人胰岛素样生长因子Ⅱ反义RNA对肝癌细胞恶性表型的抑制作用

研究人胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）反义ＲＮＡ对肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的抑制效应。方法人ＩＧＦ－ⅡｃＤＮＡ０．１ｋｂ反向插人真核细胞表达载体ｐｃＮＡ３,获得ＩＧＦ－Ⅱ反义ＲＮＡ表达载体ｐＩＧＦ－ⅡＡＳ,将其导人人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１,观察软琼脂培养集落形成的能力。流式细胞仪（ＦＣＭ）测定ｐＩＧＦ－ⅡＡｓ表达ＩＧＦ－Ⅱ反义ＲＮＡ对ＳＭＭＣ-７７２１细胞生长的影响。结果转导人ｐＩＧＦ－ⅡＡｓ的ＳＭＭＣ－７７２１细胞,不能在软琼脂上形成集落,ＦＣＭＭ实导人ＰＩＧＦ－ⅡＡｓ细胞Ｓ期增多,而对照组ＳＭＭＣ－７７２１细胞和带ＤＣＤＮＡ３空载体的ＳＭＭＣ－７７２１细胞则无明显变化．结论ｐＩＧＦ-ⅡＡＳ＆义ＲＮＡ体外可抑制肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的致瘤性。     

转化生长因子β1及p53基因蛋白在非小细胞肺癌中的表达

转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１,ＴＧＦβ１）是一种多功能细胞生长调控因子。ｐ５３基因是一种重要的抑癌基因。对象与方法　我们应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测了我院１９８９～１９９１年手术切除的１２１例非小细胞肺癌中ＴＧＦβ１和Ｐ５３蛋白的表达并探讨两者间的相互关系。术后均随访５年以上（表１）。结果　ＴＧＦβ１在非小细胞肺癌中阳性表达可分为：①间质型：阳性显色位于癌巢周围纤维结缔组织及癌旁纤维间质内;②胞浆型：阳性显色位于癌细胞胞浆内。总阳性表达率为７７－７％（９４…     

HepG2.2.15细胞诱导MT2淋巴细胞凋亡及其意义

观测表达Ｆａｓ抗原（Ｆａｓ）的Ｔ淋巴细胞一感染乙型肝炎病毒的ＭＴｓ细胞对表达Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的实质细胞一ＨｅｐＧ２２．１５细胞的敏感性,了解乙型肝炎病毒感染对淋巴细胞和肝实质细胞交互作用的影响。方法体外培养ＭＴ２细胞,用乙型肝炎病毒诱导表达ＦａｓＬ。将表达ＦａｓＬ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞与其共孵育后,以Ｔｕｎｅｌ法观测ＭＴ２细胞凋亡情况。结果ＭＴ２细胞感染乙型肝炎病毒后可测到Ｆａｓ表达信号。与表达ＦａｓＬ的ＨｅＰＧ２．２．１５细胞共孵育４８～７２小时以后,出现凋亡信号。结论乙型肝炎病毒诱导表达Ｆａｓ的ＭＴｓ细胞与表达ＦａｓＬ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞交互作用后发生凋亡,表明通常在乙型肝炎发病中作为效应细胞的淋巴细胞,亦可成为凋亡靶细胞。     

乙型肝炎病毒x蛋白对肝细胞FasL表达的激活作用

目的探讨ＨＢｘ蛋白对肝细胞Ｆａｓ配基（ＦａｓＬ）表达的调控作用。方法构建ＨＢｘ基因的真核表达载体ｐＣＥＰ４ｘ,电击法转染ＨｅｐＧ２细胞,潮霉素筛选阳性克隆细胞ＨｅＰＧ２Ｘ。用免疫细胞化学染色和免疫蛋白印迹法检测转染ＨＢｘ基因的ＨｅｎＧ２ｘ细胞ＦａｓＬ蛋白的表达。结果逆转录ＰＣＲ祛分析表明,ＨＢｘ基因在转染细胞内可有效转录;ＨｅｐＧ２ｘ细胞出现新的ＦａｓＬ蛋白表达。结论乙肝病毒ｘ蛋白可激活肝细胞表达ＦａｓＬ。     

