尿HLA-DR在肾移植急性排斥中的检测及其临床意义

目的探讨流式细胞术检测尿淋巴细胞人类白细胞抗原(HLA-DR)对移植肾急性排斥反应的诊断价值。方法 36例肾移植患者按照移植肾功能正常、术后急性排斥反应、其他原因引起移植肾功不全等标准分为A~C组,另选取10例健康志愿者作为对照(D组),采用流式细胞术检测尿中HLA-DR阳性细胞表达率。结果与A、C、D组相比,尿淋巴细胞HLA-DR在排斥反应时表达明显增加(P<0.01),抗排斥治疗后逐渐下降。与D组相比,A组和C组HLA-DR表达率轻度升高(P<0.05),但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术动态检测尿液中HLA-DR阳性率,能准确反映肾移植术后患者的免疫状态,可作为急性排斥反应的特异标志。     

肾移植患者急性排斥反应中T淋巴细胞亚群的作用研究

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群变化在同种异体肾移植术后急性排斥反应中的意义。方法选取2009年至2010年在我院行肾移植的患者27例,术后按照是否发生急性排斥反应分为急性排斥反应组(n=11)和稳定组(n=16),分别于移植术前1 d及术后第7天收集患者外周血,采用流式细胞术分选CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD3~+CD4~+及CD3~+CD8~+T细胞等,同时观察两组肾功指标及肾组织病理改变。结果与术前相比,急性排斥反应组及稳定组CD3~+CD4~+T淋巴细胞明显升高(P<0.05),而在急性排斥反应组和稳定组间无统计学差异(P>0.05)。结论监测患者外周血T淋巴细胞亚群的变化,对早期判别急性排斥反应及个体化免疫抑制剂治疗具有一定指导意义。     

本期专题:肾移植与急性排斥反应的发生

1尿趋化因子IP-10和Fractalkine在移植肾急性排斥反应早期诊断中的应用,见2011年31期5765页2尿单核细胞趋化蛋白1与肾移植后急性排斥反应:有相关性吗?见2010年5期789页3尿CD54+淋巴细胞在肾移植急性排斥反应中的变化,见2011年53期9905页     

CD15s抗原在肾移植急性排斥反应中的检测及其临床意义

目的探讨CD15s抗原在肾移植急性排斥反应中的检测和临床意义。方法将研究对象分为移植肾功能正常组、急性排斥反应组、其他原因引起移植肾功能不全组、健康对照组,采用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CD15s抗原表达率。各组分别于设定日期后第1、3、7、14、28天各采集标本1次。结果 CD15s抗原在移植肾功能正常组呈先降后升变化,但与其他原因引起肾功能不全组无显著差异;CD15s抗原表达率在急性排斥反应时明显增加(P<0.01),抗排斥治疗后逐渐下降。结论 CD15s抗原作为一项肾移植术后急性排斥反应的检测指标,能够准确反映患者的免疫功能状态。     

移植肾慢性排异反应与肾内微淋巴管的增生

背景：在慢性肾移植排斥反应中，随着排斥的加重，微淋巴管增生程度亦随之增高，排斥反应时，组织间浸润的巨噬细胞分泌血管内皮细胞生长因子C、D，激活血管内皮细胞生长因子受体3，从而引起微淋巴管增生。但尚无实验证实该理论。 目的：采用肾小球足细胞膜黏蛋白及血管内皮生长因子受体、CD68分别双重免疫组织化学染色方法，量化移植肾组织中的微淋巴管密度、血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度，探讨3者关系及内在意义。 设计、时间及地点：以细胞为对象的观察实验，于2005-09／2007—05在解放军南京军区福州总医院器官移植中心完成。 材料：50份移植肾切除组织标本来自福州总院器官移植中心1998／2005手术切除标本存档蜡块，慢性排斥25份，急性排斥17份，尿瘘致移植肾带功切除8份。 方法：双重免疫组织化学染色法检测50份移植肾切除组织标本存档蜡块切片中肾小球足细胞膜黏蛋白及血管内皮细胞生长因子受体、CD68表达，并量化微淋巴管密度、血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度。 主要观察指标：结合临床病理资料分析微淋巴管密度、血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度表达及与肾移植排斥反应之间的相互关系。 结果：急性排斥组中肾小球足细胞膜黏蛋白多伴随肾内动脉的大分支零星分布在动脉周围的细胞间质内，血管内皮细胞生长因子受体基本为零星染色。慢性排斥组可见有大量微淋巴管增生，主要集中在间质内浸润的局灶性单核细胞群周围，并且深入到肾小管周边的间质内，管腔扩张，扭曲，微淋巴管周围可见血管内皮细胞生长因子受体高表达。随着肾小球足细胞膜黏蛋白在不同肾组织表达的高低，血管内皮细胞生长因子受体阳性率亦随之变化，两者之间呈正比（P〈0．05）；慢性排斥组中血管内皮细胞生长因子受体的强阳性率明显增高，与其他两组比较差异显著（P〈0.05）。肾小球足细胞膜黏蛋白染色显示在慢性排异反应组中，随着排异程度的加重，淋巴管密度也增加（P〈0．05）。 结论：移植肾组织中的微淋巴管密度与血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度密切相关，分析：肾移植后微淋巴管增生与单核细胞的浸润互为因果，导致移植肾组织局部单核细胞的大量堆积，最终致使移植物失功。     

