聚乙二醇对利福平-聚乳酸-羟基乙酸聚合物缓释微球性能的影响

背景：聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球具有良好的生物相容性,是优良的药物缓释载体,但缓释微球的突释问题严重影响了其临床应用。
　　目的：观察聚乙二醇对利福平-聚乳酸-羟基乙酸聚合物缓释微球特征、载药率、包封率、体外释放规律及突释的影响。
　　方法：以高分子材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物作为载体,采用复乳化-溶剂挥发法制备聚乙二醇-利福平-聚乳酸-羟基乙酸聚合物微球(实验组)和利福平-聚乳酸-羟基乙酸聚合物微球(对照组)。扫描电子显微镜观察两组聚合物缓释微球特征,高效液相色谱法检测两组微球在不同时段模拟体液中的利福平药物浓度及累计释放量,计算两组微球的载药量、包封率。
　　结果与结论：与对照组比较,实验组微球表面光滑、粒径减小、分散良好,包封率和载药量明显提高。实验组微球3 h内药物释放量最大,1 d左右药物释放趋于平稳稳定状态,1 d药物累计释放量小于20%;对照组微球3 h内药物释放量最大,约为实验组的1.5倍,1 d左右药物释放也趋于平稳状态。表明聚乙二醇可改善利福平-聚乳酸-羟基乙酸聚合物缓释微球的成球率,减小其粒径,增加其载药量和包封率,控制其突释现象。     

胸腺五肽-聚乳酸-羟基乙酸微球的制备及释药性能

背景:国内外所用的胸腺肽多为注射液,其保存、运输困难,成本升高,给患者带来不便,限制了它的广泛使用.因此胸腺肽口服缓释制剂的研究正逐步受到人们的关注.目的:观察胸腺五肽-聚乳酸-羟基乙酸缓释微球的释药性能.设计、时间及地点:体外观察实验,于2005-02/2007-10在武警医学院化学教研室科研室完成.材料:胸腺五肽标准品(含量99.17%)由成都川抗派德生物医药科技有限公司提供,胸腺五肽(含量97.16%)由杭州中肽生化有限公司提供,聚乳酸-羟基乙酸共聚物(50:50,Mr10 000)由山东省医疗器械研究院提供,聚乙烯醇(聚合度1 750±50)由天津市天大化工实验厂提供,三氟乙酸由上海吉尔生化公司提供,二氯甲烷(分析纯).方法:称胸腺五肽溶丁二聚乙烯醇溶液为内水相;溶解于二氯甲烷中,超声形成W/O初乳;将初乳加入聚乙烯醇溶液快速搅拌到W/ONV复乳,再缓慢搅拌,待二氯甲烷完全挥发后得固化胸腺五肽-聚乳酸-羟基乙酸缓释微球.主要观察指标:①扫描电镜观察微球的形态.②反相高压液相色谱法测定胸腺五肽含量,计算微球载药量、包封率.③体外释药情况.结果:制备的微球表面光滑,球体均匀:微球中胸腺五肽的载药量和包封率分别为1.87%和67%左右;微球在10d内累积释药率达70%.结论:胸腺五肽-聚乳酸-羟基乙酸缓释微球对胸腺五肽具有明显的缓释作用.     