TGF—β1表达与小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡的关系

本实验通过给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种柯萨奇Ｂ－３ｍ病毒（ＣＶＢ３ｍ）诱发病毒性心肌炎（ＶＭＣ）感染病毒９ｄ后，ＶＭＣ检出率９３．３３％，应用原位末端标记法（Ｔ／ＶＮＥＬ）及免疫组化技术检测发现，７６．６７％感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞，７３．３３％，有ＴＧＦ－β１的表达，二者之间分布区域一致，提示细胞凋亡可能参与ＣＶＢ３ｍ诱导的ＶＭＣ的发生，发展，而ＴＧＦ－β１可能参与ＶＭＣ细胞凋亡的调控。     

含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（SjFABPc）基因DNA重组质粒 …

目的 观察裸ＤＮＡ重组质粒ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ在体外转染ＨｅｐＧ２细胞以及质粒ＤＮＡ免疫鼠肌组织中的表达，为进一步应用该质粒进行ＤＮＡ免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导ＤＮＡ转染法将ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ转染贴壁细胞ＨｅｐＧ２，Ｇ４１８加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定目的基因在ＨｅｐＧ２细胞中的表达，将ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ质粒肌注免疫ＢＡＬＢ     

维甲酸对人肝癌细胞转化生长因子β_1基因及蛋白水平的影响

我们运用逆转录聚合酶链反应方法，以表达比较恒定的管家基因β－ａｃｔｉｎ为内对照，半定量检测全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对肝癌细胞 ＴＧＦβ１ ｍＲＮＡ的变化，并用流式细胞术观察维甲酸（ＲＡ）对肝癌细胞ＴＧＦβ１蛋白表达的影响，以探讨ＲＡ作用的机制。 １．材料与方法：（１）细胞培养及药物配制：传代人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，细胞接种于ＲＰＭＩ—１６４０培养液中，孵箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。接种细胞２．５×１０~５到２５ｍｌ培养瓶，加ＡＴＲＡ（Ｓｉｇｍａ公司）使终浓度为０．５μｇ／ｍｌ，对照加…     

转化生长因子-β1在肝细胞性肝癌中表达增强

目的转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）在细胞生长的负性调节上有重要作用,是肝细胞生长和增殖的强抑制物但肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达高．现检测ＨＣＣ患者外周血中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,血清ＴＧＦβ１水平,以及肝组织中ＴＧＦβⅡ型受体（ＴＧＦβＲⅡ）的表达．方法ＨＣＣ患者外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ）,提取总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术扩增ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ．血清ＴＧＦβ１水平测定用Ｐｒｏｍｅｇａ公司产的试剂盒．肝组织ＴＧＦβＲⅡ表达的分析用原位杂交法．结果ＨＣＣ患者２０例ＰＢＭＣＴＧＦβ１ｍＲＮＡ用ＲＴＰＣＲ检测阳性率达７０％,对照组阴性．ＨＣＣ患者４０例血清ＴＧＦβ１水平（２７５８ｍｇ／Ｌ±８１０ｍｇ／Ｌ）明显高于对照组（８２７ｍｇ／Ｌ±３７２ｍｇ／Ｌ）．原位杂交表明,ＴＧＦβＲⅡ在ＨＣＣ细胞的胞质中有弱表达．结论ＨＣＣ患者ＴＧＦβ１基因在转录水平和翻译水平上均显示表达增强．ＰＢＭＣ有可能代替肝组织用以检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达应用于基础与临床的研究．     

反义核苷酸干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

为了研究反义核苷酸对平滑肌细胞（ＳＭＣ）及生长因子基因表达的影响。本实验对兔髂动脉粥样硬化模型行血管成形术；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法观察反义核苷酸对体外兔髂动脉ＳＭＣ增殖及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的影响。结果表明：反义核苷酸抑制ＳＭＣ增生，并呈浓度依赖性；反义核苷酸抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达；阳离子脂质体能明显增强反义核苷酸的上述作用。在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ表达阴性。结论：反义核苷酸抑制兔髂动脉ＳＭＣ增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达有密切关系。     

肝素干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

目的探讨肝素影响血管成形术后动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增生的机理。方法建立兔动脉粥样硬化模型，行血管成形术；观察肝素对体外兔髂动脉ＳＭＣ的增生、细胞周期、转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达等的影响。结果肝素能抑制ＳＭＣ的增生，并具有浓度依赖性和时间依赖性；肝素阻止ＳＭＣ进入Ｓ期，也有浓度依赖性和时间依赖性；肝素能抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达；在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达呈阴性。结论肝素抑制培养的兔髂动脉ＳＭＣ的增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达有密切关系。     

