纯钛表面牙周韧带细胞形成物骨钙素的表达

目的：以骨钙素为细胞分化指标，探讨商用纯钛表面牙周韧带细胞形成物的特征。方法：将牙周韧带细胞和纯钛进行复合培养，分别在第8天，第16天和第24天取材，免疫荧光染色原位观察骨钙素的表达，结果：第8天后，牙周韧带细胞在纯钛表面即可形成复层生长，并持续高表达骨钙素，结论：牙周韧带细胞在纯钛表面有向成骨样细胞分化的趋势，表现为形成高度表达骨钙素的类组织。     

牙周韧带细胞在纯钛表面的附着特征

目的　观察牙周韧带细胞在商用纯钛表面的附着特征。方法　MTT法分析牙周韧带细胞在商用纯钛表面的早期粘附 ,采用落射荧光观察细胞的粘附形态。结果　牙周韧带细胞在纯钛表面的早期粘附 2h达到饱和态 ,且呈现不同的粘附时相。细胞之间逐渐以丝状结构联接 ,丝状结构与钛片的打磨走向一致 ,最后融合成片。结论　牙周韧带细胞在纯钛表面的粘附具有规律性 ,纯钛的表面处理方法对细胞的生长极性有明显影响     

牙周韧带细胞及成骨样细胞在纯钛表面附着的形态学比较

目的：从形态学上比较牙周韧带细胞及成骨样细胞在纯钛表面的附着及增殖情况。方法：在相同的培养条件下，商用纯钛表面分别接种牙周韧带细胞和成骨样细胞，采用倒置显微镜及扫描电镜进行形态学观察。结果：两种细胞在纯钛表面均附着、生长良好，7天后细胞即连接成片，并在钛片边缘存在“细胞聚集”现象，呈现复层生长。扫描电镜显示两种细胞附着早期呈“伪足”样伸展，附着后期形成大量的细胞外基质成份。两种细胞在细胞形态、“伪足”形态及钛片周边聚集形态上均存在明显差异。结论：牙周韧带细胞和成骨样细胞与纯钛均有良好的生物相容性，在体外培养过程中，呈现不同细胞形态、“伪足”形态及钛片周边聚集形态，提示两种细胞在分化过程中可能存在差异。     

牙周韧带细胞在纯钦表面的附着特征

目的 观察牙周韧带细胞在商用纯钛表面的附着特征。方法 MTT法分析牙周韧带细胞在商用纯钛表面的早期粘附，采用落射荧光观察细胞的粘附形态。结果 牙周韧带细胞在纯钛表面的早期粘附2h达到饱和态，且呈现不同的粘附时相。细胞之间逐渐以丝状结构联接，丝状结构与钛片的打磨走向一致，最后融合成片。结论 牙周韧带细胞在纯钛表面的粘附具有规律性，纯钛的表面处理方法对细胞的生长极性有明显影响。     

纯钛表面牙周韧带细胞形成物的组织学和免疫组织化学研究

目的：探讨牙周韧带细胞在商用纯钛表面的增殖与分化。方法：牙周韧带细胞在纯钛表面进行培养,14天后刮取形成物,进行HE染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学分析。结果：牙周韧带细胞在纯钛表面生长良好,14天后形成单层,形成大量细胞基质,其成份主要为Ⅰ型胶原。结论：牙周韧带细胞能够在纯钛表面生长、增殖,并形成大量细胞外基质,细胞外基质的主要成份为Ⅰ型胶原。     

纯钛表面牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白的表达

目的以牙骨质附着蛋白为分化指标，分析牙周韧带细胞在纯钛表面的分化趋势，并探讨诱导矿化对牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白表达的影响。方法第三代牙周韧带细胞在商用纯钛表面接种后，分别进行常规培养和矿化液诱导矿化培养，通过免疫荧光原位检测牙骨质附着蛋白的表达，并比较诱导矿化对牙骨质附着蛋白表达的影响。结果牙周韧带细胞在纯钛表面初期呈条纹状生长，常规培养和诱导矿化培养务件下均能表达牙骨质附着蛋白，诱导矿化对牙骨质蛋白的表达无明显影响。结论在常规培养务件和诱导矿化培养条件下，纯钛表面生长的牙周韧带细胞能高度表达牙骨质附着蛋白，提示纯钛表面体外培养的牙周韧带细胞具有形成牙骨质的分化趋势，从而可为种植体周构建牙周韧带结构提供在种植体侧的锚着点。     

