射线照射对体外培养的心肌细胞凋亡的影响,照射后48h及120h用结晶紫试验及MTT试验检测照射后心肌细胞活性变化,结果照射组LDH浓度明显高于未照射组,且随照射剂量增加而升高。照射后48h凋亡细胞较对照组升高,凋亡细胞比例与照射剂量呈正相关。结晶紫试验及MTT试验均提示照射后48h照射组心肌细胞活细胞活性与对照组无明显差异,照射后120h照射组活细胞活性明显低于对照组,且与照射剂量相关。结论60Co γ射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞,降低体外培养的心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡。     

辐射对沉默ATRX的H460细胞增殖以及DNA损伤修复的影响

目的 探讨辐射对沉默ATRX的肺癌H460细胞增殖和DNA损伤修复的影响及二者的关系。方法 靶向ATRX的3个慢病毒载体转染293T细胞后,慢病毒感染H460细胞,获得ATRX低/无表达的细胞株shATRX1-H460、shATRX2-H460和shATRX3-H460,并以shControl-H460作为对照,利用Western blot检测沉默效率。分别以克隆形成实验检测细胞增殖,免疫荧光技术检测γH2AX和Rad51焦点数,同时以Western blot检测PARP1、γH2AX和Rad51蛋白的表达。结果 shControl-H460细胞中可见ATRX表达,而shATRX1-H460、shATRX2-H460和shATRX3-H460细胞中ATRX表达均出现不同程度的降低。克隆形成实验显示,shATRX2-H460和shATRX3-H460细胞的存活分数（survival fraction,SF）均较shControl-H460细胞降低。shControl-H460和shATRX3-H460细胞经4 Gy照射后1 h,γH2AX焦点最多,而3 h时Rad51焦点最多,而后均降低,与shControl-H460细胞比较,在1和6 h时shATRX3-H460细胞γH2AX焦点,以及1、3和6 h时Rad51焦点显著增加（P<0.05,P<0.001）。而且shATRX3-H460细胞中PARP1、γH2AX和Rad51蛋白在3和6 h时均较shControl-H460细胞表达增加。结论 成功地获得靶向沉默ATRX的细胞模型,辐射后细胞增殖能力降低,可能与DNA损伤修复能力降低有关。     

60Coγ射线对小鼠组织细胞氧化损伤的研究

目的：研究^60Coγ射线对小鼠组织细胞DNA的氧化损伤及其对组织抗氧化系统的影响。方法：小鼠接受^60Coγ射线全身一次性照射（吸收剂量分别为7Gy、10Gy、15Gy）后，用彗星试验对其肝、脾、肾及血液组织细胞DNA的完整性进行检测，并用比色法对红细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性，全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及肝匀浆丙二醛（MDA）含量进行测定。结果：各照射剂量组小鼠组织细胞拖尾率和拖尾细胞尾长比对照组显著增加（P〈0．05），并呈现良好的剂量反应关系。7Gy剂量组小鼠红细胞SOD活性及全血GSH-Px活性明显低于对照组（P〈0．05），而肝匀浆MDA含量则明显高于对照组（P〈0．05）。结论：^60Coγ射线照射可造成小鼠多组织细胞DNA完整性的损伤，破坏组织抗氧化系统并引起脂质过氧化水平增高。     

60 Co γ射线照射离体人血建立染色体畸变的剂量-效应曲线

目的建立^60Coγ射线照射离体人血诱发染色体畸变的剂量一效应曲线。方法采集健康成人外周静脉血，^60Coγ射线照射，照射吸收剂量为0～5．0Gy，剂量率为0．38Gy／min。采用开始加入秋水仙碱法进行细胞培养48h。制片后观察淋巴细胞中染色体型非稳定性畸变，包括双着丝粒体、着丝粒环、无着丝粒断片等。用双着丝粒体加着丝粒环对剂量进行曲线拟合。结果离体外周血经^60Coγ射线照射后，在0～5.0Gy范围内“双 环”率与剂量在不同剂量范围建立的回归方程为：0～0．5Gy，y=0.00217 0.08283D^2；0～1．0Gy，y=0.00146 0．09310D^2；0～5，0Gy，y=0．04851D^2.18601；0.5-5．0Gy，y=0.04848D^2.18645。结论成功建立了^60Coγ射线照射离体人外周血诱发染色体畸变剂量效应曲线。     