聚乳酸-羟基乙酸包载眼镜蛇毒细胞毒素缓释微球的表征及体外释放行为

背景:眼镜蛇毒细胞毒素具有强烈的细胞毒活性,但缺乏特异性,全身用药可导致严重毒副作用,而采用缓释载体包载进行间质化疗可达到提高肿瘤局部治疗效应,并且减轻全身毒性.目的:制备眼镜蛇毒细胞毒素一聚乳酸-羟基乙酸微球,观察其一般性质和体外释约特性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-12/2008-05在福建医科大学医药生物工程中心完成.材料:聚乳酸-羟基乙酸、聚乙烯醇由中国科学院成都有机化学有限公司提供,广东产中华眼镜蛇毒.方法:采用分子筛、离子交换分离,反相疏水高效液相色谱方法纯化细胞毒素,MTT法榆测细胞毒活性,复乳-溶剂挥发法制备载药微球.主要观察指标:扫描电镜观察载药微球的表面形态,激光粒径仪测微球粒径,计算包封率、载药量、体外释放周期.结果:纯化的眼镜蛇细胞毒素具有明显的细胞毒作用,对HepG2细胞12,24 h的IC50分别为1.43,1.12 mg/L.复乳法制备微球表面光滑圆整,粒径2～8 μ m,包封率和载药率分别为(74.10±9.92)%和(0.72±0.09)%,21 d药物累积释放63.3%,释放细胞毒素保持较好的生物学活性.结论:采用复乳一溶剂挥发法可制备具有较高包封率、良好缓释效果、保持完整生物学活性的眼镜蛇毒细胞毒素-聚乳酸-羟基乙酸微球.     

载溶菌酶聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球的形成机制

目的：分析载溶菌酶聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球的形成机制. 方法：实验于2005-03/07在暨南大学生物材料研究室完成.采用双乳液法（W/O/W法）制备聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球.通过改变微球的制备条件[初乳时间（15,30,45,60,120 s）、初乳速度（6 000,10 000,14 000,18 000,22 000 r/min）、聚乙烯醇质量浓度（0,5,25,50,100 g/L）、复乳时间（0.5,2.5,5,8,11.5 h）、复乳速度（200,400,600,800,1 000 r/min）、初始药物质量浓度（0,20,40,60,80,100 g/L）、内/外水相添加剂（吐温-80、葡聚糖、蔗糖、氯化钠）、油相潜溶剂（丙酮、甲醇、乙醇、二甲基亚砜）],制备不同表面结构和内部结构的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球,扫描电镜下观察微球内/外部结构. 结果：制备出不同表面结构和内部结构的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球.微球表面主要呈3种状态：光滑致密、光滑多孔或粗糙多孔.微球的内部呈多孔洞或核壳结构.①初乳速度较低时（＜10 000 r/min）,微球表面以光滑为主,内部多孔,中间有一大的核心;初乳速度较高时（＞ 18 000 r/min）,微球表面较为粗糙,内部孔洞致密,呈蜂巢状.②不同初乳时间制备的微球仍以表面平滑为主,有的微球表面有孔洞,大小在几个微米左右,微球内部仍然是蜂巢状结构.③聚乙烯醇质量浓度影响复乳的稳定性,从而对微球的形成过程影响很大.④复乳时间对微球形成过程的影响较为明显,反应时间过短（＜0.5 h）,微球未充分固化,增加反应时间,球形度相对提高.⑤复乳速度直接影响到复乳体系的稳定.速度较低时（200 r/min）,形成的微粒体积较大,易形成不规整的大块聚集体.随着搅拌速度的增加,微粒球形度也相应提高.但是当速度过大时（1 000 r/min）,微粒容易破裂形成碎散的不规则聚集体.⑥初始药物质量浓度对微球形成过程的影响很大,药物质量浓度高时（100 g/L）,微球表面粗糙,碎片较多;药物质量浓度为60 g/L时,微球表面光滑,球形度很好.⑦不同的内水相添加剂（吐温-80、葡聚糖、蔗糖、氯化钠）制备的微球球形度均较好,微球表面平滑,但是存在部分微球相互粘连的情况.外水相添加蔗糖和氯化钠,微球的球形度较好,微球之间无粘连.但外水相添加吐温-80,形成的产物体积较大且形成许多不规则的聚集体.外水相添加葡聚糖形成的微球表面粗糙且含较多碎屑.⑧选用不同的油相潜溶剂（丙酮、甲醇、乙醇、二甲基亚砜）均存在部分的微球融合现象. 结论：从多角度系统阐述了载溶菌酶聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球的形成机制.不同的制备条件对微球的结构影响各异,微球的尺寸分布及形态性能是初乳与复乳过程中各种影响因素综合作用的结果.     

