宫颈癌差异表达蛋白的相关性研究

目的筛查宫颈癌组织中差异表达蛋白,探讨survivin基因与宫颈癌发生发展的关系。方法利用蛋白阵列方法分析宫颈癌组织与正常宫颈组织中蛋白表达的差异;将体外培养的宫颈癌Hela细胞分为对照组、空质粒组和实验组,转染survivin siRNA表达载体后,利用半定量RT-PCR和Western blotting方法检测各组细胞survivin基因的转录及蛋白表达情况;MTT法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果正常宫颈组织与宫颈癌组织间有25种蛋白的表达存在明显差异;体外实验结果显示,对照组与空质粒组survivin基因的转录与蛋白表达无明显变化,而pGCsi-sur组survivin基因转录和蛋白水平明显下降;MTT结果显示,pGCsi-sur组细胞增殖速度明显下降(P0.01);流式细胞术检测显示,与对照组相比,pGCsi-sur组G1期细胞比例增加,G2期和S期细胞比例减少,并可检测到明显凋亡。结论宫颈癌组织与正常宫颈组织存在差异表达蛋白;survivin基因与宫颈癌的发生存在一定的相关性。     

p53基因诱导白血病细胞凋亡的机制研究

目的：探讨p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α、端粒酶活性、Bcl-2表达的改变及其意义。方法：利用脂质体将温敏型p53基因[pN53cG(Val135)]导入p53基因缺失的白血病细胞系HL-60、K562细胞，经G418筛选，获得稳定表达p53蛋白的抗性克隆细胞HL-60pN53cG，K562-pN53cG细胞。采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF-β1水平和端粒酶活性及。TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:①外源性野生型p53基因诱导细胞凋亡过程中内源性。TGF-β1和TNF-α mRNA表达上调，bcl-2及hTERT mRNA表达下调，细胞培养上清TGF-β1蛋白水平明显升高，端粒酶活性水平下降；②TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS能够明显抑制野生型p53基因诱导细胞凋亡的发生，并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论：p53基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF-β1和TNF-α水平，下调hTERT mRNA表达及端粒酶活性，抑制bcl-2基因表达而发挥作用。     

野生型p53基因可以增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性研究

目的评价野生型p53基因过表达的胶质瘤细胞对替莫唑胺和X射线敏感性的研究。方法利用脂质体转染试剂将pcDNA3.1(+)p53质粒转染入胶质瘤细胞中,检测转染效率后,给予替莫唑胺和X射线处理,并检测凋亡。结果野生型p53蛋白可以明显增加胶质瘤细胞对射线及替莫唑胺的凋亡率,且相对于X射线而言,p53蛋白更能促进替莫唑胺对胶质瘤细胞的凋亡作用(P<0.01)。结论替莫唑胺可能通过p53介导的凋亡通路调控了胶质瘤细胞的凋亡。     

BML-111下调骨桥蛋白对脂多糖诱导的Hela细胞增殖的影响及其机制

目的:研究脂氧素类似物BML-111对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的宫颈癌细胞株Hela细胞增殖及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法:分别用100、10、1、0.1μg/m L LPS刺激Hela细胞,MTT方法检测其对细胞存活率的影响;Western blot免疫印迹法检测LPS对Hela细胞OPN及p53蛋白表达的影响。Hela细胞分4组:(1)空白组;(2)LPS组;(3)LPS+BML-111组;(4)LPS+BML-111+Boc-2(BML-111受体FPR2/ALX的阻断剂)组。MTT方法检测BML-111对LPS诱导的Hela细胞存活率的影响;Western blot免疫印迹法检测BML-111对LPS诱导的Hela细胞OPN及p53(增殖指标)蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,100、10、1、0.1μg/m L LPS均能明显促进Hela增殖及OPN、p53蛋白表达(P<0.05),但不同浓度组间比较差异无显著性(P>0.05)。BML-111能明显抑制LPS诱导的Hela细胞存活率,并能抑制OPN及p53蛋白的表达,Boc-2能阻断这种效应。结论:BML-111能抑制LPS诱导Hela细胞增殖,其作用可能是通过与受体结合,进而抑制OPN下调p53实现。     

