急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景：Toll样受体9（TLR9）、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程。目的：测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。方法：从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。结果与结论：在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9mRNA表达高于正常对照组（P〈0.01）,化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义（P〉0.05）;各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组（P〈0.01）。TLR9mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血中单个核细胞Toll样受体4的表达及其与血清内毒素的关系

目的:通过检测乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(PMBCs)Toll样受体4(TLR4) mRNA的表达、血清内毒素水平及肿瘤坏死因子α(TNF-α);探索TLR4 mRNA表达与血清内毒素及TNF-α的关系.方法:抽取29例乙型肝炎肝硬化患者外周静脉血,分离单个核细胞,用RT-PCR半定量分析TLR4 mRNA水平;同时用鲎试剂测定血清内毒素水平和用放免法测定血清TNF-α水平.结果:正常对照组和肝硬化患者血清内毒素水平分别为0.050±0.020 EUmL-1和0.107±0.080 EUmL-1(P<0.05),血清TNF-α水平分别为1.282 pgmL-1±0.249 pgmL-1和2.076±0.358 pgmL-1(P<0.05),后者均明显升高,而且肝功能损害越严重内毒素水平升高越明显;肝硬化患者PMBCs中TLR4 mRNA的表达(0.900±0.263)与正常对照(0.923±0.461)无显著差异(P>0.05).结论:在肝硬化患者,尤其主要是Child-Pugh C级患者,血清内毒素及TNF-α水平较正常对照组明显升高,但PMBC的TLR4 mRNA的表达水平无变化,这可能与肝硬化患者同时存在内毒素耐受有关.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达，并探讨其在白血病治疗中的意义，采用RT-PCR方法及流式细胞术，对39例急性髓系白血病细胞(患者组)、18例完全缓解白血病细胞(缓解组)和21例正常人骨髓或外周血单个核细胞(对照组)表面TRAIL及其受体的表达进行检测。结果表明：①患者组和缓解组TRAIL、DR4和DR5表达高，而DcR1和DcR2表达低。②缓解组DR5的表达高于患者组。③患者组和缓解组DR5的表达均高于DR4。④患者组AML不同亚型表达TRAIL及其受体相似。结论：TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达具有明显的差异性：DR5在TRAIL介导的急性髓系白血病细胞凋亡中起重要的作用。     

人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导急性髓系白血病细胞凋亡的实验研究

为了研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对急性髓系白血病(AML)细胞的作用，通过MTT比色法测定不同浓度TRAIL对39例AML患者(病例组)和21例健康人(对照组)的骨髓或外周血单个核细胞的杀伤率。用流式细胞术检测细胞凋亡。结果发现，不同浓度TRAIL对AML细胞均有不同程度的杀伤作用，而对正常细胞无此作用。结论：TRAIL能通过诱导细胞凋亡而杀伤AML细胞，是一种有望应用于临床白血病治疗的新型生物制剂。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Toll样受体9和Foxp3的表达及二者相关性

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中转录因子Toll样受体9(TLR9)和Foxp3在的表达,并探讨其意义以及二者的相关性,明确TLR9和Foxp3在SLE中的作用和意义。方法选择泰安市中心医院和山东大学齐鲁医院2012年10月至2014年6月门诊或住院SLE活动性患者33例、SLE非活动性患者30例,查体中心健康查体者23例作为正常对照,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常对照组和SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3和TLR9m RNA的表达水平。结果活动性SLE患者外周血单个核细胞中TLR9 m RNA的表达水平明显高于SLE非活动性患者和正常对照(P<0.05),非活动性SLE患者TLR9 m RNA的表达水平高于正常对照(P<0.05)。TLR9 m RNA水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)呈正相关(r=0.702,P<0.05)。活动性SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3 m RNA的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照(P<0.05),非活动性SLE患者Foxp3 m RNA的表达水平低于正常对照(P<0.05)。Foxp3 m RNA水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.681,P<0.05)。在SLE患者外周血单个核细胞中TLR9和Foxp3的表达呈负相关。结论 SLE患者TLR9的表达与疾病活动性呈正相关,而Foxp3的表达与疾病活动性呈负相关。TLR9和Foxp3之间可能存在相互调节的作用,共同导致SLE的发生和发展。     

