重组人骨形成蛋白2在皮肤成纤维细胞中的表达

目的 构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。方法 构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2，并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后，采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达。结果 RT-PCR显示转染后的CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞可以有效地转录BMP2 mRNA。结论 含有人BMP2 cDNA的重组质粒pRK5-hBMP2转染正常人皮肤成纤维细胞后可以有效地表达BMP2。     

成纤维细胞生长因子促进骨形成的实验研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对成骨细胞合成骨作用的影响。方法　实验分为 5组 ,每组 8孔 ,每组分别加入浓度为 0 1、1、10、10 0 μg·L-1的bFGF ,每组均设空白对照 ,分别在实验后 1、2、3、5、7天进行检测。结果　bFGF可明显促进人成骨样细胞活性 ,在 0 1～ 10 μg·L-1呈剂量依赖性 ,10 μg·L-1时bFGF的作用最强 ,10 0 μg·L-1以上者作用减弱。结论　bFGF能有效促进骨形成 ,但需和其他细胞因子协同作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌中的表达及其意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和成纤维细胞生长因子受体-4(fibroblast growth factor receptor-4，FGFR-4)在胃癌组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法，检测81例胃癌及其癌旁组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4的表达。结果：11例癌旁正常胃粘膜上皮有1例碱性成纤维细胞生长因子(9．1％)，2例成纤维细胞生长因子受体-4(18．2％)染色阳性；5例癌旁不典型增生中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性各2例(40％)；4例癌旁肠化碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别有2例(50．0％)和1例(25．0％)；81例癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别为72例(88．89％)和74例(91．36％)；癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性率明显高于癌旁肠化及不典型增生(P＜0．01)；胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4表达的水平与患者肿瘤部位、组织学类型及分化程度无关(P＞0．05)；碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色呈明显相关(P＜0．01)。结论：碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

骨形成蛋白2及骨形成蛋白4在牙胚发育中的时空表达及意义

牙齿发育初期和后期起调节作用的一些信号分子中,骨形成蛋白是与骨和牙齿形成相关的生长因子,作为形态生成信号在牙齿发育不同时期调控上皮与间充质间相互作用。牙胚发育过程中,BMP-2、BMP-4在牙胚发育各个时期的表达提示其在牙胚发育中的作用。研究表明,BMP-2、BMP-4作为上皮-间充质相互作用的继发调节信号参与牙齿发育,BMP-2参与调控牙乳头细胞分化形成成牙本质细胞;BMP-4与多种细胞因子相互作用参与调控牙型的形成。     

兔骨折骨痂中骨形态发生蛋白和成纤维细胞生长因子基因的表达

兔骨折骨痂中骨形态发生蛋白和成纤维细胞生长因子基因的表达李亚非李青马福成陈万录刘新平骨断端成骨细胞活性和血液循环状态与骨折愈合、预后密切相关。骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）有高度骨诱导活性，碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）也有促进成骨细胞增殖和毛细血管增...     

碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白在Origami2体系中的可溶表达及二者促成骨的协同效应

目的 建立优化高效的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)蛋白重组方法,阐明二者在促成骨中的协同效应.方法 优化bFGF和BMP-2成熟肽的基因序列密码子,获得适用于大肠杆菌Origami2体系表达的bFGF及BMP-2成熟肽cDNA片段;利用PCR法将bFGF成熟肽cDNA片段插入原核表达质粒pColdⅡ中,构建重组原核表达质粒pColdⅡ-bFGF;利用PCR法将BMP-2成熟肽cDNA片段插入原核表达质粒pET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-BMP-2,转入大肠杆菌Origami2中表达纯化;运用双酶切、质粒测序及Western blot技术证明Origami2表达体系的构建效果;进行细胞增殖实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)染色观察和体内成骨效率检测等,探索bFGF、BMP-2在促成骨中的协同效应.结果 双酶切和质粒测序鉴定证明成功构建重组大肠杆菌pColdⅡ-bFGF/Origami2和pET30a(+)-BMP-2/Origami2表达体系,Western blot检测发现蛋白正确表达.经过Ni-NTA亲和层析纯化后bFGF及BMP-2纯度高达90％.通过对二者比例的优化筛选,发现40 ng/mL bFGF +40 ng/mL rhBMP-2时,大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖效率、ALP活性及体内成骨效率最高,是二者促成骨的最优效组合.结论 成功构建高效表达的pCold Ⅱ-bFGF/Origami2和pET30a(+)-BMP-2/Origami2表达体系,实现了bFGF及BMP-2的高效表达.bFGF和BMP-2的优化联合应用具有促成骨协同效应.     