内皮微粒在肾移植急性排斥反应中的诊断作用

背景:血管内皮细胞的变化与移植排斥反应的关系极为密切,内皮微粒脱落于激活或凋亡的内皮细胞,能直接而特异地反映血管内皮细胞的变化,检测血浆中内皮微粒对肾移植排斥反应的诊断监测具有一定的理论和实际意义。目的:探讨肾移植急性排斥反应时循环内皮微粒的数量和表型的变化及与急性排斥反应之间的关系。方法:建立同基因和同种异基因大鼠腹腔原位肾移植模型;移植后5d苏木精-伊红染色观察肾组织的病理学改变,并进行Banff评分;采用免疫组化法检测肾组织中细胞间黏附分子1表达;采用流式细胞术检测血浆中CD144+内皮微粒数量及细胞间黏附分子1+/CD144+内皮微粒的数量;分析内皮微粒的数量和表型与肾组织病理变化的关系。结果与结论:与同基因移植组比较,异基因移植组Bnaff评分明显增加(P<0.01),肾组织中细胞间黏附分子1表达明显增强(P<0.01);与同基因移植组比较,异基因移植组CD144+内皮微粒的数量和携带细胞间黏附分子1的内皮微粒的水平明显增加(P<0.01)。内皮微粒的数量与移植肾急性排斥反应的程度呈正相关(P<0.01),携带细胞间黏附分子1内皮微粒的水平与移植肾脏中细胞间黏附分子1的表达呈正相关(P<0.01)。提示肾移植后对内皮微粒数量和表型进行检测对诊断急性排斥反应的发生有一定意义。     

尿趋化因子IP-10和Fractalkine在移植肾急性排斥反应早期诊断中的应用

背景:相关研究已证实,趋化因子IP-10、Fractalkine在器官移植后急性排斥反应过程中发挥着重要的作用。目的:检测尿液中IP-10和Fractalkine水平变化,并结合肾组织活检病理,探讨尿液中IP-10和Fractalkine在移植肾急性排斥反应早期诊断中的意义。方法:106例同种异体肾移植患者,根据移植后临床表现、实验室检查及肾穿刺组织病理学检查结果,分为急性排斥反应组(n=16)和非急性排斥反应组(n=90);另选择健康志愿者作为正常对照组。用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测尿IP-10和Fractalkine浓度变化。结果与结论:急性和非急性排斥反应组患者在移植后的尿IP-10及Fractalkine的表达水平均较移植前明显升高,但非急性排斥反应组在移植后7d呈下降趋势,至第11天降至移植前水平,而急性排斥反应组则持续高表达,IP-10在移植后第1天和Fractalkine在移植后第3天即与急性排斥反应组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示,肾移植后尿液中IP-10和Fractalkine水平的检测对于急性排斥反应发生的早期诊断和早期治疗具有重要意义。     