肥胖患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达及活性研究

目的研究肥胖患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体4（11LR4）表达及活性。方法收集16例肥胖患者和16例正常对照者的PBMCs,蛋白印迹法检测PBMCsTLR4及IKBct蛋白表达,实时荧光定量PCR检测PBMCsTLR4及白细胞介素6（IL-6）mRNA表达,并测定空腹血糖、空腹胰岛素、血游离脂肪酸（FFA）、IL-6及肿瘤坏死因子仪（TNF-a）。结果与正常对照组比较,肥胖组血FFA、IL-6、TNF-a及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）明显增高[FFA：（879±64）、（458±48）umoL／L,t=24．613、P=0．000;IL-6：（2．20±0．35）、（1．264-0．25）ng／L,t=14．993、P=0．000;TNF—a（1．964-0．32）、（1．384-0．24）ng／L,t=9．128、P=0．000;HOMA．IR：1．84-0．2、0．44-0．1,t=32．254、P=0．000];肥胖组PBMCsTLR4mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4mRNA：3．13±0．21与0．99±0．03,f=54．758,P〈0．05;TLR4蛋白：7．04±0．42与2．53±0．17,t：77．450,P〈0．05）;肥胖组PBMCsIKBet蛋白表达显著降低（2．52±0．16与4．00±0．30,t=23．284,P〈0．05）,IL-6mRNA表达显著升高（2．55±0．15与1．03±O．11,t=53．981,P〈0．05）。结论肥胖患者PBMCsTLR4表达及活性显著增加,可能在肥胖患者胰岛素抵抗的发生、发展中具有重要作用。     

类风湿性关节炎患者早期外周血单个核细胞Toll样受体2、4表达及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)早期患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体(TLR)2、TLR4对其配体双糖链蛋白多糖(BGN)、脂多糖(LPS)的刺激反应性,阐明PBMC TLR2、TLR4在RA疾病早期中的作用。方法采用流式细胞术、实时荧光定量逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测BGN和LPS刺激前后,RA组和健康对照组外周血CD14+单核细胞TLR4+细胞频率、PBMC TLR2 mRNA和TLR4mRNA及上清液白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量变化。结果 RA早期患者TLR2 mRNA明显升高、TLR4 mRNA下降(P<0.01);经LPS刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.50倍,而健康对照组下降到0.11倍;LPS和BGN促进了各组PBMC产生IL-6、TNFα,但RA早期患者组上升的倍数明显高于健康对照组。结论 PBMC TLR2、TLR4参与早期RA的发生、发展。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合三氧化二砷对急性髓系白血病细胞凋亡的影响

我们观察了肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和三氧化二砷(As2O3)分别和联合对急性髓系白血病(AML)细胞凋亡的影响，旨在探讨TRAIL与As2O3联合应用治疗白血病的临床价值。     

特发性血小板减少性紫癜外周血单个核细胞Toll样受体表达研究

目的了解特发性血小板减少性紫癜(ITP)外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLRs)的mRNA表达情况。方法采用RT-PCR方法(SYBR GreenⅠ荧光染料结合法),对30名ITP患者和30名健康者的PBMCs中所表达的TLR2、4、6、7、9 mRNA进行相对定量检测。结果ITP组TLR2和TLR7的mRNA相对表达量均明显高于对照组(P<0.05),而TLR4、TLR6、TLR9的mRNA相对表达量两组间无明显差异(P>0.05)。结论TLR2和TLR7在ITP患者中表达水平上调,可能在ITP发病机制中起重要作用。     

脓毒症患者单个核细胞Toll样受体4表达与内毒素耐受的关系

目的观察革兰阴性菌感染所致脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达与内毒素耐受之间的关系。方法以重症监护病房治疗的32例革兰阴性菌感染所致脓毒症患者为研究对象,另选20例为健康对照组。两组入选人员均晨起空腹采血,分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪技术检测单个核细胞表面TLR4的表达;另一部分外周血分离单个核细胞,并加入1μg/ml脂多糖(LPS)培养24h,同样进行流式细胞仪检测单个核细胞表面TLR4的表达。并应用放射免疫法测定血清及外周血单个核细胞培养液中TNF-α、IL-6的浓度。结果 (1)脓毒症组外周血单个核细胞表面TLR4表达、血清细胞因子TNF-α、IL-6浓度均明显高于健康对照组(均P<0.001)。(2)脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后培养上清液中TNF-α、IL-6的浓度显著低于健康对照组(均P<0.05),脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后TLR4表达较刺激前轻度下调,但刺激前后组间无统计学差异(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血单个核细胞体外给予大剂量LPS刺激后可以产生内毒素耐受,但这种现象不能单纯用TLR4的表达下调解释,其可能存在更复杂的机制。内毒素耐受状况下,单个核细胞表现为促炎因子表达的明显下调。     