表达人骨形成蛋白2的成纤维细胞系的建立与鉴定

目的:建立能稳定表达BMP2的成纤维细胞系.方法:运用阳离子聚合物转染试剂,将含有人BMP2基因的真核表达载体pcDNA3.1-B2导入NIH3T3细胞,通过G418筛选获得阳性细胞克隆,RT-PCR、免疫组化和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BMP2基因的稳定转染和蛋白表达.结果:转染细胞内有BMP2mRNA的转录,胞内及胞外有BMP2蛋白的表达.结论:采用阳离子聚合物转染法可成功地将外源性hBMP2基因导入NIH3T3细胞,为进一步研究诱导牙周膜细胞骨化分化建立基础.     

膀胱癌中碱性成纤维细胞生长因子和血管形成的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子和血管形成与膀胱癌的发病及生物学行为之间关系。方法 采用免疫组化法检测了７２例膀胱癌组织和２１例正常膀胱组织中ｂＦＧＦ和第Ⅷ因子相关抗原的表达。结果 膀胱癌组织中ｂＦＧＦ表达和微血管密度（ＭＶＤ）均显著高于正常膀胱组织，而且两者与肿瘤病理分级分期密切相关。肿瘤复发者的ｂＦＧＦ表达和ＭＶＤ均显著高于无复发者。ｂＦＧＦ表达和ＭＶＤ均显著高于无复发者；ｂＦＧＦ强阳性表达者     

成纤维细胞生长因子10 mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达

目的:研究成纤维细胞生长因子10 mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达,探讨其在银屑病发病中的作用机制.方法:应用原位杂交法检测FGF10 mRNA在22例正常皮肤组织、银屑病皮损和未受累皮肤中的表达和分布.结果:原位杂交法检测发现,在22例正常皮肤组织、银屑病皮损和未受累皮肤表皮的全层或表皮中下层可见FGF10 mRNA表达(95%);在正常皮肤表皮的基底层或少量细胞内可见FGF10 mRNA的表达(5%);在寻常型银屑病非皮损表皮的中下层或个别细胞内可见FGF10 mRNA的表达(82%).寻常型银屑病皮损表皮中FGF10 mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.05).结论:FGF10 mRNA在银屑病发病早期阶段的表达增高可能与银屑病的早期发病有关.     

骨形成蛋白2基因转染的人牙周膜成纤维细胞的生物学特性

目的建立表达骨形成蛋白2(BMPS)的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFS)并观察其生物学特性。方法利用脂质体将BMP2噬菌粒表达载体pBK-B2转染至HPDLFs,免疫组化ABC法检测BMP2基因的表达,并检测转染细胞的碱性磷酸酶(ALP)活力、骨钙素(OC)含量和矿化能力。结果转染BMP2基因后,HPDLFs内有BMP2蛋白的表达,ALP活力、OC含量和矿化结节数量均显著增加。结论BMP2基因在HPDLFs中得到表达并促进其向成骨样细胞分化。     