聚乳酸-羟基乙酸共聚物吗啡微球的制备及其镇痛作用

背景:药物微球因其对特定器官和组织的靶向性及微粒中药物释放的缓释性而成为一种新的给药系统.国内外学者对局麻药缓释给药系统进行了一系列研究,但麻醉性镇痛药的微球制剂末见报道.目的:制各以聚乳酸-羟基乙酸共聚物为载体的吗啡生物可降解缓释微球制剂,并检测其镇痛作用.方法:采用溶剂挥发法制备吗啡聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球,并计算其载药量及包封率.将雄性健康SD大鼠以数字表法随机分为3组:空白对照组(皮下注射生理盐水),阳性对照组(皮下注射盐酸吗啡注射剂)和吗啡微球组(皮下注射吗啡聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球),利用CO2激光为热刺激进行痛阈测定.结果与结论:制成的吗啡聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球为白色粉末,载药量为11.86%,药物包封产率为33%,微球可较明显延长吗啡作用时间至6 h以上.结果说明吗啡聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球明显地延长了吗啡释放时间,缓释性好,但未达到预期的理想时间,仍然需要进行改进.     

聚乳酸-羟基乙酸药物缓释体系

聚乳酸-羟基乙酸是一种具有良好生物相容性和可降解的聚合物,由于它的最终降解产物是H2O和CO2,中间产物乳酸也是体内正常糖代谢产物,所以不会在重要器官聚集,已成为被美国食品药品监督管理局(FDA)认可的一类生物降解材料。它具有较好的机械强度、弹性模量和热成型性,通过调节相对分子质量、     

复合壳聚糖纳米微球聚乳酸-羟基乙酸/纳米羟基磷灰石缓释载体系统对蛋白的缓释作用

背景：聚乳酸-羟基乙酸支架材料具有良好的生物相容性、无毒、可以良好的塑性,并具有一定的强度和韧性。但其降解产物为酸性,会影响局部pH值变化,不利组织生长。目的：制备能够良好缓释蛋白类药物的复合支架。方法：以牛血清蛋白为模型药物,以离子凝胶法制备壳聚糖微球。将微球与纳米羟基磷灰石和聚乳酸-羟基乙酸按一定比例混合,以冰粒子为致孔剂,采用粒子沥虑-冷冻干燥复合工艺制备CMs/nHA/PLGA复合缓释支架。利用扫描电镜、透射电镜、压泵仪和力学性能测试仪检测复合支架的形态和性能,并考察其在体外对蛋白类药物释放的规律。结果与结论：制备的壳聚糖纳米微球形态良好,呈规则球形或类球形,粒径分布在220～770nm,以380～650nm为多。微球对药物的载药量为39.2%,包封率为68.3%,两者均与牛血清蛋白的初始量相关,载药量随牛血清蛋白初始量的增加而增加,包封率则反之。复合支架呈白色多孔状,孔径为125～355mm,孔与孔之间联通良好,孔隙率达83.4%,压缩强度为1.4~2.1MPa,10周降解率为28.6%。PLGA/nHA支架对牛血清蛋白的2d累积释放量为85%,而壳聚糖和CMs/nHA/PLGA复合支架对牛血清蛋白的9d累积释放量分别是为48.9%和35.7%。提示制作的壳聚糖纳米微球和CMs/nHA/PLGA支架材料对牛血清蛋白有良好的缓释作用,复合支架材料形态好,强度和降解速率合适。     