直流小电场对肺癌细胞凋亡的诱导作用

目的观察应用直流电疗法对肺癌细胞凋亡的影响,研究直流小电场对于肺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法应用体外直流小电场作用于肺腺癌细胞系A549,观察其对肺癌细胞凋亡和重要基因p53、Rb以及E2F1表达的影响。结果直流小电场对肺癌细胞系A549有明显的诱导作用,200mV/mm和250mV/mm组癌细胞大量脱落,电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多(F=795.372,P=0.000)。电场组p53、Rb基因mRNA表达明显升高,E2F1基因mRNA表达明显下降。结论直流小电场对肺癌细胞系A549具有明显的凋亡诱导作用并可能与p53、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

直流小电场对肺癌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察应用直流电疗法对肺癌细胞凋亡的影响，研究直流小电场对于肺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法 应用体外直流小电场作用于肺腺癌细胞系A549，观察其对肺癌细胞凋亡和重要基因p53、Rb以及E2F1表达的影响。结果 直流小电场对肺癌细胞系A549有明显的诱导作用，200mV/mm和250mV/mm组癌细胞大量脱落，电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多（F=795.372,P=0.000）。电场组p53、Rb基因mRNA表达明显升高，E2F1基因mRNA表达明显下降。结论 直流小电场对肺癌细胞系A549具有明显的凋亡诱导作用并可能与p53、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

突变型与野生型c—myc在非p53依赖性通路中对Bim基因表达的影响

目的探讨突变型与野生型c-myc基因在非p53依赖性通路中对Bim基因表达调控及细胞凋亡的诱导功能。方法分别用携带突变型与野生型c-myc基因慢病毒载体感染p53缺失型乳癌HCCl937细胞，并得到二者过表达的稳定细胞株，以未感染组及感染不携带cmyc基因的慢病毒细胞做空白对照和感染对照，RT-PCR检测突变型与野生型c-myc及Bim基因mRNA表达，MTT、TUNEL检测突变型与野生型c-myc基因过表达乳癌HCCl937细胞增殖与凋亡情况。结果RT-PCR结果显示，突变型组与野生型组cmyc基因mRNA过表达，野生型组Bim基因mRNA表达量与突变型组比较，差异有显著性（F=125．191、157．974，P％0．05）。突变型组细胞增殖活性显著高于野生型组（F=769，64，P％0．05）。突变型组与两对照组细胞凋亡率较低，三者相比差异无显著性，野生型组细胞凋亡率显著高于突变型组与两对照组（F=61．57，P％0．05）。结论非p53依赖性通路中，野生型c-myc基因过表达能明显上调Bim基因表达，通过Bim诱导细胞凋亡，而突蛮后此作用丧失,致瘤件增高。     

脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响

背景:脉冲电场对肿瘤细胞侵袭转移能力是否具有抑制作用尚不十分清楚.目的:探讨不同强度脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响及可能的机制.方法:以场强分别为0,500,1 000和1 500 V/cm的脉冲电场作用人宫颈癌Hela细胞后,采用平板克隆形成实验,观察脉冲电场对细胞克隆能力的影响;采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和转移实验,观察脉冲电场对细胞侵袭和转移能力的影响;采用RT-PCR法检测宫颈癌Hela细胞中基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达情况.结果与结论:脉冲电场作用后,宫颈癌Hela细胞的克隆能力受到抑制;细胞侵袭和转移能力明显降低;基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达均明显减弱,且有电场强度依赖性.结果表明,脉冲电场能抑制人宫颈癌Hela细胞的侵袭转移能力,其机制可能与降低RhoC和基质金属蛋白酶2的表达有关.     

脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响

背景：脉冲电场对肿瘤细胞侵袭转移能力是否具有抑制作用尚不十分清楚。目的：探讨不同强度脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响及可能的机制。方法：以场强分别为0,500,1000和1500V/cm的脉冲电场作用人宫颈癌Hela细胞后,采用平板克隆形成实验,观察脉冲电场对细胞克隆能力的影响;采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和转移实验,观察脉冲电场对细胞侵袭和转移能力的影响;采用RT-PCR法检测宫颈癌Hela细胞中基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达情况。结果与结论：脉冲电场作用后,宫颈癌Hela细胞的克隆能力受到抑制;细胞侵袭和转移能力明显降低;基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达均明显减弱,且有电场强度依赖性。结果表明,脉冲电场能抑制人宫颈癌Hela细胞的侵袭转移能力,其机制可能与降低RhoC和基质金属蛋白酶2的表达有关。     