骨形态发生蛋白2 在人骨不连组织中的表达及其临床意义

目的：探讨肥大性骨不连组织与萎缩性骨不连组织在成骨潜能上的差异,进一步指导骨不连的治疗。方 法：收集2010年10月至2014年3月入住中南大学湘雅二医院骨科的骨不连患者骨不连处组织40例,按照骨不连性质分为 肥大性骨不连组(n=20)、萎缩性骨不连组(n=20);按照不同年龄段分为20~35岁年龄组(n=18)、36~50岁年龄组(n=18)、 >50岁年龄组(n=4);按照骨不连时间分为9~12个月组(n=21)、13~24个月组(n=14)和>24个月组(n=5)。利用免疫组织化 学SP二步法及IPP6.0病理图像分析软件对骨不连组织中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的表达 进行半定量分析,测定其平均吸光度值。结果：肥大性骨不连组BMP-2平均吸光度值为0.1540±0.0408,萎缩性骨不连 组BMP-2平均吸光度值为0.1372±0.0372,两组标本BMP-2平均吸光度值差异无明显统计学意义(P>0.05)。20~35岁年龄组 BMP-2平均吸光度值为0.1477±0.0379,36~50岁年龄组BMP-2平均吸光度值为0.1419±0.0399,>50岁年龄组BMP-2平均吸 光度值为0.1456±0.0595,三组年龄段标本间BMP-2平均吸光度值差异无明显统计学意义(P>0.05)。在三组不同骨不连时 间中,9~12个月组BMP-2的平均吸光度值为0.1449±0.0366,13~24个月组BMP-2的平均吸光度值为0.1472±0.0400,>24个 月组BMP-2的平均吸光度值为0.1445±0.0541,三组不同骨不连时间标本之间BMP-2平均吸光度值差异亦无明显统计学意 义(P>0.05)。结论：肥大性骨不连组织和萎缩性骨不连组织在成骨潜能上无显著性差异。     

转化生长因子 β1 和骨形态发生蛋白 -9在人骨不连组织中的表达及其临床意义

目的：检测肥大性骨不连组织与萎缩性骨不连组织中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9表达的差异, 评价两种骨不连组织在成骨潜能上的区别。方法：收集2010年至2014年中南大学湘雅二医院和上海交通大学医学 院苏州九龙医院骨科住院的肥大性和萎缩性骨不连患者各20例。利用免疫组织化学SP二步法及病理图像分析软件 IPP6.0对骨不连断端间组织转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9的表达进行半定量分析。根据骨不连类型、患者年 龄和骨不连时间对其进行统计学分析。结果：肥大性骨不连患者中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9 的吸光度值 分别为0.3236±0.0390和0.1337±0.0400,萎缩性骨不连患者中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9的吸光度值分别为 0.3191±0.0369和0.1373±0.0423,两者标本中的吸光度值差异均无明显统计学意义(均P>0.05)。转化生长因子β1和骨形 态发生蛋白-9在不同年龄、不同骨不连时间中的吸光度值差异也均无明显统计学意义(均P>0.05)。结论：肥大性骨不 连组织和萎缩性骨不连组织在成骨潜能上无明显差异。     

Role of transforming growth factor P and bone morphogenetic protein composite on repair of bone defects

Bonerepairisacomplicatedprocess.Recentstudiesdemonstratedthatseveralgrowthfactorsplayanimportantroleinboneformation.Bonemorphogeneticproteins(BMPs)induceboneformationthroughstimulatingundifferentlatedmesenchymalproliferationanddifferentiationandinitiatingheterotopicboneformation.Transforminggrowthfactor5(TGF--0),mostabundantinquantityofthegrowthfactorsinthebody,stronglypromotestheembryogenesis,traumahealing,matrixsynthesis,osteoandosteochondralformationandboneremodeling.Ourpreviousexperimen…     