复合壳聚糖纳米微球聚乳酸-羟基乙酸/纳米羟基磷灰石缓释载体系统对蛋白的缓释作用

背景:聚乳酸-羟基乙酸支架材料具有良好的生物相容性、无毒、可以良好的塑性,并具有一定的强度和韧性。但其降解产物为酸性,会影响局部pH值变化,不利组织生长。目的:制备能够良好缓释蛋白类药物的复合支架。方法:以牛血清蛋白为模型药物,以离子凝胶法制备壳聚糖微球。将微球与纳米羟基磷灰石和聚乳酸-羟基乙酸按一定比例混合,以冰粒子为致孔剂,采用粒子沥虑-冷冻干燥复合工艺制备CMs/nHA/PLGA复合缓释支架。利用扫描电镜、透射电镜、压泵仪和力学性能测试仪检测复合支架的形态和性能,并考察其在体外对蛋白类药物释放的规律。结果与结论:制备的壳聚糖纳米微球形态良好,呈规则球形或类球形,粒径分布在220～770nm,以380～650nm为多。微球对药物的载药量为39.2%,包封率为68.3%,两者均与牛血清蛋白的初始量相关,载药量随牛血清蛋白初始量的增加而增加,包封率则反之。复合支架呈白色多孔状,孔径为125～355mm,孔与孔之间联通良好,孔隙率达83.4%,压缩强度为1.4~2.1MPa,10周降解率为28.6%。PLGA/nHA支架对牛血清蛋白的2d累积释放量为85%,而壳聚糖和CMs/nHA/PLGA复合支架对牛血清蛋白的9d累积释放量分别是为48.9%和35.7%。提示制作的壳聚糖纳米微球和CMs/nHA/PLGA支架材料对牛血清蛋白有良好的缓释作用,复合支架材料形态好,强度和降解速率合适。     

载多烯紫杉醇聚乳酸-羟基乙酸微球的制备、表征及其药物稳定性

背景:目前临床使用的多烯紫杉醇注射液多采用吐温80作为增溶剂,容易导致过敏反应,且全身化疗不良反应大.采用聚乳酸-羟基乙酸包载多烯紫杉醇制备的缓释微球进行肿瘤间质化疗可提高肿瘤局部药物浓度,减轻全身不良反应.目的:制备一种用于肿瘤间质化疗的载多烯紫杉醇聚乳酸-羟基乙酸缓释微球,并考察其理化性质、体外释放及药物稳定性.方法:采用溶剂挥发法制备不同投料比载药微球,扫描电镜观察微球的表面形态、粒径,高效液相色谱法检测包封率、载药率及体外药物释放情况.将制备的微球于5,15,25 kGy 60Co 3种剂量辐照灭菌,体外细菌培养观察灭菌效果.结果与结论:制备的载药微球呈圆球形,表面光滑,分散良好,平均粒径为23.1 um.聚乳酸-羟基乙酸与多烯紫杉醇的投料比为100 mg,5 mg时可获得最佳的包封率(96 3%)和载药率(4.82%);载药微球体外4周平稳释放药物达81.6%,无明显突释效应,包裹在微球内的多烯紫杉醇结构稳定性明显提高;3种剂量60Co辐照后均未见短小芽孢杆菌生长.说明采用溶剂挥发法可制备粒径及分布适宜、释放周期较理想、药物稳定性好的载多烯紫杉醇聚乳酸-羟基乙酸缓释微球.     

壳聚糖微球/纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架制备及其蛋白缓释效果:与单纯纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸支架、壳聚糖微球的比较