二甲基甲酰胺致人肝细胞DNA的损伤效应

目的 探讨不同染毒剂量二甲基甲酰胺(DMF)在不同染毒时间下对人正常离体肝细胞DNA损伤的影响.方法 肝细胞染毒分别以PBS阴性对照组、1.56、6.25、25.00、100.00 mmol/L的DMF和100μmol/L的H2O2,染毒时间为0.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h,用γH2AX免疫荧光法观察肝细胞DNA的损伤情况.结果 不同剂量的DMF和H2O2诱导形成γH2AX焦点的细胞数量多于PBS阴性组,差异有统计学意义(P＜0.01),并且随着DMF染毒剂量的增加,形成γH2AX焦点细胞数有增多趋势;在不同染毒时间处理后,γH2AX焦点细胞数的形成除3.0 h组和0.5 h组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),余处理时间组与0.5 h比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),并且形成γH2AX焦点细胞数有减少趋势.结论 不同剂量DMF可引起DNA的损伤,并且损伤程度与剂量呈正相关,与染毒时间呈负相关,γH2AX可作为检测细胞DNA损伤程度的良好指标.     

γ射线诱发培养淋巴细胞TCR基因突变的剂量-效应关系

目的　探讨γ射线诱发培养淋巴细胞T细胞受体 (TCR)基因突变的剂量 效应关系。方法　以不同剂量 (0～ 4 0Gy)的γ射线照射新鲜分离的健康成人外周血淋巴细胞 ,植物血凝素脉冲式刺激 2h后 ,用白细胞介素- 2培养 7d ,用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术检测TCR基因突变频率 (TCRMF)。应用SAS统计软件包编写的程序进行辐射剂量 效应曲线的拟合和筛选。结果　培养 7d后 ,TCRMF (10 -4)随照射剂量D (Gy)的增加而增高 ,最佳拟合曲线为二次多项式模型 ,其方程式可描述为 :TCRMF =2 . 74+ 6. 0 5D + 7 60D2 (F =3 62. 3 7 16,P <0 . 0 1,经校正的R2 =0 . 9999)。结论　TCR基因突变作为一种有潜力的生物剂量计可能用于近期辐射照射生物剂量的估算。     

富勒醇对小鼠γ射线辐射损伤的防护作用

目的研究C60衍生物富勒醇对小鼠~(60)Coγ射线辐射损伤的防护效果。方法ICR小鼠于照射前5d至照后7d连续腹腔注射富勒醇,~(60)Coγ射线全身均匀照射,照射剂量分别为5Gy和8Gy,照射剂量率1.0Gy/min,测定5Gyγ射线照射下小鼠体重变化,照后7d胸腺、脾脏指数外周血白细胞;8Gyγ射线照射下30d存活率和平均生存时间。结果富勒醇能减轻~(60)Coγ射线辐射所引起的外周血白细胞、血小板降低,胸腺和脾脏萎缩;提高小鼠生存率,延长存活时间。结论富勒醇对~(60)Coγ射线照射的小鼠具有一定的防护作用。     

X、γ射线在洋葱根尖细胞中的微核诱发率

目的　了解X、γ射线作为评价辐射相对生物效应的参考辐射的重要性。方法　用6 0 Coγ射线以及X射线照射洋葱种苗后 ,观察根尖细胞中的微核诱发率的差异。结果　6 0 Coγ射线的微核诱发率为 (3 .41± 0 .3 0 ) %·Gy- 1(±标准差 ) ,X射线的微核诱发率为 (5 .2 3± 0 .3 8) %·Gy- 1 。以6 0 Coγ射线和X射线作为参考辐射时 ,某反应堆中子照射洋葱种苗后在根尖细胞中诱发微核的相对生物效应值分别为RBEn ,γ=3 3 .7± 8.4和RBEn ,X=2 2 .0± 5 .4。结论　不同的参考辐射 ,对同一辐射来说 ,其相对生物效应值有十分显著的差异 ,论及辐射的相对生物效应时必须指明参考辐射。     

