矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞向成骨细胞样细胞的分化

目的:探讨矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs)向成骨细胞样细胞分化的潜力.方法:矿化液诱导前磨牙HDPSCs 28d,于诱导的第7、28天时,应用酶化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达;第14、21、28天时,应用茜素红染色观察细胞矿化情况;于诱导的第0、3、5、7、14、21、28天时,采用RT-PCR法检测其ALP、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)的基因表达;Western印迹分析、免疫细胞化学染色检测BSP及OCN蛋白的表达.结果:经矿化液诱导后,前磨牙HDPSCs ALP染色阳性,形成钙结节.诱导第3天,细胞ALP mRNA呈高表达;DSPP始终不表达;BSP、OCN mRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致;第5天时OCN染色阳性.结论:前磨牙牙髓干细胞具有向成骨细胞样细胞分化的潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞.     

人恒牙牙髓干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的:研究人恒牙牙髓组织来源的牙髓干细胞在体外分化为成骨细胞的能力,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性.方法:从正畸治疗减数拔除的恒前磨牙中分离牙髓组织,应用酶消化法获得牙髓细胞.单抗Stro-1标记、免疫磁珠阳性分选系统分选获得牙髓干细胞,第3代牙髓干细胞用成骨向诱导培养基向成骨细胞诱导分化.用碱性磷酸酶染色和Vo...     

牙髓干细胞向神经细胞方向的诱导分化实验

目的探讨克隆化培养分离的人牙髓干细胞是否具有向神经细胞方向分化的潜能,并确定其诱导条件。方法克隆化培养的人牙髓干细胞预诱导24 h,然后换含一定浓度二甲基亚砜（DMSO）、丁羟基茴香醚（BHA）、forskolin、β- 巯基乙醇（β-ME）和氢化可的松（hydrocortisone）的联合诱导液连续诱导4 d,对诱导细胞进行形态学观察,神经胶质酸性蛋白（GFAP）、非特异性酯酶（NSE）免疫组化染色和GFAP mRNA RT- PCR检测。同时,以未诱导细胞为对照。结果诱导12 h时细胞形态开始改变,24 h时分化为较为典型的神经细胞样细胞,继续诱导分化细胞数量增多;诱导细胞表达神经元细胞特异性标志NSE和GFAP蛋白;RT- PCR检测诱导细胞表达GFAP mRNA,而未诱导细胞均无上述改变和表达。结论人牙髓干细胞在一定的诱导条件下可横向分化为神经元样细胞。     

牙髓干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展

血管内皮细胞是血管的核心,表达一些特异性标志物如血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、CD31和血浆血管性血友病因子等,具有在基质胶上形成管状结构的特征。牙髓干细胞是具有自我更新能力和多向分化潜能的一类成体间质干细胞,在添加不同成分诱导物的条件培养基中可定向分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞和神经细胞。体外研究发现,在添加血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子成分的低血清培养基培养一段时期后,牙髓干细胞可以表达内皮细胞标志物,同时具有形成血管状结构能力;体内研究发现,牙髓干细胞可促进低血区域组织血管生成和血流灌注,进一步证实牙髓干细胞亦可定向分化为内皮细胞。     

人牙髓干细胞在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的实验研究

目的：探讨矿化液诱导条件下人牙髓干细胞( human dental pulp stem cells,HDPSCs)在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的潜力。方法将HDPSCs接种于钛金属板表面,于第3、7d时观察其增殖状态。将HDPSCs接种于钛金属板表面进行矿化液诱导,于诱导的第0、3、5、7、14、21、28d时,采用RT-PCR检测其牙本质涎磷蛋白( DSPP)、碱性磷酸酶( ALP)、骨涎蛋白( BSP)和骨钙素( OCN)的基因表达。 Western印迹分析、免疫荧光检测BSP及OCN蛋白表达。对照组为矿化液诱导培养皿中的HDPSCs,检测指标、方法基本相同,免疫细胞化学染色检测OCN蛋白表达。结果钛金属板上 HDPSCs增殖迅速,表现出良好的生物相容性。两组细胞均自诱导第3天ALPmRNA呈高表达、DSPP始终不表达。培养皿组BSP、OCNmRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;钛金属组BSP、OCNmRNA表达于第14天出现第一峰值,随后有所下降,28天再次升高。两组BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致,第5天 OCN染色阳性。结论钛金属表面 HDPSCs 经矿化液诱导向成骨细胞样细胞分化。     