背景:骨组织工程骨构建中如何使生长因子持续高效发挥作用是影响成骨速度和质量的关键,现多以各种材料的微球或支架作为缓释载体,但缓释作用有待提高.目的:实验拟制备壳聚糖微球,然后复合到纳米羟基磷灰石/聚乳酸羟基乙酸支架上,形成双重缓释作用,并测量对牛血清白蛋白的释放效果.方法:以牛血清白蛋白为模型药物,采用乳化交联法制备壳聚糖微球.将微球与纳米羟基磷灰石、聚乳酸-羟基乙酸按一定比例混合,以冰粒子为致孔剂,采用冷冻干燥法制备壳聚糖微球,纳米羟基磷灰石,聚乳酸-羟基乙酸复合支架.利用扫描电镜、激光粒度分析仪、压泵仪和力学性能测试仪检测复合支架的形态性能,考察药物在缓释支架上的体外释放规律.结果与结论:所制备的壳聚糖微球形态良好,呈规则圆球形,粒径集中分布在20～40 μum,微球药物包封率为86.5%,载药量为0.8%,随牛血清白蛋白初始用量的增加,载药量可升高至2.6%,但包封率下降至74.1%.壳聚糖微球能均匀分布在聚乳酸-羟基乙酸支架上,形成壳聚糖微球,纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架,孔径为1 00-400 μm,孔隙率>80%,压缩强度为1.1～2.3 MPa,10周降解率为26.5%.单纯纳米羟基磷灰石,聚乳酸-羟基乙酸支架其牛血清白蛋白在36 h累积释放量达85%以上,壳聚糖微球其牛血清白蛋白10 d累积释放量为33.6%,复合支架其牛血清白蛋白40 d累积释放量为81.5%.结果证实包埋壳聚糖微球的纳米羟基磷灰石,聚乳酸-羟基乙酸支架其压缩强度和降解速率合适,对蛋白类药物具有良好的缓释作用,有望作为组织工程的支架材料和生长因子的缓释载体.     

乳酸-羟基乙酸共聚物缓释微球的制备工艺与生物学性能

微球(microspheres)是一种生物物理靶向载药制剂,粒径为1～300μm.微球的载体材料按其来源可分为天然高分子材料、半合成高分子材料及合成高分子材料.在合成高分子材料中,通过采用合适的制备工艺和处方,制得的载药微球可在几周或几个月时间内以一定速率释放药物,减少给药次数,增加患者顺应性.对蛋白和多肽类药物,微球是相当理想的载药系统.微球制剂是近年来缓释剂型的研究热点,根据临床需要很多药物正被研究成微球制剂.乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]有着优良的安全性、生物相容性和可变的生物降解性,是制备微球的常用基本材料.PLGA缓释微球制剂的制备方法基本上可分为3种:溶剂挥发法、喷雾干燥法、相分离法.溶剂挥发法是常用的制备方法之一,目前PLGA微球作为多肽、蛋白类药物的载体已广泛应用于免疫学、基因治疗、肿瘤治疗、骨缺损修复、眼科等众多医学领域中.     

缓释成骨生长肽聚乳酸-聚羟乙酸共聚物微球的制备及其体外释放实验

背景:既往动物实验证实,局部或全身应用成骨生长肽,能够促进骨折愈合。但存在着半衰期短及口服生物利用率低等缺点,限制了其在临床上的应用。目的:用可吸收性生物材料包裹成骨生长肽于微球中,观察成骨生长肽在体外释放的过程及其结构变化,为控制释放系统选取合适的载体材料。设计:分组观察对比实验。单位:西安交通大学生命科学院实验室。材料:成骨生长肽由西安蓝晶生物科技公司按照Fmoc系统合成。质谱分析其纯化后纯度超过98%,Mr1523650符合理论Mr1523750),其序列分析符合理论序列。聚乳酸-聚羟乙酸共聚物(PLGA)(50∶50,Mr30000;75∶25Mr80000)由山东医疗器械研究所提供。方法:应用两种不同Mr的PLGA,用复乳溶剂挥发法包裹成骨生长肽,制备成骨生长肽PLGA微球。利用扫描电镜观察微球的表面结构及形态。应用激光粒度计数仪测量微球的粒径分布。高效液相色谱法检测成骨生长肽的包裹率、缓释时间及制备过程对多肽的结构稳定性的影响。结果:①成功制备了较均匀的圆形成骨生长肽微球。PLGA50∶50微球的平均粒径为(19.6±4.5)μm,包裹率为(83.9±4.2)%,载药率为(83.9±4.2)%;PLGA75:25微球的平均粒径为(35.8±3.6)μm,包裹率为(65.6±6.8)%,载药率为(65.6±6.8)%。②高效液相色谱法结果显示,成骨生长肽在制备过程没有发生化学结构改变及凝集,与制备前的结构一致。两种微球均有突释现象,但成骨生长肽-PLGA75∶25微球突释较重,成骨生长肽-PLGA50∶50微球能够缓释成骨生长肽56d,且累计缓释效果良好,成骨生长肽-PLGA75∶25缓释70d。成骨生长肽-PLGA50∶50微球35d的成骨生长肽累计缓释率低于成骨生长肽-PLGA75∶25,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:与成骨生长肽-PLGA75∶25缓释微球相比,成骨生长肽-PLGA50∶50缓释微球具有较好的控制释放效果,且缓释时间能够满足骨折或骨缺损愈合局部应用需要。     