不同剂量γ射线对肾小管上皮细胞增殖与功能的影响

目的研究受不同剂量γ射线照射后,原代培养肾小管上皮细胞增殖和功能的改变情况。方法机械过滤加酶消化法分离培养肾小管上皮细胞,以01、、51、0 Gyγ射线照射细胞,MTT法测定细胞的增殖,RT-PCR法分析基因mRNA表达,Western Blot法检测相关蛋白的表达。结果肾小管上皮细胞受1 Gyγ射线照射后对数生长期延迟,受5 Gy1、0 Gyγ射线照射后不出现对数生长期。受1 Gy、5 Gy1、0 Gyγ射线照射的肾小管上皮细胞Na ,K -ATP酶、1α羟化酶、24羟化酶mRNA表达明显降低,TGF-βmRNA和蛋白质表达明显升高。受1Gy射线照射后OPN蛋白量提高,而受5 Gy、10 Gy照射后OPN蛋白量降低。结论不同剂量γ射线可明显抑制肾小管上皮细胞的增殖,促使肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化,并通过增加TGF-β的分泌促进纤维蛋白等基质蛋白在细胞外的堆积,这种作用存在明显的剂量依赖关系。     

应用γH_2AX检测甲醛致DNA损伤的研究

目的探讨磷酸化的H2AX(即γH2AX)能否灵敏、快速、简便的检测甲醛致DNA损伤。方法用甲醛处理中国仓鼠肺细胞株(V79)肺细胞,应用免疫荧光实验检测γH2AX焦点的形成,并通过单细胞凝胶实验验证DNA损伤程度。结果20μmol/L甲醛处理V79细胞10 min即可诱导γH2AX焦点形成增加,但2 h时才出现彗尾增长。1μmol/L甲醛处理细胞8 h时,γH2AX平均焦点数及焦点细胞率与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),但此浓度在所有时间段都不能导致彗尾增长。结论γH2AX可在早期监测甲醛对DNA的损伤,并能检测到低浓度的甲醛致DNA损伤,因此,其敏感性优于单细胞凝胶实验。     

钷-147内照射诱发红细胞微核的辐射交叉抗性研究

目的：研究低剂量钷－147（^147Pm)内照射能否抵抗相继高剂量^60Coγ射线引起的细胞遗传损伤效应。方法：应用外周血红细胞（RBC）计数，网织红细胞（RC）计数，正常染红细胞（NCE）微核和嗜多染红细胞（PCE）微核检测，观察了低剂量^147Pm内照射诱发小鼠红细胞微核的辐射交叉抗性。结果：剂量为2.0Gy的^60Coγ射线外照可引起明显的外周血红细胞系统损伤，与正常对照组比较，RBC和RC计数显著减少（P＜0．01）；NCE和PCE微核细胞率明显增高（P＜0．01）。然而，预先应用低剂量^147Pm 0.37,3.7,37Bq/g内照射预处理动物，3d后相继给予高剂量^60Coγ射线2.0Gy外照射，RBC和RC计数显著增加，NCE和PCR微核细胞率显著降低，与单纯高剂量^60Coγ射线外照射相比较，差异有显著性或非常显著性（P＜0．05或P＜0．01）；其中某些指标与正常对照组比较，差异无显著性（P＞0．05）。表明预先应用低剂量^147Pmβ射线内照射动物，可使不同成熟期外周血红细胞对相继高剂量^60Coγ射线外照射引起的微核突变有了明显的抵抗力。低剂量^147Pm诱导外周血红细胞系统的辐射抗性具有一定的剂量范围。结论：简便快速并适于进行连续观察的外周血红细胞微核可作为低剂量辐射生物效应的观察指标之一。     