褐藻多糖硫酸酯通过调控PCNA-AS1表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨褐藻多糖硫酸酯对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hela细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中PCNA-AS1基因表达水平。转染PCNA-AS1小干扰RNA或PCNA-AS1过表达载体至Hela细胞后,上述相同方法观察干扰PCNA-AS1表达或过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯处理对Hela细胞抑制率、凋亡率及CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达的影响。结果褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白及PCNA-AS1表达水平显著降低(P0.05)。干扰PCNA-AS1表达后,Hela细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯可抑制宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA-AS1表达有关。     

5，7-二甲氧基白杨素对体外培养人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

[目的】观察5,7-二甲氧基白杨素（dMchR）对体外培养人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。【方法】运用A0／EB荧光双染色法观察HeLa细胞凋亡形态;采用PI单染流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率;运用FITC荧光标记流式细胞术分析HeLa细胞的Bcl-2,Bax蛋白的表达。【结果]dMChR能有效地诱导HeLa细胞凋亡;dMChR能下调HeLa细胞的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性变化。【结论]dM—ChR具有诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,这种作用与上调细胞Bax／Bcl-2比值有关。     

甘露糖结合凝集素对甲状腺癌细胞p53及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨甘露糖结合凝集素（MBL）对甲状腺癌细胞株p53及凋亡基因Bcl-2基因表达的影响。方法将0、1mg／L的重组人甘露糖结合凝集素（RhMBL）（对照组、实验组）分别作用于两种甲状腺癌细胞株（甲状腺乳头状癌细胞和甲状腺滤泡状癌细胞）,利用蛋白印记（WesternBlot）检测p53、Bcl-2的表达。结果重组人甘露糖结合凝集素作用于甲状腺癌细胞株后,可使p53及Bcl-2蛋白相对表达量下调。（1）甲状腺乳头状癌细胞：p53蛋白对照组的表达量为1．51±0．29、实验组为0．74±O．07,两组比较差异有统计学意义（t=7．63,P=0．040）;Bcl-2蛋白对照组的表达量为1．20±0．07,实验组为0．59±0．04,两组比较差异有统计学意义（t=6．28,P=0．001）。（2）甲状腺滤泡状癌细胞：p53蛋白对照组的表达量为0．88±O．14,实验组为0．35±0．08,两组比较差异有统计学意义（t=3．29,P=0．003）;Bcl-2蛋白对照组的表达量为1．07±0．11,实验组为0．33±0．06,两组比较差异有统计学意义（t=5．73,P=0．000）。结论MBL在其诱导甲状腺癌细胞凋亡、抑制其增殖的的过程中,Bcl-2和p53可能发挥着一定的作用。     

Silymarin induces apoptosis primarily through a p53-dependent pathway involving Bcl-2/Bax, cytochrome c release, and caspase activation

Silymarin, a plant flavonoid, has been shown to inhibit skin carcinogenesis in mice. However, the mechanism responsible for the anti-skin carcinogenic effects of silymarin is not clearly understood. Here, we report that treatment of JB6 C141 cells (preneoplastic epidermal keratinocytes) and p53+/+ fibroblasts with silymarin and silibinin (a major constituent of silymarin) resulted in a dose-dependent inhibition of cell viability and induction of apoptosis in an identical manner. Silymarin-induced apoptosis was determined by fluorescence staining (8-64% apoptosis) and flow cytometry (12-76% apoptosis). The silymarin-induced apoptosis was primarily p53 dependent because apoptosis occurred to a much greater extent in the cells expressing wild-type p53 (p53+/+, 9-61%) than in p53-deficient cells (p53-/-, 6-20%). The induction of apoptosis in JB6 C141 cells was associated with increased expression of the tumor suppressor protein, p53, and its phosphorylation at Ser15. The constitutive expression of antiapoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xl were decreased after silymarin treatment, whereas the expression of the proapoptotic protein Bax was increased. There was a shift in Bax/Bcl-2 ratio in favor of apoptotic signal in silymarin-treated cells, which resulted in increased levels of cytochrome c release, apoptotic protease-activating factor-1, and cleaved caspase-3 and poly(ADP-ribose) polymerase in JB6 C141 cells. The shift in Bax/Bcl-2 ratio was more prominent in p53+/+ fibroblasts than in p53-/- cells. Silymarin-induced apoptosis was blocked by the caspase inhibitor (Z-VAD-FMK) in JB6 C141 cells which suggested the role of caspase activation in the induction of apoptosis. These observations show that silymarin-induced apoptosis is primarily p53 dependent and mediated through the activation of caspase-3.     