病毒性肝炎患者血清HGF和TGF—β1水平的临床意义

目的：探讨血清肝细胞生长因子（ｓＨＧＦ）和转化生长因子－β＿１（ＴＧＦ－β１）水平在病毒性肝炎患者中的临床意义。方法：选１３９例病毒性肝炎患者，以双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ｓＨＧＦ，以改良ＭＶ１ＬＵ细胞生长抑制ＭＴＴ法检测ＴＧＦ－β＿１活性，同时检测其肝功能、肝纤维化、甲胎蛋白等指标。结果：各型病毒性肝炎患者ｓＨＧＦ水平及ＴＧＦ－β＿１活性均明显高于正常人水平（Ｐ值均＜０．０１）。ＴＧＦ－β１活性增高以肝硬化和重症肝炎最为显著（分别为９．４４±２．１７ｎｇ／ｍｌ和８．４２±２．５４ｎｇ／ｍｌ）。ｓＨＧＦ水平与ＴＧＦ－β＿１活性相关（Ｐ值＜０．０１）。结论：ｓＨＧＦ水平能反映患者肝细胞损伤及肝功能障碍程度，并与肝纤维化程度也可能有关。     

恶性疟原虫环子孢子蛋白基因在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白基因片段,经基因序列测定后克隆于ｐＷＲ４５０－１融合蛋白表达载体,并转化大肠杆菌ＴＧ１、ＪＭ１０３及ＪＭ１０９。在不同菌体浓度及不同剂量ＩＰＴＧ诱导下检测ＣＳＰ融合蛋白的表达,结果显示仅ｐＷＲ－ＣＳＰ／ＴＧ１工程菌在菌体浓度ＯＤ５９０值达０．７～０．８时,加入终浓度１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ进行诱导,可表达一８８ｋＤａ的融合蛋白。ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明ＣＳ蛋白表达产物能被抗ＣＳ蛋白重复区单克隆抗体所识别     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞

目的探讨抗Ｆａｓ单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义．方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Ｆａｓ单克隆抗体对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＳＧＣ７９０１细胞表面Ｂｃｌ２的表达情况．．结果抗Ｆａｓ单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用．经抗Ｆａｓ单克隆抗体处理后,ＳＧＣ７９０１细胞表面Ｂｃｌ２蛋白表达无明显变化．．结论抗Ｆａｓ单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１细胞凋亡．抗Ｆａｓ单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Ｂｃｌ２表达无关     

化疗药物对肺癌细胞凋亡诱导作用的研究

目的探讨化疗药物鬼臼乙叉甙（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ，Ｖｐ１６）及中成药得力生对肺癌细胞凋亡的诱导作用。方法采用电镜、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ原位末端标记和流式细胞术（ＦＣＭ）检测凋亡细胞。结果Ｖｐ１６及得力生在一定的作用时间与剂量下均能诱导小细胞肺癌和腺癌细胞的凋亡，凋亡细胞有典型的形态学改变及ＤＮＡ梯形带形成，ＦＣＭ检测凋亡细胞处于低ＤＮＡ含量位置（ＰｒｅＧ１峰），ＴＵＮＥＬ荧光染色能将凋亡细胞的形态与定量计数结合起来。结论Ｖｐ１６及得力生均能成功诱导肺癌细胞凋亡，此种诱导作用呈药物作用浓度及时间依赖性     

Fas基因转导胃癌细胞的表达

目的将Ｆａｓ基因导入胃癌细胞，建立Ｆａｓ基因表达株，并比较转导前后ｍＲＮＡ与蛋白的表达水平．方法采用分子克隆技术将Ｆａｓ基因插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１，用Ｇ４１８筛选克隆细胞；以Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｆａｓ基因的表达．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫＦａｓｃＤＮＡ．转导细胞后，从１×１０５细胞中筛选出１００个抗性克隆以上，转导率大于０１％，随机挑选２个克隆扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而有效地建立了Ｆａｓ基因表达株（ＳＧＣ７９０１Ｆａｓｃｅｌｓ）．杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｃＤＮＡ的表达，但转导株在ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均明显高于非转导株．结论Ｆａｓ基因在胃癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体的介导，Ｆａｓ基因导入胃癌细胞后，能有效地表达ＦａｓｍＲＮＡ及其蛋白．     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1—17区基因的原核表达,纯化及表？…