乳酸-羟基乙酸共聚物缓控释微球的制备及突释成因与影响因素

背景:乳酸-羟基乙酸共聚物是一种生物可降解高分子材料,以乳酸-羟基乙酸共聚物为原料制备的载药微球和纳米粒既可提高药物的稳定性,又能实现缓释、控释和靶向释放.目的:分析乳酸-羟基乙酸共聚物缓控释微球的制备方法以及突释的成因、影响因素和改进方法.方法:应用计算机检索1990/2010中国期刊全文数据库和PubMed数据库与乳酸-羟基乙酸共聚物缓控释微球的制备及突释联系紧密的文章.结果与结论:目前乳酸-羟基乙酸共聚物缓释微球制备方法主要有单凝聚法、乳化-固化法、喷雾干燥法.造成其突释的原因首先是药物分子和聚合物分子之间的相互作用太弱,导致药物很容易从微球进入释放递质中,其次是在微球释放初期,药物从微球中的孔洞和缝隙中释放出来导致突释.影响突释程度的具体因素有乳酸-羟基乙酸共聚物的相对分子质量、浓度、微球载药量、主药理化性质、微球制备方法及制备参数等.虽然国内外对突释机制以及控制突释措施的研究都还处于初步阶段,通过对各影响因素加以适当优化与控制,可在一定程度上减少微球的突释率,突释问题应该能够得到解决和控制.     

硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球的制备及其体外性质

背景:硫酸软骨素酶ABC能够分解脊髓损伤局部持续产生的硫酸软骨素蛋白多糖,从而促进轴突的生长,但该酶性质不稳定,需要多次局部用药.目的:制备硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球,观察其体外释药特性.设计、时间及地点:重复测量设计,于2006-03/2007-01在中国科学院成都有机所和四川大学华西医学中心药理实验室完成.材料:聚乳酸-聚乙醇酸共聚物、硫酸软骨素酶ABC、CH2Cl2、硫酸软骨素B.方法:复乳法制备硫酸软骨素酶ABC缓释微球,并以生理盐水为体外释药介质.主要观察指标:扫描电镜下观察硫酸软骨素酶ABC缓释微球的形态.应用Malvern激光粒度分布测试仪测定其粒径分布并自动计算微球的平均粒径和径距.采用酶解分光光度测定硫酸软骨素酶ABC含量,并计算载药量与包封率.于0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12,14,16,18,21 d取样,绘制体外释药曲线.结果:硫酸软骨素酶ABC缓释微球形态均匀.其平均粒径5.538 ì m,径距1.479,呈正态分布.平均载药量(15.554±0.90)×10 3%,甲均包封率(53.88±1,45)%,硫酸软骨素酶ABC微球在3周内的体外累积释药分数为O.851 4,释药平稳,其最佳体外释药拟合方程为Weibull方程:Inln(1/1-Y)=0.739 61nX-1.617,R2=0.993 3.结论:所制备的硫酸软骨素酶ABC微球形态均匀.粒径分布窄,再分散性好,3周内能维持有效的药物浓度.     