间充质干细胞条件培养基对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的 观察人脐带间充质干细胞条件培养基(MSC-CM)对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞(HPV18 HeLa细胞)凋亡相关基因的调控作用,以及对HPV18 HeLa细胞凋亡的影响。方法 制备MSC-CM,设置空白组、低剂量组和高剂量组,配制相应浓度分别为0%、20%和60%的MSC-CM处理HPV18 HeLa细胞,使用CCK-8法、克隆形成实验检测细胞活力和克隆形成能力;磷脂结合蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法凋亡染色和流式细胞术检测细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因mRNA表达量。结果 与空白组相比,在低剂量组或高剂量组的MSC-CM作用下,HPV18 HeLa细胞的生长活性和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高(P均< 0.05),且高剂量组作用效果均比低剂量组明显(P均< 0.05)。与空白组相比,HPV18 HeLa细胞在低剂量或高剂量组MSC-CM的作用下,HPV18 HeLa细胞中p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、Bax的mRNA表达量升高,而B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA表达量降低(P均< 0.05),高剂量组比低剂量组的作用效果更明显(P < 0.05)。结论 MSC-CM能诱发HPV18 HeLa细胞凋亡,可能与p53、Caspase-3、Caspase-9、Bax以及Bcl-2等基因表达差异相关。     

miR-22修饰的骨髓间充质干细胞外泌体抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨miR-22修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法扩增培养从SD大鼠骨髓中分离的BMSCs,将携带miR-22重组慢病毒载体及其阴性对照(miR-NC)载体分别转染至BMSCs,并提取转染后BMSCs的外泌体。将60只SD大鼠随机分为Sham组、AMI组、Exo BMSCs组、Exo BMSCs/miR-NC组和Exo BMSCs/miR-22组,每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射外泌体进行干预。干预72 h后,采用超声心动图监测大鼠心脏功能;TTC染色观察大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡水平;qRT-PCR检测心肌组织中miR-22及p53 mRNA表达水平;Western blot检测心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶剪切体(Cleaved-caspase-3)及p53蛋白表达水平。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心脏功能明显降低(P <0.05),心肌梗死面积(%:1.16±0.84 vs.38.68±5.31)和心肌细胞凋亡率(%:9.04±1.95 vs.66.70±5.92)明显增加(P <0.05),心肌组织中miR-22和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),而p53、Bax和Cleavedcaspase-3等蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与AMI组比较,各外泌体干预组大鼠心功能明显改善(P <0.05),心肌梗死面积(%:38.68±5.31 vs.23.54±3.94,22.33±4.12,13.79±2.25)和心肌细胞凋亡率(66.70±5.92 vs.43.73±3.39,42.67±2.87,30.73±2.97)明显降低(P <0.05),心肌组织中miR-22以及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),而p53、Bax和Cleaved-caspase-3等蛋白表达水平明显降低(P <0.05),其中Exo BMSCs/miR-22组大鼠各指标改善情况均优于Exo BMSCs组和Exo BMSCs/miR-NC组。结论 miR-22修饰的BMSCs外泌体可有效抑制p53介导的心肌细胞凋亡,从而改善AMI大鼠的心功能。     

凋亡相关基因Bcl-2及Bax在实验性糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡中的作用定位、定性、定量分析