流式细胞技术检测肾移植后外周血白细胞介素18受体的表达

背景:细胞因子常常在肾移植后排斥反应早期即被释放,因此可以作为排斥反应的早期诊断指标.目的:观察尿毒症患者肾移植前后外周血白细胞介素18 受体(IL-18R)表达的变化.方法:将2004-09/2005-09 在解放军济南军区总医院进行的肾移植尿毒症32 例患者分为肾功能稳定组24 例,急性排斥组8 例.另选择以往手术后移植肾功能正常,平均存活时间4 年的肾移植患者12 例为长期存活组.同期查体未发现异常健康自愿者7 例为健康对照组.提取受试者的外周血淋巴细胞,加入双荧光标记的鼠抗人CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα单克隆抗体,利用流式细胞仪进行测定.结果与结论:流式细胞技术检测CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα在尿毒症组的阳性率明显高于健康对照组(P=0.02,P=0.04).肾功能稳定组及长期存活组外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的表达明显低于急性排斥组(P ＜ 0.05).急性排斥反应组激素冲击治疗后其阳性率明显低于激素冲击治疗前(P ＜ 0.05).3 例耐激素排斥反应者IL-18R 表达值高于5 例激素治疗有效者.结果显示外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的变化可以较早预测肾移植后急性排斥反应,预测肾移植后恢复情况,评估排斥反应对激素治疗的效果.     

细胞间黏附分子1与移植肾急性排斥反应

目的:检测移植肾组织内细胞间黏附分子1的表达水平,分析其与移植肾急性排斥反应的关系.方法:选择解放军南京军区福州总医院全军器官移植研究所在2002/2005进行的72例尸体肾移植的移植肾穿刺活检标本72份,其中移植肾急性排斥反应54份,环孢素A中毒标本18份;并取8份正常肾组织作对照.采用免疫组化技术检测细胞间黏附分子1在移植肾内的表达,分析其与病理形态结构的关系.结果:发生急性排斥反应的受者肾小管上皮细胞间黏附分子1表达显著高于正常者及环孢素A中毒受者(P<0.05),且随移植肾排斥程度加重,细胞间黏附分子1表达明显增多(P<0.05).结论:细胞间黏附分子1的表达与移植肾急性排斥反应病理分级密切相关,移植肾组织内细胞间黏附分子1的检测对于肾移植后急性排斥反应的诊断具有参考价值.     

肾移植急性排斥反应时B7-2/CD28信号通路的表达

背景:以往动物研究表明,在器官移植急性排斥反应时共刺激分子的表达与急性排斥反应密切相关.目的:观察急性排斥反应时患者移植肾脏组织和外周血中B7-2/CD28信号通路的表达.方法:对53例同种异体肾移植患者于移植前1 d、移植后1,3,7,14,21,28 d分别取外周血以及在临床诊断急性排斥反应当天和抗排斥治疗1周后额外采血,用流式细胞仪检测共刺激分子B7-2/CD28在外周血淋巴细胞中的表达;同时,行经皮肾穿刺活检供肾修整结束时、移植后7 d、1个月、6个月、1年或以上获取活检肾脏组织,用免疫组织化学方法检测活检组织中B7-2/CD28的表达情况.结果与结论:移植后1,3 d内所有患者外周血中CD28+,CD4+/CD28+,CD8+/CD28+细胞比率均有显著下降(P < 0.05),一二周后恢复到术前水平;移植后7 d未发生急性排斥反应的患者肾脏组织B7-2阳性表达率显著上升(P < 0.05),1个月后下降至移植前水平(P > 0.05).移植后发生急性排斥反应的患者外周血CD28+,CD4+/CD28+,CD8+/CD28+细胞比率及肾脏组织B7-2阳性表达率明显上升(P < 0.05),经抗排斥治疗1周后均好转.结果证实,在肾移植后出现急性排斥反应时,肾脏组织以及外周血中共刺激分子B7-2/CD28的表达上调与急性排斥反应的发生密切相关.     

Inflammation in acute kidney injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is one of the major causes of acute kidney injury (AKI) and evidence supporting the involvement of both innate and adaptive immunity in renal IRI has accumulated in recent years. In addition to leukocytes, kidney endothelial cells promote inflammation after IRI by increasing adhesion molecule expression and vascular permeability. Kidney tubular epithelial cells increase complement binding and upregulate toll-like receptors, both of which lead to cytokine/chemokine production in IRI. Activation of kidney resident dendritic cells, interferon-gamma-producing neutrophils, infiltrating macrophages, CD4+ T cells, B cells and invariant natural killer T cells are all implicated in the pathogenesis of AKI. The complex interplay between innate and adaptive immunity in renal IRI is still not completely understood, but major advances have been made. This review summarizes these recent advances to further our understanding of the immune mechanisms of acute kidney injury.     