包载雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒子的制备、表征及体外释放试验

背景：新型可生物降解多聚物纳米控释载药制剂能显著改善药物穿透组织能力、再分布时程和滞留时间,可能克服载药基质对血管修复的负性影响,有望避免药物洗脱支架晚期支架内血栓。目的：制备雷帕霉素-聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒子（rapamycin poly（lactic-co-glycolic）acid nanoparticles,RPM-PLGA-NPs）并观察其表征及体外控释性能。设计、时间及地点：单一样本实验于2003-03/09在中国医学科学院,中国协和医科大学,生物医学工程研究所生物医学材料重点实验室完成。材料：聚乳酸-聚乙烯醇酸共聚物50∶50由美国Birmingham Polymers公司提供。方法：以可生物降解高分子材料聚乳酸-聚乙醇酸共聚物作载药基质,超声乳化-溶剂挥发法制备RPM-PLGA-NPs,采用双室扩散池行体外药物释放试验。主要观察指标：测定平均载药量、平均包封率;激光光散射实验测定纳米粒子的粒径及分布;扫描电镜观察纳米粒子的表面形态;高效液相色谱法计算体外药物释放量、绘制累积释放曲线。结果：成功制备了平均粒径为246.8nm的RPM-PLGA-NPs,平均粒径246.8nm,粒径分布集中在208～294nm,呈窄分布;包封率大于77%,平均载药量为19.42%。体外释放近似于零级过程,至2周释放75%的药物。结论：超声乳化-溶剂挥发法制备RPM-PLGA-NPs稳定可靠,包封效率高,载药量控制稳定,粒径小、范围窄,体外释放药物恒定、具有良好的控释效能。     

Stability of insulin during the erosion of poly(lactic acid) and poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres.

In recent years, the acylation of peptides during the erosion of poly(lactic acid) and poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres has been described in the literature. To investigate whether insulin is prone to the covalent attachment of lactic or glycolic acid, insulin-loaded PLA and PLGA microspheres containing 5% bovine insulin were manufactured using a w/o/w multiple emulsion-solvent evaporation technique. Microspheres were characterized for their insulin encapsulation efficiency and release characteristics in phosphate-buffered saline (PBS) at pH 7.4 and 37 degrees C. Moreover, the stability of the peptide during 18 days of release was evaluated using HPLC and HPLC-MS techniques. The results showed that the insulin loading efficiencies of PLA and PLGA microspheres were 75.18% and 79.63%, respectively. The microspheres were spherical with relatively porous surfaces with an average diameter of 40 and 53 mum, respectively. Insulin release from the microspheres was characterized by an initial burst, which was attributed to the amount of protein located on or close to the microsphere surface. The total ion chromatogram (TIC) of insulin samples extracted after 18 days of erosion in phosphate buffer pH 7.4 at 37 degrees C revealed that deamidation was the major mechanism of instability. Surprisingly, no acylation products were found. Control experiments in concentrated lactic acid solutions confirmed a minimal reactivity of the peptide under these conditions.     

Preparation and characterization of melittin-loaded poly (DL-lactic acid) or poly (DL-lactic-co-glycolic acid) microspheres made by the double emulsion method.