为进一步研究和应用恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１的１７区基因,本文原核表达了ＦＵＰ株ＭＳＰ１的１７区基因,并纯化及鉴定了表达蛋白。方法将ＭＳＰ１－１７基因片段克隆入原核表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１,形成ｐＧＥＸ－４Ｔ－１／ＭＳＰ１－１７,ＩＰＴＧ诱导ｐＧＥＸ－４５－１／ＭＳＰ１－１转化的ＢＬ２１菌,纯化并用ＭＳＰ１－１７特异性生有达产物。结果成功地构建了ｐＧＥＸ－４Ｔ－１／ＭＳＰ１－１７,转化菌经诱导表     

细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞生长的调节作用

目的研究细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞的生长调节作用。方法应用小鼠腹腔渗出性巨噬细胞（ＰＥＭ）和巨噬细胞株Ｊ７７４Ａ．１为靶细胞，测定细菌脂多糖（ＬＰＳ）对Ｍ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ刺激的巨噬细胞集落细胞形成的影响，同时用１２５Ⅰ标记的ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验测定了ＬＰＳ对巨噬细胞膜上的ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的调节。用反向ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＴＴＧＦ－β１对巨噬细胞产生ＩＦＮ－γ的作用。结果ＬＰＳ单独对巨噬细胞无生长调节作用，但可抑制ＧＭ－ＣＳＦ对巨噬细胞的增殖效应。而在ＴＧＦ－β１同时存在下，ＬＰＳ的抑制效应被消除。ＲＴ－ＰＣＲ证实ＬＰＳ诱生巨噬细胞产生的ＩＦＮ－γ可被ＴＧＦ－β１有效地抑制．而已知ＩＦＮ－γ是强烈的巨噬细胞生长抑制因子。此外，１２５Ⅰ－ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验发现，同ＴＧＦ－β１一样ＬＰＳ增强ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的表达。结论ＬＰＳ参与了多种细胞因子对巨噬细胞生长的调节网络，根据存在的细胞因子不同，表现为抑制和增殖的双重作用。     

Fas,FasL与1型糖尿病

１型糖尿病是Ｔ细胞介导的自身免疫性疾病,β细胞凋亡在其发病中起一定作用,Ｆａｓ／ｆａｓＬ系统参与β细胞凋亡。Ｆａｓ是死亡因子,Ｆａｓｌ是其受体,表达Ｆａｓ的细胞和表达Ｆａｓｌ的细胞或抗Ｆａｓ抗体结合均可导致表达Ｆａｓ的细胞凋亡。正常胰腺细胞不表达Ｆａｓ,胰岛炎时,许多细胞因子和炎症介质可诱导胰岛β细胞表达Ｆａｓ,从而被表达Ｆａｓｌ的细胞（Ｔ细胞或胰α及β细胞）诱导凋亡,导致糠尿病的发生。对Ｆａｓ／     

SHR血管平滑肌PDGF—A链,TGFβ1及其受体mRNA表达的研究

目的：在自发型高血压和正常血压的Ｖｉｓｔａｒ－ｋｙｏｔｏ大鼠血管壁平滑肌细胞（ＳＨＲ－ＶＳＭＣ和ＷＫＹ－ＶＳＭＣ）,比较几种内源性生长因子及它们受体的表达水平,从ＶＳＭＣ自分泌和旁分泌产生骨源性生长因子的角度,阐述ＳＨＲ－ＶＳＭＣ和ＷＫＹ－ＶＳＭＣ的差异。方法：以定量ＲＴ－ＰＣＲ技术,在二株系ＶＳＭＣ,检测长型ＰＤＧＦ－Ａ ,ＴＧＦβ１及它的受体ｍＲＮＡ的表达水平。结果：（１）在ＳＨＲ－ＶＳＭＣ,     

HBV反义全基因真核细胞表达载体的构建及在肝癌细胞内的表达

１．材料与方法：乳哺动物细胞表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ,长约４．５ｋｂ,带有Ｔ_７公用序列。ｐＣＰ１０是ｐＢＲ３２２ＥｃｏＲＩ位点中插入双拷贝头尾相接的ＨＢＶａｙｗ亚型全基因ＨＢＶＤＮＡ重组质粒。ＰＣＲ引物ＸＩ１：１４２８－１４４８ｎｔ５'ＣＧＴ　ＣＣＣＧＴＣ　ＧＧＣＧＣＴＧＡＡＴＣＣ３',ＸＩ_２：１６７２－１６５３ｎｔ５'ＡＧＴＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＴＣＴＴＡＡＧ３'。人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１,出上海细胞所提供。将ＥｃｏＲＩ酶切后回收的全基因ＨＢＶ片段。在Ｔ_４ＤＮＡ连接酶作用下,与ＥｃｏＲＩ酶切…