肾小管上皮细胞炎性损伤中的转分化-获得组织干细胞潜能的研究

目的：研究肾脏纤维化过程中转分化的肾小管上皮细胞获得的组织干细胞潜能。方法体外建立局部肾素-血管紧张素（AngⅡ）系统炎性环境下肾小管上皮细胞（NRK-52E）转分化的细胞模型,观察其胚胎肾发育基因 Pax2和组织干细胞表面标志 CD133分子的表达和变化情况。结果局部高浓度 AngⅡ可刺激 NRK-52E 细胞表达 Pax2和 CD133分子,其作用呈剂量和时间依赖关系。结论炎性损伤导致肾小管上皮细胞转分化后可获得组织干细胞潜能。     

Cytokine-induced expression of a nitric oxide synthase in rat renal tubule cells.

Nitric oxide (NO.) has been implicated in the regulation of renal vascular tone and tubular sodium transport. While the endothelial cell is a well known source of NO(.), recent studies suggest that tubular epithelial cells may constitutively generate NO(.). An inducible isoform of nitric oxide synthase which produces far greater quantities of NO. exists in some cell types. We sought to determine whether kidney epithelial cells exposed to cytokines could express an inducible nitric oxide synthase. Primary cultures of rat proximal tubule and inner medullary collecting duct cells generated NO. on exposure to TNF-alpha and IFN-gamma. NO. production by both cell types was inhibited by NG-monomethyl-L-arginine; this inhibition was partially reversed by the addition of excess L-arginine. Stimulation of kidney epithelial cells with TNF-alpha and IFN-gamma dramatically increased the level of inducible nitric oxide synthase mRNA. In summary, renal proximal tubule and inner medullary collecting duct cells can produce NO. via expression of an inducible isoform of nitric oxide synthase.     

Vascular endothelium and lymphocyte adhesion molecules in minor salivary glands of patients with Sjogren's syndrome.

The aim of this study was to examine the distribution and types of adhesion molecules expressed over endothelial cells and the ligands present on lymphocytes which infiltrate exocrine glands in patients with Sjogren's syndrome. Minor salivary gland biopsies were examined from twelve patients with Sjogren's syndrome and eight normal subjects for the presence of adhesion molecules using monoclonal antibodies and an Indirect Immunoperoxidase technique. There was an increased expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1, CD54) on endothelial cells, lymphocytes, fibroblasts and salivary gland epithelial cells. In addition we documented the expression of endothelial leukocyte adhesion molecule-1 (ELAM-1) on endothelial cells in salivary glands from patients but not the controls. Many of the endothelial cells expressing these adhesion molecules in patients with Sjogren's syndrome had the morphological appearance of high endothelial venules. V-CAM-1 was shown to be present in some of the salivary biopsies from patients with Sjogren's syndrome. Lymphocytes infiltrating salivary glands strongly express LFA-1 (CD11a/CD18) molecules. Some infiltrating lymphocytes, and most monocytes, expressed C3bi-R (CD11b/CD18) and the p150.95 (CD11c/CD18) antigens on their cell surface. The results of this study reveal the enhanced expression of vascular endothelial and lymphocyte adhesion molecules on the minor salivary glands of patients with Sjogren's syndrome. The presence of such receptors and their putative ligands indicate an important role for these molecules in the pathogenesis of Sjogren's syndrome.     

福辛普利联合缬沙坦对梗阻性肾病模型幼鼠MMP-7表达的影响

目的：观察联合应用福辛普利和缬沙坦对梗阻性肾病模型（UUO）大鼠肾小管间质MMP-7表达的影响,初步探讨其在肾间质纤维化中的作用机制。方法：72只Wistar雌性幼年大鼠单侧输尿管结扎制成UUO模型,并随机分为假手术对照组（A组）、UUO模型组（B组）和福辛普利及缬沙坦联合治疗组（C组）,于模型成功后第1,2,3,4周末为实验时间点,检测各组大鼠24h尿蛋白、血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）。用免疫组化法研究MMP-7在肾组织的分布、表达及变化。结果：光镜下MMP-7在对照组肾小管上皮细胞胞浆呈阴性表达,术后1周UUO组MMP-7在肾小管上皮细胞胞浆区及肾间质细胞表达,在血管内皮细胞有微量表达,2周后表达增强,4周表达最强。治疗组各周MMP-7表达较UUO组下调。结论：联合应用福辛普利和缬沙坦可通过下调MMP-7在肾组织的表达而改善肾功能,延缓肾间质纤维化的进展。     

黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

背景：干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实,但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。目的：观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法：实验分为4组。2.5μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞24 h,建立肾小管细胞损伤模型（顺铂损伤组）;将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养（脂肪源性干细胞＋损伤肾小管上皮细胞组）;利用 Transwel小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养（黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞＋损伤肾小管上皮细胞组）;以正常肾小管上皮细胞做对照（正常对照组）。结果与结论：与肾小管上皮细胞损伤组相比,AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组和20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少;ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高（P＆lt;0.05）;Western blot进一步显示20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降,而Bcl-2的表达量明显增加（P＆lt;0.05）。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌,抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。     

The role of vascular endothelial growth factor in the kidney in health and disease

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a potent endothelial cell mitogen, angiogenic factor and enhancer of vascular permeability. Expressed in the epithelial cells of the developing glomerulus and tubular epithelium, VEGF plays an important role in the development and maintenance of the early vasculature of the kidney. Here, we review the available literature regarding the expression and function of VEGF both in the developing and healthy adult kidney. Furthermore, we highlight how VEGF expression is altered in the diseased kidney and how this modulated expression may impact on and reflect underlying functional changes occurring during the disease process. As discussed, many controversial issues remain, particularly concerning the role of VEGF in the diseased kidney. That VEGF has been proposed as a potential future therapeutic target for the management of some renal diseases requires first that the precise role of VEGF in the normal kidney and various renal pathologies be further and more clearly defined.     

纤溶酶原激活物/Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物的失衡在大鼠肾脏衰老过程中的意义

目的　探讨纤溶酶原激活物 (PAs)及其抑制物 1(PAI 1)在大鼠肾脏衰老过程中的作用。方法　选用 3、12、2 4个月龄Wistar大鼠 ,采用免疫组化技术分别检测组织型纤溶酶原激活物 (t PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物 (u PA)、PAI 1及转化生长因子 β1(TGF β1)在不同年龄大鼠肾组织中的表达。 结果　PAI 1主要表达在肾小球壁层上皮细胞、内皮细胞及系膜细胞、小血管的内皮细胞及平滑肌细胞和肾小管上皮细胞 ,并随增龄表达增强 (P <0 0 1) ;t PA主要表达在肾小球、肾小管 ,并随增龄表达减弱 (P <0 0 1) ;u PA主要表达在肾小管上皮细胞 ,亦随增龄表达减弱 (P <0 0 1) ;TGF β1主要表达在肾小球、血管周围、小管及间质 ,随增龄表达增强 (P <0 0 1)。PAI 1与TGF β1与肾小球硬化有相关性 (P <0 0 5 )。结论　PA/PAI 1表达失衡在肾脏衰老过程中可能起重要作用     

Role for integrin-linked kinase in mediating tubular epithelial to mesenchymal transition and renal interstitial fibrogenesis

Under pathologic conditions, renal tubular epithelial cells can undergo epithelial to mesenchymal transition (EMT), a phenotypic conversion that is believed to play a critical role in renal interstitial fibrogenesis. However, the underlying mechanism that governs this process remains largely unknown. Here we demonstrate that integrin-linked kinase (ILK) plays an important role in mediating tubular EMT induced by TGF-beta1. TGF-beta1 induced ILK expression in renal tubular epithelial cells in a time- and dose-dependent manner, which was dependent on intracellular Smad signaling. Forced expression of ILK in human kidney proximal tubular epithelial cells suppressed E-cadherin expression and induced fibronectin expression and its extracellular assembly. ILK also induced MMP-2 expression and promoted cell migration and invasion in Matrigel. Conversely, ectopic expression of a dominant-negative, kinase-dead form of ILK largely abrogated TGF-beta1-initiated tubular cell phenotypic conversion. In vivo, ILK was markedly induced in renal tubular epithelia in mouse models of chronic renal diseases, and such induction was spatially and temporally correlated with tubular EMT. Moreover, inhibition of ILK expression by HGF was associated with blockade of tubular EMT and attenuation of renal fibrosis. These findings suggest that ILK is a critical mediator for tubular EMT and likely plays a crucial role in the pathogenesis of chronic renal fibrosis.