急性髓细胞性白血病患者外周血单个核细胞CD28mRNA的表达

背景:大量研究显示,肿瘤患者外周血T细胞表面共刺激分子CD28蛋白表达存在差异,提示共刺激通路异常可能与恶性肿瘤的发生进展有关.目的:观察急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞共刺激信号分子CD28 mRNA在中的表达.方法:急性髓细胞性白血病患者80例,其中M0型7例,M1型6例,M2型18例,M3型15例,M4型17例,M5型9例,M6型8例.并根据急性白血病疗效标准将80例患者分为完全治愈组、缓解组、未缓解组.采用Taqman探针实时荧光定量PCR检测80例患者及76名健康人群外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达.结果与结论:急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞M1,M3和M4亚型中的CD28 mRNA表达量低于健康人群 (P < 0.05);急性髓细胞性白血病未缓解组中CD28 mRNA低于健康人群 (P < 0.05),完全治愈组和缓解组中CD28 mRNA表达与健康人群差异无显著性意义.说明急性髓细胞白血病患者外周血单个核细胞存在CD28 mRNA表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后有关.     

急性髓细胞性白血病患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

背景：大量研究显示,肿瘤患者外周血T细胞表面共刺激分子CD28蛋白表达存在差异,提示共刺激通路异常可能与恶性肿瘤的发生进展有关。目的：观察急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞共刺激信号分子CD28 mRNA在中的表达。方法：急性髓细胞性白血病患者80例,其中M0型7例,M1型6例,M2型18例,M3型15例,M4型17例,M5型9例,M6型8例。并根据急性白血病疗效标准将80例患者分为完全治愈组、缓解组、未缓解组。采用Taqman探针实时荧光定量PCR检测80例患者及76名健康人群外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达。结果与结论：急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞M1,M3和M4亚型中的CD28 mRNA表达量低于健康人群（P〈0.05）;急性髓细胞性白血病未缓解组中CD28 mRNA低于健康人群（P〈0.05）,完全治愈组和缓解组中CD28 mRNA表达与健康人群差异无显著性意义。说明急性髓细胞白血病患者外周血单个核细胞存在CD28 mRNA表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后有关。     

紫癜性肾炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3和4的信号转导途径

背景：目前关于Toll样受体3和Toll样受体4介导的信号转导通路在紫癜性肾炎的发病机制中的作用尚不清楚。 目的：分析Toll样受体3和Toll样受体4在过敏性紫癜和紫癜性肾炎发病机制中的作用。方法：选取过敏性紫癜患儿64例,分为过敏性紫癜无肾损害组36例及过敏性紫癜性肾炎组28例,另选健康儿童30例作为正常对照组。实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4、髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素12 mRNA的基因相对表达量;应用流式细胞术检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4蛋白表达率。结果与结论：①过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组（P 〈 0.05）。紫癜性肾炎组Toll样受体4 mRNA及蛋白表达均显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。②过敏性紫癜组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达均显著高于正常对照组（P 〈 0.05）,白细胞介素12 mRNA的表达显著低于正常对照组（P 〈 0.05）;紫癜性肾炎组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）,紫癜性肾炎组白细胞介素12 mRNA的表达显著低于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。③过敏性紫癜组患儿外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA与蛋白表达呈正相关（r=0.60,P 〈 0.01）;过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA与髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6表达均呈正相关（P 〈 0.01）,与白细胞介素12 mRNA表达呈负相关（r=-0.66,P 〈 0.01）。提示Toll样受体4可能通过髓样细胞分化因子88依赖信号转导途径介导过敏性紫癜的免疫发病机制,Toll样受体4的过度活化可能与过敏性紫癜的肾损伤有关。     