还原型谷胱甘肽对~(60)Coγ射线激活核转录因子-κB影响研究

目的探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对60Coγ射线引起的人肺腺癌A549细胞中p65蛋白表达情况的影响。方法按处理方法不同将人肺腺癌A549细胞分为假照组、单纯照射组、GSH组、GSH+照射组。免疫印迹法检测各组细胞质和细胞核中p65蛋白的表达情况;免疫荧光法检测各组细胞中p65在细胞质和细胞核中的定位变化。结果 60Coγ射线照射后,p65蛋白在细胞核中的表达量随着吸收剂量的增加逐渐增多;GSH+照射组与单纯照射组相比,细胞核中p65的表达明显减少;但p65在细胞总蛋白中的表达没有明显变化。免疫荧光法检测到单纯照射组与假照组比较,细胞核内p65的表达量增多;GSH+照射组细胞核内p65的表达量相对单纯照射组明显减少。结论γ射线照射后人肺腺癌A549细胞核内p65的表达量增多,但GSH可以减少p65在细胞核内的表达,抑制p65的入核。     

低氧条件下γ射线对Hep-2细胞周期、凋亡的影响

目的体外建立不同氧供状态下的细胞模型,探讨不同剂量~(60)Coγ射线对喉鳞癌Hep-2细胞周期及凋亡的影响。方法将体外培养的人喉鳞癌Hep-2细胞分为两组:A组(常氧组)、B组(低氧组),两组细胞分别接受1、3、5、10、20、40(Gy)不同剂量~(60)Coγ射线照射,两组分别设0Gy对照组。流式细胞仪检测HIF-1α蛋白表达、细胞凋亡及细胞周期变化;免疫细胞化学检测各组细胞HIF-1α蛋白表达。结果A组Hep-2细胞在接受1～5Gyγ射线照射后,主要发生了G0/G1期阻滞,在接受10～40Gyγ射线照射后,发生了G2/M期阻滞;B组细胞主要发生了G2/M期阻滞。B组0Gy对照组发生了明显的G0/G1期阻滞;A组Hep-2细胞凋亡曲线成抛物线状,凋亡率呈现明显的剂量依赖性,在5Gy处出现最大值41.56±2.25。B组细胞凋亡率同A组相比总体上呈现明显的下调趋势,但不同剂量的γ射线没有对Hep-2细胞的凋亡率产生明显的影响。结论不同剂量~(60)Coγ射线照射会导致常氧条件下Hep-2细胞发生不同周期阻滞,而不同的周期阻滞会对Hep-2细胞的凋亡产生明显的影响。低氧条件下γ射线照射未能导致Hep-2细胞发生明显的凋亡,可能同Hep-2细胞G2/M期阻滞有关,而HIF-1a蛋白的表达上调可能是Hep-2细胞G2/M期阻滞的原因之一。     

γ射线模拟职业照射对大鼠血细胞影响

目的 探讨γ射线模拟核设施检修职业照射对大鼠血细胞的影响.方法 无特定病原体级健康成年雄性SD大鼠随机分为5个照射剂量组和1个对照组,照射剂量组接受137Cs γ射线小剂量率照射,累积剂量分别为0.05、0.20、0.50、1.00和2.00 Gy;对照组不接受照射.照射结束后第2天和第11天,进行大鼠血液白细胞计数(WBC)及其分类、红细胞计数、血小板计数、血红蛋白(Hb)水平检测.结果 ①γ射线照射累积剂量0.50 Gy以上可以造成WBC在照射结束后第2天暂时降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),照射结束后第11天恢复正常.②0.05～0.50 Gy剂量可导致单核细胞(Mo)比例在照射结束后第11天升高.③1.00 Gy以上剂量可导致Hb水平在照射结束后第11天降低,照射结束后第2天和第11天淋巴细胞比例均降低,Mo比例均升高,此3项指标分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜O.05和P＜0.01).结论 γ射线模拟职业照射对大鼠WBC及其分类有明显影响,1.00 Gy以上剂量可能造成受照大鼠在照射结束一段时间后发生贫血.     