牙周韧带细胞的异质性

牙周韧带细胞是一群具有异质性的多能干细胞,在牙周再生中发挥着重要作用、本文从体内实验、体外实验及细胞移植学方面对牙周韧带细胞的异质性进行了综述。     

牙周韧带细胞结构的电子显微镜观察

本实验对大鼠磨牙牙周韧带细胞结构的超微结构进行了较细致的观察。使用5%EDTA-2Na脱钙液对样本进行充分脱钙,常规电镜制片。观察到牙周韧带的细胞成份有:成纤维细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞、破骨细胞、破牙骨质细胞、巨噬细胞、未分化间质细胞、组织细胞、上皮细胞等。结合各细胞成份的超微结构,对其功能进行了探讨。     

牙周韧带细胞的表型分化及其表面标记物

体外培养的未经克隆化的牙周韧带细胞是具有多种细胞表型的细胞群。按照细胞的分化潜能,可分为成纤维细胞表型和成骨样细胞表型。其中,成骨样细胞表型又可分为成牙骨质细胞表型和成骨细胞表型。笔者就牙周韧带细胞不同细胞表型的表面标记物(surface marker)、表型分化的影响因素以及细胞克隆在表型研究中的应用作一综述。     

四环素和多西环素对人牙周韧带细胞生物学活性的影响

目的探讨四环素及多西环素对体外培养的人牙周韧带成纤维细胞(HPDLCs)的生物学作用。方法将不同浓度的2种药物(1、5、20、100、500、2500滋g/ml)加入体外培养的HPDLCs中,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1～100滋g/ml的浓度范围内,2种药物对细胞形态无影响。在20～100滋g/ml的浓度范围内,四环素显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P﹤0.01),而多西环素只在20滋g/ml时,能显著促进细胞DNA的合成(P﹤0.01)。当2种药物的浓度增至2500滋g/ml时,不仅使细胞的镜下形态发生明显改变,而且严重抑制细胞的生物学活性。结论在合适的浓度范围内,四环素能显著促进HPDLCs的增殖及生物合成,多西环素的促进作用不明显,而浓度过高时两者均具有细胞毒性。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞生长的影响

目的 探讨在碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)作用下,人牙周膜细胞（PDLC）的增殖、DNA合成状况的变化。方法 以常规体外组织块细胞培养法获得PDLC,采用MTTI地和^3H-TdR掺入法测定bFGF对PDLC的影响,实验结果A值和CPM值经方差分析。结果 各实验组与对照组之间均有显著性差异,bFGF能显著提高PDLC的增殖活性及DNA合成,其效应随bFGF浓度增大而增大,1000ng/ml范围内未见抑制现象,最大效应一半的浓度约为100ng/ml。结论 bFGF能促进PDLC增殖及DNA合成,可望在牙周再生治疗中起到重要作用。     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

牙周膜干细胞在钛表面不同应答的实验研究

目的：研究牙周膜干细胞在不同粗糙程度的钛板表面的增殖情况及成骨基因表达。方法：常规酶消化法培养牙周膜干细胞,按照接种面性质及钛盘表面不同的处理方法分为5组;将牙周膜干细胞按照相同的细胞浓度植于上述5组培养皿内,检测细胞的增值情况和成骨标志蛋白的表达情况。结果：SEM检测钛板表面处理情况：第1组常规机器处理组（G1）;第两组75μm Al2O3喷砂组（G2）;第3组125μm Al2O3喷砂组（G3）;第4组阳极电压处理组（G4）;第5组空白对照组（G5）。细胞增殖情况：第1天细胞增殖较慢,但是G2和G3细胞增殖明显高于其他组,统计学处理有显著性差异;第3天细胞增殖增快,G3和G4细胞增殖明显加快;第6天G2表现出最快的细胞增殖率,G5则表现出比其他各组明显缓慢的细胞增殖率。基因表达检测：培养后第1、3、6天GAPDH表达相对稳定,骨桥蛋白的表达在各组无显著性差异;骨钙蛋白的表达则有显著性,到第6天,骨钙蛋白在G5的表达明显降低,而在G2/3的表达明显增强。I型胶原的表达,在整个实验过程中在G5表达较高水平,而在G2,G3轻度降低,在G5明显降低。结论：牙周膜干细胞在粗糙面增殖优于光滑平面,与塑料表面相较,钛板表面能更利于牙周膜干细胞的骨向分化。     