The water soluble peptide, melittin, isolated from bee venom and composed of twenty-six amino acids, was encapsulated in poly (DL-lactic acid, PLA) and poly (DL-lactic-co-glycolic acid, PLGA) microspheres prepared by a multiple emulsion [(W1/O)W2] solvent evaporation method. The aim of this work was to develop a controlled release injection that would deliver the melittin over a period of about one month. The influence of various preparation parameters, such as the type of polymer, its concentration, stabilizer PVA concentration, volume of internal water phase and level of drug loading on the characteristics of the microspheres and drug release was investigated. It was found that the microspheres of about 5 microm in size can be produced in high encapsulation (up to 90%), and the melittin content in the microspheres was up to 10% (w/w). The drug release profiles in vitro exhibited a significant burst release, followed by a lag phase of little or no release and then a phase of constant melittin release. The type of polymer used was a critical factor in controlling the release of melittin from the microspheres. In this study, the rate of peptide release from the microspheres correlated well with the rate of polymer degradation. Moreover, melittin was released completely during the study period of 30 days, which agreed well with the polymer degradation rate.     

聚乙丙交酯支架的细胞相容性特点

背景:聚乳酸及其衍生物具有良好的生物相容性、降解产物无毒性、易加工、具备一定强度等优点在骨组织工程中得到越来越广泛的应用。目的:观察骨髓基质干细胞与聚乙丙交酯类支架的细胞相容性及体外贴附情况,为制备负载多种细胞因子的聚乙丙交酯类支架提供研究基础。设计:对比观察。单位:南方医科大学南方医院创伤骨科。材料:实验于2004-09/2005-06在广东省组织构建与检测重点实验室完成。选择健康2月龄雄性新西兰兔1只。实验用主要材料:聚乙丙交酯支架(中山大学高分子研究所),β-磷酸三钙(瑞士AO公司)。方法:抽取新西兰兔骨髓,用全骨髓培养法获取单核细胞,经条件培养液体外诱导、扩增。骨髓基质干细胞以1×109L-1接种于聚乙丙交酯和β-磷酸三钙上,另设不加材料的空白对照组。通过倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞生长及细胞与材料的附着情况。以MTT法、流式细胞仪等手段检测各组细胞增殖和细胞周期变化情况。主要观察指标:①相差显微镜下每日定期观察细胞生长及与材料贴附情况。②培养1,3,6d扫描电镜下观察细胞生长情况。③MTT法检测细胞增殖情况。④采用化学比色法测定碱性磷酸酶活性。⑤流式细胞仪检测2种材料对骨髓基质干细胞的细胞周期、DNA含量及倍体水平的影响,并计算样品细胞的DNA指数。结果:①细胞培养后相差显微镜观察:空白对照组培养7～10d时细胞多呈梭形,未发现接触抑制现象。聚乙丙交酯组细胞开始贴壁时间明显晚于β-磷酸三钙组,随培养时间延长,细胞在材料周围与材料表面密集生长,细胞形态为多角形,两材料组细胞生长状态及细胞形态与空白对照组相似。②细胞培养后扫描电镜观察:空白对照组培养7d的细胞仍为单层并融合成片,但多角形细胞增多,细胞表面存在颗粒状物,细胞间以微丝相连。聚乙丙交酯组培养7d时,细胞数量大为增加,胞体扁平,跨越孔隙表面,形成细胞间连结,细胞连接成片,有大量基质形成。β-磷酸三钙组培养7d时,细胞数量增加,并相互连接,表面呈单层排列,可有细胞外基质形成,细胞长入孔隙内。③细胞增殖情况:随培养时间的延长各组细胞数量都有所增加,但聚乙丙交酯组与空白对照组及与β-磷酸三钙组间差异无显著性意义(P>0.05)。④碱性磷酸酶活性:随细胞培养时间延长,检测到各组细胞的碱性磷酸酶活性均增加,但聚乙丙交酯组与空白对照组及与β-磷酸三钙组间细胞碱性磷酸酶活性差异无显著性意义(P>0.05)。⑤细胞周期情况:两种材料对兔骨髓基质干细胞的细胞周期影响不大,各组细胞皆为正常的二倍体细胞,未见异倍体细胞形成。结论:聚乙丙交酯类支架的细胞相容性较好,并可进一步作为多种细胞因子载体构建缓释型支架用于骨组织工程。