在肠缺血再灌注下骨形成蛋白 4下调IL 7/IL 7R

【摘要】目的 探讨小鼠小肠在肠缺血再灌注（I/R）条件下骨形成蛋白（BMP 4）通过下调IL 7/IL 7R信号通路促进IELs凋亡的机制。方法 建立小鼠小肠I/R损伤模型,随机分为手术组(I/R组)、假手术组(Sham组),每组各16只,免疫荧光检测IECs中IL 7蛋白和流式细胞术检测IELs中IL 7受体(CD127)及STAT5蛋白磷酸化水平变化;外源性BMP 4蛋白刺激IEC 6培养6小时后,Western blot检测IEC 6中IL 7蛋白表达变化;分离培养正常小鼠IELs,分别加入外源性BMP 4蛋白及BMP4拮抗剂NOGGIN蛋白刺激,流式细胞术观察BMP4对IELs中IL 7受体(CD127)及STAT5蛋白磷酸化变化; 分离培养正常小鼠IELs,分别加入外源性BMP 4蛋白及IL 7蛋白刺激,观察IELs凋亡率的变化。结果 在I/R刺激下,IECs中IL 7蛋白表达I/R组较Sham组明显减少（P＜005）;IELs中IL 7受体(CD127)及STAT5蛋白磷酸化水平均较Sham组表达减少(P＜005）;体外培养实验发现：IECs中IL 7蛋白表达在BMP 4刺激下明显减少,IELs单独培养给予BMP4蛋白刺激后CD127及P STAT5较Sham组减少(P＜005）;给予BMP特异性拮抗剂RNOGGIN可逆转BMP对IL 7/IL 7R信号通路的抑制作用;BMP 4促进IELs的凋亡率增加(P＜005）,给予外源性IL 7蛋白刺激后,有效的抑制IELs的凋亡率增加(P＜005）,BMP 4抑制IL 7对IELs的增殖作用,促进IELs的凋亡。结论 小肠在I/R条件下,肠上皮细胞中BMP 4蛋白抑制IL 7/IL 7R信号通路,使IELs的保护性细胞因子减少,从而促进IELs的凋亡率增加,进一步加重肠免疫屏障损伤。
     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在胃癌及癌前病变中的表达及其意义

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor-2,FGFR-2)在胃癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化SP法检测100例胃癌及癌旁组织,bFGF和FGFR-2的表达及两者之间的关系。结果胃癌中bFGF和FGFR-2表达明显高于癌旁组织及正常组织(P0.01),胃癌组织中bFGF、FGFR-2表达的水平与临床病理分期有关,中晚期胃癌bFGF及FGFR-2阳性率明显高于早期胃癌(P0.05),胃癌组织中bFGF与FGFR-2表达呈正相关,随bFGF表达的增高FGFR-2表达亦增高(P0.05)。结论 bFGF和FGFR-2在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体-1表达与甲状腺癌侵袭转移的关系

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)，成纤维细胞生长因子受体－1（FGFR－I）在甲状腺癌组织中的表达，及与甲状腺癌发生发展的关系。方法：采用免疫组织化学（SP法），检测88例甲状腺癌bFGF和FGFR－I表达，并以15例甲状腺腺瘤，30例正常甲腺组织作对照，同时对33例甲状腺癌应用图像分析方法检测细胞核DNA含量。结果：bFGF与FGFR－I表达均呈癌＞腺瘤＞正常甲状腺组织（P＜0．05）,bFGF表达和FGFR－1表达正相关（P＜0．05），bFGF和FGFR－I表达与甲状腺癌细胞核DNA含量正相关（P＜0．01），两者表达甲状腺癌颈淋巴结转移阳性组＞阴性组（P＜0．05），结论：bFGF,FGFR-I表达反映甲状腺癌的生物学行为，与甲状腺癌侵袭转移相关。     

碱性成纤维生长因子在多发性骨髓瘤塑包切片中的表达

目的检测多发性骨髓瘤(MM)骨髓活检塑料包埋切片中的碱性成纤维生长因子(b-FGF2)的表达情况,探讨b-FGF2在MM发病机制中的作用。方法对20例初诊的MM患者和10例正常对照者进行骨髓活检,制成塑料包埋切片,应用免疫组织化学SP染色法检测骨髓组织中b-FGF2表达及MVD测定,进行分析研究。结果20例初诊MM患者骨髓中MVD高于对照组,12例b-FGF2表达阳性。结论b-FGF2和MM的血管生成密切相关。抑制b-FGF2的分泌将有可能成为一个新的有效的治疗方法。