矿化液对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的 探讨矿化液对人牙髓干细胞(DPSCs)生长特性的影响.方法 用含一定浓度的β-甘油磷酸钠、抗坏血酸和地塞米松的矿化液诱导人牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学染色、von Kossa染色方法,观察和检测矿化液诱导后细胞形态、超微结构、表型和矿化基质分泌的变化,以未诱导组为对照.结果 矿化液连续培养7d,人DPSCs细胞形态明显改变,呈牙本质样极化细胞表现,另一侧为增大的胞体;超微结构显示,诱导后的细胞体积增大,核浆比例下降,胞浆细胞器丰富;诱导前细胞不表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OC),诱导后均表达;连续培养21d,诱导组细胞形成多个矿化结节.结论 矿化液能诱导人DPSCs向成牙本质细胞样细胞分化并产生矿化基质.本研究从细胞水平上揭示了人DPSCs向成牙本质细胞分化机理,为人DPSCs应用于牙髓损伤的修复再生提供了依据.     

生长因子对牙髓干细胞的矿化作用

健康牙髓中含有的具有多向分化、高效增殖和自我更新潜能的牙髓干细胞,在牙髓损伤后牙本质修复再生和牙/骨组织工程中具有至关重要的作用.本文就牙髓干细胞的矿化潜能、生长因子及其在促牙髓干细胞矿化和作用机制方面的研究进展作一综述.     

TEGDMA reduces mineralization in dental pulp cells

Direct application of dentin bonding agents onto the exposed pulp has been advocated, but in vivo studies indicate a lack of reparative dentin formation. Our objective was to investigate the role of triethylene glycol dimethacrylate (TEGDMA), a commonly used compound in dentin bonding agents, as a potential inhibitor of mineralization. Human pulp cells were exposed to different concentrations of TEGDMA, and expression of the mineralization-related genes collagen I, alkaline phosphatase, bone sialoprotein, osteocalcin, Runx2, and dentin sialophosphoprotein was analyzed. Gene expression studies by real-time polymerase chain-reaction revealed a concentration- and time-dependent decrease of mineralization markers. A subtoxic TEGDMA concentration (0.3 mM) reduced expression levels by 5 to 20% after 4 hrs and by 50% after 12 hrs. Furthermore, alkaline phosphatase activity and calcium deposition were significantly lower in dental pulp cells treated with TEGDMA over 14 days. These findings indicate that even low TEGDMA concentrations might inhibit mineralization induced by dental pulp cells, thus impairing reparative dentin formation after pulp capping with dentin bonding agents.     

大鼠牙髓干细胞与牙乳头间充质细胞成牙能力的比较研究

目的:探讨采用牙髓干细胞替代牙乳头间充质细胞进行牙齿再生研究的可行性。方法:分别分离培养6周龄SD大鼠切牙牙髓干细胞(DPSCs)和出生1d的SD仔鼠切牙牙乳头间充质细胞(DPMCs),对上述2种细胞的表面标记、增殖能力、体外矿化能力以及向成牙本质细胞分化能力进行比较。结果:DPSCs与DPMCs均具有较强的增殖能力和矿化能力,体外诱导均有成牙本质细胞特异性标记物DSPP基因表达,体内移植后均能够形成牙本质样结构。结论:DPSCs是一种较为理想的牙胚间充质细胞的替代细胞,在适宜的诱导环境中能够替代DPMCs进行牙齿的再生研究。