中药黄芩苷对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响

目的 :探讨在不同浓度的黄芩苷作用下 ,人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的变化。方法 :运用细胞生物学方法 ,MTT法和考马斯亮蓝染色法 ,观察黄芩苷对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响。结果 :黄芩苷浓度在 1× 10 -5～ 1μg/ml,明显促进人牙周膜细胞增殖 ,且 1× 10 -2 μg/ml作用效应最大。黄芩苷浓度在 1× 10 -3 ～ 1μg/ml,明显增加人牙周膜细胞总蛋白的合成 ,且 1× 10 -1μg/ml作用效应最大。黄芩苷的作用显示出一个明显的浓度依赖效应和时间依赖效应。结论 :黄芩苷明显促进牙周膜细胞增殖及增加细胞总蛋白 ,作为一种中药有效成分 ,有望用于辅助牙周病的防治     

Sirtuin 1促进牙周膜干细胞骨向分化的实验研究

目的：研究蛋白酶Sirtuin 1在牙周膜干细胞骨向分化中的作用。方法：筛选人因正畸而拔除的前磨牙,获取牙周膜组织做细胞培养,并行牙周膜干细胞鉴定;实验分为实验组、对照组。实验组1：加入Sirtuin 1激活剂白藜芦醇使其工作浓度为1、5、10mmol/L。实验组2：加入Sirtuin 1抑制剂烟酰胺使其终末工作浓度为1、5、10mmol/L,对照组为空白对照。获取培养细胞后半定量RT-PCR检测Sirtuin 1和各组细胞骨向分化标志物,即碱性磷酸酶,骨桥蛋白,骨钙蛋白和骨涎蛋白。结果：通过检测牙周膜干细胞的蛋白酶Sirtuin 1和骨向分化标志物,即碱性磷酸酶,骨桥蛋白,骨钙蛋白和骨涎蛋白的mRNA含量,显示随着加入白芦藜醇剂量的差异而出现梯度的上调;而随着烟酰胺的浓度的升高而出现梯度的下调。结论：Sirtuin 1可以有效的促进牙周膜干细胞的骨向分化,从而促进牙槽骨再生修复重建,具有良好的临床应用前景。     

人牙周膜细胞不同分离培养方法的比较研究

目的探讨组织块法、酶解组织块法和酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞的优缺点。方法分别应用组织块法、酶解组织块法及酶消化法进行人牙周膜细胞分离培养,鉴定细胞来源,利用倒置显微镜观察细胞生长状况。结果应用组织块法从24块人牙周膜组织中成功分离培养出人牙周膜细胞,成功率96%（24/25）,细胞生长状态良好;应用酶解组织块法成功率80%（16/20）;应用酶消化法成功率75%（12/16）。结论组织块法原代培养人牙周膜细胞方法简单且成功率较高。     

RGD七肽固定对胶原粘附人牙周膜成纤维细胞粘附的影响

目的：将促粘附分子RGD七肽（GRGDSPC）固定于Ⅰ型胶原材料,研究其对人牙周膜成纤维细胞粘附性的影响。方法：实验分4组。A组：耦联组,采用化学交联剂sulfo—Lc—SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合。B组：混合组,将GRGDSPC肽与I型胶原直接混合后涂层。C组：单纯胶原涂层组。D组：未涂层孔板组。采用贴壁法培养人牙周膜成纤维细胞,鉴定其细胞起源;检测细胞贴壁率,评估不同时间、不同浓度人牙周膜成纤维细胞粘附效果。结果：成功建立人牙周膜成纤维细胞的分离和体外培养方法;方差分析分组变量、浓度变量及时问变量对贴壁率的影响,结果显示A、B、c、D分组（P〈0．05）、GRGDSPC浓度分组（P〉0．05）及时间分组（P〈0．05）,各因素间无交互作用;A组与B、C、D各组比较,有统计学差异（P〈0．05）。结论：耦联组GRGDSPC肽固定Ⅰ型胶原后细胞粘附率明显高于其它各组,且呈时间和肽浓度依赖性。     

镁离子对人牙周韧带细胞体外成骨能力的影响

目的:探究不同浓度Mg²⁺对hPDLCs成骨向分化的影响,为后续牙周组织再生实验选择合适的Mg²⁺注入浓度提供依据。方法:取P3-P5代hPDLCs于Mg²⁺浓度分别为0、10、15、25、35、50 mmol/L条件中常规培养,用CCK-8法检测hPDLCs增殖情况。成骨诱导后比较各组ALP活性差异及茜素红矿化结节着色情况,进行RT-qPCR检测成骨相关基因Runx2、ALP、Col1、OPN及Bglap的表达差异。采用SPSS16.0软件,运用单因素方差分析进行统计学分析。结果:10、15、25 mmol/L Mg²⁺浓度可促进细胞增殖并提高ALP活性,35、50 mmol/L Mg²⁺浓度抑制细胞增殖及ALP活性。结论:适宜浓度镁离子(0~25 mmol/L)可促进hPDLCs早期成骨分化并抑制矿化。