背景近年来的研究表明,细胞凋亡可能与糖尿病性阴茎勃起功能障碍的病理过程有关. 目的应用大鼠糖尿病模型,观察抑制凋亡基因Bcl-2和凋亡诱导基因Bax在糖尿病大鼠阴茎组织中的表达. 设计随机对照实验. 单位佳木斯大学中心实验室. 对象选取纯系成年雄性Wistar大鼠50只.随机分为正常对照组10只,造模组40只,造模组再根据造模后大鼠是否发生糖尿病分为四氧嘧啶组9只和糖尿病组12只. 方法实验于2003-01/03在佳木斯大学中心实验室完成.造模组大鼠以20g/L四氧嘧啶50 mg/kg行尾静脉注射,48 h后于大鼠尾尖取血测定血糖和尿糖.以血糖浓度≥16.67 mmol/L,尿糖+++～++++的大鼠确定为糖尿病模型.发生糖尿病的大鼠为糖尿病组,未发生糖尿病的大鼠为四氧嘧啶组,死鼠剔除.各组大鼠于实验前、实验后48 h,2,4,6和8周测血糖和尿糖.8周处死大鼠并取阴茎海绵体,切取长0.5 cm中段阴茎海绵体放入10g/L中性甲醛溶液固定24 h之后,切取5～7 μm石蜡切片.细胞凋亡检测用原位末端标记法,Bcl-2和Bax的基因表达用免疫组织化学方法检测. 主要观察指标各组大鼠勃起组织细胞凋亡和Bcl-2及Bax基因的表达结果.结果19只大鼠造模后死亡,进入结果分析31只.①各组大鼠勃起组织细胞凋亡情况糖尿病组凋亡率显著高于正常对照组和四氧嘧啶组(16.26±6.63)%,(0.38±0.02)%,(0.40±0.03)%,(q=4.45,P＜0.01).②各组大鼠勃起组织Bcl-2基因的表达结果糖尿病组显著低于正常对照组和四氧嘧啶组[(12.04±2.30)%,(20.88±3.02)%,(21.23±2.58)%,(q=4.45,P＜0.01)],③各组大鼠勃起组织Bax基因的表达结果糖尿病组明显高于正常对照组和四氧嘧啶组[(18.35±2.00)%,(9.33±0.56)%,(10.32±0.63)%,(q=4.45,P＜0.01)].④Bcl-2/Bax比值糖尿病组显著低于正常对照组和四氧嘧啶组.结论糖尿病大鼠勃起组织细胞凋亡率增加,提示细胞凋亡与糖尿病性勃起功能障碍发病有关,Bcl-2/Bax下凋提示Bcl-2和Bax共同参与糖尿病勃起组织细胞凋亡.     

自然流产蜕膜、绒毛组织细胞凋亡与p53、Bax、Bcl-2蛋白表达的关系

目的:从细胞凋亡角度探讨早期自然流产发病机制。方法:标本取自在空军总医院妇科就诊行流产的患者,自然流产组蜕膜及绒毛标本23例,并以正常早孕蜕膜及绒毛标本22例为对照组。采用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测p53、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果:与对照组比较,自然流产组蜕膜及绒毛组织细胞凋亡指数均明显增加(P<0.01),p53及Bax蛋白的表达也均明显增加(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论:细胞凋亡过度为自然流产发病机制之一,p53通过Bax/Bcl-2途径参与了自然流产蜕膜及绒毛组织细胞的凋亡调节。     

联合转染P53、AS基因对K562细胞增殖的抑制作用

本研究观察联合转染p53、血管生成抑素(angiostattn,AS)基因对人K562细胞的抑制作用,并初步探讨其机制.用脂质体转染法将pVITRO2-hp53-hAS转染K562细胞17天后,以RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达,通过MTT生长曲线、流式细胞术检测细胞周期来观察细胞生物学改变;用细胞免疫化学观察VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表达差异.结果表明转染成功后目的基因在细胞中获得稳定表达,目的基因转染组细胞上升幅度均比空载体转染组细胞低(p＜0.05),且双基因组细胞上升幅度(最后1天的A290 nm值0.264±0.011)比p53组(最后1天的A290 nm值0.652±0.039)和AS组(最后1天的A290 nm值0.604±0.017)低(p＜0.05).转染后,VEGF和Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达加强.结论联合转染p53和AS基因对K562细胞增殖有较强的抑制作用,且比单独转染组作用强,两者协同作用的机制可能是共同影响bcl-2、bax表达的途径.     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

超声辐照载羟基喜树碱微泡对肝癌SMMC-7721 细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 研究超声辐照载羟基喜树碱微泡对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法 SMMC-7721细胞随机分为6组,即对照组、空白脂质微泡+超声组、载羟基喜树碱微泡组、羟基喜树碱组、羟基喜树碱+超声组及载羟基喜树碱微泡+超声组.采用Annexin V-FITC/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡状况;免疫细胞化学法检测Bel-2、Bax蛋白表达.结果 载羟基喜树碱微泡+超声组用Annexin V-FITC/PI检测细胞早期凋亡率为(12.18±1.38)%;TUNEL法显示染成棕黄色的凋亡细胞,细胞中晚期凋亡率为(34.25±1.83)%;免疫细胞化学法检测Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bel-2/Bax比值明显下降.以上结果与其他组的检测结果相比,差异具有统计学意义.结论 超声辐照载羟基喜树碱微泡能明显诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值有关.