60Coγ射线诱导L02人正常肝细胞COXⅡ基因表达、ATP水平和细胞活力改变

目的 探讨照射剂量和照射时间对电离辐射诱导L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”)的线粒体编码基因细胞色素c氧化酶(COX)Ⅱ基因表达、三磷酸腺苷(ATP)水平和细胞活力变化的影响.方法 采用2×7析因设计方法.0、1、3、5、8、10、15 Gy剂量60Coγ射线分别照射L02细胞24、48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR法检测COXⅡmRNA表达水平,蛋白质印迹法检测COXⅡ蛋白表达水平,ATP发光检测试剂盒和CCK-8试剂盒检测细胞内ATP水平和细胞活力.结果 照射时间与照射剂量对L02细胞的COXⅡmRNA及蛋白表达水平上调、ATP水平升高和细胞活力下降的影响存在交互作用(F值分别为92.43、267.40、6.99、116.11,P＜0.05或P＜0.001).在一定照射剂量范围内,照射后24 h COXⅡ蛋白表达水平、照射后24、48 h ATP水平和细胞活力分别与照射剂量存在剂量-效应关系(P＜0.05或P＜0.01).结论 照射剂量和照射时间的交互作用影响60Coγ照射诱导的L02细胞COXⅡ基因表达和细胞内ATP水平与细胞活力.     

高剂量率60Coγ射线照射离体人血建立染色体畸变的剂量-效应曲线

目的　高剂量率 6 0Coγ射线照射离体人血建立染色体畸变的剂量 -效应曲线。方法　6 0 Coγ射线照射离体人血 ,吸收剂量为 1 0～ 8 0Gy ,剂量率为 3 0Gy/min ,染色体采用微量法 ,培养开始加秋水仙碱 ,主要记录染色体型畸变的非稳定性畸变 ,包括无着丝粒断片、微小体、无着丝粒环、双着丝粒体和着丝粒环 (双 +环 ) ,对实验数据做曲线拟合 ,并检验回归系数的显著性和曲线的拟合度。结果　6 0 Coγ射线照射离体血诱发的“双 +环” ,在 0～8 0Gy范围内 ,呈良好的剂量 -效应关系 ,拟合的最佳回归方程为Y =0 2 69792D + 7 73 0 83× 10 - 2 D2 (R =0 99198)。结论　高剂量率 6 0 Coγ射线照射离体人血 ,采用微量法培养染色体 ,在 0～ 8 0Gy范围内 ,“双 +环”最佳数学模式为Y =bD +cD2 。     

锌对体外培养小鼠骨髓造血细胞辐射防护作用研究

[目的]探讨锌对γ射线诱导的体外培养小鼠骨髓细胞辐射损伤的影响及可能机制。[方法]分离小鼠骨髓细胞并悬浮于RPMI1640培养基中。分别将锌按20、200、400、800μmoL／L终浓度加入细胞培养液中。5Gγ^60Coγ射线照射骨髓细胞后置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，16h后终止培养，分别测定有核细胞数、细胞DNA含量、并采用流式细胞术和彗星试验测定细胞DNA损伤和细胞凋亡率。[结果]5Gγ^60Coγ射线照射体外培养的小鼠骨髓细胞后。骨髓有核细胞数、DNA含量均明显下降；细胞凋亡率和DNA损伤率增加。照射前在培养液中加入一定浓度的锌。细胞DNA损伤程度和凋亡率下降，DNA含量升高，有核细胞数增加，并在200～800μmoL／L的剂量范围内，存在剂量-反应关系。[结论]锌可能通过保护DNA大分子，抑制细胞凋亡而发挥其辐射防护作用。