外周血单个核细胞Toll样受体的表达与冠状动脉病变程度的关系

目的观察冠状动脉造影患者外周血单个核细胞Toll样受体（TLR）1～10的表达状况及其与冠状动脉病变程度的关系。方法冠状动脉造影患者436例,根据冠状动脉病变支数,分为多支病变组93例、双支病变组172例、单支病变组98例和冠状动脉造影正常的对照组73例,用流式细胞术检测外周血单个核细胞TLR1～10的表达。用Gensini评分系统对冠状动脉造影结果进行评分。观察TLR1～10在各组中的阳性率的情况,用相关分析研究TLR1～10阳性率与冠状动脉Gensini评分的关系。结果外周血单个核细胞TLR2～6在多支病变组、双支病变组、单支病变组表达的阳性率均显著高于对照组,TLR2（86．36±13．45）％,（81．74±12．68）％,（72．89±10．37）％vs（60．76±11．56）％（均P〈0．01）;TLR3（7．05±2．47）％,（6．94±2．83）％,（7．01±2．21）%vs（5．25±2．06）％（均P〈0．05）;TLR4（39．83±8．34）％,（37．17±8．02）％,（30．35±9．78）%vs（25．86±6．48）％（P〈0．01或〈0．05）;TLR5（18．10±4．46）％,（17．31±4．92）%,（13．62±4．25）％vs（11．34±3．77）％（P〈0．01或〈0．05）;TLR6（9．71±3．60）％,（9．43±3．25）％,（8．62±3．53）％vs（6．84±3．19）％（均P〈0．01）。其中TLR2、4、5在多支病变组、双支病变组的表达阳性率均显著高于单支病变组（均P〈0．01）,其他亚型在各组间差异无统计学意义。相关分析显示,外周血中单个核细胞TLR2～6表达的阳性率与冠状动脉Gensini评分呈正相关,其相关系数分别为0．473,0．327,0．646,0．516,0．304（P〈0．05或〈O．01）。结论冠状动脉病变患者外周血中单个核细胞TLR2～6表达的阳性率增多,TLR2、4、5可反映冠状动脉病变的广泛性;冠状动脉的病变程度与TLR2～6的表达有关。     

急性白血病患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及其临床意义

OBJECTIVE: To explore the levels of serum soluble tumor necrosis factor receptors (sTNFRs) and the relationships with clinical situation, chemotherapeutic effects and TNF alpha level in acute leukemia (AL) patients. METHODS: Serum levels of sTNFRs and TNF alpha were measured by ELISA. Six parameters which might influence therapeutic effects were analyzed by logistic regression. RESULTS: 1. Serum levels of sTNFR I and sTNFR II in 31 untreated AL patients were significantly higher than those in controls(P < 0.001 and < 0.005, respectively) and in bone marrow remission (BMR) AL patients (P < 0.005 and < 0.05, respectively). The levels of sTNFR I and sTNFR II in 11 relapsed/refractory AL patients were significantly higher than those in controls(P < 0.001 and < 0.05, respectively), but were not different from those in untreated AL patients. 2. Serum levels of sTNFR I in untreated ALL patients were significantly higher than those in ANLL patients (P < 0.05). 3. High levels of serum sTNFR I were more common in patients with high leukocyte count(> or = 100 x 10(9)/L) and high levels of serum sTNFR II were more common in patients with splenomegaly. Levels of the two sTNFRs positively correlated with blasts in peripheral blood (P < 0.001 and < 0.05, respectively). 4. The level of TNF alpha in 31 untreated AL patients significantly correlated with the level of sTNFR I (r = 0.440, P < 0.05). 5. The BMR rate was higher in those serum sTNFR I level < 2.0 micrograms/L than in those > or = 2.0 micrograms/L(P < 0.05). 6. Of the six parameters which might influence AL therapeutic effects, only sTNFR I < 2.0 micrograms/L was predictive. CONCLUSION: High levels of serum sTNFRs in AL patients might be derived from leukemic cells and predicted an adverse prognosis.     

Tumor necrosis factor downregulates granulocyte-colony-stimulating factor receptor expression on human acute myeloid leukemia cells and granulocytes.

Tumor necrosis factor (TNF) inhibits granulocyte-colony-stimulating factor (G-CSF)-induced human acute myeloid leukemia (AML) growth in vitro. Incubation of blasts from three patients with AML in serum-free medium with TNF (10(3) U/ml), and subsequent binding studies using 125I-G-CSF reveal that TNF downregulates the numbers of G-CSF receptors by approximately 70%. G-CSF receptor numbers on purified blood granulocytes are also downmodulated by TNF. Downregulation of G-CSF receptor expression becomes evident within 10 min after incubation of the cells with TNF at 37 degrees C and is not associated with an apparent change of the dissociation constant (Kd). The TNF effect does not occur at 0 degrees C and cannot be induced by IL-2, IL-6, or GM-CSF. TNF probably exerts its effect through activation of protein kinase C (PKC) as the TNF effect on G-CSF receptor levels can be mimicked by 12-O-tetradecanoylphorbol-13- acetate. The PKC inhibitor Staurosporine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) as well as protease inhibitors can completely prevent G-CSF receptor downmodulation. Thus, it appears TNF may act as a regulator of G-CSF receptor expression in myeloid cells and shut off G-CSF dependent hematopoiesis. The regulatory ability of TNF may explain the antagonism between TNF and G-CSF stimulation.